HPLC测定盐酸羟甲唑啉喷雾剂中三氯叔丁醇的含量

HPLC测定盐酸羟甲唑啉喷雾剂中三氯叔丁醇的含量

李永贵，张锡霞，徐伟娜，王 晶*

（山东省药学科学院，山东省化学药物重点实验室 山东 济南 250101）

摘 要：目的 建立高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸羟甲唑啉喷雾剂中三氯叔丁醇含量的方法。方法 采用Kromasil色谱柱，以磷酸盐缓冲液（pH 4.0）-乙腈-甲醇（45:40:15）为流动相，流速1.0 ml/min，柱温35 ℃，检测波长210 nm。结果 三氯叔丁醇在0.1999～0.5998 mg/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为99.16 %，RSD为0.34 %。结论 该方法简便、快速、准确、专属性强，可用于盐酸羟甲唑啉喷雾剂中三氯叔丁醇的检测。

关键词：三氯叔丁醇；含量测定；盐酸羟甲唑啉；高效液相色谱法

中图分类号：R927.2 文献标识码： A 文章编号：1672-979X（2018）03-0210-04DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2018.03.011

Determination of Chlorobutanol in Oxymetazoline Hydrochloride Spray by HPLC

LI Yong-gui, ZHANG Xi-xia, XU Wei-na, WANG Jing

收稿日期：2017-06-14

作者简介：李永贵，高级工程师，从事新药研发工作 E-mail:lyg-1230@163.com*通讯作者：王晶，主任药师，从事新药研发工作 E-mail:2390619@qq.com

3.3 操作环境的要求

胆红素遇光不稳定，对照品和供试品的制备过程和测定过程中须注意避光操作。胆红素遇热不稳定，在操作中特别是在超声提取过程中，温度控制在30 ℃以下，必要时在超声仪中加入冰块或冰袋以控制温度。

参考文献

[1] 国家药典委员会. 卫生部药品标准：中药成方制剂第九册[S].

1994：48-49.

[2] YBZ22932005，心可宁胶囊 国家食品药品监督管理局标准

（试行）[S]. 2005.

[3] YBZ08692006，心可宁胶囊 国家食品药品监督管理局标准

（试行）[S]. 2006.

[4] YBZ02242004，心可宁胶囊 国家食品药品监督管理局标准

（试行）[S]. 2004.

[5] YBZ07542005，心可宁胶囊 国家食品药品监督管理局标准

（试行）[S]. 2005.

[6] 曹帅，夏晶，杨新华，等. 3 种牛黄及安宫牛黄丸中总胆红素含

量测定方法的优化[J].药物分析杂志，2014, 34（2）: 329-334.[7] 刘洪海，刘维彬，李智慧，等. HPLC 波长切换法测定氨咖黄

敏胶囊4 个成分的含量[J].中国药事，2016, 19（1）: 1-191.

[8] 张梦轩，张轶华，张越，等. HPLC 法测定4 种感冒药制剂

人工牛黄或体外培育牛黄中的胆红素[J]. 中成药，2017, 39（9）: 1960-1963.

[9] 莎日娜，何春龙. HPLC 法测定小儿清肺八味丸中胆红素的含

量[J]. 中国药师，2014, 17（3）: 520-521.

[10] 丛晓娟，李峰，朱晓静，等. HPLC 指纹图谱对西黄滴丸胆红

素含量的测定[J].山东中医药大学学报，2014, 38（4）: 386-388.

[11] 张颖，宋志钊，刘元. 高效液相色谱法测定“天竺痫康宁胶

囊”中胆红素的含量[J]. 安徽医药，2016, 20（6）: 1087-10.[12] 李为，李喜平，张程亮，等. 高效液相色谱法同时测定复方

牛黄贴中胆红素和奥硝唑含量[J]. 医药导报，2016, 35（10）: 1101-1104.

[13] 罗亚玲，周娟，齐景梁. 基于高效液相色谱法的牛黄解毒制剂

中胆红素含量测定[J]. 成都大学学报（自然科学版），2017, 36（1）: 18-20.

