肝脏祖细胞标志物ep-cam、n-cam1、c-kit 和ki-67表达与原发性肝癌的关系

Int J Angiol, 2015, 24(2): 75-80.• 1683 •and skin autofluorescence are increased in

trix metalloproteinase-9 for the earliest stage acute coronary syndrome[J]. Circ J,

[9] Wu L, Ma L, Nicholson LF, et al. Advan­COPD[J]. Eur Respir J, 2014, 43(2): 430-43 8.[11]骆世棠•晚期糖基化终末产物与冠状动脉

ced glycation end products and its recep­tor (RAGE) are increased in patients with

2011,75(12): 285328-285361.[8] Prasad K, Dhar 1, Caspar-Bell G. Role of

COPD[J]. Respir Med, 2011, 105(3): 329-336.[10] Gopal P, Reynaert NL, Scheijen JL, et al.

病变程度的相关性研究[J].实用临床医 学,2009,10(6):30-32.advanced glycation end products and its receptors in the pathogenesis of cigarette

收稿日期= 2019-08-15 (本文编辑:陈志翔)smoke-induced cardiovascular disease [J].Plasma advanced glycation end-products

肝脏祖细胞标志物Ep・CAM、N・CAMl、C・Kit 和Ki-67表达与原发性肝癌的关系李银亚，孟蓉蓉，金洁【关键词】 肝癌;肝脏祖细胞;Ep-CAM； N-CAM1 ； C-Kit； Ki-67；预后doi:10.3969^.issn,1671-0800.2019.12.063【中图分类号】R365【文献标志码】A 【文章编号】1671-0800（20⑼12-1683-03原发性肝癌（PHC）依据病理组织学 外科收治的PHC患者110例为观察组，

公司,N-CAMl、C-Kit、Ki-67免疫组化试

类型可将其分为肝细胞性肝癌（HCC）、

均符合《中国原发性肝癌治疗指南》中相 剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限

公司;通用型SP免疫组化试剂盒与DAB

胆管细胞性肝癌（CC）和混合细胞性肝 关诊断标准叫纳入标准：（1）年龄N18 癌（cHCC-CC）,目前关于PHC的病因与

岁，行外科手术切除并经病理确诊；（2）

显色试剂盒购自北京中衫金桥生物技术

发病机制尚未完全明确叫近年来，肿瘤 所获取的组织标本均经10%中性甲醛固 公司。采用BenchMark-GX全自动免疫

干细胞学说为研究肿瘤发病机制提供了

定，常规石蜡包埋；（3）无心、肺、肾等器 组化仪（Roche公司）进行免疫组化检测。

新的方向,2004年美国肝脏病研究协会 质性病变，且本研究获得本院伦理委员 1.3方法所选标本均送本院病理科

统一将人肝脏中与啮齿类动物卵圆细 会批准，患者知情。排除：（1）继发性肝 检查，对石蜡切片脱蜡、水化，应用PBS 胞/干细胞相似的这群细胞建议命名为 癌；⑵住院期间临床资料与相关检查结 冲洗3x3 min,高温高压抗原修复后，加

肝脏祖细胞（HPC）。在正常人肝组织中， 果欠缺者;⑶存在糖尿病等其他系统疾 3%H：O：溶液，室温下孵育10 min；应用

HPC位于成体肝脏中门静脉区的胆小管 病或不愿参与本研究者。观察组男60例， PBS冲洗3x3 min,加一抗，室温下孵育

和Hering管内，具有双向分化潜能日。在 女50例;年龄35〜67岁，平均（52.1±5.3）

60 min； PBS冲洗3x5 min,加聚合物增

HPC中钙黏素表达上调,Ep-CAM是一 岁；高分化41例,中分化45例,低分化24 强剂（试剂1）,室温下孵育20 min； PBS冲

种I型跨膜糖蛋白，参与祖细胞成熟与 例；发生远处转移者60例,未发生远处转 洗3x3 min,加酶标抗鼠聚合物（试剂2）, 分化及肿瘤形成，受体C-Kit是干细胞 移者50例;病理类型:HCC 40例,CC 35

