抗结核药物致肝脏损伤机制的研究

抗结核药物致肝脏损伤机制的研究

姓名：查月芳申请学位级别：硕士专业：内科学（呼吸系病学）

指导教师：张广宇

20040301

中文摘要抗结核药物致肝脏损伤机制的研究摘要目的：为研究常用抗结核药物致肝脏损害的机理，了解不同抗结核药物组合对肝脏损伤程度，分析抗结核药物对肝脏损害的发生、发展过程，以及药物问相互作用的规律，为临床减缓和／或阻止不良反应及进一步指导合理用药提供依据。材料与方法：１．实验动物选择：健康成年ＳＤ大鼠（清洁级）６４只，体重在２５０９～３００９，雌雄各半，随机分为９组。２．实验动物处置：９组动物随机分为Ａ：生理盐水对照组；Ｂ：常规剂量异烟肼（ＩＮＨ）或（Ｈ）组：吡嗪酰胺（ＰｚＡ）或（ｚ）组；ｃ：高剂量异烟肼Ｅ：常规剂量组；Ｄ：常规剂量利福平（Ⅺ１Ｐ）或（Ｒ）组；Ｆ：常规剂量异烟肼＋利福平组；Ｇ：高剂量异烟肼＋利福平组；Ｈ：常规剂量利福平删比嗪酰胺组；Ｉ：常规剂量异烟肼＋利福平＋ｎｔｔ：嗪酰胺组（大鼠用药的常规剂量：指每公斤体重人的常用剂量乘以５．５倍）。３．标本制备：根据各组的不同要求，进行大鼠一次性灌胃，十天后断头取血，制备血清；分离肝脏，取部分肝左叶用１０％的溶液固定１０天，常规切片，ＨＥ染色，石蜡包埋，制作病理切片；剩余肝脏液氮保存，随后制备成肝组织匀浆待用。４．检测项目：为研究异烟肼、利福平、吡嗪酰胺可能导致大鼠肝损害机理，应用生物化学检测试剂盒，测定血清谷丙转氨酶（川Ⅱ），肝组织匀浆脂质过氧化的终产丙二醛（ＭＤＡ）及谷胱甘肽（ＧｓＨ）含量，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）中文摘要活性指标变化；应用药理学实验方法中的Ｃａ离子沉淀法测定肝组织匀浆微粒体细胞色素Ｐ４５０含量不同；在光学显微镜下观察肝脏细胞的病理组织学变化；对各组数据、指标进行比较，行统计学分析。结果：１．血清—～Ｌ１、与对照组比较，Ｒ组增高有统计学差异（Ｐ（０．０５），Ｚ组及两种合用药组增高有统计学差异（Ｐ（０．０１）；与ＨＲ组、ＲＺ组、ｚ组比较，ＨＲＺ组增高有统计学差异（Ｐ（０．０５），。２．肝组织匀浆微粒体细胞色素Ｐ４５０含量与对照组比较，单Ｈ组、ｚ组有增高（Ｐ＜０．０５）；在ＨＲＺ组，ＨＲ组，Ｒ组，ＲＺ组增高有统计学差异（Ｐ＜０．０１）即含利福平各组细胞色素Ｐ４５０含量有增高；与单Ｈ组、ｚ组比较，在ＨＲＺ组，ＨＲ组，Ｒ组，ＲＺ组增高有统计学差异（Ｐ（０．０５）。３．肝组织匀浆ＭＤＡ与对照组比较，Ｒ组有增高有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；ＨＲ组、ＲＺ组、ｚ组增高有统计学差异（Ｐ＜Ｏ．０１）；与ＨＲＺ组，ＨＲ组，Ｒ组，ＲＺ组比较，ＨＲＺ组增高有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；ＨＲ组，ｚ组，ＲＺ组组问无明显有统计学差异（Ｐ＞０．０５）。４．肝组织匀浆ＳＯＤ与对照组比较，Ｒ组降低有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；Ｚ组，ＨＲ组，ＲＺ组降低有统计学差异（Ｐ（０．０１）；与ＨＲ组，Ｒ组，ＲＺ组比较，ＨＲＺ组降低有统计学差异（Ｐ（０．０５）：Ｚ组，ＨＲ组，ＲＺ组组间无明显差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。５．肝组织匀浆ＧＳＨ，与对照组比较：ＨＲ组、ＲＺ组、ｚ组降低有统计学差异（Ｐ（０．０５）；与ＨＲ组，Ｒ组，ＲＺ组比较，ＨＲＺ组明显降低有统计学差异（Ｐ（０．０５）；Ｒ组与对照组比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）。６．肝组织病理学观察：与对照组比较，Ｒ组病理改变有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；ＨＲ组、ＲＺ组、ｚ组病理改变加重有统计学中文摘要差异（Ｐ＜０．０１）；与ＨＲ组、ＲＺ组、ｚ组比较，ＨＲＺ组病理改变加重有统计学差异（Ｐ＜Ｏ．０５）；ＨＲ组，ｚ组，ＲＺ组组问无明显差异（Ｐ＞０．０５）。同时在研究中发现５种检测指标在常规剂量异烟肼与高剂量异烟肼之间，常规剂量异烟肼＋利福平组与高剂量异烟肼＋利福平组问均无明显统计学差异（Ｐ＞０．０５）；单Ｈ组无论常规剂量还是高剂量组与对照组比较均无明显统计学差异（Ｐ＞０．０５）；ＨＲＺ组较单药组、双药组ＭＤＡ、ＧＳＨ、ＳＯＤ三值的差别均有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；脂质过氧化反应与ＭＤＡ含量呈明显正相关，与ＧＳＨ含量呈明显负相关。肝组织病理学观察发现：随着抗结核药物联用数量的增多，肝组织病理改变明显加重。结论：异烟肼利福平吡嗪酰胺均可引起大鼠的脂质过氧化指标的改变，同时伴随病理细胞学的改变；多种药物联用比单用改变明显；药物逐个增加，种类的增多，肝脏代谢负担明显加重，肝脏毒性亦随之增加；吡嗪酰胺组比其它单用药组肝脏毒性大。含利福平各实验动物组的细胞色素Ｐ４５０含量有明显增加，所以利福平有明显肝酶诱导活性。推测抗结核药物间相互作用与肝脏毒性增加有关，细胞色素Ｐ４５０含量与肝脏毒性并不一定呈正相关。异烟肼的剂量与肝毒性无明显正相关（大剂量异烟肼易致维生素Ｂ６缺乏，引起神经症状）。总之，从统计学分析结果显示：肝脏组织病理损伤程度与脂质过氧化反应程度、抗结核药物数量的增多有明显关系。关键词：异烟肼；利福平；吡嗪酰胺；肝损伤；脂质过氧化；细胞色素Ｐ４５０；肝药酶；药物相互作用英文摘要ＳｔｕｄｙｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｎｈｅｐａｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｂｙａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｍｅｄｉｃｉｎｅｓＡＢＳＴＲＡＣＴｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｎｏｒｍａｌａｎｔｉ－ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｄｒｕｇｓ；Ｔｏｅｘｐｌｏｉｔｔｈｅｄｅｇｒｅｅｃａｕｓｅｄｂｙｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｇｒｏｕｐｓ；Ｔｏｈａｐｐｅｎｉｎｇａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｏｎａｎａｌｙｚｅｂｙｔｈｅｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙａｎｔｉ－ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｍｅｄｉｃｉｎｅｓ；Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｉｎａｎｔｉ—ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｄｒｕｇｓ；Ｔｏｇｉｖｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｒａｂｏｕｔｕｓｉｎｇｒｅａｓｏｎａｂｌｙｍｅｄｉｃｉｎｅｓｆｏｒｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇｏｆｌｅｓｓｅｎｉｎｇｔｈｉｓｓｉｄｅ—ｅｆｆｅｃｔａｎｔｉ－ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｍｅｄｉｃｉｎｅｓｔｏＭｅｔｈｏｄｓ：（１）Ｓａｍｐｌｅｓｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓ．ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ６４ｈｅａｌｔｈｙａｄｕｌｔｒａｔｓ，ｗｅｉｇｈｉｎｇａｂｏｕｔ２５０９－３００９．Ｔｈｅｙｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ９ｇｒｏｕｐｓ：Ａ：ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｒａｎｄｏｍｌｙｇｒｏｕｐ；Ｂ：ｇｅｎｅｒａｌｄｏｓｅ１ＮＨｇｒｏｕｐ；ｃ：ｈｉｇｈｄｏｓｅＩＮＨｇｒｏｕｐ；Ｄ：ＲＦＰｇｒｏｕｐ；Ｅ：ＰＺＡｇｒｏｕｐ；Ｆ：ｇｅｎｅｒａｌｄｏｓｅＩＮＨ＋ＲＦＰｇｒｏｕｐ；Ｇ：ｈｉｇｈａｎｄｄｏｓｅＩＮＨ＋ＲｆＰｇｒｏｕｐ；Ｈ：ＲＦＰ＋ＰＺＡ；Ｉ：ｇｅｎｅｒａｌｄｏｓｅｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆＡＬＴｉｎｓｅｒｕｍＰ４５０ＩＮＨ＋ＲＦＰ＋ＰＺＡ．（２）ＴｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＭＤＡ．ＧＳＨａｎｄａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤｉｎｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓｂｙｍｅａｎｓｏｆｏｎｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＩＮＮ，ＲＦＰａｎｄＰＺＡｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓｆｒｏｍｓｉｍｐｌｅｏｎｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｇｒｏｕｐｓ．ｏｎ（３）Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｎｇｅｓｇｒｏｕｐｕｎｄｅｒｅｌｅｃｔｒｉｃｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．４ｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｌｓｉｎｅｖｅｒｙ英文摘要Ｒｅｓｕｌｔｓ：（１）ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｏｎｇｅｎｅｒＮｄｏｓｅＩＮＨｇｒｏｕｐａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅ１ＮＨｇｒｏｕｐｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆＡＬＴｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＭＤＡａｎｄＧＳＨａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｏｆｇｒｏｕｐｗｅｒｅｎｏａｎｄＳＯＤｒａｔｓ（Ｐ＞０．０５）．（２）ＢａｎｄＣｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｃｏｎｔｅｎｔｓｇｒｏｕｐｉｎｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆ越』ｉｎｓｅｒｕｍ，ＭＤＡ，ＧＳＨａｎｄＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｌｉｖｅｒｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｏｆｒａｔｓ（Ｐ＞Ｏ．