杜泊羊细管冻精不同稀释液效果的比较

羹藕与生理・Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　２００７年第４３卷楚２１期　杜泊羊细管冻精不同稀释液效果的比较　杨　凌　一，张乐颖　，袁　明。，闫志刚３曾申明　（１．河北工程大学农学院，河北邯郸０５６０２１；　２．中国农业大学动物科技学院，北京１０００９４；　３．河北省畜牧良种工作站，河北石家庄０５００６１）　摘要：采用４种不同冷冻稀释液制作杜泊羊细管冻精，解冻后精子活力以Ｔｒｉｓ、柠檬酸、糖类、甘油和卵黄稀释液　最高，达到０．４０８，与其他３种稀释液相比差异达极显著水平（Ｐ＜０．０１），柠檬酸钠、糖类稀释液为０、３５８；乙二醇稀　释液解冻后精子活力最低，只有０．２１８，与其他３种稀释液相比差异极显著（Ｐ＜０、０１），即乙二醇的抗冷冻效果不如　甘油。Ｔｒｉｓ、甘油、脱脂奶粉稀释液解冻后活力为０．３３７，即脱脂奶粉抗冻效果不及卵黄。　关键词：冻精；活力；杜泊羊　中图分类号：￥８２７．３　文献标识码：Ｂ　文章编号：０２５８—７０３３（２００７）２１—００１４—０２　杜泊羊原产于南非，是目前世界上公认最好的肉　产。试验时间为２００２年１０月一２Ｏ０４年１１月。　用绵羊品种，被誉为南非国宝。其生长速度快，羔羊初　１．２试验方法　生重大，有较强的抗病力，适应性强、易饲养。杜泊羊不　１．２．１用假阴道采精法采集精液，精液采出后，目测评　Ａ　Ｂ　Ｂ　Ｂ　用剪毛，是改良和提高当地绵羊肉用性能的优良终端　定精液的颜色、浑浊度；稀释后镜检，并按生产标准测　液＿液液＿－液　ｌ　父系。　定活力和密度，其外观、活力和密度均正常的才能进行　∞∞∞∞　Ｅｍｍｅｎｓ等Ⅲ首次将绵羊精液在一７９℃下冷冻保　冷冻试验。　一　一加一　存，但是受胎率极低。Ｍｏｌｉｎｉａ等ｆ斗认为Ｔｒｉｓ（三羟甲基氨　１．２．２采用４种稀释液稀释，具体内容见表１和表２。　基甲烷）、糖类稀释液是绵羊颗粒冷冻精液的最适稀释　表１基础液成分　一　　一一　液，甘油的抗冷冻效果优于其他抗冷冻剂。Ｐｕｒｄｙ翻利用　乳糖　葡萄糖幢蔗糖　Ｔｒｉｄｇ柠檬酸　柠檬酸钠／ｇ蒸ｆｌ￣／ｍＬ　Ｔｒｉｓ、卵黄、甘油稀释液，对绵羊精液冷冻前的平衡时问　Ａ　４．６　３．１　一　一　一　ｌ、８　５　６　６ｌ００　一　Ｂ　—　１．６　２．０　２．４２　ｌ＿３８　一　ｌ００　进行了研究，发现在５　ｏＣ、平衡４８　ｈ对解冻后精子的品　表２稀释液成分　质没有影响。据赵有璋等硎报道，颗粒冷冻精液以Ｔｒｉｓ　稀释液　基础液　蒸馏脱脂奶甘油乙二醇卵黄硫酸庆大霉素，　类稀释液效果较好。徐振军等ｆ　利用柠檬酸钠、糖类稀　编号　／ｍＬ　７Ｊ￣ｈｎＬ粉儋　／ｍＬ　／ｍＬ／ｍＬ支（８００００ＩＵ）　释液对小尾寒羊精液低温保存进行了研究，但是低温　Ｉ（Ｃ　Ｋ１　２Ｏ　ｌ　２　２Ｏ　ｌ　保存精液和冷冻精液相比保存时间较短。绵羊细管冷　３　冻精液和颗粒冷冻精液相比具有操作简便、容易标记、　４　不易被污染、受胎率高等诸多优点，是以后的发展趋　将３只符合要求的杜泊公羊精液混合后分为４等　势。本试验通过优化杜泊羊细管冷冻精液的稀释液配　分，分别用４种稀释液稀释，采用稀释器（ＢＳ２４５，北京　方，提高冷冻精液品质，进而提高杜泊种公羊的配种效　生化仪器厂）和精液浓度光度计（ＢＣＭ一５３５，北京市计　能和种用价值。　算机技术研究所、北京市奶牛研究所）确定稀释倍数，　以确保每只０．２５　ｍＬ细管中解冻后有效精子数不少于　１材料与方法　１．２ｘ１０　个。　１．１试验动物试验所用的３只杜泊羊（Ｗｈｉｔｅ　Ｄｏｒｐｅｒ）　１．