重庆医科大学学报２０１０年第３５卷第１１期（Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１０．Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．１ １ 临床研究文章编号：０２５３—３６２６（２０１０）１１—１７６１—０４ １ １３例急性髓细胞自血病细胞形态学及免疫表型分析 钟辉秀，殷明刚，杨新春 （自贡市第一人民医院检验科，自贡６４３０００） 【摘要】目的：探讨细胞形态学（包括细胞化学）、免疫表型及二者联合分析对初诊急性髓细胞白血病（Ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ， ＡＭＬ）的诊断价值，以指导流式细胞术对ＡＭＬ的诊断工作，提高诊断分型准确率。方法：回顾性分析已确诊的１１３例ＡＭＬ患者 的细胞形态学与免疫表型结果。免疫表型采用流式细胞术，用２３种荧光标记单克隆抗体（ＭｃＡｂ）测定白血病细胞的抗原表达。 结果：①形态学分型与最终诊断符合率为７９．４％，免疫表型分型与最终诊断符合率为８５．３％，二者联合分析与最终诊断符合率 为９６．５％。②髓系抗原ＣＤ１１７、ＣＤ１３、ＣＤ３３可在各型中高表达，无特异性；ｃＭＰＯ可在除Ｍ。的各型中高表达；ＣＤ１４、ＣＤ６４在 Ｍ４、Ｍ５中高表达；ＣＤ３４及ＨＬＡＤＲ在Ｍ 中低表达；各型ＡＭＬ均可见淋系抗原表达，主要是ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ９、ＣＤＩＯ、ＣＤＩ９、 ＣＤ５６。结论：ＡＭＬ患者细胞抗原表达复杂，异质性强，多个抗原综合分析及ＳＳＣ／ＣＤ４５散点图上的细胞分布特征，有助于判断白 血病细胞的来源、种类与阶段；流式细胞仪对白血病细胞的计数受多种因素影响，其百分比例不如形态学准确；联合应用细胞 形态学与免疫表型分析，可以相互弥补，大大提高诊断与分型的准确率。 【关键词】急性髓细胞白血病；细胞形态学；细胞免疫表型；流式细胞术 【中国图书分类法分类号】Ｒ７３３．７１ 【文献标识码】Ａ 【收稿日期】２０１０—０４—０２ Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １ １ ３ ｃａｓｅｓ ＺＨ０／ｖＧ ｕ — 『上，ｅｔ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆｃｈｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆＺ／ｏｇｏｎｇ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ，ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｂｏｔｈ ｆｏｒ ｐｒｉｍａｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＡＭＬ）．ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｏｎｄｕｃｔ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＡＭＬ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｒａｉｓｅ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｃｃｕｒａｃｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎ０ｔｙｐｅ（ １ １ ３ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ＡＭＬ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ｉｍｍｕｎ０ｐｈｅｎ０ｔｙｐｅ 作者介绍：钟辉秀（１９６８一），女，副主任检验师， 研究方向：各种血液病的形态学诊断及实验室检查。 野之间形成一道屏障，阻隔支配腮腺的神经向支配面部汗腺 及毛细血管的神经错联吻合，虽然这些方法都获得了较好的 效果，但这些方法往往较为复杂，增大了手术损伤，同时血 参考文献 肿、感染等并发症也增加。