０５）．（３）Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＷｅｃａｎｋｎｏｗｔｈａｔＤｇｒｏｕｐｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜０．０５），Ｅ，Ｆ，ＱｄｉｆｆｅｒｅｎｔＨｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜Ｏ．０１）；Ｉｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎｉｎｄｅｘｏｆＡＬＴｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｓｅｒｕｍｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＥ，Ｆ，ＧＨｇｒｏｕｐ；ＣｏｍｐａｒｅｄⅥ哇ｔ｝１ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，Ｄｇｒｏｕｐｗａｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＞Ｏ．０５）ｉｎｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆｉｎｄｅｘｏｆＧＳＨｃｏｎｔｅｎｔｓ，Ｄｇｒｏｕｐｗａｓｃｏｎｔｅｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜０．０５）ｉｎｔｈｅｏｆＭＤＡａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤ；Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，Ｅ，Ｆ，ＧＨｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜Ｏ．０１）；ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＥ，Ｆ，ＧＨｇｒｏｕｐＩｇｒｏｕｐｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ（０．０５）ｉｎｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＩＶＩＤＡｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄＧＳＨｏｆＳＯＤｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｌｉｖｅｒｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｏｆａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＢ，ｒａｔｓ，（４）ＣｏｎｔｅｎｔｓＰ４５０ｉｎＤ，Ｅ，Ｆ，ＧＨ，ＩｉｎｃｒｅａｓｅｄＣｇｒｏｕｐｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．（５）Ｃｏｍｐａｒｅｄｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｎｇｅｓｏｆｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｃｅｌｌｓｉｎＤｔｈｅｒｅｗｅｒｅｐｒｏｍｉｎｅｎｔｃｈａｎｇｅｓｉｎｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５），Ｅ，Ｆ，ＧＨｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０１）；ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｈａｎｇｅｓｉｎＩｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＥ，Ｆ，ＧＨｇｒｏｕｐｓ．英文摘要ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＷｅｃａｎｃｏｎｃｌｕｄｅ：（１）ｔｈｅｒｅｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｈｅｐａｔｉｃｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆＭＤＡ；ｔｈｅｒｅｗａｓｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅｉｎｄｅｘｏｆｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＧＳＨａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｏｆｒａｔｓ；ｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｐｌａｙａｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙ．（２）ｔｈｅｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｒｅｆｌｅｃｔｅｄｇｒａｄｕａｌｌｙｗｏｒｓｅｎｉｎｉｎｄｅｘｏｆＡＬＴａｎｄｄｅｇｒｅｅｏｒｉｎｄｅｘｏｆｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｗｈｅｎｔｈｅａｎｔｉｍｂｅｒｃｕｌｏｕｓｄｒｕｇｓｐｌｕｓｃｏｎｔｅｎｔｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．（３）ＩｎｔｈｅｓｅｇｒｏｕｐｓｃｏｎｔａｉｎｅｄＲＦＰ，ｏｆＰ４５０ｅｎｈａｎｃｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＲＦＰＣａｎｉｎｄｕｃｅＰ４５０ｄｒｕｇ—ｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇｅｎｚｙｍｅｏｆｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓ．（４）ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏａｄｏｓｅ—ｒｅｓｐｏｎｓｅｅｆｆｅｃｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔＩＮＨｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓ．（５）ｔｈｅｅｖｉｄｅｎｃｅｔｈａｔｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｉｎｊｕｒｅｈａｐｐｅｎｅｄｏｎｔｈｅｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｃｅｌｌｓｕｐｐｏｒｔｅｄｐｏｓｓｉｂｌｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｌｉｐｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ．ｔｏＫｅｙｗｏｒｄｓ：ｌｉｖｅｒｉｓｏｎｉａｚｉｄ；ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ；ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ；ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄｅ；ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０；ｄｒｕｇｉｎｊｕｒｙ；ｌｉｐｉｄｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ；ｌｉｖｅｒｄｒｕｇｅｎｚｙｍｅ６研究论文抗结核药物致肝脏损伤机制的研究刖置在世界卫生组织推荐的标准抗结核化疗方案中，异烟肼、利福平、吡嗪酰胺是不可替代一线抗结核药，对细胞内外、繁殖期和静止期状态细菌均有较强杀灭作用，其中吡嗪酰胺在细胞外酸性环境中对结核菌有较强杀灭作用。随着抗结核病化疗疗程的推移，由抗结核药物所造成的不良反应也相应增加，其中以肝脏毒性反应最为显著。由于抗结核药物造成肝脏毒副作用的机制尚未明了，所以临床不能采取有针对性的保护肝脏的治疗，甚至出现不规范以至滥用保肝疗法情况，不仅未能缓解肝脏损伤，反而加重了肝脏负担，造成更加严重的后果。目前对抗结核药物肝脏损伤的研究，国内外报道不多；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ等［１，２１提出异烟肼的代谢产物乙酰肼一部分在Ｐ４５０酶催化下形成活性中间体（乙酰偶氮或乙酰正离子和乙酰游离基）可与肝细胞内的大分子共价结合，或与ＧＳＨ共价结合破坏肝细胞；另一部分继续水解成肼，肼可以直接与肝细胞发生过氧化反应，引起肝损伤。推测此为异烟肼肝脏损害机理，同时指出快乙酰化者的肝脏毒性要大于慢乙酰化者；这与一直以来认为慢乙酰化者由于药物在体内代谢比快乙酰化者慢，毒性产物在体内滞留时间长，故较慢乙酰化者易导致肝毒性的观点相悖。Ｎｏｄａ和Ｊｅｎｎｅｒ等［３，４１又研究发现利福平可诱导异烟肼代谢过程中乙酰肼的释放，考虑此为异烟肼、利福平合用为抗结核治疗过程中导致肝脏损害可能的原因：ＺｈｕＤＬ．Ｍｅｎｇ［５ｌ等注意到利福平代谢过程中产研究论文生乙酰基，为异烟肼的代谢提供更多的乙酰基，使二者和用时体内代谢物乙酰肼数量明显增加，加重肝脏损害；利福平对肝微粒体细胞色素Ｐ４５０诱导活性使乙酰异烟肼数量增加，肝脏毒性亦随之增加。薛洪源等【６】曾进行小鼠抗结核药异烟肼、利福平肝脏毒性机理研究，提出异烟肼、利福平合用较单用增加了肝脏毒性，也提出这种肝脏毒性与脂质过氧化的关系［６１。但到目前为止，对抗结核治疗仍为一线常用药物的异烟肼、利福平、吡嗪酰胺的肝脏毒性的研究，及其药物间相互作用规律，不同药物组合之间毒性的差异，仍未见有系统研究的报道。我们成功地建立了大鼠抗结核药物肝脏损害的模型，观测了单药组与组合用药组、不同剂量组大鼠血清谷丙转氨酶（趟Ｊ）、肝组织匀浆中谷胱甘肽（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）含量，脂质过氧化的终产物丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａ．１ｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性变化，以及肝微粒体细胞色素Ｐ４５０酶活性改变，得出了有一定研究和实践意义的结论。本研究旨在探讨常用抗结核药物单用药组及不同组合用药组与大鼠肝损害所致脂质过氧化的终产物ＭＤＡ含量，ＳＯＤ活性及抗氧化物ＧＳＨ含量改变之间的关系，和肝组织病理改变之间的相关性，以揭示抗结核药物所致肝脏损害机理，以便为临床合理选择药物，减轻、阻止或逆转脂质过氧化肝脏损害，提供依据。观测细胞色素Ｐ４５０在药物肝代谢中的重要作用，肝药酶诱导剂对肝Ｐ４５０酶含量的影响，更进一步理解肝药酶的诱导和抑制作用，把握药物间相互诱导和抑制机制，合理使用药物配伍，为减少药物毒副反应的发生创造条件。