[14] 国家药典委员会. 中国药典[S]. 2015年版四部. 北京：中国医药

科技出版社, 2015：374-378.

[15] 国家药典委员会. 中国药典[S]. 2015年版一部. 北京：中国医药

科技出版社, 2015：5-6，70-71.

[16] 陈小红，欧阳吉德. 高效液相法测定牛黄解毒片中胆红素的含

量[J]. 中国医药导刊，2010，12（2）：307-308.

[17] 陈婧，干国平，何再安，等. 高效液相色谱法测定牛黄复方栓

剂中胆红素的含量[J]. 中药材，2004，27（10）：772-774.

食品与药品 Food and Drug 2018年第20卷第3期 211

(Shandong Provincial Key Laboratory of Chemical Drugs, Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences, Jinan

250101, China)

Abstract: Objective To establish an HPLC method for the determination of chlorobutanol in Oxymetazoline Hydrochloride Spray. Methods A Kromasil chromatographic column was adopted with phosphate buffer (pH 4.0)-acetonitrile -methanol (45:40:15) as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min, the column temperature was 35 ℃ and the detection wavelength was 210 nm. Results The linear range of chlorobutanol was 0.1999-0.5998 mg/ml (r=0.9997) and the average recovery was 99.16 %, with RSD of 0.34 %. Conclusion The method can be simple, rapid, accurate and specific, and can be used for the determination of chlorobutanol in Oxymetazoline Hydrochloride Spray.

Key Words：chlorobutanol; determination; oxymetazoline hydrochloride; HPLC

盐酸羟甲唑啉是一种α-肾上腺素受体激动药，具有收缩鼻黏膜血管，减轻充血、改善鼻塞症状的效果[1]；其制剂盐酸羟甲唑啉喷雾剂广泛应用于急慢性鼻炎、鼻窦炎、过敏性鼻炎、肥厚性鼻炎的治疗，也可用于感冒引起的鼻黏膜充血及特应性变应型鼻炎的治疗[2-3]。

盐酸羟甲唑啉喷雾剂中加入三氯叔丁醇作为抑菌剂，起到抗真菌、抗细菌的作用，对革兰阳性菌及某些真菌均有较好的抑制效果[4]。其作用机制是通过凝固细菌的蛋白及球蛋白达到抑菌效果。盐酸羟甲唑啉喷雾剂为鼻腔给药，药物直接与鼻腔黏膜接触，因此需严格控制三氯叔丁醇的用量。本研究建立了一种高效液相色谱法测定三氯叔丁醇含量的方法，可检测盐酸羟甲唑啉喷雾剂中抑菌剂三氯叔丁醇的含量，可用于该药物的质量控制[5-9] 。

空白溶液：照盐酸羟甲唑啉喷雾剂处方配制不含三氯叔丁醇的空白供试品溶液。精密量取1 ml置入10 ml量瓶，加入适量流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀。

对照品溶液制备：精密称取三氯叔丁醇对照品约30 mg置入100 ml量瓶，加入适量流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml中含有三氯叔丁醇约0.3 mg的对照品溶液。

供试品溶液制备：精密量取盐酸羟甲唑啉喷雾剂1 ml置入10 ml量瓶，加入适量流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀。

2.2 色谱条件

色谱柱：Kromasil（100-5C18色谱柱，250 mm×4.6 mm，5 μm）。

流动相：磷酸盐缓冲液（0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液含0.2 %三乙胺，磷酸调节pH值至4.0）-乙腈-甲醇（45:40:15），检测波长210 nm，柱温35 ℃，流速1.0 ml/min，进样体积20 μl。理论板数按三氯叔丁醇峰计算应不低于2000。

1 仪器与试药1.1 仪器

高效液相色谱仪（LC-20AT型泵、SPD-M20A型检测器、Lab Solution液相色谱数据工作站，日本岛津公司）；BT125D分析天平（Saryorius）；PHSJ-3F精密酸度计（上海雷磁仪器厂）。