因此寻找一种简便易行、确切有效 【１］Ｓａｎｔｏｓ Ｒ Ｃ，Ｃｈａｇａｓ Ｊ Ｆ，Ｂｅｚｅｒｒａ Ｔ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｆｒｅｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ａｆｔｅｒ ｐａｒｔｉａｌ ｐａｒｏｔｉｄｅｃｔｏｍｙ［Ｊ］．Ｂｒａｚ Ｊ Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ，２００６，７２（１）：ｌｌ２ —的方法，减少腮腺手术后Ｆｒｅｙ’Ｓ综合征的发生，改进患者术 后生活质量具有较大的临床意义。 海奥口腔修复膜是一种异种脱细胞真皮基质，经过脱细 １Ｉ５． 【２】张德保，吕 洁．改良腮腺良性肿瘤切除术后并发症分析ｆＪ】．南 华大学学报医学版，２００８，３６（２）：２１２－２１３． 【３１ ＦｅｒｒｅｉｒａＰＣ，Ａｍａｒａｎｔｅ ＪＭ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ＪＭ，ｅｔａ１．Ｐａｒｏｔｉｄ ｓｕｒｇｅｒｙ：ｒｅ— ｖｉｅｗ ｏｆ１０７ ｔｕｍｏｒｓ（１９９０－２００２）『Ｊ】＿ｌｎｔＳｕｒｇ，２００５，９０（３）：１６０—１６６． 胞冷冻干燥形成的三维支架结构，其主要成分是胶原蛋白， 因而具有极好的生物相容性，不具有免疫原性和毒性作用， 它可通过空间诱导让创面的上皮细胞快速长人形成组织屏 障，有效地阻止神经纤维的错位长人，以达到预防Ｆｒｅｙ’ｓ综 ［４ｌ周晓萍，张茹慧．味觉出汗综合征的治疗与预防［ＪＪ＿１３腔医学， ２００５，２５（５）：３１４—３１５． 合征的作用，同时在形成自身组织屏障后３～６个月其修复 膜分解吸收。目前我们还未查见用口腔修复膜来预Ｆｒｅｙ’Ｓ综 合征的研究报道。本研究首次证明了在腮腺肿瘤术后植入口 【５】Ｆｏｕｓｔａｎｏｓ Ａ，Ｚａｖｆｉｄｅｓ Ｈ．Ｆａｃｅ－ｌｉｆｔ ａｐｐｒｏａｃｈ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｓｕｐｅｒ— ｉｆｃｉｌａ ｍｕｓｃｕｌ０ａｐ０ｎｅｕｒ０ｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔ ｌｆａｐ ｉｎ ｐａｒｏｔｉｄｅｃｔｏｍｙ［Ｊ］．Ｂｒ ＪＯｒａｌＭａｘｉｌｌｏｆａｃ Ｓｕｒｇ，２００７，４５（８）：６５２—６５５． 腔修复膜能显著降低术后Ｆｒｅｙ’Ｓ综合征的发生，同时方法简 单易行，在传统切口和创面的基础上不增加新的手术切口和 创面，也没发现有其它任何毒副作用。因此，该方法具有较高 的临床应用价值，值得推广应用。 【６］Ｗｉｌｌｅ－ＢｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒＡ，Ｒａｊａｈ ＧＰ，ｌａｎｄｅｒＴＥ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｐａｃｔ ｏｆｔｈｅ ＳＭＡＳ ｏｎ Ｆｒｅｙ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｆｔｅｒ ｐａｒｏｔｉｄ ｓｕｒｇｅｒｙ：Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ，ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＰｌａｓｔＲｅｃｏｍｔｒＳｕｒｇ，２００７，１２０（６）：１５１９—１５２３． （责任编辑：张学颖） 一１ ７６２一 重庆医科大学学报２０１０年第３５卷第１１期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１０．ＶＯＩ．３５ Ｎｏ．１ １） ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ａｎｄ ２３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍａｒｋｅｄ ＭｃＡｂ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｉｌｓ Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｗａｓ７９－４％．ｔｈａｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｗａｓ ８５＿３％．Ｗｈｅｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎ０ｐｈｅｎ０ｔｙｐｅ ｗｅｒｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ，ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ９６，５％，Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｍｏｄｕｌａｒｌｙ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｔｉｇｅｎ ＣＤＩ１７，ＣＤ１３，ａｎｄ ＣＤ３３ ｗｅｒｅ ｈｉ ，ｂｕｔ ｗｉｔｈ ｒｉｏ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ．ｃＭＰＯ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｍｏｓｔ ｅａｃｈ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｔｙｐｅ ｅｘｃｅｐｔ Ｍ０．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＣＤ１４ ａｎｄ ＣＤ６４ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｍ４ ａｎｄ Ｍ５ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｔｙｐｅｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＣＤ３４ ａｎｄ ＨＬＡＤＲ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｍ３ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｔｙｐｅｓ．Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｅｖｅｒｙ ｔｙｐｅ ｏｆ ＡＭＬ，ｍａｉｎｌｙ ＣＤ４，ＣＤ７，ＣＤ９，ＣＤ１０，ＣＤ１９，ａｎｄ ＣＤ５６．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅａｃｈ ｔｙｐｅ ｏｆ ＡＭＬ ｗａｓ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ｅｎｏｕｇｈ ａｎｔｉｇｅｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｔｔｅｒ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｇａｔｅ ＳＳＣ／ＣＤ４５ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｈｅｌｐｆｕｌ ｆｏｒ ｊｕｄｇｉｎｇ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ，ｔｙｐｅ，ａｎｄ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｍａｎｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ，ｔｈｅ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｉｓ ｎｏｔ ａｓ ｅｘａｃｔ ａｓ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ；Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ；Ｉｍｍｕｎ０ｐｈｅｎ０ｔｙｐｅ；Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ 白血病的正确诊断与分型是白血病预后判断、选择治疗 方案的重要依据，近年来，随着白血病临床和基础研究的不 断深入，白血病的实验诊断技术也取得了显著进展，２０００年 ＷＨＯ提出了白血病的ＭＩＣＭ分型标准，但其中细胞遗传学 及分子生物学分型受试剂、仪器及技术难度的，在大多 数医院尤其一些地区级医院的应用受阻，而免疫学分型则随 着流式细胞仪的发展，在临床的应用１３趋广泛，已成为白血 显微镜下分类计数，并同时进行细胞化学染色检查，包括过 氧化物酶（ＰＯＸ）、非特异性脂酶＋氟化钠抑制实验（ —ＮＡＥ ＋ＮａＦ）、中性粒细胞碱性磷酸酶（ＮＡＰ）和过碘酸一雪夫染色 （ＰＡＳ），参照ＦＡＢ标准（ 确定类型。 １．４．２免疫表型检测流式细胞仪进行测定，采用ＳＳＣ／ＣＤ４５ 设门，用２３种免疫荧光标记单克隆抗体分别测定白血病细 胞的抗原表达。判断标准【２＿：对细胞膜抗原荧光阳性细胞 ＞２０％为相应抗原阳性，对ＣＤ３４和胞浆抗原＞１０％为阳性。根 病诊断与分型的一项可行、快速、准确、重要的技术，为了更 好地应用该技术，本文研究了１ １３例初诊急性髓细胞白血病 （Ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．ＡＭＬ）患者的细胞免疫表型结果，并 据各抗原的积分参照欧洲白血病免疫学分型研究组（ＥＧＩＬ） 积分系统口确定类型。 １．５统计学处理 与传统形态学分型比较，现报告如下。 结果采用 检验，以Ｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。 １材料和方法 ２结１．１研究对象 果 １１３例患者均为我院确诊的门诊或住院ＡＭＬ患者，根据 形态学、细胞化学和细胞免疫学等方法确诊，均符合国内急 性白血病的诊断标准／”。男性５１例，女性６２例，年龄２岁 一２．１分型结果 １１３例ＡＭＬ患者采用细胞形态学分型诊断为：Ｍ。２７例， Ｍ２ ２６例，Ｍ３ １９例，Ｍ ７例，Ｍ ２２例，Ｍ６ ５例，７例被误诊为 急性淋巴细胞白血病（Ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＬＬ），与最终 ７８岁，平均年龄４ｌ岁，其中ＡＭＬ—Ｍ。（Ｍ。）３例、ＡＭＬ—Ｍ。 （Ｍ ）２５例、ＡＭＬ—Ｍ：（Ｍ２）２８例、ＡＭＬ—Ｍ３（Ｍ ）２２例、ＡＭＬ－Ｍ （Ｍ４）１１例、ＡＭＬ—Ｍ５（Ｍ ）１８例、ＡＭＬ—Ｍ６（Ｍ６）６例。 １．２试剂与仪器 诊断符合率为７９．４％；采用免疫表型诊断为：Ｍ。３例，Ｍ。２２ 例，Ｍ ３４例，Ｍ３ ２０例，Ｍ ９例，Ｍ ２１例， ４例，与最终诊断 符合率为８５．３％；采用二者联合分析诊断为：Ｍ。３例，Ｍ ２５ 流式细胞仪（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）为美国Ｃｏｕｌｔｅｒ公司产品，型 例，Ｍ ２９例，Ｍ３２３例，Ｍ４ １０例，Ｍ５ １７例，Ｍ ６例，与最终诊 断符合率为９６．５％。联合分型与形态学相比差异有显著统计 意义（Ｐ＜Ｏ．００５），与免疫表型分型相比差异也有显著统计学 意义（Ｐ＜０．０１０），而形态学与免疫表型相比差异无统计学意 义，结果详见下表１。 ２．２细胞抗原表达情况 号为ＥＰＩＣＳ—ＸＬ。鞘液、破膜剂、溶血剂及单克隆抗体均为美 国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ公司提供。所用单克隆抗体包括：ｃｙ— ＣＤ７９ａ、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤＩ９、ＣＤ９ ｃｙＣＤ３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、 ＣＤ８ ＣＤ７ ＣＤ５６ ｃｙＭＰＯ ＣＤＩ１７ ＣＤ３３ ＣＤ１３ ＣＤ１４ ＣＤ７１ ＣＤ６４、ＧｌｙＡ、ＣＤ３４、ＨＬＡＤＲ、ＣＤ４５。细胞化学染色试剂由上海 太阳生物技术有限公司提供。 １．３样本 １ １３例各型ＡＭＬ免疫表型特征祥见上表２。