研究论文材料与方法１材料１．１实验动物健康成年ＳＤ大鼠，雌雄各半，体重（２２０－３３０）ｇ（购自河北医科大学实验动物中心，动物许可证号：ＳＣＸＫ冀２００３．１－００３号），常规喂养于恒温、清洁、安静的动物房内，标准饮用水及饲料喂养。１．２药物异烟肼（石家庄制药集团欧意药业有限公司，批号０３０５０１），利福平（华北制药集团制剂有限公司，批号Ｈ１３０２０６２１），吡嗪酰胺（上海信谊药业有限公司，批号Ｈ３１０２０８００）；生理盐水（石家庄第四制药厂）１．３试剂血清谷丙转氨酶ＡＬＴ测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；脂质过氧化的终产物丙二醛ＭＤＡ试剂盒（南京建成生物工程研究所）：超氧化物歧化酶ＳＯＤ测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；谷胱甘肽ＧＳＨ测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；１．４仪器及设备仪器及设各名称电动匀浆机电冰箱型号ＪＪ．１型ＢＣＤ．２４５型ＭＤＦ３８２Ｅ型ＪＡｌ００３型连二亚硫酸钠（天津化学试剂厂）；其他试剂均用国产分析纯。产地江苏河南超低温冰箱电子天平日本三洋德国研究论文高速冷冻离心机ＴＧＬ一１６Ｇ型高速冷冻离心机酶标仪ＲＤ．２０型ＳＬＴ型ＧＩＬＳＯＮ上海日本奥地利法国法国法国微量移液器（０—１０ｕ１１微量移液器（０—１００ｕ１）ＧＩＬＳＯＮ微量移液器ｆ．１０００ｕ１）ＧＩＬＳＯＮ电热恒温箱ＰＸＸ．１２０光学显微镜２实验方法ＯＬＩＭＰＡＳ连云港日本２．１动物模型建立和分组将ＳＤ大鼠随机分为９组，雌雄各半。对照组（Ａ）：ｉ９０．９％氯化钠注射液ｌＯｍｌ／ｋｇ／ｄ；ＩＮＨ组（Ｂ）：ｉ９５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ；高剂量ＩＮＨ组（Ｃ）：８２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ：ＲＦＰ组（Ｄ）：ｉ９５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ；ＰＺＡ组（Ｅ）：ｉ９１９２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ，ⅡⅫＨ＋ＲＦＰ组（Ｆ）：ｉｇＩＮＨ５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ＋ＲＦＰ５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ；高剂量仆聃＋ＲＦＰ组（Ｇ）：ｉｇ高剂量ＩＮＨ８２．５ｍｇＡｅｄｄ＋ＲＦＰ５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ；ＲＦＰ＋ＰＺＡ组（Ｈ）：ｉｇＲＦＰ５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ＋ＰＺＡｌ９２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ；ＩＮＨ＋ＲＦＰ＋ＰＺＡ组（Ｉ）：ｉｇＩＮＨ５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ＋ＲＦＰ５５ｍｇ／ｋｇ／ｄ＋ＰＺＡｌ９２．５ｍｇ／ｋｇ／ｄ；不同组合用药组均为各种单药按前述剂量混合，规律灌喂大鼠１０ｄ，每日一次空腹定点灌服，动物室具备恒温、清洁、安静的等条件，动物饲料由河北医科大学动物中心提供。动物分组详见（表７）２．２实验试剂的制各与标本采集２．２．１实验试剂的制备（除试剂盒己配备的试剂外）：２．２．１．１８８ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２液的制备：ＣａＣｌ２９．７７９称取研究论文加三蒸水至１０００ｍｌ２．２．１．２０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ液的制备：１２。１１４９１１．１８９称取ＴｒｉｓＫＣｌ加三蒸水至１０００ｍｌ２．２．１．３０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７）Ｍ／１５Ｎａ２ＨＰ０４６１．１ｍｌ３８．９ｍｌ量取混和即可Ｍ／１５ＫＨ２Ｐ０４２－２＿２标本采集全部动物末次给药后１２ｈ，断头取血，抗凝处理，３０００ｓ／分离心２０分钟，分离血清，剖腹取肝，０－４℃冰盐水经门脉冲洗，清洁滤纸吸干残留水分，分离肝脏，取部分肝左叶用１０％的溶液固定１０天，ＨＥ染色，石蜡包埋，制作病理切片；余．２０℃保存备用。２．２．３１０％肝组织匀浆的制备从．２０。Ｃ冷冻冰箱取出大鼠肝标本，用电子天平称取约２００９的肝组织标本，剪成细小碎块，约２立方毫米大小，用生理盐水及匀浆介质在冰浴条件下，应用电动匀浆机，制备１０％的肝组织匀浆，体积约为２ｍｌ，低温保存备用。２．３血清谷丙转氨酶（剐ＬＴ）活性测定２．３．１赖氏法测定原理：谷丙转氨酶（ＡＬＴ）在３７４Ｃ及ｐＨ７．４条件下，作用于丙氨酸及仪．酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应３０ｍｉｎ后（固定时间）加入２，４．二硝基苯肼（ＤＮＰＨ）盐酸溶液，既中止反应，同时ＤＮＰＨ与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，研究论文于５０５ｒａｎ比读吸光度并计算酶活力。２．３．２试剂配制和操作步骤２．３．２．１试剂配制谷丙转氨酶基质液：１００ｍｌ４℃冰箱保存；２，４．二硝基苯肼液：１００ｍｌ４。Ｃ室温避光保存；４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ：１００ｍｌ，用时加蒸馏水至１０００ｍｌ，配成０．４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ．室温保存；２ｕｍｏｌ／ｍｌ丙酮酸钠标准液５０ｍｌ，室温保存；０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液５０ｍ１，冰箱保存；２．３．２．２操作步骤血清ｏ．１ｍｌ与３７。Ｃ已预温５分钟的谷丙转氨酶基质液０．５ｍｌ混合制成测定管，单谷丙转氨酶基质液０．５ｍｌ为标准管，二者分别混匀后，３７℃水浴３０分钟，分别加入２，４．二硝基苯肼液Ｏ．５ｍｌ，混匀后３７℃水浴２０分钟，再分别加入０．４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ５ｍｌ，混匀，室温放置５分钟，５０５ｎｍ波长比读吸光度，用下式计算ＡＬＴ酶活力。ＡＬＴ酶活力＝（测定管一对照管／标准管一对照管）×２８卡门氏单位２．４１０％肝匀浆蛋白浓度测定２．４．１Ｌｏｗｒｙ法（即福林．酚试剂法）‘７１测定蛋白浓度原理：蛋白质中的酪氨酸等与酚试剂之磷钼酸、磷钨酸作用产生蓝色化合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。分两个步骤：首先在硷性溶液中，蛋白质与铜离子发生反应生成Ｃｕ－蛋白质，然后Ｃｕ一蛋白质使试剂中的磷钼酸、磷钨酸还原成蓝色化合物，测定光吸收值。２．４．２试剂配制与具体操作步骤研究论文２．４．２．１试剂配制试剂Ａ：２９酒石酸钾钠１００９Ｎａ２Ｃ０３溶于５００ｍｌＮａＯＨ中，用水稀释至１０００ｍｌ。１．０ｍｏｌ／Ｌ试剂Ｂ：２９酒石酸钾钠及ｌｇＣｕＳＯ。．５Ｉ－１２０分别溶于少量水中，混合后加水至９０ｍｌ再加ｔｍｏｌ／ＬＮａＯＨ１０ｍｌ即成。试剂Ｃ：市售的酚试剂按ｌ：１５稀释，最后浓度为０．１５～Ｏ．１８ｍｏｌ／Ｌ（用标准ＮａＯＨ滴定）。标准蛋白溶液：称量干燥的牛血清白蛋白１０ｍｇ，用生理盐水配制成０．１ｍｇ／ｍｌ的标准蛋白溶液。２．４．２．２牛血清蛋白标准曲线绘制分别取０．１ｍｇ／ｍｌ的标准蛋白溶液（０、０．２、０．４、０．６、０．８、１．０）ｍｌ，分别加生理盐水（１．０、０．８、０．６、０．４、０．２、０）ｍｌ混合，六管中分别加试剂ＡＯ．９ｍｌ，试剂Ｂ０．１ｍｌ混合，室温放置ｌＯ分钟，再加入试剂Ｃ３ｍｌ，立即混匀，置５０℃水浴保温１０分钟，冷却后比色。以第一管为空白管，在酶标仪６５０ｎｍ处测定光密度值。以标准溶液浓度为横坐标，各管光密度值为纵坐标作图，绘制标准曲线。２．４．２．３样品蛋白的测定将稀释的待测样品ｌｍｌ加入Ｏ．９ｍｌ试剂Ａ，混匀后置５０℃水浴保温１０分钟，冷却，加入试剂Ｂ０．１ｍｌ室温放置１０分钟，加入试剂Ｃ３ｍｌ，立即混匀，置５０℃水浴保温１０分钟，冷却后在酶标仪６５０ｒｉｍ处测定光密度值。查标准曲线计算蛋白含量，再乘以稀释倍数，即为组织匀浆蛋白含量。（单位：ｇ几）２．５肝微粒备及蛋白测定２．５．１线粒体后上清液的制备：将制备好的１０％肝匀浆置低研究论文温高速离心，１００００９，１５～３０分钟，以沉淀未破碎的细胞、细胞碎片、核及线粒体。所得上清部分即线粒体后上清液，小心倒出上清液，备用。２．５．２用钙离子沉淀法分离微粒体原理：系钙离子与内质网碎片发生聚集，燃后低温离心分出聚集的微粒体颗粒，此法优点是节省时间和不需要超速离心机。２．５．３肝微粒体蛋白浓度测定同肝匀浆蛋白浓度测定，按Ｌｏｗｒｙ法测定微粒体蛋白浓度嘲。２．５．４细胞色素Ｐ４５０含量具体操作步骤：取制备好的线粒体后上清液２ｍｌ加入０．２ｍ１８８ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２液混匀，置冰浴５分钟，轻轻搅拌数次，混合液低温高速离心，２７０００９离心１５分钟，上清液倒弃，沉淀板重悬于ｌｍｌ０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ液，用旋窝混匀器混匀，再次低温高速离心，２７０００９离心１５分钟，上清液倒弃，沉淀板重悬于ｌｍｌ０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液中。各标本管通ＣＯ（应用浓Ｈ２Ｓ０４与ＨＣＯＯＨ混合产生ＣＯ的化学发生原理），２０～３０秒后测４５０毫微米和４７５毫微米处的吸光率（分别为Ａ１、Ａ２）。然后加约ｌｍｇ的连二亚硫酸钠混匀后再测４５０毫微米和４７５毫微米处的吸光率（分别为Ｂ１、Ｂ２）。细胞色素Ｐ４５０含量计算公式如下：细胞色素Ｐ４５０含量＝［（Ｂ１．Ａ１）一（Ｂ２．Ａ２）１Ｘ１０５单位÷微粒体蛋白浓度（毫微克分子量／克微粒体蛋白即ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔ）【９】２．６肝匀浆中ＭＤＡ含量测定２．６．１原理：过氧化脂质降解产物中的丙二醛（ＭＤＡ）司－与硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）缩合，形成红色产物，在５３２ｎｍ处有最大吸研究论文收峰。２．６．２测定步骤：将１０ｎｍｏｌ／ｍｌ四乙氧基丙烷、无水乙醇与试剂盒已配备的试剂（一～三）按一定比例混合制备成标准管；将无水乙醇与试剂盒已配备的试剂（一～三）按一定比例混合制备成标准空白管；将测定样品管与试剂盒已配备的试剂（一～三）按一定比例混合制备成测定管，旋窝混匀器混匀，９５℃水浴４０分钟，取出后流水冷却，然后３５００－－４０００转／分离心１０分钟。应用移液器小心移取上清，加入比色皿中，于５３２ｎｍ处测定各管吸光度，应用下述公式计算ＭＤＡ含量。ＭＤＡ含量＝【（测定管吸光度一标准空白管吸光度）／（标准管吸光度一标准空白管吸光度）］×标准品浓度÷肝组织蛋白含量（单位：ｎｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔ）２．７肝匀浆中ＧＳＨ含量的测定２．７．１原理：二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物，可进行比色定量测定。２．７．２步骤：将双蒸水、０．５ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨ标准品、样本按一定比例分别与试剂盒中配备的试剂（一～三）混匀，制成空白管、标准管、测定管，室温静置５分钟后，于４１２ｎｍ处，测定各管ＯＤ值，按下式计算ＧＳＨ含量。ＧＳＨ含量＝ｆ（测定管ＯＤ值一空白管ＯＤ值）／（标准管ＯＤ值一空白管ＯＤ值）］×标准管浓度×ＧＳＨ分子量÷组织匀浆蛋白浓度（单位：ｍｇ／ｇｐｒｏｔ）２．８肝匀浆中ＳＯＤ含量测定２．８．１原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（０２‘），后者氧化羟胺星亚盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测定其吸光度。当研究论文被测样品中含ＳＯＤ时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的ＳＯＤ活力。２．８．２步骤：取２０ｕｌ１０％组织匀浆稀释５倍到１００ｕｌ，与双蒸水１００ｕｌ，分别与试剂盒配备的试剂（一～四）各８０ｕｌ用旋窝混匀器充分混匀，配制成测定管和对照管，置３７℃恒温水浴４０分钟；将试剂盒配备的试剂（五～六），按照试剂五：试剂六：冰乙酸＝３：３：２的体积比配成显色剂，４ｏｃ避光冷藏；再将测定管和对照管分别加入１．６ｍｌ的显色剂，混匀，室温放置１０分钟，用移液器移入酶标板中，于波长５５０ｎｍ处比色。按下式计算ＳＯＤ活力。组织匀浆ＳＯＤ活力＝（对照管吸光度－Ｎ定管吸光度）／对照管吸光度÷５０％×（反应液总体积／取样量）÷组织中蛋白含量×样品稀释倍数（单位：Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ）３新鲜大鼠部分肝脏用１０％的溶液固定１０天，ＨＥ染色，石蜡包埋，制作病理切片在光学显微镜下观察肝细胞的病理组织学变化，根据损伤程度分为轻、重两级；轻度：正常或肝细胞轻度水泡样、脂肪样变性，重度：变性程度加重，且偶见散在点壮坏死，或见肝细胞浊肿变性严重，可见气球样变、嗜酸性变、点状坏死病灶等。４统计学方法采用Ｉｎｓｔａｔ统计学软件。所有数据均以ｘ±Ｓ表示，组间比较用ｔ检验。结果研究论文１血清ＡＬＴ在各实验组的检测结果的比较（表ｌ，图１）与对照组比较，Ｒ组增高（Ｐ＜０．０５）；Ｚ组及ＨＲ、ＲＺ组均增高（Ｐ＜０．０１），ＨＲＺ组增高（Ｐ＜０．０１）；与合用药组、ｚ组、Ｒ组比较ＨＲＺ组增高（Ｐ＜０．０５）。２肝组织匀浆Ｐ４５０含量在各实验组的结果分析（表２，图２）与对照组比较，单Ｈ组及ｚ组增高（Ｐ＜０．０５）；ＨＲＺ组，｝承组，Ｒ组，ＲＺ组明显增高（Ｐ＜Ｏ．０１）；与单Ｈ组及ｚ组比较ＨＲＺ组，ＨＲ组，Ｒ组，ＲＺ组明显增高（Ｐ＜０．０５）。３肝组织匀浆ＭＤＡ含量在各实验组中的对比分析（表３，图３）与对照组比较，Ｒ组增高（Ｐ＜０．０５）。ＨＲ、（Ｐ＜０．０５）。ＲＺ组、ｚ组增高（Ｐ＜０．０１），与ＨＲ、ＲＺ组、ｚ组比较ＨＲＺ组有增高４肝组织匀浆ＳＯＤ活力在各实验组中的对比分析（表４，图４）与对照组比较，Ｒ组有降低（Ｐ＜０．０５），ＨＲ组、ＲＺ组、Ｚ组有明显降低（Ｐ＜０．０１）。与ＨＲ、ＲＺ组、ｚ组比较ＨＲＺ组有增高（Ｐ＜０．０５）。５肝组织匀浆ＧＳＨ含量在各实验组中的对比分析（表５，图５）与对照组比较在单Ｈ组和Ｒ组无明显差异：ＨＲ组，ＲＺ组，ｚ组有降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。与ＨＲ、ＲＺ组、Ｚ组比较｝噩湿组有降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。６按照肝细胞的病理组织学变化分度标准，对各用药组指标进行统计学分析（见表６）单Ｈ组无论常量或高剂量未见重度病理改变，与对照组比较，均无统计学差异（Ｐ＞０．０５）：Ｒ组有ｌ例重度病理改变与对照组比较，有统计学差异（Ｐ＜０．０５）。ＨＲ、ＲＺ组、ｚ组重度病理改变有明显增多，与对照组比较有统计学差异研究论文（Ｐ＜０．０１）；与ＨＲ、ＲＺ组、ｚ组比较ＨＲＺ组重度病理改变更多有统计学差异（Ｐ＜０．０５）。讨论抗结核药所致肝损伤，一直是临床医疗工作者所关注的问题；近年随着耐药结核病的增多，临床愈来愈以多组药物联合应用为抗痨方案，所以药物的毒副作用的研究已成为临床治疗的重点。近年文献提示：药物诱导肝脏损伤的发生率约占住院病人的１／６００～１／３５００，在美国２％～５％的黄疸住院病人系药物性，１５％～３０％的暴发性肝衰竭及２０％～５０％的非病毒性慢性肝炎病人为药物性。目前约有５００～１０００种药物可能引起各种肝脏疾病【１刚。但近年来对于抗结核药物肝脏损伤发生机理没有一个系统的报导，众说不一。我们知道机体通过酶系统与非酶系统产生自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成包括醛基（丙二醛ＭＤＡ）在内的脂质过氧化物；超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（０２‘）保护细胞免受损伤；谷胱甘肽（ＧＳＨ）是一种低分子清除剂，它可清除０２。、Ｈ：０２、ＬＯＯＨ，是ＧＳＨ－ＰＸ和ＧＳＴ两种酶类的底物，缺乏或耗竭ＧＳＨ会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其中毒作用，这可能与增加氧化损伤有关，因而ＧＳＨ的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素。药物进入体内要经肝脏复合功能氧化酶，主要是细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）氧化或还原代谢后，与葡萄糖醛酸，硫酸等结合或经乙酰化而变为水溶性，尔后由尿研究论文液或胆汁排泄，当药物在肝脏代谢过程产生过多的脂质过氧化产物，不能被体内抗氧化物质清除时，将发生肝脏损伤。通过本实验我们可以看到，ＩＮＨ和ＲＦＰ合用或三种药合用及ＰＺＡ单用组，其肝组织匀浆中脂质过氧化产物ＭＤＡ的含量增高，ＳＯＤ活性、ＧＳＨ含量下降有统计学差异。说明ＩＮＨ和ＲＦＰ合用或三种药合用及ＰＺＡ单用组对大鼠肝脏损伤，与脂质过氧化呈明显相关性，与戴宁掣¨’垤］曾报导高脂饮食性或酒精性脂肪肝大鼠模型，其肝匀浆中脂质过氧化产物ＭＤＡ的含量明显增高，ＳＯＤ活性ＧＳＨ含量明显下降的结果相类似。同时ＰＺＡ的肝毒性应予重视。脂质过氧化作用可引起细胞膜及线粒体膜的脂质过氧化，线粒体膜的Ｃａ２十一ＡＴＰ酶活性降低，细胞内及线粒体内Ｃａ２＋过多，致使细胞变性进而坏死，导致肝脏毒性发生１１３］。异烟肼、利福平、吡嗪酰胺三药在肝脏毒性方面的机制目前己知有：ＩＮＨ在Ｎ．乙酰基转移酶催化下生成乙酰异烟肼（Ａｃｅｔｙｌｉｓｏｎｉａｚｉｄ），并迸一步水解为乙酰胼（Ａｃｅｔｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ）和异烟酸（Ｉｓｏｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｉｄ）；乙酰肼一部分继续水解为肼（Ｈｙｄｒａｚｉｎｅ），一部分乙酰化成二乙酰肼。乙酰肼与肼均是造成肝细胞损伤的重要因素，乙酰肼在Ｐ４５０酶催化下形成活性中间体（乙酰偶氮或乙酰正离子和乙酰游离基）可与肝细胞内的大分子共价结合，或与ＧＳＨ共价结合破坏肝细胞；肼可直接与肝细胞发生过氧化反应引起肝细胞损伤【ｌ４１。本实验所用ＩＮＨ为常用剂量，高剂量不超过临床高限（０．９／日），单ＩＮＨ组与高剂量ＩＮＨ组的ＭＤＡ指标较对照组无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。有报道称异烟肼亦有肝酶诱导活性：１９８５年将细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１（ｃｙｐ４５０２Ｅ１）从大鼠肝微粒体分离纯化，研究论文并命名为Ｐ４５０ｊ。其活性可被异烟肼、乙醇诱导，可加速异烟肼或其它同时服用药物的排泄，Ｐ４５０２Ｅ１在药物毒物代谢，前致癌物和前毒物的活化过程有重要作用垆Ｊ，但异烟肼诱导活性并未使ｃｙｐ４５０总含量增加，原因为其抑制其它ｃｙｐ４５０酶的合成【Ｉ引。ＩＮＨ由于上述因素及半衰期短，蛋白结合率低，如果不超过０．９／目的剂量，肝脏毒性较低。快乙酰化者使乙酰肼短时间生成较多，肝脏毒性较慢乙酰化者更大；慢乙酰化型易致过敏反应，有明显的个体差异。利福平（ＲＦＰ）由于其水溶性差，故在体内以蛋白结合的方式运行至肝脏，在肝脏乙酰化代谢随胆汁排泄，同时未乙酰化的可经肝肠循环重新吸收（三药中唯一有此特点），故能竞争性抑制胆红素排泄，间接损伤肝细胞，这种作用在大剂量或合并有阻塞性肝胆疾病，慢性肝病，酒精性肝病，低蛋白血症时更为明显，临床可见转氨酶增高、高胆红素血症、黄疸、肝昏迷、肝坏死¨“。ＲＦＰ因在三药中抗原性最强，所以有人通过测定病人的血清发现，有ＲＦＰ副反应者的血中利福平抗体阳性率，明显高于无副反应及正常对照组，推测ＲＦＰ的副反应亦与变态反应、过敏反应有关【１７１。其中ＲＦＰ的肝脏毒性为其主要副反应。所以除脂质过氧化损伤外ＲＦＰ还存在免疫性肝脏损伤，如一些药物性肝损可表现为慢性活动性狼疮性肝炎综合征；这需要建立脂多糖或卡介菌的免疫性肝损伤模型作对照，才能了解损伤程度。这可能是单ＲＦＰ组较单ＩＮＨ组毒性大的原因。ＲＦＰ代谢过程中要脱乙酰基，当其与ＩＮＨ合用时可为ＩＮＨ代谢提供乙酰基，使ＩＮＨ代谢加快，使乙酰肼、肼的量明显增加，加重肝细胞损伤，这在本实验亦得到证实：ＩＮＨ、ＲＦＰ合用较它们单用时毒性更大。研究论文同时由于ＲＦＰ诱导Ｐ４５０酶（ｃｙｐ４５０２ｃ９）的活性，使ＲＦＰ在使用一周后半衰期缩短４０％，所以本实验表现ＲＦＰ较ＰＺＡ的肝毒性要小。据文献统计ＩＮＨ、ＲＦＰ合用有３５％的人可出现转氨酶升高，而单用ＩＮＨ仅为１０％；治疗方案中有ＩＮＨ没有ＲＦＰ肝毒发生率为１．６％，有ＲＦＰ没有ＩＮＨ肝毒发生率为１．１％；两药合用时，成人肝毒性为２．７％，儿童为６．９％ｔ１８】。所以当用Ｉ－ＩＲＺＳ或ＨＲＺＥ方案出现肝脏毒性时，停用ＩＮＨ或ＲＦＰ均可缓解肝毒，使治疗方案继续下去【１９１。临床在应用抗结核药物时，比ＩＮＨ、ＰＺＡ更常见因ＲＦＰ所致的胃肠道反应、过敏性反应，如恶心呕吐、皮疹、血卟啉病、流感、狼疮、血小板减少性紫癜、哮喘、过敏性休克、肝衰等，而片面地认为ＲＦＰ在三药中肝脏毒性最大；但从本实验来看，ＲＦＰ致肝脏脂质过氧化反应程度较ＰＺＡ为低。原因一：肝药酶诱导活性，促其本身排谢；原因二：王乃平等【２卅曾研究ＲＦＰ对Ｃｃｌ４所致小鼠急性肝中毒影响，发现经ＲＦＰ预处理过的小鼠在给予Ｃｃｌ４后，其血清ｍＪ水平显著低于对照组（Ｐ＜ｏ．００１）；组织病理也发现肝损害程度轻于未用ＲＦＰ预处理小鼠的对照组；检测肝脏微粒体膜发现ＲＦＰ可以稳定小鼠肝脏微粒体膜。ＰＺＡ的半衰期较ＩＮＨ、ＲＦＰ的（１～２小时）长，为９～１０小时，蛋白结合率为５０％，每日总量３９口服后，有１５％出现肝脏症状，其中２～３％出现黄疸，极少数有肝坏死【２¨。其主要在肾脏排泻，肝脏毒性发生在大剂量，与ＲＦＰ合用又因砌叩肝酶诱导活性，推测代谢过程中肝脏毒性物质在ＲＦＰ肝酶诱导活性下被活化，可能有竞争性抑制胆汁的排泄，故本实验中ＰＺＡ和ＲＦＰ合用较ＲＦＰ单用脂质过氧化毒性大研究论文（Ｐ＜Ｏ．０５）：与对照组比较，ＰＺＡ单用在ＭＤＡ含量，ＳＯＤ活性，ＧＳＨ含量有明显统计学差异（Ｐ＜０．叭）；而ＲＦＰ组在ＧＳＨ含量与对照组比较，无明显差异（Ｐ＞０．