2.3 波长选择

取三氯叔丁醇对照品溶液，DAD检测器在190～400 nm波长范围内进行紫外扫描，结果表明，三氯叔丁醇在240～400 nm波长处均无吸收，在199～240 nm范围内随波长的增加吸收值逐渐降低，属于紫外末端吸收。为减少紫外末端吸收时溶剂及流动相对测定结果干扰，保证测定结果准确，采用210 nm为检测波长。

1.2 试药

三氯叔丁醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号100492-201302）；盐酸羟甲唑啉喷雾剂（自制中试样品）；乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺为分析纯；水为试验用去离子水。

2 方法与结果2.1 溶液制备

2.4 专属性试验

分别取空白溶液、对照品溶液及供试品溶液

212 食品与药品 Food and Drug 2018年第20卷第3期

各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，三氯叔丁醇保留时间约6.4 min，空白溶液在三氯叔丁醇出峰位置无干扰，表明本色谱条件专属性良好。见图1~3。

t/min

图1 空白溶液HPLC图谱

t/min

图2 三氯叔丁醇对照品溶液HPLC图谱

t/min

图3 供试品溶液HPLC图谱

2.5 线性试验

精密称取三氯叔丁醇对照品约25 mg，置入25 ml量瓶，加入适量流动相使完全溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取2，3，4，5，6 ml分别置入10 ml量瓶，加入流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各20 µL注入液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标做线性回归，求得三氯叔丁醇的线性回归方程为A=918360C+5493.8，相关系数r=0.9997，结果表明，三氯叔丁醇浓度在0.1999～0.5998 mg/ml浓度范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密量取三氯叔丁醇对照品溶液20 μl注入液

相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图及峰面积，计算RSD为0.39 %，表明仪器精密度良好。

2.7 溶液稳定性试验

取同一供试品溶液及对照品溶液分别于0，2，4，6，8，12，24 h进样20 μl，记录色谱图及峰面积，计算RSD。结果供试品溶液的RSD为0.52 %，对照品溶液的RSD为0.46 %，表明对照品溶液与供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 定量限与检测限

精密量取“2.1”项下对照品溶液，用流动相进行一系列稀释，精密量取各稀释溶液20 μl，分别注入液相色谱仪，测得定量限为17.99 ng（S/N≈10），检测限为6.00 ng（S/N≈3）。

2.9 回收率试验

精密称取三氯叔丁醇对照品适量（约相当于三氯叔丁醇处方量的80 %，100 %，120 %），按

处方加入其它辅料，分别平行配制3份，照“2.1”项下配制成供试品溶液。依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果

加入量/mg回收量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%24.5124.29.0624.3824.1298.9324.5224.3399.2330.0129.8299.3729.9829.8299.4799.160.3430.2530.1099.5036.1135..3636.5836.2599.1035.8535.2998.44

2.10 样品含量测定

取本品3批，按照“2.1”项下制备供试品及对照品溶液，按照“2.2”项下色谱条件，分别取20 μl注入色谱仪，记录色谱图及峰面积，按外标法计算含量，含量结果分别为99.74 %，99. %，99.55 %。

