１１６现代农业理论与实践油菜菌核病菌对多菌灵抗性茵系生物学特性、交互抗性、遗传稳定性研究张勇，孙明娜，王梅，段劲生，高同春（安徽省农科院植物保护研究所安徽省农作物品质改良重点实验室，合肥２３００３１）摘要：以江苏、安徽等地区采集的油菜茵核病菌为试验茵株，采用茵丝生长速率法测定对多菌灵的敏感性，结果表明，部分茵株已对多茵灵产生低抗。经室内诱导获得４株抗性均高于自身１倍的油菜茵核病菌，抗性倍数最高达３４．３倍。抗多菌灵菌系与敏感亲本相比，其菌丝生长速率、茵丝鲜重、产茵核能力有一定的差异。多茵灵抗性菌系与酮、烯唑醇、福美双和丙环唑等４种药剂分别产生了５６７．３、８０．３、２０．５和１３．２倍交互抗性。野生敏感菌株有较好的遗传稳定性；抗多菌灵菌系随着在无药平板上转接次数增加，其抗性水平逐渐提高。关键词：油菜茵核病菌；抗药性；交互抗性；遗传稳定性油菜菌核病（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）是油菜上的重要病害，尤其雨水多的年份，发生较重，轻者减产２０％～３０％，重者减产５０％以上，严重影响着油菜的产量与品质。长期以来一直使用以多菌灵为主的苯并咪唑类杀菌剂，据报道，在江苏部分地区，Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ已经对多菌灵产生抗性，且田间抗性菌株分布较培养基：２００ｇ马铃薯、２０ｇ蔗糖、１５ｇ琼脂、１０００ｍＬ水。依据杨敬辉等对油菜菌核病敏感性划分标准结果，即当某菌株的Ｅｃ∞值小于０．５恤∥ｍＬ，为敏感菌株（Ｓ）；当ＥＣ５。值大于等于０．５ｐ，ｇ／ｍＬ，小于５斗ｇ／ｍＬ时，为低抗菌株（ＬＲ）；当ＥＣ，。值大于等于５ｐ。ｇ／ｍＬ，小于５０¨ｇ／ｍＬ时为中抗菌株（ＭＲ）；当ＥＣ，。值大于等于５０斗∥ｍＬ，为高抗菌株（ＨＲ）¨１。１．３油菜菌核病菌抗药突变体诱导方法将所采集的油菜菌核病各菌株经２５。Ｃ培养２ｄ后，于菌落边缘制成５ｍｍ的菌碟，接人含多菌灵５０斗ｇ／ｍＬ的ＰＳＡ平板，距离２５Ｗ紫外灯２５０ｍｍ处，照射１２０广¨’２１。笔者使用采自安徽、江苏部分田块油菜菌核病菌，通过室内诱导，选取具有代表性的突变菌株，研究其对多菌灵的敏感性、生物学特性、对其他杀菌剂交互抗性和遗传稳定性等，为评价该菌系抗多菌灵的风险性以及如何科学使用农药提供依据。Ｓ，然后置于２５℃黑暗培养４ｄ，挑取在平板上生长１材料与方法１．１供试材料菌株：ＪＳｌ采集于南京，江苏农业科学院植保所提供；ＪＳＭ７、ＪＳｒｌ７、ＪＳＭｌ２、ＨＭｌ０、ＨＭ３、ＨＭ２５分别采集于江苏通洲、海门，南京农业大学杀菌剂实验室提供；ＡＨｌ、ＡＨ２、ＡＨ３、ＡＨ４分别采自于安徽合肥、长丰、太湖、霍山等地。杀菌剂：９８．００％多菌灵原药，江苏靖江农药厂生产；９５．２０％酮原药，江苏建农农化有限公司；９７．００％丙环唑原药，张家港七洲农药化工厂；９５．２８％戊唑醇原药，张家港七洲农药化工厂；８５．００％腈菌唑原药，宜兴生物化工厂；９３．８０％烯唑醇原药，江苏长青农化股份有限公司。９６．２２％扑海因原药，江苏快达农药有限公司；９８．２０％福美双原药，镇江第二农药厂。１．２油菜菌核病菌对多菌灵敏感性测定采用菌落直径法测定各菌株的ＥＣ，。值。供试ＰＳＡ出的菌株菌丝，进行纯化与敏感性测定。１．