室温下孵育30 min； PBS冲洗3x3 min,

因子受体,为造血干细胞的标志，同时N- 例,cHCC-CC35例。另选取同期进行肝 加新配制的DAB显色液，于显微镜下观

CAM1, Ki-67也是肿瘤干细胞的重要标 活检者40例为对照组,其中男21例，女 察，阳性显色为棕黄色。流水冲洗2 mm,

志物,参与肿瘤的转移及发生发展叫本

19例；年龄34~66岁，平均（51.牡5.4）

岁;疾病类型:病毒性肝炎8例,脂肪肝12

苏木素复染，釆用0.1%盐酸酒精分化,

文主要分析 Ep-CAM、N-CAM1、C-Kit、

以流水冲洗返蓝，梯度酒精脱水干燥，后

Ki-67与PHC患者组织类型、分级、转移 例，肝硬化20例。两组一般资料差异无 以中性树脂封片。及预后的关系，现报道如下。统计学意义（P>0.05）„1.4结果判读 由2位高年资病理科

记物 Ep-CAM、N-CAM1、C-Kit 和 Ki-67

1资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年5月至1.2试剂与仪器 鼠抗人Ep-CAM单 专科医师阅片，观察组织中HPC标

克隆抗体购自Santa Cruz公司（sc-25308,

工作浓度1 : 400,克隆号C-10）,鼠抗人 蛋白在组织芯片及手术标本的定位与分

2018年6月宁波市鄭州第二医院胃肠作者单位：315100宁波，宁波市鄭州N-CAM1 （克隆号 3B-10）, C-Kit（克隆号 布。Ep-CAM染色阳性细胞为细胞膜出

kit2c75）、Ki-67（克隆号MIB-1）均由购自 现棕黄色颗粒,N-CAM1阳性细胞为细

福州迈新生物技术开发有限公司；免疫组 胞质内出现棕黄色颗粒,C-Kit阳性细胞 化 Ep-CAM 试剂盒 Ultraview Universal

为细胞质内出现黄棕色颗粒,Ki-67阳性

第二医院通信作者：李银亚，Email： kep!2246569@163.comDAB Detection Kit （D06808）购自 Roche 细胞核内出现棕褐色颗粒叫在病变处• 1684 •Modern Practical Medicine, December 2019, Vol. 31, No. 12随机选择10个高倍镜视野（X400）,每个 CAM、N-CAM1、C-Kit 及 Ki-67 表达水 （才35.047,P < 0.05）,不同性别、年龄的

视野计数100个细胞数，通过强度及异 平患者的预后，包括中位无瘤生存期、平 PHC患者上述指标差异均无统计学意义 质性的快速评分法（Q-score）进行半定 均生存时间。（才W2.786,均 F > 0.05）=见表 2.量评分评估染色结果。根据染色强度赋 予0分（阴性）、1分（弱）、2分（中度）、3 分（强度）;对于异质性，根据阳性染色肿

1.6统计方法采用SPSS19.0统计软 2.3 PHC患者HPC标志物与预后的关

件进行分析，计数资料釆用才检验,计量 系 Ep-CAM, N-CAM1, C-Kit, Ki-67 资料以均数士标准差表示，采用r检验。高表达者中位无瘤生存期、平均生存时

瘤细胞百分比计0分（0）、1分（1%〜 P < 0.05为差异有统计学意义。间短于低表达者（732.303,均P <

25%）、2 分（26%~ 50%）、3 分（51%~ 75%）、4分（76%~ 100%）,每份样本的

满分0〜7分,Q-score》2分为高表达,

2 结果0.05）,且 Ep-CAM、N-CAM1, C-Kit, Ki-67 4项均高表达者中位无瘤生存期、

Q-score得分为强度与异质性得分之和， 2.1两组HPC标志物阳性率比较观 平均生存时间最短。见表3。察组 Ep-CAM、N-CAM1、C-Kit 及 Ki-67