3 讨论

3.1 三氯叔丁醇紫外吸收属于末端吸收，选用210 nm波长检测既可减少制剂其它组分及配样溶剂对检测结果的干扰，又能保证有较高的响应值，进行准确的定量分析。

3.2 盐酸羟甲唑啉喷雾剂通过鼻腔喷雾给药，药物直接接触鼻腔粘膜，通过本研究可准确检测三氯叔

食品与药品 Food and Drug 2018年第20卷第3期 213

HPLC-DAD同时测定野菊不同部位8种活性成分的含量

侯爱荣, 陈 彤

（烟台市食品药品检验检测中心，山东 烟台 2003）

摘 要：目的 建立同时测定中药野菊不同部位（花、叶、嫩茎、老茎）中绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷、蒙花苷和木犀草素含量的高效液相色谱-二极管阵列检测（HPLC-DAD）方法。方法 采用Thermo Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，乙腈-0.1 %磷酸为流动相，梯度洗脱，流速1.0 ml/min，柱温35 ℃，检测波长327 nm。结果 绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷、蒙花苷和木犀草素进样量分别在0.031~0.620 μg、0.009~0.180 μg、0.016~0.320 μg、0.081~1.620 μg、0.021~0.420 μg、0.011~0.220 μg、0.152~3.040 μg、0.017~0.340 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9999，0.9998，0.9997，0.9996，0.9995，0.9996，0.9997，0.9998。绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷、蒙花苷和木犀草素的平均加样回收率分别为98.29 %，99.09 %，99.03 %，98.88 %，99.22 %，99.02 %，98.38 %，99.02 %，RSD（n=6）分别为1.40 %，1.05 %，0.98 %，1.18 %，0.98 %，0.91 %，0. %，1.26 %。结论 本法操作简便，准确性和重复性好，可用于中药野菊的质量控制，测定结果显示野菊不同部位有机酸和黄酮类活性成分含量差异较大。关键词：野菊；高效液相色谱-二极管阵列检测；有机酸；黄酮；含量测定

中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2018）03-0213-06DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2018.03.012

Determination of Eight Active Ingredients in Different Parts of Chrysanthemum Indicum L. by

HPLC-DAD

HOU Ai-rong, CHEN Tong

收稿日期：2018-04-10

作者简介：侯爱荣，副主任药师，研究方向：药物分析 E-mail: swqs1965@163.com

丁醇的用量，保证药品质量，降低三氯叔丁醇用量不规范带来的风险[10]。

3.3 本研究采用高效液相色谱法测定三氯叔丁醇的含量，方法简单、快速，结果准确，可用于盐酸羟甲唑啉喷雾剂中三氯叔丁醇的检测。

[7] [4] [5] [6]

参考文献

[1] 杨艺红. HPLC法测定盐酸羟甲唑啉喷雾剂的含量[J]. 海峡药

学, 2009, 21(9): 31-33.

[2] 杜玍妮, 高永良, 潘卫三, 等. 盐酸纳美芬鼻腔喷雾剂纤毛毒性

影响因素的考察与评价[J]. 药物分析杂志, 2007, 16(15): 1199-1202.

[3] 赵晓頔, 张肖宁, 杨利红, 等. HPLC法测定盐酸羟甲唑啉滴鼻液

[8]

中苯扎溴铵的含量[J]. 评价技术与方法, 2016, 33(3): 133-135.赵静丹, 秦峰, 杨燕, 等. 滴眼液中抑菌剂的快速高通量测定及抑菌效力的研究初探[J]. 中国药学杂志, 2017, 52(4): 308-313.杨海霞, 李英杰, 徐鑫, 等. 直接进样GC法测定喷昔洛韦乳膏中三氯叔丁醇含量[J]. 中国药师, 2016, 19(12): 2358-2360.

黄青, 张婷, 陆益红, 等. HPLC法测定缩宫素注射液中三氯叔丁醇的含量及其应用[J]. 中国药品标准, 2017, 15(6): 413-416.赵国敏, 张华, 王淑华, 等. 气相色谱法测定丁酸氢化可的松乳膏中的三氯叔丁醇含量[J]. 食品与药品, 2011, 13(1): 47-49. 刘彦, 程辉跃. 气相色谱法测定复方托吡卡胺滴眼液中三氯叔

丁醇的含量[J]. 中国处方药, 2015, 13(6): 38-39.

[9] 国家药典委员会. 中国药典[S]. 2015年版四部. 北京：中国医药

科技出版社，2015：374-377.

[10] 谷福根, 郝朵, 王毅, 等. 富马酸比索洛尔鼻喷剂的制备及其质

量评价[J]. 中国新药杂志, 2016, 25(2): 215-218.