４生物学特性测定抗性菌系的生长量测定：将野生菌株ＪＳｌ７和室内诱导获得的低抗菌株ＪＳｒｌ７一ＬＲ，制成５ｍｍ菌碟，在ＰＳＡ平板上２５ｃＣ培养，测定１２、２４、３６、４８ｈ的菌落直径，重复３次。菌丝鲜重：将ＪＳ耵和ＪＳｌ７一ＬＲ菌株菌碟放人装有３０ｍＬ液体ＰＳＡ培养基的三角瓶中，２０℃１３０ｒ／ｍｉｎ振荡培养３ｄ，菌丝过滤清洗后，测量鲜重，重复３次。抗性菌系产菌核测定：将ＪＳｒｌ７和ＪＳ，１７一ＬＲ菌株，制成５ｍｍ菌碟，在ＰＤＡ平板上２５℃培养，测定菌核出现时间、形成时间、没皿菌核数量及菌核重，重复３次。抗性菌系菌核萌发测定：取相同大小ＪＳ，１７和ＪＳｒｌ７一ＬＲ菌株所产的菌核，置于ＰＤＡ平板，２５℃培养，观察菌核萌发时间，重复３次。种植业科学与技术１１７１．５交互抗药性测定分别制成含系列浓度的酮、丙环唑、戊唑醇、腈菌唑、烯唑醇、扑海因、福美双等药剂的ＰＤＡ培养基平板，利用菌落直径法测定对野生菌株ＪＳＴ７和低抗菌株ＪＳＴ７一ＬＲ的ＥＣ５０值。１．６抗性菌系遗传稳定性测定将野生菌株ＪＳＴ７和Ｊｓｒｌ７．ＬＲ接种到无药平板上，连续转接１２次，分别测定０、３、６、９、１２次转接菌对多菌灵的敏感性。敏感菌系（１９个／ＩＩＩＬ）、（０．３６ｇ／皿）小，同时抗性菌系所产生的菌核较大，而敏感菌系产生的菌核较小。抗性菌系菌核萌发时间（１ｄ）较敏感菌系菌核萌发的时间（３ｄ）短。表２抗多菌灵茵系与敏感菌系的菌丝生长速率比较２结果与分析２．１油菜茵核病菌对多茵灵的敏感性２．４抗多菌灵菌系的交互抗药性抗多菌灵菌系对酮、烯唑醇、福美双和丙环唑等药剂均产生很高程度的交互抗性，和敏感菌系相比，其交互抗性倍数分别为５６７．３、８０．３、２０．５和１３．２倍；对腈菌唑、扑海因和戊唑醇交互抗性不明显，抗性倍数仅为２．５、１．８和１．１。酮、烯唑醇、丙环唑、腈菌唑和戊唑醇均为类杀菌剂，该抗性菌系与前３种有显著的交互抗性，而对后２种交互抗性有较大差异，其原因有待进一步研究。另外，抗多菌灵菌系对福美双也产生了显著的交互抗性（表３）。表３抗多菌灵菌系对其他几种杀菌剂的交互抗性通过对采集的１０株油菜菌核病菌，采用菌丝生长速率法测定多菌灵对各菌株的ＥＣ，。值。结果表明：其中２株为低抗菌株，以ＨＭｌ０的Ｅｃ蚰值最高，达２．２７５４Ｉｘｇ／ｍＬ，其次ＪＳＭ７的Ｅｃ５０值为１．３９１９Ｉｘｇ／ｍＬ；其余菌株的Ｅｃ，。值均小于０．５Ｉｘｇ／ｍＬ，为敏感菌株，以ＪＳｌ最为敏感，ＥＣ５０值为０．０８２３Ｉ．ｚｇ／ｍＬ；试验中未检测到中抗、高抗菌株。２．２油菜菌核病菌对多茵灵室内诱导抗药性将油菜菌核病各菌株经过室内紫外灯的诱导，其中ＪＳＭ７、ＪＳ，１７、ＡＨｌ、ＨＭｌ０均获得了抗性高自己１倍的菌株（表１），其中，ＪＳＭ７经室内诱导，ＥＣ，。值高达２８．４２８８斗ｇ／ｍＬ，是其诱导前ＥＣ５０值的２０．４倍，ＡＨｌ抗性倍数达３４．３倍。表１油菜菌核病菌对多菌灵的室内诱导抗药性表４抗多菌灵菌系连续转接培养后对多菌灵ＥＣ。值的变化２．３抗多菌灵菌系的生物学特性２．３．１菌丝生长比较从表２可以看出，抗性菌系ＪＳＴ７一ＬＲ与敏感菌系ＪＳｒｌ７，在菌丝生长速率、菌丝鲜重上有一定差异，但差异不显著。２．３．１产茵核能力比较抗性菌系在菌核出现和形成时间上较敏感菌系均有延迟现象，前者菌核出现和形成时间分别为７ｄ和１０ｄ，后者则分别为５ｄ和７ｄ。抗性菌系产生的菌核数量（１１个／ＩＨＬ）、重量（０．３３ｇ／皿）较１１８现代农业理论与实践２．５抗多菌灵茵系的遗传稳定性室内诱导的低抗菌株ＪＳＴ７．