Q-score < 2为低表达。1.5观察指标（1）比较两组HPC标志表达阳性率均高于对照组（均F <

3讨论过去很长一段时间都认为肝细胞肝

0.05）。见表1、封四彩图3〜6。物表达水平的差异；（2）分析Ep-CAM、 2.2 PHC患者HPC标志物与其病理参 癌起源于成熟肝细胞的去分化，近年来

N-CAM1,C-Kit,Ki-67 与 PHC 患者病理 数的关系分析随分化程度降低、Child-

的研究表明这种观念不正确，在许多肝

参数（性别、年龄、分化程度、病理组织学 pugh 分级增加，患者Ej>CAM、N-CAMl、 癌的动物模型中，肝癌的发展伴随着 类型、Child-pugh分级）的关系，病理组 C-Kit,Ki-67表臥平增加，且组织类型为 HPC的激活，一部分肝癌细胞表达HPC 织学类型、Child-pugh分级标准参照文 HCC 患者 Ep-CAM, N-CAM1, C-Kit、 献［6］； （3）比较PHC患者中有远处转移、的标志物，这表明肝癌可能起源于HPC, 因此以肿瘤干细胞学说为基础的理念为

Ki-67 高于 CC、cHCC-CC 患者 Q6.772,

无远处转移者 Ep-CAM、N-CAM1, C-均P< 0.05）,转移者Ep£AM、N-CAMl、 PHC的机制研究提供了新方向S肿瘤

Kit、Ki-67的阳性率；（4）比较不同Ep- C-Kit、Ki-67表达水平高于未转移者表1两组HPC标志物阳性率比较

干细胞学说认为肿瘤的生长是极少量肿 瘤干细胞增殖的结果，为肿瘤发生的根

例（％）组别观察组例数Ep-CAM80(72.73)18(45.00)9.957N-CAM152(47.27)C-Kit45(40.91)Ki-6748(43.)源。HPC位于门静脉区的胆小管和Her-

11040对照组才值10(25.00)6.001< 0.059(22.50)4.3158(20.00)7.005ing管内,Hering管是由部分肝脏细胞和

部分胆管细胞连接而成的管道，是胆树

P值< 0.05< 0.05< 0.05和小叶内微管系统的解剖和生理

表2病理参数例数PHC患者HPC标志物与其病理参数的关系例（％）系,是由于其分化过程被阻断所致叫近 期有学者研究表明在胆汁性肝纤维化表3 PHC患者HPC标志物Ep-CAMN-CAM1C-KitKi-67性别男6045(75.00)35(70.00)28(46.67)24(48.00)25(41.67)20(40.00)28(46.67)20(40.00)指标与预后的关系分析女年龄（岁）50例数中位无瘤生 平均生存 时间（个月）存期（个月）68$50< 5051(75.00)31(45.59)21 (50.00)32(47.06)13(30.95)32(47.06)Ep-CAM高表达低表达4229(69.05)16(3&10)453523.45±2.4 广28.47±2.96\"26.18±2.74分化程度高中4130.16±3.4420(48.78)39(86.67)14(34.15)10(24.39)22(48.)11(26.83)23(51.11)N-CAM1高表达低表达452420(44.44)18(75.00)2923

22.16±2.43\"25.1U2.63\"低Child-pugh 分级A级21(87.50)13(54.17)14(58.33)27.15±2.8433.09±2.90C-Kit1840528(44.44)5(27.78)4(22.22)11(27.50)6(27.78)11(27.50)31(59.62)高表达低表达2624.10±2.51^27.15±2.84\"B级26(65.00)46(88.46)16(40.00)31(59.62)1925.88±2.6331.22±3.05c级组织类型30(57.69)Ki-67高表达3024.05±2.54 粋27.56±2.80^25.84±2.6731.20±3.21HCCCC403536(90.00)25(62.50)23(57.50)10(2&57)12(34.29)25(62.50)低表达4项均高表达1821 (60.00)23(65.71)11(31.43)16(45.71)13(37.14)10(28.57)cHCC-CC有无转移发生35是2520.65±2.24*24」5±2.63*5529.56±2.93否605034.10±1.65有无49(61.25)31(62.00)36(60.00)31(51.67)32(53.33)注:与低表达者比较,*PV 0.05；与4项均高16(32.00)14(28.00)16(32.00)表达者比较,#P<0.05现代实用医学 2019年12月第31卷第12期