０５），在ＭＤＡ含量，ＳＯＤ活性较对照组有明显差异（Ｐ＜０．０５），故ＲＦＰ的毒性较ＰＺＡ相对要低。从病理学观察结果看：ＩＮＨ、ＲＦＰ、ＰＺＡ三种抗结核药物在单用时，除ＰＺＡ可引起重度病理损害外，ＩＮＨ为轻度损害或为正常，ＲＦＰ有１６％为重度损害，于对照组比较有差异（Ｐ＜Ｏ．０５）；三种抗结核药物在两两合用时重度病理损害明显增加（Ｐ＜０．０１），以三种抗结核药物合用时为著（Ｐ＜０．００１）。肝细胞病理损害与脂质过氧化反应呈明显正相关；这与薛洪源等报道ＩＮＨ、ＲＦＰ合用较单用肝细胞病理损害严重的结论相符。同时发现抗结核药物致肝细胞病理损害以嗜酸细胞浸润为主，而乙肝病毒感染以淋巴细胞为主【２２】，与文献相符。目前对于临床药物间相互作用及其代谢途径的研究已成为指导临床用药的热点，细胞色素Ｐ４５０在药物代谢及药物毒理学研究方面亦愈来愈深入，己能够从分子水平揭示出各种类型细胞色素Ｐ４５０及其亚型表达情况。细胞因子对细胞色素Ｐ４５０的表达亦有影响【２３Ｉ。针对这方面研究成果，已将其应用于临床新药的开发及指导临床用药，达到减少临床药物毒副作用，加速毒性代谢产物的排泄的目地，增加抗癌药的疗效，收到了可观的临床效果。细胞色素Ｐ４５０是肝脏混合功能氧化酶系（ＭＰＯ）的主要成分，在内源性外源性化合物生物转化起重要作用，其基因表达具有高度的多态性和复杂的种属及个体差异。外源物进入体内后可由一种或多种特异的细胞色素Ｐ４５０同工酶活化增毒，同时又可被其它细胞色素Ｐ４５０同研究论文工酶灭活而解毒。目前，细胞内细胞色素Ｐ４５０水平及异构酶的组成，决定细胞对一种外源物的作用是解毒还是增毒。对于外来化学物质有两种代谢途径：首先通过肝药酶诱导剂使Ｐ４５０酶活化，促进化合物氧化还原结合排出：其次，使化合物活化成为具更大毒性物质。本实验中ＩＮＨ有Ｐ４５０２Ｅｌ诱导活性，但不超过常量时毒性不明显，ＲＦＰ与ＩＮＨ＋ＲＦＰ组Ｐ４５０酶有相似的含量，但前者毒性较低；所以细胞色素Ｐ４５０含量与肝脏毒性不一定呈正相关；特异性的细胞色素Ｐ４５０酶含量或高表达与肝脏毒性呈正相关（如细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１）。与细胞色素Ｐ４５０有关的药物毒性形成机制主要有三种：（１）由于过量未代谢药物的蓄积，导致细胞色素Ｐ４５０活性降低，毒性增加：常用量下细胞色素Ｐ４５０活性无明显降低。（２）细胞色素Ｐ４５０与药物作用后生成亲电子或氧自由基代谢产物，与细胞膜或其它细胞成分起化学反应而产生的。（３）由于细胞色素Ｐ４５０的代谢产物与ＤＮＡ及各种蛋白分子结合，诱导自身抗体产生，引起免疫病理损伤所致１２４，２５１。本实验研究药物毒性机制属于后两种。细胞色素Ｐ４５０与药物间相互作用有密切关系，前面已经提到由于ＲＦＰ对肝酶ｃｙｐ４５０３Ａ４有诱导活性，使ＩＮＨ、ＲＦＰ合用毒性增加；能促使与之合用药物的排泄，而需增加药物的剂量，如ＲＦＰ可以减弱口服抗凝药的作用，缩短降糖药的半衰期，促进的排泄，使这些药物临床疗效降低【２６１。ＲＦＰ肝酶诱导活性与其它药物间的相互作用研究，将逐渐从分子水平了解细胞色素Ｐ４５０基因表达情况，为药物的配伍提供依据。从本实验来看ＲＦＰ与ＩＮＨ配伍，和与ＰＺＡ配伍肝毒性相当，无统计学差异。同时可以看到，与对照组比较在ＨＲＺ研究论文组，ＨＲ组，Ｒ组，细胞色素Ｐ４５０含量有明显增高（Ｐ＜０．０１），ｚ组，Ｈ组与对照组比较有统计学差异（Ｐ＜０．０５），说明利福平对肝酶诱导活性较强；异烟肼虽然有细胞色素Ｐ４５０的诱导活性，但未能使Ｐ４５０总量增加，如果异烟肼超出本实验的剂量，使细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１的表达明显增强，那麽肝脏毒性亦随之增加。对抗结核药物致肝损害机理有一定了解后，我们可以开发一些中成药及补充体内缺乏的抗氧化物质，清除自由基，阻断脂质过氧化链式反应的起动及延长，达到保肝护肝的目的。已有报道白头翁、山莨菪碱、银杏叶醇提取物等中药及有效成分，能中和异烟肼与利福平所致肝毒性【２７—９１。硒和维生素Ｅ也是公认的抗氧化物质：硒是ＧＳＨ．ＰＸ酶的活性部位，其可大幅提高ＧＳＨ．ＰＸ的活性；而维生素Ｅ可直接与自由基结合，从而中止自由基的链式反应，抗氧化作用更为显著［３州。李桂芝等曾做大鼠实验，发现亚硒酸钠和维生素Ｅ合用，可明显降低血清脂质过氧化物（Ｐ＜０．０５），使ＡＬＰ水平显著降低（Ｐ＜０．０１）ｐ“。同时随着对肝药酶分子表达研究的不断深入，了解和认识更多的特异性Ｐ４５０酶的诱导剂和抑制剂，利用药物间相互作用，达到增加疗效降低毒性的目的；我们推测在不久的将来，可以应用分子生物学技术，针对特异性的Ｐ４５０酶的基因靶点进行替换、激发和阻遏，产生诱导或抑制，使其特定代谢药物毒性减少及加快毒性代谢产物排泄，使临床抗结核药物得以更合理应用。研究论文结论１．抗结核药物所致肝脏损害与脂质过氧化反应指标丙二醛（ＭＤＡ）呈明显正相关；与脂质过氧化反应指标谷胱甘肽（ＧＳＨ）呈明显负相关。２．肝脏损害程度随联用抗结核药物的种类多少有关，多种药物联合应用较单用毒性明显增加。３．利福平有明显肝脏细胞色素Ｐ４５０酶的诱导活性，有力的依据，抗结核药物的相互作用是造成肝脏损伤的原因之一。５．肝脏组织细胞的病理损害程度与脂质过氧化反应程度呈明显正相关。研究论文参考文献ＭｉｔｃｈｅｌｌＪＲ，Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｉｎｊｕｒｙ：Ｍｉｔｃｈｅｌｌｃｌｉｎｉｃａｌｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＡｎｎＩｎｔｅｍ２１ＨＪ，ＩｓｈａｋＫＧｅｔａ１．Ｉｓｏｎｉａｚｉｄｌｉｖｅｒａｎｄｐｒｏｂａｂｌｅｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｐａｔｈｏｌｏｇｙＭｅｄ，１９７６，８４：１８１Ｍ，ｅｔａ１．ＩｎｃｒｅａｓｅｄＪＲ，ＴｈｏｒｇｅｉｒｓｓｏｎＵＰ，Ｂｌａｃｋｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｉｓｏｎｉａｚｉｄｈｅｐａｔｉｔｉｓｉｎｒａｐｉｄａｃｅｔｙｌａｔｏｒｓ：ｐｏｓｓｉｂｌｅｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｈｙｄｒａｚｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，１９７５，１８：７０３ＮｏｄａＡ，ＨｓｕＫＹ，ＮｏｄａＨ，ｅｔａ１．Ｉｓｉｓｏｎｉａｚｉｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，ｈｙｄｒａｚｉｎｅ？ＳａｎｇｙｏＩｋａＤａｉｇａｋｕＺａｓｓｈｉ，１９８３，５（２）：１８３４ＪｅｎｎｅｒＰＪ，ＥｌｌａｒｄＧＡ．Ｉｓｏｎｉａｚｉｄｒｅｌａｔｅｄｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ａｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｒｉｆａｍｐｉｃｉｎａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆａｃｅｔｙｌｉｓｏｎｉａｚｉｄ，１９８３，５（２）：１８３５ＺｈｕＤＬ．ＭｅｎｇＸＱｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｔｏｆａｃｅｔｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅｏｎｔｈｅｈｅｐａｔｉｃｍｉｃｒｏｓｏｍａｌｃｙｔｏｃｈｒｏｍＰ４５０ａｎｄｉｔｓＩｓｏｚｙｍｅｉｎｒａｔｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｈａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９４，２８（５）：３９９６薛洪源、侯艳宁，刘会臣等．利福平异烟肼合用致小鼠肝毒性增加的机理研究．药报，２００２．１８ｆ６１：３３０．３３３７徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［Ｍ】．第５版．北京：人民卫生出版社，２００２．５１１－５４９８张均田，现代药理实验方法【Ｍ］．第一版．北京：北京医科大学中国协和医科大合出版社，１９９８．１６４７．１６５２９杨中枢，吴德丰，罗逊，等．大鼠肝微粒体的提取及细胞色素Ｐ４５０和ＡＨＨ活性的测定［Ｊ】．中华肿瘤杂志；１９８０，研究论文２（３Ｊ：１８３１０傅青春．药物诱导的慢性肝病．肝脏［Ｊ】；２００１，３（６）４６。１１戴宁，曾民德，邱德凯，等．酒精性脂肪肝肝细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１的表达与氧化与氧化抗氧化的关系［Ｊ］．中华消化杂志；１９９９，７（２）：１０４１２戴宁，曾民德，李继强，等．非酒精性脂肪肝肝色素Ｐ４５０ｔｔＥｌ的表达与氧化抗氧化的关系［Ｊ］．中华肝杂志；１９９９，１９（５）：３１２１３张仁亮，王振钺，李端等．利福平对大鼠异烟肼及其代谢物乙酰肼药物动力学的影响．中国药理学报：１９９２，１３（６）：４９４—６１４朱大岭，孟宪清，李玉兰，等．乙酰肼对大鼠肝微粒体细胞色素Ｐ４５０及亚型作用．哈尔滨医科大学学报；１９９４，２３（５）：３９８１５伍忠銮，谢红光，周宏．细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１的研究进展．中国临床药理学杂志，１９９７，１３（１）：５７．６２１６王仲元．利福平的临床应用．新医学；１９９７，２８（２）：９１１７李树峰等．结核病患者血清中利福平特异ＩｇＧ、ＩｇＭ检测意义．中华结核和呼吸杂志；１９９３，１６（６）：３５２１８ＳｔｅｅｌｍＡ，ＢｕｒｋＲＦ，ＤｅｓｐｒｅｚＲＭ．ＴｏｘｉｃＨｅｐａｔｉｔｉｓｗｉｔｈＩｓｏｎｉａｚｉｄａｎｄＲｉｆａｍｐｉｎ．Ａ４６５ｍｅｔａ—ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，１９９１，９９：１９Ｍ．Ｄｏｓｓｉｎｇ，Ｊ．Ｔ．Ｒ．Ｗｉｌｃｋｅ，Ｄ．Ｓ．Ａｓｋｇａａｒｄ，Ｂ．Ｎｙｂｏ．ＴｕｂｅｒｃｌｅａｎｄＬｕｎｇＤｉｓｅａｓｅ（１９９６）７７，３３５—３４０２０王乃平，臧林泉，黄仁彬，等．利福平对小鼠四氯化碳急性肝中毒的影响．广西医科大学学报：１９９４，１１（４）３５６．３６０研究论文２１张德昌．医学药理学．第四版．北京：北京医科大学中国协和医科大合出版社，１９９４．７４．７５２２邢同京，陈加保，张光曙，等．利福平与异烟肼合用致肝损害的临床与病理分析．中华结核和呼吸杂志；１９９７，２０（１１）２３吕慧．宋述强．细胞因子与细胞色素Ｐ４５０．海峡药学．Ｖｏｌ１３Ｎｏ．３２００１２４ＳａｒｍａＧＲ，ＩｍｍａｎｕｅｌＣ，ＫａｉｌａｓａｍＳ，ｅｔａ１．Ｒｉｆａｍｐｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｌｅａｓｅｏｆｈｙｄｒａｚｉｎｅｆｒｏｍｉｓｏｎｉａｚｉｄ．ＡｐｏｓｓｉｂｌｅｃａｕｓｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓｄｕｒｉｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｗｉｔｈｒｅｇｉｍｅｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｉｓｏｎｉａｚｉｄａｎｄＲｅｓｐｉｒＤｉｓ，１９８６，１２５Ｚｈａｎｇｒｉｆａｍｐｉｎ［Ｊ］．