２＿３精液的分装是将稀释后的精液采用细管自动分　种公羊为河北省畜牧良种工作站从澳大利亚引进的原　装机（法国大欧公司，ｓｔｃｏｃｎ）分装。每只细管的容量为　种羊，试验前后这３只杜泊羊均用于正常的冷冻精液生　０．２５ｍＬ。　１．２．４将分装完毕的细管精液放人４℃的环境平衡　收稿日期：２００７—０１—１８；修回日期：２００７—０５—１０　３～４　ｈ。　基金项目：河北省十五科技攻关课题（０１２２０４３５Ｄ）　１．２．５精液的冷冻采用细管精液冷冻仪冷冻（Ｍｏｄｅｌ　Ｋ　作者简介：杨凌（１９６７一），男，河北永年人，讲师，博士生　通讯作者　ＳＡＭＥＧＥＦＲＩＥＲＡＮＬＡＧＥ）。　中固耄教东志　维普资讯 http://www.cqvip.com

２００７年鬻４３卷第２｛期　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ・繁骚与笺理　１．２．６解冻采用４０　ｃｃ温水解冻。　１．２．７测定指标①精子活力：利用生物显微镜、专用　２结果　恒温板、数码摄像仪和彩色电视机，由常年从事冻精生　２．１不同稀释液对杜泊羊细管冻精品质的影响　产的专业人员测定精子的活力。②用蓝墨水染色测精　２．１．１不同稀释液对解冻后精子活力的影响从表３　子畸形率，每个样品测定２００个精子。③用姬姆萨染色　可知，以２组解冻后精子活力最高，极显著高于其他３　法测顶体完整率，每个样品测定２００个精子。④室温保　种稀释液（Ｐ＜０．０１），即采用Ｔｒｉｓ、柠檬酸、蔗糖、葡萄　存１２　ｈ活力，即在２０　ｃｃ左右的室温下，将解冻后的细　糖、甘油和卵黄的稀释液效果较好，柠檬酸钠、糖类稀　管精液在细管内保存１２　ｈ后再观察精子的活力。　释液不及Ｔｒｉｓ类稀释液；以４组即卵黄、乙二醇稀释液　１．２．８配种试验①发Ｊ隋鉴定：用公羊试情，结合母羊　解冻后精子活力最低，与其他３种稀释液相比差异极　阴道黏液状况及子宫颈口的开张情况，确定适宜的输　显著（Ｐ＜０．０１），即乙二醇的抗冷冻效果不如甘油。其　精时间。②输精：采用４０　ｃｃ温水解冻，用倒提后腿法输　中脱脂奶粉、甘油稀释液和卵黄、乙二醇稀释液解冻后　精。每次输精剂量为０．２５　ｍＬ，有效精子数不少于１．２ｘ　活力均未达到０．３５的生产标准（参照牛冷冻精液国家　１０　个，输精深度要在子宫颈口内１　ｃｍ以上，动作要　标准）［６１，即脱脂奶粉抗冻效果不及卵黄。　轻。输精后，做好记录，间隔８～１０ｈ再输１次。③不返　２．１．２不同稀释液对解冻后精子畸形率的影响从表　情观察：对配种的母羊连续试情观察４０　ｄ，统计不返情　３可知，以２组解冻后精子畸形率最低，同样是　ｓ、柠　率，并做好记录。　檬酸、蔗糖、葡萄糖、甘油和卵黄稀释液效果较好。但４　１．３数据分析用ＳＰＳＳＩＯ．０统计分析软件对各项指　种稀释液之间差异并不显著（Ｐ＞０．０５　ｏ　标进行ｔ检验。　２．１－３不同稀释液对解冻后精子顶体完整率的影响从　表３不同稀释液解冻后冻精的品质　注：同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著　＜Ｏ．Ｏ１），相同字母表示差异不显著　＞Ｏ．０５）　表３可知，２组解冻后精子顶体完整率最高，即Ｔｒｉｓ、柠　进行冷冻效果良好，这是由于Ｔｒｉｓ具有良好的缓冲性　檬酸、蔗糖、葡萄糖、甘油和卵黄稀释液效果较好。但４　和渗透性，且高浓度时对精子的毒性也较低　，与赵有　种稀释液之间差异亦不显著（Ｐ＞０．０５　ｏ　璋等　报道的对波德代（Ｂｏｒｄｅｒｄａｌｅ）和无角陶赛特（Ｐｏｌｌ　２．１．４不同稀释液对解冻后２０　ｃｃ保存１２　ｈ后活力的　Ｄｏｒｓｅｔ）绵羊精液进行冷冻的结果基本一致，只是本试　影响从表３可知，以２组解冻后２０￣Ｃ保存１２　ｈ的精　验采用的配方与赵有璋等［４１报道的颗粒冻精的配方略　子活力最高，极显著（Ｐ＜０．