• 1685 •达及临床意义[JI中国热带医学,2015.15中，HPC细胞可分化为胆管上皮细胞,

信号传导、细胞迁移、增殖及分化等生物

Notch信号通路活化对其发挥关键作用性

因此分析HPC相关标志物有重要意义。本文结果显示观察组Ep-CAM、N-

过程中发挥重要作用1叫神经细胞黏附 分子1是免疫球蛋白超家族的一类糖蛋

[5]

:1484-1486.(12)刘会春.中国原发性肝癌治疗指南解 读[J].肝胆外科杂志,2013.21(1):12-14.白,在胆管上皮细胞发育早期以及Hering

CAM1、C-Kit、Ki-67表达阳性率高于对 管和反应性增生的胆小管明显表达,为人

照组，且在PHC患者中随肿瘤分化程度 类HPC的标志“3本文也显示Ep-CAM、

[6] 葛均波，徐永健.内科学[MI8版.北京:人

民卫生出版社,2013:355.[7] 王虎明，巴彩霞，丽敏，等.血清肿瘤标志物

降低、Child-pugh分级增加，患者Ep- N-CAM1,C-Kit,Ki-67高表达者中位无瘤

检测对肝癌及转移患者的临床意义[J]. 标记免疫分析与临床,2016.23⑻:881-884.CAM、N-CAM1, C-Kit, Ki-67 表达水平 生存期、平均生存时间短于低表达者，且

增加，同时组织类型为HCC患者Ep-

Ep-CAM, N-CAM1, C-Kit, Ki-67 4 项均高 [8] 孙加林.王彤.肝细胞生长因子受体c-Met

肝癌细胞上皮间质转化的作用机 制[J]冲华肝胆外科杂志,2017,23(2):

CAM, N-CAM1, C-Kit, Ki-67表达水平 表达者中位无瘤生存期、平均生存时间最

较CC、cHCC-CC患者高，发生远处转移

短，表明 Ep-CAM,N-CAM1, C-Kit, Ki-67 与PHC患者祖细胞的成熟与分化以及肿

[9]

患者 Ep-CAM, N-CAM1, C-Kit, Ki-67

142-144.慕永平，张笑，徐莹，等.Notch信号通路参

水平也高于未转移者。而不同性别、年 瘤的形成、预后不良有关。与大鼠胆汁性肝纤维化肝祖细胞向胆管 上皮细胞分化以及肝纤维化进展[JI中 华病理学杂志.2017,46(6):400-405.[10] 张薇薇，钟晶敏，李晶，等上皮细胞黏附分

龄的 PHC 患者 Ep-CAM, N-CAM1, C- 综上所述，HPC标志物Ep-CAM、

Kit、Ki-67表达水平差异无统计学意义 N-CAM1、C-Kit,Ki-67 与 PHC 患者肿瘤

(均 P > 0.05)。可见 Ep-CAM, N-

分级、转移、预后存在密切关系，参与其

CAM1、C-Kit、Ki-67 参与 PHC 的分化，

并与肿瘤分级存在一定关系，尤其在组 织类型为HCC细胞中，Ep-CAM, N-

发生发展,相关机制有待进一步研究。参考文献：子表达与乳腺癌淋巴结转移的相关性[JI 国际肿瘤学杂志,2017,44(3):177-181.[11] Tsuchiya A, KamimuraH, Tamura工 etal.

Hepatocellular earcinoma with progenitor cell features distinguishable by the hepatic

CAM1、C-Kit, Ki-67表达水平明显升 [1] 王述莲，呼建民,何光伦，等.血清肿瘤标志

高。原因可能是HCC由肝细胞发展而 来,此型约占肝癌的90%,癌细胞以多角 形、圆形多见，排列为巢或索间有丰富的

物联合血常规指标检测在原发性肝癌诊 断中的应用研究[J].标记免疫分析与临

stem progenitor cell marker NCAM[J]. Cancer Lett, 2011,309(1):95-103.床.2017,24(1):4-7.[2] 李飞，马振增,陆伦根，等.成体肝祖细胞的

研究进展[J].临床肝胆病杂志,2017,33[12] Oishi N, Kumar MR, Roessler S, et al.