ＡｍＲｅｖ３３（６）：１０７２ＹＬ，ｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｏｆｒｉｆａｍｐｉｃｉｎｉｓｏｎｉａｚｉｄａｎｄｉｔｓｏｎＲＬ，ＷａｎｇＺＹ，ＬｉｏｆｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓａｃｅｔｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｔｅＳｉｎｉｃａ，ｌ９９２，ｒａｔ［Ｊ］．Ａｃｔａｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ１３（６）：４９４２６宋振玉，刘耕陶．当代药理学ｔＭ］．北京：北京医科大学中国协和医科大合出版社，２００２．６９２２７路西明，王建刚，侯湘波，等．白头翁对利福平异烟肼肝毒性研究【Ｊ］．中国中医药信息杂志；ｔ９９８，５（８）：２１２８王建刚，王淑英，吴银萍等．山莨菪碱对异烟肼与利福平肝毒性的保护作用【Ｊ］．中国药理学通报；１９９９，１５（４）：３８２２９王建刚，周海梅，侯湘波，等．银杏叶醇提取物对异烟肼与利福平肝毒性的保护作用的实验研究［Ｊ］．中国现代应用药学杂志；２０００，１７（３）：１７８３０刘利华，呼文亮，等．硒与维生素Ｅ对需谷胱甘肽抗氧化研究论文酶的保护作用．广东微量元素科学；１９９９，６（４）：８－９３１李桂芝，王守训，郭键．硒单独使用或与维生素Ｅ协同作用对大鼠血清脂质过氧化物和ＡＬＰ水平的影响。微量元素与健康研究；２００１，１８（１）：９－１０研究论文附表、附图Ｔａｂｌｅ－１Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ玎ＶＨ．ＲＦＰａｎｄＰＺＡｂｙｓｉｍｐｌｅｇｒｏｕｐｓｏｎｏｎｅｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｔｈｅｒａｔｓ’ｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｏｆＡＬＴ（ｘ＇＊ｎ塑型对照组高ｌＮＨＲＦＰＰＺＡＩＮＨ＋ＲＦＰ塾塑垫６垒！！ｆ±塑垦璺焦！３４３士１．８３４．１９土Ｏ．３４＊４．５１土１．０８＊６．９８土Ｏ．４０丰车９．７８士１．１１△９．９３士０．７８△１０．１７土１．８３△１０．３５士２．５８△１５．４６士５．３５△Ａ高ＩＮＨ＋ＲＦＰＲＦＰ＋ＰＺＡＪＮＨ＋ＲＦＰ＋ＰＺＡＮｏｔｅ：｛ｉｎｄｉＧａｔｅｄｅｃｒｅａｓｅｄＰ＞０．０５．｛｛ｉｎｄｉＧａｔｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．０５Ａ｝｝ｉｎｄｉＧａｔｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．０１．ＡＡｎｄｉＧａｔｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．０５ｃｍｍｐａｒｅｄｂｙＡＬＴ图１ＩＮＨ，ＲＦＰ和ＰＺＡ对大鼠血清Ａｕ’水平的影响３０研究论文Ｔａｂｌｅ－２ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＩＮＨ，ＲＦＰａｎｄＰＺＡｂｙｓｉｍｐｌｅｇｒｏｕｐｓｏｎｏｎｅｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｒａｔｓ’ｃｙｐ４５０ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓ（ｘ＿士ｓ）Ｎｏｔｅ：｛ｉｎｄｉｃａｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．０５．｝｝ｉｎｄｉｃａｒｅｉｎｏｒｏａｓｅｄＡＰ＜００１ｉｎｄｉｃａｒｅｉｎｅｒｅａａｅｄＰ＜０．０１．ｂｙｔｈｅｃｏｒｌｔｒｏＩｇｒｏｕｐ．Ｐ４５０一Ｐ４５０ＯＡＢＣＤＥＦＧＨ工图２ＩＮＨ，ＲＦＰ和ＰＺＡ对大鼠肝组织匀浆Ｐ４５０含量的影响３ｌ研究论文Ｔａｂｌｅ－３ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＤｑＨ．ＲＦＰａｎｄＰＺＡｂｙｓｉｍｐｌｅｇｒｏｕｐｓｏｎｏｎｅｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｒａｔｓ’ＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓ（ｘ＇＊ｓ）组别对照组ＩＮＨ动物数６６６６６８８８８ＭＤＡ（ｕｍｍｏＩ／ｍｇｐ翌型０７１士Ｏ３１１．０２土Ｏ．２４＊１．２８士０．５７＊２．１７士０．８４｝￥３．１１士Ｏ．４５△３．１４士０．５６△３．４８士Ｏ．３６△３．３７土０．８２△３．６７士Ｏ．１２△△高ＩＮＨＲＦＰＰＺＡｎｑＨ＋ＲｆＰ商ＩＮＨ＋ＲＦＰＲＦＰ＋ＰＺＡｌＮＨ＋ＲＦＰ＋ＰＺＡＮｏｔｅ：｝ｉｎｄｉｃａｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ△ＡＰ＜０．０５．｝｝ｉｎｄｉｃａｒｅＰ＜０．０１．ＡｏｒｉｎｄｉｃａｒｅＰ＜０００１ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙｔｈｅｃｏｎｔｒｏＩｇｒｏｕｐ：ＡｉｎｄｉｃａｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．们ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙ＊，△ＡｉｎｄｉｃａｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄＰ＜００１Ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙ＊．ＭＤＡ图３ＩＮＨ，ＲＦＰ和ＰＺＡ对大鼠肝组织匀浆ＩｌＤＡ含量的影响３２研究论文Ｔａｂｌｅ－４ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＩＮＨ，ＲＦＰａｎｄＰＺＡｂｙｓｉｍｐｌｅｇｒｏｕｐｓｏｎＯｌｌｅｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｒａｔｓ’ＧＳＨｏｆｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓ（ｘ．士ｓ）Ｎｏｔｅ：｝ｉｎｄｉｃａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄＰ＞０．０５，｝｝ｉｎｄｉｃａｒｅＰ＜０．０５。Ａｇｒｏｕｐ’ＡｏｒＡ△ｉｎｄｉｃａｒｅＰ＜０．０１ｏｏｃＮｏａｒｅｄｂｙｔｈｅｃｏｎｔｒｏＩＰ＜０．０１ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙ＊，ＡＡｉｎｄｉｃａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｎｄｉｃａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｎｐｔＴＰ＜０．０１ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙ＊．图４ＩＮＨ，ＲＦＰａｎｄＰＺＡ对大鼠肝组织匀浆ＧＳＨ含量的影ｑ３３研究论文Ｔａｂｌｅ－５ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＩＮＨ．ＲＦＰａｎｄＰＺＡｂｙｓｉｍｐｌｅｇｒｏｕｐｓｏｎｏｎｅｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｒａｔｓ’ＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓ（ｘ－－ｉ－ｓ）ＡｉｎＮｏｔｅ：￥ｉｎｄｉｃａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄＰ＞０。０５．￥￥ｉｎｄｉｃａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄＰ＜０．０５。ＡｏＦ△ＡｄｉｃａｒｅＰ＜０．０１ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙｔｈｅｃｏｎｔｒｏＩｇｒｏｕｐ：ＡＡｉｎｄｉｃａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄＰ＜００５ｃｏｍｐａｒｅｄｂｙ△．ＳＯＤ图５ＩＮＨ，ＲＦＰａｎｄＰＺＡ对大鼠肝组织匀浆ＳＯＤ活性的影响研究论文Ｔａｂｌｅ一６ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＤｉＨ，ＲＦＰａｎｄＰＺＡｂｙｓｉｍｐｌｅｇｒｏｕｐｓｏＢｏｕｅｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｒａｔｓ’ｈｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓｏｆｐａｔｈｏｌｏｇｙＮｏｔｅ：｝ｉｎｄｉＧａｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔＰ＜０．０１ｅｌｆｉｃｉｅｎｔＩＹｒｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｏｅＰ＜００５ｂｙｔｈｅｃｏｎｔｒｏＩｂｙｔｈｅｃｏｎｔｒｏＩｇｒｏｕｐ：＊＃ｉｎｄｉｃａｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐａｒｅｄｇｒｏｕｐ：△ｉｎｄｉｃａｔｅＰ＜０．０５ｂｙ自＃．表．７各实验组药物分配及药量明晰塑型Ａ：对照组Ｂ：ＴＮＨ垫塑壁墼０１１１ｌ２２２３堑垦！型幽型）Ｏ５５８２．５５５１９２．５５５＋５５８２．５＋５５５５＋１９２．５５５＋８２．５＋１９２．５Ｃ：高ＩＮＨＤ：ＲＦＰＥ：ＰＺＡＦ：ＩＮＨ＋ＲＦＰＧ：高ＩＮＨ＋ＲＦＰＨ：ＲＦＰ＋ＰＺＡＩ：ＩＮＨ＋ＲＦＰ＋ＰＺＡ３５综述综述抗结核药物致肝脏损伤的关联性研究当抗结核药物开始应用于临床之时，先是标准化疗（异烟肼、乙胺丁醇、链霉素）应用于临床，患者的毒性反应除了过敏反应外，就是一些轻度肝外不良反应，一般情况下思者均可完成疗程，很少因肝脏损伤而中止疗程，但是复发率较高；随着抗结核药物的不断开发研究，更强更有力的新药（如常用的利福平、吡嗪酰胺）问世，减少了结核病的复发，但是药物的不良反应明显增加，使一部分患者不得不停药，造成了病情的迁延。所以早在５０年代就开始了抗结核药物临床应用时，不良反应的监测，特别是肝功能的检验。申悦平［１】曾总结了１３５例药物性肝炎，其中９０例是异烟肼加利福平所致，占到所有临床用药肝脏损伤的６６．６％显示抗结核药物肝脏损伤在临床占到相当比例。但是，一直以来对抗结核药物肝损伤的机理，不甚明了，故临床在预防和治疗抗结核药物肝损伤时存在明显盲目性；表现在（１）不能提前预测患者发生抗结核药物肝脏损害的可能性；（２）没有确切可行的抗肝脏损害的药物，来减轻损害的发生、发展。所以迫切需要进一步研究药物的肝脏损害机理。我们知道药物进入体内，在酶系统及非酶系统作用下可发生脂质过氧化反应损害肝细胞，其机理为：药物进入体内，一般要经肝脏复合功能氧化酶，主要是细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）氧化或还原代谢后，与葡萄糖醛酸，硫酸等综述结合或经乙酰化而变为水溶性，尔后由尿液或胆汁排泄，药物经ＣＹＰ代谢产生的亲电子基、自由基等活性代谢产物，能攻击细胞不饱合脂肪酸，产生以ＭＤＡ为代表的脂质过氧化产物，通过共价结合破坏生物膜完整性及膜上受体和酶活性，改变膜的结构和膜的功能与抗原特异性。