主要抗原表 达情况如下：以髓系抗原ＣＤ３３、ＣＤＩ３、ｃｙＭＰＯ、ＣＤ１ １７表达 最常见，分别为９５．６％、９２．９％、８７．６％及８１．４％；非系列标记 采集患者骨髓液，制作骨髓涂片供细胞形态及细胞化学 分析，同时将１．０ ｍｌ左右骨髓液注入肝素钠抗凝管中，立即 混匀后送流式细胞室进行细胞免疫分型检测。 １．４方法 ＨＬＡＤＲ、ＣＤ３４也有较高表达，分别为７６．１％及６４．６％，其中 ｃｙＭＰＯ可在除Ｍ。外的各型ＡＭＬ中表达；ＣＤＩ１７可在ＡＭＬ 各型中表达；ＣＤ３４及ＨＬＡＤＲ在Ｍ 型中表达率分别为 ２２．７％、４．５％，远低于其余类型７４．７％及９３．４％的表达，二者 １．４．１细胞形态学检查将骨髓涂片进行瑞氏染色，在光学 重庆医科大学学报２０１０年第３５卷第１ｌ期ｆＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１０．Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．１１） 一１７６３一 差异均有显著性统计学意义（Ｐ均＜０．００５）；ＣＤ１４在Ｍ，、Ｍ 、 可在Ｍ 、Ｍ 中表达（１．８％）；ＣＤ５６可在Ｍ．、Ｍ 、Ｍ 及Ｍ 型中 Ｍ 型中表达率为７．１％，但远低于在Ｍ 、Ｍ 型中６８．９％的表 达，二者差异有显著统计学意义（Ｐ＜０．００５），但在Ｍ 、Ｍ 中表 达分别为６３．６％及７２．２％，差异无统计学意义；ＣＤ６４只在 表达，但在Ｍ 型中表达（３８．９％）高于Ｍ，、Ｍ 、Ｍ 型（４．７％），二者 差异有显著性统计学意义（Ｐ＜０．００５）。 Ｍ 、Ｍ 型中表达，分别为７２．７％、７７．７％，但在Ｍ 及Ｍ 型中的 表达差异无统计学意义；ＣＤ７１虽为红系标记，但不特异，可 在各型中表达（６５．５％）；ＧｌｙＡ是红系特异性标记，在Ｍ 型中 高表达（１００％）。淋系抗原表达率为３７．６％，其中ｃｖＣＤ３、 ＣＤ３、ｃｙＣＤ７９ａ和ＣＤ２０在各型中未见表达；ＣＤ４可在ＡＭＬ 的Ｍ 、Ｍ 、Ｍ 及Ｍ 型中表达（４．６％）；ＣＤ７可在ＡＭＬ各型中 表达（８ ８％）；ＣＤ９可在Ｍ，及Ｍ 型中表达，但在Ｍ 中的表达 为５９．１％，远高于Ｍ 中的表达（５．６％），二者差异有统计学意 义（１９＜０．００５）；ＣＤ１０可Ｍ０、Ｍｌ、Ｍ２及Ｍ 中表达（３．５％），ＣＤＩ９ ３讨论 细胞形态学分型是根据细胞的形态和细胞化学染色并 利用显微镜进行检查，仍是自血病诊断的基石之一，其ＦＡＢ 分型标准明确，反映了主要的细胞类型，可对ＡＭＬ进行亚型 诊断，目前已被各国广泛采用，但该检查方法是基于细胞形 态学水平的直观判断，易受检测水平及主观因素影响，尤其 对部分细胞的鉴别较困难，如原始粒细胞、原始单核细胞与 表１ １ １３例ＡＭＬ患者分别用形态学分析、免疫表型分析及联合分析结果 注表ｌ中：（３）与（１）相比 ＝１３．６２８，Ｐ＜０．００５；（３）与（２）相比 ．２＝７．５６０，Ｐ＜０．０１０；（１）与（２）相比： ＝Ｏ．７５９，０．２５＜Ｐ＜０．５ 表２ １１３例ＡＭＬ患者各型的细胞抗原表达情况 一１ ７６４一 重庆医科大学学报２０１０年第３５卷第１１期（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１０．Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．１ １） 原始淋巴细胞，Ⅱ型原始粒细胞与早幼粒细胞，早幼粒细胞 与原始单核细胞等，虽然细胞化学可辅助鉴别诊断ＡＭＬ与 ＡＬＬ及ＡＭＬ的部分类型，但它与细胞形态之间的符合率也 不高，部分病例出现相互矛盾的结果，导致诊断困难或误 诊ｔ４］，诊断准确率低，一般为６０％一８０％ ，我们的分析表明， ＡＭＬ各型均有病例被误诊，尤其是Ｍ。及Ｍ 型，诊断符合率 很低，分别为０．０％及６３．６％，有７例ＡＭＬ被误诊为ＡＬＬ，总 的诊断符合率为７９．４％，与文献报道相符目。 