０１）高于其他３种稀释液，　有不同。　即Ｔｒｉｓ、柠檬酸、蔗糖、葡萄糖、甘油和卵黄稀释液效果　３．２乙二醇分子较小，渗入或渗出细胞的速率与水分　较好；以卵黄、乙二醇稀释液解冻后２０￣Ｃ保存１２　ｈ的　子差异不大，渗透压反应也较小，在冷冻胚胎上已经得　精子活力最低，与其他３种稀释液相比差异达极显著　到成功的应用阎，甘油的分子较大，渗入或渗出细胞的　水平（Ｐ＜０．０１），乙二醇的抗冷冻效果不如甘油。　速度较水分子陧，在常温下对精子有毒害作用。但本试　２．２配种试验用冷冻效果最好的Ｔｒｉｓ、甘油、卯黄稀　验结果显示，乙二醇在冷冻精液中的抗冻明显不如甘　释液制作杜泊羊细管冻精，在石家庄市的灵寿、藁城、　油，这与武浩等［９１报道的结果一致，却与刘玉峰等ｌ１Ｏｌ报　正定等地给当地绵羊进行人工授精。据统计，共对２３５　道的用乙二醇代替甘油作为抗冷冻剂获得了较好的冷　只发情绵羊进行了人工授精，其中１　５２只不返情，不返　冻效果不一致。这可能是由于试验所用的绵羊品种和　情率为６４．６８％。　稀释液配方不同所致，乙二醇在冷冻精液中的抗冻效　３讨论　果还需进一步证实。　３－３采用脱脂奶粉代替卵黄在进行波尔山羊颗粒冷　３．１　本试验证实了采用Ｔｒｉｓ类稀释液对杜泊羊精液　冻精液上取得了良好的效果ｌ１”。脱脂奶粉具有易溶于　中　鸯裁东恙《参　维普资讯 http://www.cqvip.com 繁臻与生理・Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　２００７年舞４３卷笫２１期　绵羊同期发情技术在生产中的应用研究　王春强　，马　巍　，马　宁　（１．辽宁医学院动物科技学院，辽宁锦州　１２１００１；　２．吉林农业大学动物科技学院。吉林长春１３０１１８）　摘要：试验对２１９只绵羊进行同期发情试验，其结果是孕激素长期处理和短期处理２种不同的同期发情方法都　获得了较高的同期发情效果（８９．１０％和８９．０８％），并且在短期处理中使用不同的阴道栓（含ＭＡＰ的ＰＲＩＤ和　ＣＩＤＲ）所获得的最终结果无显著差异（８６．４４％和９１．６７％）；采用腹腔镜子宫角输精法输精，通过Ｂ超检查妊娠情　况，结果表明：处理组Ⅲ（９４．５５％）和处理组Ⅱ（９４．１２％）均显著高于处理组Ｉ（８１．６３％）。通过处理组Ⅱ与处理组Ⅳ　的比较可知同期处理组中使用输精管切割的公羊进行发情诱导是很有必要的。　关键词：同期发情；定时人工授精；妊娠率；绵羊　中图分类号：￥８２６、３　文献标识码：Ｂ　文章编号：０２５８—７０３３（２００７）２１—００１６—０３　同期发情是近年来现代化畜牧业生产中发展起来　的新的繁殖控制技术，是由诱发发情演化而来，是实行　新的繁殖控制技术的关键。控制母畜同期发情对缩短　配种时间、推广人工授精技术、减少不孕、提高繁殖率，　技术，在生产上得以推广利用开始于Ｒｈｉｎｄ等『１１采用阴　道海绵栓埋植孕酮法实行了同期发情。Ｂｏｌａｎｄ等回、　Ｓａｒｋａｒ等『３１和Ａｎｄｏ等　用ＰＧ或其类似物对家畜进行　肌肉、皮下或子宫颈注射法进行绵羊同期发情，都取得　了理想效果。定时人工授精（ＴＡＩ）就是指通过运用适当　以及有计划合理地组织畜牧生产具有重要作用，同时　也是要进行动物胚胎移植的必需手段之一。同期发情　的激素处理，而使母畜在特定的时间内集中发情，并不　通过发情鉴定而直接进行人工授精的一种方法，在商　收稿日期：２００７－０１—２４；修回日期：２００７－０５—１２　作者简介：王春强（１９８０一），男，助讲，硕士　业胚胎移植中ＴＡＩ的推广有着极其重要的作用。