亲电子基是通过与肝细胞蛋白半胱氨酸残基的巯基赖氨酸残基的氨基等亲电子基团共价结合，造成肝细胞的损伤。另外细胞膜因含大量不饱和脂肪酸侧链，所以其具有流动性，能完成正常的物质代谢与能量转换：当不饱和脂肪酸发生脂质过氧化损伤时，将影响细胞膜的流动性，影响其完成正常的物质转运和代谢功能。通常情况下这些自由基与谷胱甘肽ＧＳＨ结合而解毒，或由过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶清除，但当它们大量消耗，体内自由基的产生速度与清除速度失衡，将导致肝细胞中毒性损伤，老化衰亡【，１。可推测脂质过氧化反应在药物性肝脏损害中起重要作用。脂质过氧化反应的过程是一个产生自由基和自由基参与的链式反应过程，起动因素在诱发肝脏损伤时亦至关重要。所以研究阻断链式反应的起动和扩展，从而阻止脂质过氧化反应的肝损害已成为临床基础研究重要课题１２１。近年有一些关于抗结核药物肝脏毒性的多种论述，现综述如下：ｌ异烟肼（Ｈ）、利福平（Ｒ）、吡嗪酰胺（ｚ）三药对肝脏损害的毒性分析：１．１异烟肼的代谢产物：乙酰异烟肼、肼二者直接或间接引起肝脏损害，在大剂量时除因神经损害外，肝脏损害亦较为明显。Ｍｉｔｃｈｅｌｌ等１３，４１提出异烟肼的代谢产物乙酰肼一部分综述在Ｐ４５０酶催化下形成活性中间体（乙酰偶氮或乙酰正离子和乙酰游离基１可与肝细胞内的大分子共价结合，或与ＧＳＨ共价结合破坏肝细胞：另一部分继续水解成肼，肼可以直接与肝细胞发生过氧化反应，引起肝脏损伤。当同时存在Ｐ４５０酶诱导剂时，异烟肼的代谢产物、活性中间体在单位时间内明显增加，使肝脏毒性明显增大。异烟肼在临床常用的高剂量时，因蛋白结合率低，半衰期短，较利福平、吡嗪酰胺肝脏毒性低；但其存在明显的个体差异。异烟肼在体内代谢方式，主要在肝脏与乙酰基结合而灭活，乙酰化过程必须有乙酰转移酶参与，Ｎ．乙酰转移酶受遗传基因所控制；日本砂原芪一【５Ｊ根据扩散法的结果认为异烟肼所表现的遗传性状，是由快速（Ｉ）慢性（ｉ）两种常染色体的对立基因支配，（Ｉ）为快速型，（ｉ）为缓慢型，中间型为杂合子（Ｉｉ）；董启权［６１认为异烟肼肝炎中８６％为乙酰化快者，而中国部分属于快型及中间型，而慢型仅占５．２０％，所以因利福平肝药酶的影响提出异烟肼与利福平不宜合用。在肝药酶诱导剂存在时，加速了乙酰肼成为二乙酰肼和肝毒性物质，快乙酰化者的乙酰化速度快，形成较多的乙酰肼，所以快乙酰化者的肝毒性要大于慢乙酰化者【７１。另外也有人认为乙酰肼形成越快，它变为二乙酰肼速度也快，消除速度也快，快慢乙酰化者消除同样多的乙酰肼，所以认为快慢乙酰化者有同样的肝毒性；Ｒｕｎｇｅ等【剐观察到肼、苯乙肼、肼苯酞嗪对大鼠肝脏、１肾脏的毒性与Ｐ４５０２Ｅ１介导氧化反应产生的自由基有关，其中肾脏表达Ｐ４５０２Ｅ１为著，损害亦比肝脏明显；所以单用异烟肼（小于１．０／日）的肝毒性相对不大。综述１．２利福平因蛋白结合率高，存在药物的肝肠循环而延长了药物的半衰期，同时竞争性抑制胆红素的排泄，利福平易致变态反应，所以其本身即是肝脏毒性药物，可致黄疸和肝细胞坏死，黄疸发生率达５－７％ｌ９。。单药时较异烟肼的肝毒性大；另外利福平具有诱导肝脏细胞色素Ｐ４５０的作用，加重合用药物的毒性或促进与之合用药物的排泄，降低其疗效。王建刚等［１ｏ】研究利福平诱导Ｐ４５０酶，使异烟肼的代谢加快，乙酰肼的浓度增加，继而大量肝脏毒性物质与生物膜发生脂质过氧化，损害线粒体膜上的Ｃａ２－．ＡＴＰ酶，使细胞内及线粒体内Ｃａ２＋过多，影响ＡＴＰ的代谢，导致肝细胞变性坏死；ＳａｒｍａＮｏｄａ等【１１，１２１证明，利福平对异烟肼代谢物中乙酰异烟肼、乙酰肼、二乙酰肼的血药浓度没有很大影响，但可诱导细胞色素Ｐ４５０酶参与肼的脂质过氧化损害过程；Ｓｏｄｈｉ等【ｌ３Ｊ的实验证明：两药合用肝脏毒性增加与氧化作用增加有关，表现在血清及肝组织中过氧化产物增多、ＧＳＨ含量减少、抗氧化酶减少等方面；肝脏细胞色素Ｐ４５０酶含量增加与肝毒性不呈正相关，与特异性细胞色素Ｐ４５０酶含量有关。如果需要了解特异性细胞色素Ｐ４５０酶亚型表达情况，则应进一步从分子水平揭示其原理。１．３吡嗪酰胺的肝脏毒性，早在它发现的初期就为人们所认识，每日一次口服不能耐受，而改为分次口服，疗程亦缩短。因其为半杀菌药，所以经常要与异烟肼、利福平合用，更增加了抗结核治疗过程中的肝毒性的发生。李汝安等【１４】报道：应用含异烟肼、利福平方案抗结核治疗致肝损害率为２５．８％；杨洪芹掣幅Ｊ丰艮道：应用含异烟肼、利福平、吡嗪酰胺方案抗结核治疗组，肝损害发生率高于应用异烟综述肼、利福平方案治疗组；方毅敏等【ｌ６Ｊ观察５３ｌ例初治结核病患者执行含异烟肼、利福平、毗嗪酰胺方案后出现肝损害２３ｌ例，肝损害率高达４３．５％。２药物代谢及相互作用的分子机制与肝毒性增加的关系药物的生物转化一般均在肝脏中进行，通过肝脏的第一时相：氧化、还原、水解反应；第二时相：结合反应，然后排出体外。生物转化中最重要因素有：遗传多态性、与其它药物合用、疾病和年龄，这些因素可影响药物的有效性、药理作用和毒性。２．１细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ４５０）酶的遗传多态性：指不同基因型导致的病人个体间药物生物转化的差异，这种不同与可遗传的常染色体的隐性特征有关，其代谢药物的能力明显不同，可分为快代谢型和慢代谢型，表现的毒力亦有不同。外源物进入体内，因ＣＹＰ４５０代谢活性不同及ＣＹＰ４５０各家族敏感程度的差异，使ＣＹＰ４５０的活性和表达受到不同程度的影响；近年来可通过分子诊断学（如分子探针）实验方法鉴定受影响的ＣＹＰ４５０同工酶的种类，精确了解外源物在代谢过程中对ＣＹＰ４５０的方式；在哺乳动物中至少有１４个家族和２６个亚型，其中２０个亚族已在人基因组中定位１１７１。ＣＹＰ４５０２家族是目前已知的ＣＹＰ４５０同工酶中最大且最复杂的家族，包括ＣＹＰ２Ａ，ＣＹＰ２Ｂ，ＣＹＰ２Ｃ，ＣＹＰ２Ｄ，ＣＹＰ２Ｅ，ＣＹＰ２Ｆ等众多的亚族。ＣＹＰ２Ｃ亚族至少有５个同工酶蛋白组成，ＣＹＰ２Ｃ９在药物代谢中起重要作用ｕｓ］。ＣＹＰ２Ｄ６有显著的遗传多态性，能代谢多种临床用药【１９１。ＣＹＰ２Ｅ１在人及啮齿类动物中主要参与乙醇、丙酮、氯仿等小分子化合物的代谢，可被乙醇等小分子化合物诱导【２０１。综述目前对于药物性肝炎研究最多的为ＣＹＰ２Ｅ１，因为它能在药物代谢过程中活化中间代谢产物或产生一些毒性产物，如亲电子基、自由基、氧基等与肝细胞内的大分子物质（如蛋白质、核酸等）共价结合或造成细胞膜与细胞器的脂质过氧化，最终导致肝细胞坏死【２‘ｌ。可应用免疫组织化学的方法，观测肝脏细胞ＣＹＰ２Ｅ１的表达情况。戴宁等曾报导高脂饮食性或酒精性脂肪肝大鼠模型的肝脏细胞中，有显著的ＣＹＰ２Ｅ１表达１２２，２３］。推测在抗结核药损伤的肝脏细胞中可能亦有显著的ＣＹＰ２Ｅ１表达。２１２抗结核药物相互作用与毒性关系：改变药物生物转化反应最常见的两种原因是药物对ＣＹＰ酶的诱导和抑制。酶的诱导和抑制数量有个体差异，诱导剂的剂量，具体的年龄，基因型，合用的诱导或抑制剂，以及肝脏功能都对其有影响。酶的诱导可增加生物转化率，从而降低药物的浓度。诱导：当一种药物通过同一种或不同种酶的途径刺激合用药物的生物转化时即发生诱导，但诱导剂对特定ＣＹＰ酶有专属性。有时，一种药物除可对其它药物产生诱导作用外，也可诱导自身的生物转化。利福平是肝脏和肠中ＣＹＰ３Ａ４酶的诱导剂，可促进合用药物的排泄，多数条件下需增加与之合用药物的剂量，如：环孢素、口服避孕药和法华令。诱导作用可在治疗的头两天内出现，但通常合成新的酶需要一周多时间，此时可产生最大疗效，诱导作用的起始时间也由药物的ｔｌ／２决定，当诱导药物被人体清除和肝酶作用改变时，诱导作用即可逆转。抑制：最常见的抑制作用是竞争性抑制，发生在两种药物以上药物竞争同一种酶时，其临床意义主要由药物的相对浓度和其它多种综述特异性因素决定。药物可与酶的血红素结合部位进行可逆或不可逆结合，从而抑制其它药物与之结合。当某种药物通过ＣＹＰ酶代谢为可与酶结合并使其功能不可逆地丧失的活性代谢物时，即可发生抑制，如：环丙沙星、依诺沙星可抑制ＣＹＰｌＡ２酶，此酶为茶碱的代谢酶，所以二者合用时，可降低茶碱的清除率。还有一些药物经ＣＹＰ酶代谢活化后成为抑制性化合物，再与ＣＹＰ酶形成相对稳定的复合物，使细胞色素处于一种非活性状态，如红霉素可抑制ＣＹＰ３Ａ４，也可降低茶碱的清除率，均因为茶碱的代谢酶为ＣＹＰＩＡ２和ＣＹＰ３Ａ４。一旦抑制剂停用，酶的抑制作用比诱导逆转来得更迅速犯４１。潘淳掣２５１研究了异烟肼对利福平体内药物动力学影响，得出异烟肼对利福平不存在药物问药动学不良交互影响。异烟肼、利福平合用毒性增加为利福平的诱导活性所致。２＇３抗结核药物肝脏毒性的风险因素：前面提到快慢乙酰化型有人种和地区差异，造成药物代谢的毒性不同，此与基因型有关，特定的基因型可造成药物毒性风险的不同；另外年龄、性别、遗传、营养状态、急慢性肝病，能诱导细胞色素Ｐ４５０酶的药物或食物，以及接触毒性物质（如：乙醇、烟草、环境中的有害物质，如：杀虫剂、油漆、合成材料）的时间等，对该酶的活性有很大影响［２６１。７０年代以来，人们发现在炎症和感染时一些药物的代谢受到明显影响，如流感患者，茶碱的消除率明显减慢，而机体在炎症和感染引起的急性期反应中，一些细胞因子如：白介素．１（ＩＬ．ｔ）ＩＬ．６、肿瘤坏死因子（ｎ婿）和干扰素ＩＮＦ－ｒ等明显升高，三者在免疫调节、抗肿瘤和治疗病毒性肝炎方面综述正较广泛应用，因此他们对细胞色素Ｐ４５０酶水平的改变受到广泛关注，不同的细胞因子对Ｐ４５０酶的调节作用亦有不同特点１２７】。在健康志愿者中证实，通过注射内毒素（ＬＰＳ）造成内毒素血症（即全身性炎症反应），血浆中细胞因子ＴＮＦ一Ⅱ、ＩＬ．１、ＩＬ．６等明显升高。同时几个Ｐ４５０酶的“探针药”安替比林、环乙烯巴比妥，氨茶碱等的代谢速度明显减慢，并且在男女无性别差异【２８１。所以，抗结核药物应用过程中，应注意各种因素对其代谢的影响，避免肝脏毒性的发生。３减轻或阻止抗结核药物肝脏毒性的可能性研究概况：据报道：白头翁、山莨菪碱、银杏叶醇提取物等中药及有效成分，能中和异烟肼与利福平所致肝毒性［２９－３１】。硒和维生素Ｅ也是公认的抗氧化物质：硒是ＧＳＨ．ＰＸ酶的活性部位，其可大幅提高ＧＳＨ．ＰＸ的活性；而维生素Ｅ可直接与自由基结合，从而中止自由基的链反应，抗氧化作用更为显著口引。目前对于减轻或阻止抗结核药物肝脏毒性的研究除了上述中西药物以外，目前正在进行发生在蛋白翻译之前，或蛋白质翻译水平，使细胞色素Ｐ４５０基因转录水平下调，导致蛋白质合成减少的研究。已有充分证据说明：ＤＮＡ，ＲＮＡ和蛋白质翻译水平及ＡｈＲ对基因的均能影响ＣＹＰ４５０的表达，不同机制所引起的作用与ＣＹＰ４５０同工酶种类、外源药物的性质有判３３】。已经建立敲基因鼠的实验模型，剔除ＣＹＰ４５０的基因，来研究药物的代谢及其抗原性。４前展：也许在不久的将来，通过抗结核药物代谢的基因转录水平的研究，将更加明确由于个体差异造成的肝脏毒性综述反应，及有针对性地应对抗结核药物引起的肝脏脂质过氧化反应；同时在新的抗结核药上市之前，即可确定其生物转化的相关酶，由此可预测药物及药物间相互毒性、诱导及抑制关系，并能确定遗传因素在特殊药物代谢中的作用。这将为临床抗结核药物合理用药指明方向，进一步预防和减少因药物的毒副反应，而致病人病情迁延或死亡。对由ＣＹＰ４５０引起的活化中间代谢产物．癌前物质认识的深入，将对肿瘤的预防及治疗产生深远的影响。综述参考文献申悦平．１３３例药物性肝炎的病因及临床表现．镇江学院学报；２０００，１Ｏ（３）：５５２—５５３医ｌ２赵保路．氧自由基和天然抗氧化剂．