白血病免疫分型是通过流式细胞术（Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ） 检测细胞内、外的特异性抗原，根据抗原表达谱对细胞的来 源及分化阶段进行更精细准确的分析，从而准确判断自血病 细胞的种类与阶段，尤其是一些少见、疑难的病例，如ＡＭＬ—Ｍ 、 ＡＭＬ—Ｍ 、ＡＵＬ（急性未分化白血病）等，我们的资料表明：７例 形态学诊断为ＡＬＬ的患者经免疫分型均被诊断为ＡＭＬ，且 有部分病例被诊断为伴淋系抗原表达的ＡＭＬ（ＬＹ＋ＡＭＬ），弥 补了形态学诊断不足，不过，在应用过程中我们发现：流式细 胞仪测得的白血病细胞百分比不如形态学准确，影响了ＡＭＬ 部分类型的诊断准确率，而采用免疫学与形态合分析， 可以相互弥补，大大提高ＡＭＬ的诊断与分型准确率，可达 ９６．８％，明显优于单独的形态学与免疫分型。流式细胞术免疫 分型测得白血病细胞数量低于形态学分类计数的原因可能 是：①骨髓被外周血稀释；②ＣＤ３４及ＣＤ１ １７阴性的原始细 胞存在；③涂片计数有时包括原血细胞；④细胞碎片的存在。 而高于形态学分类计数的原因可能是：①溶血破坏近成熟 ＲＢＣ，对Ｍ 的红系比例有影响；②制片过程中细胞易碎影响 计数；③ＣＤＩ１７可能表达在一些较Ｊ戊热的细胞，被误认为原 始细胞；④颗粒减少的粒系，侧向敞９１』光值低而落于原始细 胞窗内。 ＡＭＬ患者细胞抗原表达复杂，异质性强，是免疫分型的 依据，但多数抗原缺乏特异性及敏感性，并可出现错乱表达， 单独某一抗原阳性表达对细胞鉴别价值不大，应尽可能同时 检测多种抗原的表达水平，综合分析其抗原表达谱，才能较 准确地判断白血病细胞的来源、种类与阶段，以减少漏诊和 误诊的机率，尤其是对一些抗原表达或形态不典型的患者。 我们的分析表明，Ｉ１３例ＡＭＬ中以髓系抗原ＣＤ１３、ＣＤ３３、 ｃＭＰＯ、ＣＤ１１７的表达最常见，其次是ＨＬＡＤＲ、ＣＤ３４及ＣＤ７１， 与文献报道相符ｍ，其中ＣＤＩ３、ＣＤ３３可在各型ＡＭＬ中高表 达，是鉴别ＡＭＬ与ＡＬＬ的重要抗原；ｃＭＰＯ是特异性的髓系 抗原，其阳性强力支持ＡＭＬ的诊断 ，Ｓｌ；ＣＤ１１７的表达有助于 ＡＭＬ细胞克隆的识别，其特异性较ＣＤ１３和ＣＤ３３更强，是鉴 别ＡＭＬ的一个重要抗原 ；造血干，祖细胞抗原ＣＤ３４及非系 列抗原ＨＬＡＤＲ在Ｍ 型中表达率远低于其他各型，是鉴别 型的重要抗原，也是鉴别原始细胞的重要抗原嘲；ＣＤ１４、 ＣＤ６４是单核细胞特异性的标记，在原、幼单核细胞上的表达 率远高于原始粒细胞，是Ｍ 、 与其他ＡＭＬ类型进行鉴别诊 断的重要抗原 ；ＣＤ７１及ＧｌｙＡ可在幼红细胞中高表达，但特 异性ＣＤ７１不如ＧｌｙＡ，ＧｌｙＡ只在红系上表达，对Ｍ 的诊断具 有重要价值。 白血病细胞可出现抗原的错乱表达，现在一般认为仅异 常表达个别次要非系列相关抗原不能诊断为双表型白血病， 而应诊断为ＬＹ＋ＡＭＬ或ＭＹ＋ＡＬＬ，因此在进行ＡＭＬ免疫表 型分析时应增加多种淋系抗原的检测，以提高ＡＭＬ各型及 ＬＹ＋ＡＭＬ的诊断准确率。本研究资料表明，次要淋系抗原在 ＡＭＬ中的错乱表达并不少见，总的表达率为３７．６％，介于文 献报道的结果之间 ０１，主要是ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ９、ＣＤＩＯ、ＣＤ１９ 及ＣＤ５６，以ＣＤ７、ＣＤ９及ＣＤ５６较常见，其中ＣＤ９对Ｍ 的鉴 别诊断有重要价值，联合应用ＣＤ９抗原及其他免疫标记，是 诊断 的一个有用依据；ＣＤ５６可辅助Ｍ 的鉴别诊断；淋系 特异性抗原ｃｙＣＤ３、ＣＤ３及ｃｙＣＤ７９ａ及ＣＤ２０在ＡＭＬ各型中 未见表达，它们阴性强力支持ＡＭＬ的诊断。 总之，本研究结果证实，不同类型ＡＭＬ存在非同期抗原 共表达、交叉系列抗原表达、抗原过度表达等Ｉ１１Ｊ＇在分化过程 中形态学上也具有异质性，应用流式细胞仪进行测定时，白 血病细胞在ＳＳＣ／ＣＤ４５散点图上具有不同的分布特征，可以 辅助各型ＡＭＬ的诊断，与细胞抗原表达相结合，可充分发挥 流式细胞术进行免疫分型的优势作用。 参考文献 ［１】张之南，沈悌．血液病诊断及疗效标准【Ｍ］．第２及第３版．北京 科学出版社，１９９８．２００８． ［２］ Ｃａｔｏｖｓｋｙ Ｄ，Ｍａｙｕｔｅｓｅ Ｅ．Ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｅｕｋｅｍｉａｓ［Ｊ】． Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１９９２，６（２）：１． 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