Transcriptomic profiling revea Is hepatic stem-like gene signatures and interplay of

血窦而无间质成分，而CC型细胞排列 为腺体，纤维组织较多，血窦较少。Ep-

:994-997.(5)[3] 徐军，胡勇，王健，等.原发性肝细胞癌中干

细胞标志物的表达与上皮细胞-间质转 化的关系[J].临床与实验病理学杂志,

CAM 为I型跨膜糖蛋白,又称CD326,

最初在结肠癌中发现，存在于细胞器、细

miR 200c an d epithelial-mesenchymal transition in intrahepatic cholangiocarc in- oma[J]. Hepatology, 2012,56(2): 1792-1803.胞膜与细胞外区，Ep-CAM与细胞含氮

化合物代谢过程、生物合成、信号传导及 解剖形成等有关，因此在细胞连接、细胞

2014.30(8):884-88 &[4] 李金梅，张金库,周炳娟，等.Sox2,EpCAM

收稿日期= 2019-09-10 (本文编辑:陈志翔)和Ki-67在三阴乳腺癌原发和转移灶表腹部CT及磁共振胰胆管成像在肝外胆结石

诊断中的价值比较郑苏津

【关键词】X线计算机，体层摄影术;胆结石;诊断doi:10.3969/j.issn,1671-0800.2019.12.0【中图分类号】R816.5【文献标志码】A

【文章编号】1671・0800(2019)12\"685・02作者单位：324100浙江省江山，江山市人民医院通信作者：郑苏津，Email： 378277288@qq.com肝外胆管结石平时一般没有症状或 下，胆管发生痉挛,且易并发胆管梗阻,

仅有腹部不适或腹部隐痛的情况，在食 用大量油腻食物或体位改变时可能会出

此时除了腹痛外还会出现黄疸叫长时 间梗阻不解除，发生感染的概率增大，继

现胆绞痛，因为在直径较小结石的刺激 发胆管炎时会出现典型的腹痛、寒战高邢潇英•放大率校正对近视人群视盘旁神经纤维层厚度测量的影响（见正文第1620页）RNFL象限值图2为放大率矫正示意图注:从外到内紫圈为仪器默认采样圈，蓝圈为实际1.73 mm直径采样圈，

图1为OCT自动识别上下鼻颖四象限神经纤维层厚度示意图黑圈为视盘边界，红圈为视杯边界。该受试者眼轴长度为27.61 mm,因此 OCT 的采样环实际半径为 3.3823x0.0130623x（27.61 -1.82）x1.73=1.97 mm李银亚，孟蓉蓉，金洁•肝脏祖细胞标志物Ep-CAM.N-CAM1、C-Kit和Ki-67表达与原发性肝癌的关系（见正文第1683页）表达（DAB染色,x200）表达（DAB染色,x200）达(DAB 染色,x200)(DAB 染色,Ax200,B><400)张江锋，陈景南•孤立性脑毛霉菌病一例并文献复习（见正文第1694页）A B C D AB CD图7右额叶和基底节大片异常信号灶 图8右侧颈内动脉颈段闭塞注：TiWI等低信号，T2WI略高信号，DWI高信号，增强扫描周围脑回样 注:A远端全程未见显示。B右侧颈内动脉颅底和颅内段未显影， 强化，无明显占位效应,左侧大脑半球多发点片状长T2信号,DWI高信 大脑前后动脉由交通支供血。C右额叶和基底节区可见片状低密

号，中线无偏移。提示脑梗死 度影，大部分趋向液化性，部分区域密度稍高，右侧侧脑室轻度受压，中线向左偏移。D右侧大脑病损切除术后，右侧大脑中动脉供 血区大面积脑梗死伴出血转化，中线无偏移BCD图9病灶脑组织病理结果注:HE染色（xlOO和x400）：脑组织大的坏死，局灶性化脓性炎症，由非隔膜菌丝渗透的血管（黑色箭头MA - B）q PASM染色（C）和PAS

染色（D） （x400）:可见多个鞄子囊（黑色箭头）和宽菌丝，属毛霉菌的特征