绵羊　人工授精技术在我国农村的应用还不普及，为此本文　水、称量方便等优点，并且还具有卵黄的多种有益作　用。由于牛、羊同属草食动物，脱脂奶粉中营养物质（如　蛋白质等）的生物化学结构与禽类卵黄中营养物质相　比，其生物化学结构更接近绵羊精液中的营养物质，应　更有利于绵羊精子的利用。但本试验采用脱脂奶粉代　替卵黄效果并不理想，这还需要在基础液配方和脱脂　奶粉的用量上进行探究。　３．４本试验采用国内比较先进的细管自动分装机和　ｅｒｙｏｐｒｏｔｅｅｔａｎｔｓ　ｉｎ　ｄｉｌｕｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｐｅｌｌｅｔ—ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ｒａｍ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ［］Ｊ．　Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，ｌ　９９４，４２：８４９—８５８．　［３］ＰｕｒｄｙＰＨ．Ｔｈｅｐｏｓｔ－ｔｈａｗｑｕａｌ　ｏｆ　ｒａｍ　ｓｐｅｒｍｈｅｌｄｆｏｒ０ｔｏ４８ｈａｔ５０Ｃ　ｐｒｉｏｒ　Ｉｏ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｉ　Ｒｅｐｍｄ　Ｓｅｉ，２００６，９３：１　１４—１２３．　［４］赵有璋，陈亚明，孙照刚，等．提高绵、山羊颗粒冻精品质的研究　叨．中国草食动物，２００３，２３（１）：３－５．　［５］徐振军，闫长亮，郭成，等．小尾寒羊精液保存技术研究叨．中国　畜牧杂志，２００６，４２（２１）：８—１１．　［６］　中华人民共和国国家标准牛冷冻精液［Ｊ］．中国供销商情・乳业　导刊，２００５，（７）：３３．　ｆ７】Ｎａｈａｓ　Ｇ　Ｇ　Ｉｎｔｏｄｕｃｔｒｏｒｙ　ｒｅｍａｒｋｓ【Ｊ］．Ａｎｎ　Ｎ　Ｙ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ，１９６１，９２：３３７．　细管精液冷冻仪，分装和冷冻在河北省种牛站（河北省　畜牧良种工作站下属单位）进行，精液的品质检查也是　由专业人员完成，冷冻程序也采用牛冷冻精液的制作　［８］桑润滋．动物繁殖生物技术（第１版）［Ｍ】．北京：中国农业出版社，　２００２．２５５—２５６．　程序，这是其他研究单位所不能具备的，由于绵羊的精　液量少、密度大、稀释倍数大，因此可以考虑探索一套　绵羊冷冻精液的制作程序。　参考文献：　［１１　ＥｍｍｅｎｓＣＷ．ＢｌａｅｋｓｈａｗＡＷ．Ｔｈｅｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｓｔｏｒａｇｅｏｆｒａｍ，ｂｕｌｌ　［９］武浩，王立强，华松，等．无角陶赛特羊冻精制作技术［Ｊ］．中国畜　牧杂志，２００２，３８（６）：２９—３１．　［１Ｏ］刘玉峰，李武，兰翠．乙二醇对绵羊冻精效果的研究［Ｊ１＿中国草　食动物，２００２，２２（６）：９一ｌ１．　［１　１］杨凌，桑润滋，张会文，等．脱脂奶粉提高波尔山羊颗粒冻精效　果试验叨．黑龙江动物繁殖，２００４，ｌ２（１）：ｌ１一ｌ２．　ａｎｄ　ｒａｂｂｉｔ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ［Ｊ］．Ａｕｓｔ　Ｖｅｔ　Ｊ，１　９５０，２６（９）：２２６—２２８．　【２１　Ｍｏｌｉｎｉａ　Ｆ　Ｃ，Ｅｖａｎｓ　Ｇ．Ｍａｘｗｅｌｌ　Ｗ　Ｍ　Ｃ．Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ　．Ｉｉ　中固亳牧袈志