ＬＲ在无药平板上连续转接后，其ＥＣ∞值逐渐升高，转接１２次后，其ＥＣ。。值升高了３．８倍，抗性水平从低抗到达中抗。而野生菌株ＪＳＴ７的ＥＣ，。值较稳定，始终保持着对多菌灵的敏感性，表明野生菌株有较好的遗传稳定性。３讨论自２０世纪７０年代以来，多菌灵因其内吸性强，防病效果好等优点，一直以来作为防治油菜菌核病的首选药剂，由于长期单一使用，致使田问选择压力增大，部分敏感菌株能转变为抗性菌株。通过对江苏、安徽等部分地区所采集的菌株进行敏感性测定表明，江苏部分田块，油菜菌核病存在着对多菌灵的抗性，有的已达高抗Ｈ１；安徽地区所采集的油菜菌核病菌均为敏感菌株，但通过室内诱导可获得抗性菌株，抗性倍数最高可达３４．３倍。抗性菌系与敏感菌系在菌丝生长速率、菌丝鲜重上差异不显著，但产菌核能力要比敏感菌系强，菌核萌发时间要比敏感菌系早，说明在田间抗性菌系的适合度较强，所以要加强对田间抗性菌发展进行监测，发现抗性菌系，应立即引起重视，重视治理技术，不能单一使用多菌灵药剂。在遗传稳定性上，敏感菌系比抗性菌系趋于稳定，当部分菌株有抗性，随着时间推移，会导致抗性水平增强。同时发现，抗多菌灵菌系不仅对类杀菌剂如酮、烯唑醇和丙环唑有高水平的交互抗性（１３．２～５６７．３倍），对有机硫福美双也存在着较高水平的交互抗性，说明油菜菌核病菌不仅对多菌灵易产生高水平的抗性，而且对其他药剂间的交互抗性范围较广，这不仅为抗药性治理带来了困难，也证明了油菜菌核病菌对多菌灵的抗性风险性较大，在对其进行药剂防治时，选用二甲酰亚胺类杀菌剂如扑海因等是治理多菌灵抗药性的有效途径。参考文献：［１］石志琦，周明国，叶钟音．油菜菌核病对多菌灵抗药性监测．江苏农业学报，２０００，１６（４）：２１２—２１６．［２］ＢｒｅｎｎｅｍａｎＴＢ，ＰｈｉｐｐｓＰＭ，ＳｔｉｐｅｓＲＪ．Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｂｌｉｇｈｔｏｆｐｅａｎｕｔ；ｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｉｎｖｉｔｒｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｆｉｅｌｄｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｄｉｅａｒｂｏｘｉｍｉｄｅｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８７，７７（７）：１０２８—１０３２．［３］杨敬辉，潘以楼，朱桂梅，等．油菜菌核病菌对多菌灵和乙霉威的抗药性机理．植物保护学报，２００４，３１（１）：３７０—３７４．［４］潘以楼，吴汉章，杨敬辉，等．油菜菌核病（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）抗多菌灵菌株的检测．江苏农业学报，１９９８，１４（３）：１５９—１６３．油菜菌核病菌对多菌灵抗性菌系生物学特性、交互抗性、遗传稳定性研究
作者：作者单位：
张勇， 孙明娜， 王梅， 段劲生， 高同春
安徽省农科院植物保护研究所安徽省农作物品质改良重点实验室,合肥 230031
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