科学出版社：２００１，７９—８０３ＭｉｔｃｈｅｌｌＪＲ，ＴｈｏｒｇｅｉｒｓｓｏｎＵＰ，ＢｌａｃｋＭ，ｅｔａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｉｓｏｎｉａｚｉｄｈｅｐａｔｉｔｉｓｉｎｒａｐｉｄａｃｅｔｙｌａｔｏｒｓ：ｐｏｓｓｉｂｌｅｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｈｙｄｒａｚｉｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，１９７５，１８：７０．４ＺｈｕＤＬ．ＭｅｎｇＸＱｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｔｏｆａｃｅｔｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅｏｎｔｈｅｈｅｐａｔｉｃｍｉｃｒｏｓｏｍａｌｃｙｔｏｃｈｒｏｍＰ４５０ａｎｄｉｔｓＩｓｏｚｙｍｅｉｎｒａｔｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｈａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９４，２８（５）：３９９５孙友乐译：临床药理学，第一版，科学技术文献出版社重庆分社，重庆，１９８２，２４０—２４７６董启权．异烟肼与利福平不宣合用．海峡药学；１９９５，７（２）：７４—７５７ＥｌｌａｒｄＧＡ．Ａｓｌｏｗ－ｒｅｌｅａｓｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｉｓｏｎｉａｚｉｄ：ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｓｐｅｃｔｓ．ＢｕｌｌＩｎｔＵｎｉｏｎＴｕｂｅｒｃ，１９７６，５１：１４３．８ＲｕｎｇｅＭｏｒｒｉｓＭ，ｆｅｎｇＹＺａｎｇａｒＲＣ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｏｎｈｙｄｒａｚｉｎｅ，ｐｈｅｎｅｌｚｉｎｅ，ａｎｄｈｙｄｒｉｌａｚｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｒａｔｈｅｐａｔｉｃａｎｄｒｅｎａｌｄｒｕｇ－ｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇｅｎｚｙｍｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＤｒｕｇＭｅｔａｂＤｉｓｐｏｓ，１９９６，２４（７）：７３４．９陈新谦主编：新编药物学，第１３版，人民卫生出版社，北京，４５综１９９２：３述１０王建刚王淑英赵建龙等．利福平增加异烟肼肝毒性的机制探讨．洛阳医专学报．１９９９，１７（１）；１１．１３１１ＳａｒｍａＧＲ，ＩｍｍａｎｕｅｌＣ，ＫａｉｌａｓａｍＳ，ｅｔａ１．Ｒｉｆａｍｐｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｌｅａｓｅｏｆｈｙｄｒａｚｉｎｅｆｒｏｍｉｓｏｎｉａｚｉｄ．Ａｐｏｓｓｉｂｌｅｃａｕｓｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓｄｕｒｉｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｗｉｔｈｉｓｏｎｉａｚｉｄａｎｄｒｅｇｉｍｅｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｉｆａｒｎｐｉｎ［Ｊ］．ＡｍＲｅｖＲｅｓｐｉｒＤｉｓ，１９８６，１３３（６）：１０７２１２ＮｏｄａＡ，ＨｓｕＫＹ，ＮｏｄａＨ，ｅｔａ１．Ｉｓｉｓｏｎｉａｚｉｄｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，ｈｙｄｒａｚｉｎｅ？ＳａｎｇｙｏＳＶ，ＭｅｈｔａＳＫ，ｅｔＩｋａＤａｉｇａｋｕＺａｓｓｈｉ，１９８３，５（２）：１８３１３ＳｏｄｈｉＣＰ，Ｒａｎｄｉｎａ１．Ｓｔｕｄｙｉｎｄｕｃｅｄｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｓｏｎｉａｚｉｄ．ｒｉｆａｍｏｐｉｃｉｎｈｅｐａｔｉｃｉｎｊｕｒｙｉｎｙｏｕｎｇｒａｔｓ．ＤｒｕｇＣｈｅｍＴｏｘｉｃｏｌ，１９９７，２０（３）：２５５１４李汝安，周庆新，石桂芬，等．利福霉素类药物对肺结核病ＨＢＶＭ阳性者肝功影响，中国防痨杂志．１９９５；１７（４）：１７２１５杨洪芹，安永茂，李树旺．抗结核药物致肝功能异常５１例分析．中国防痨杂志．１９９４；１６（３）：１３６１６方毅敏，陈志成，潘四珍．异烟肼、利福平、吡嗪酰胺对结核病患者肝功能的影响．实用医学杂志；１９９７，１３（９１：６０９．６ｌＯ１７ＮｅｌｓｏｎＤＲ，ＫｏｙｍｏｎｓＬ，ＫａｍａｔａｋｉＴ，ｅｔａ１．Ｐ４５０ｓｕｐｅｒ－ｆａｍｉｌｙ：ｕｐｄａｔｅｏｎｎｅｗｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｇｅｎｅ．ｍａｐｐｉｎｇ，ａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒａｎｄｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ［Ｊ】．Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９６，６（１）：１．４２．１８ＭｉｎｅｒｓＪＯ，ＢｉｒｋｅｔｔＤＪ．ＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０２Ｃ９：ａｎｅｎｚｙｍｅｏｆ．综述Ｍａｊｏｒｉｍｐｏｔａｎｃｅｉｎｈｕｍａｎｄｒｕｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ】．ＢｒＪＣｌｉｎＰｈａｍａｃｏｌ，１９９８，４５（６）：５２５—５３８１９ＪｅｒｌｉｎｇＭ，ＤａｈｌＭＬ，ＡｂｅｒｇＷｉｓｔｅｄｔＡ，ｅｔａ１．ＴｈｅＣＹＰ２Ｄ６ｇｅｎｏｔｙｐｅｐｒｅｄｉｃｔｓｔｈｅｏｒａｌｃｌｅａｒａｎｃｅｏｆｔｈｅｎｅｕ—ｒｏｌｅｐｔｉｃａｇｅｎｔｓｐｅｒｐｈｅｎａｚｉｎｅａｎｄＺｕｃｌｏｐｅｎｔｈｉｘｏｌ［Ｊ］．ＣｌｉｎＰｈａｒｍｃｏｌＴｈｅｒ，１９９６，５９（４）：４２３—４２８２０ＲｏｍｋｅｓＭ，ＣｈｅｍＨＤ，ＬｅｓｎｉｃｋＴＧ，ｅｔａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｌｏｗ２１李靖涛，张明磊，等．细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１基因在肝脏疾病２２戴宁，曾民德，邱德凯，等．酒精性脂肪肝肝细胞色２３戴宁，曾民德，李继强，等．非酒精性脂肪肝肝细胞色素２４刘萍编译，边强审较，国外医药．合成药生化药制剂分册．２５潘淳，邓立东，邓航等．异烟肼对利福平的药动学影响．中２６方新华，杨东亮，等．细胞色素Ｐ４５０与药物所致的肝损伤２７吕慧，宋述强．细胞因子与细胞色素Ｐ４５０．海峡药学［Ｊ］１３ＣＹＰ３ＡａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈＰ５３ｍｕｔａｔｉｏｎａｎｄＣＹＰ２Ｄ６ａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈＲｂｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９６，１７（５）：１０５７一ｌ０６２中的意义［Ｊ】．临床肝胆病杂志，２００１，１７（２）：６７Ｐ４５０２Ｅ１的表达与氧化与氧化抗氧化的关系［Ｊ】．中华消化杂志；１９９９，７（２）；１０４Ｐ４５０ＲＥｌ的表达与氧化抗氧化的关系［Ｊ］．中华肝脏病杂志：１９９９，１９（５）：３１２２０００，２１（５）：３０５－３０６国药师；２００３，６（２１：６９．７１［Ｊ】．肝脏，２００１，６（１）４３Ｎｏ．３２００１：１—３综述２８ＬｉｕＪ，ＳｅｎｄｅｌｂａｃｈＬＥ，ＰａｒｋｉｎｓｏｎＡ，ＫｌａｓｓｅｎＣＤ，ＥｎｄｏｔｏｘｉｎｐｒｅｔｅｒａｔｍｅｎｔｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｔｈｅｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎａｎｄＣａｒｂｏｎｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ：ｒｏｌｅｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０００，１４（７）：１６７—７６２９路西明，王建刚，侯湘波，等．白头翁对利福平异烟肼肝毒性研究【Ｊ】．中国中医药信息杂志；１９９８，５（８）：２１３０王建刚，王淑英，吴银萍，等．山莨菪碱对异烟肼与利福平肝毒性的保护作用［Ｊ］．中国药理学通报；１９９９，１５（４）：３８２３１王建刚，周海梅，侯湘波，等．银杏叶醇提取物对异烟肼与利福平肝毒性的保护作用的实验研究［Ｊ］．中国现代应用药学杂志；２０００，１７（３）：１７８３２刘利华，呼文亮等．硒与维生素Ｅ对需谷胱甘肽抗氧化酶的保护作用．广东微量元素科学；１９９９，６（４）：８－９３３ＭｏｒｇａｎＥＴ．ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｓＰ４５０ｄｕｒｉｎｇｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ．ＭｅｔａｂＲｅｖ，１９９７，２９（４）１１２９—１１８８．致谢致谢衷心感谢张广宇教授对我的严格要求，精心指导和关怀，使实验课题得以顺利完成，受益匪浅。衷心感谢医科大学药理学教研室袁志芳老师，刘伟娜老师在百忙中对我的悉心帮助，言传身教。河北省胸科医院病理科徐明堂技师，许志明技师，杨永辉主任，在病理标本制作，光镜观察技巧方面给予了极大的帮助，在此表示衷心感谢。河北医科大学生化教研室佟晓旭老师，罗湘衡老师对我的基础实验的指导，借此表示感谢。衷心感谢河北省胸科医院李志惠主任，宋海亭主任，赵小哲主任，田艳如护士长及一病区全体工作人员在我实验一年中给予我的巨大支持和帮助。衷心感谢河北省胸科医院李登瑞院长，医务科、院办事、药械科、实验室所有工作人员对本课题的完成给予的大力支持与协助。河北医科大学学位办，研究生部的所有老师在我申请学位、课程学习和论文答辩过程中给予的多方指导和帮助，在此一并致谢。感谢我的亲朋好友在我攻读学位的期间给予我的鼓励和帮助，使我能够克服困难，不断进取。个人简历个人简历一、一般情况姓名市查月芳性别女民族汉出生年月１９６５年１１月２８日籍贯江苏省常熟二、个人经历三、发表论文１９８４年就读于河北医科大学临床医学系，学制五年，获医学学士学位，１９８９年毕业后，分配到河北省胸科医院呼吸结核内科工作，２００２年７月完成在河北医科大学研究生课程的学习，同时于２００２年通过同等学历人员申请硕士学位外语全国统一考试，于２００３年通过西医综合水平全国统一考试。参加工作以来，共完成医学论文１０余篇，其中有：《结核病合并重症药疹２７例临床分析》《肺炎肺结核相混淆７例临床分析》《肺炎误诊肺结核４８例临床分析》《单纯胸膜炎标准化疗与短程化疗２７６例临床分析》《老年肺结核７６例临床分析》《重症非典型肺炎激素治疗的疗效观察》抗结核药物致肝脏损伤机制的研究

作者：

学位授予单位：

查月芳

河北医科大学

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