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青海畜牧兽医杂志
2007年第37卷第3期(总第1期)
青海部分牧区牦牛酸奶中乳杆菌的分离与鉴定
胡 勇,刘书杰
(青海省畜牧兽医科学院,西宁,810016)
Ξ
摘 要:利用MRS培养基,对青海部分牧区收集的15份牦牛酸奶,进行了乳杆菌的分离,对分离得到的9株疑似乳杆
菌,对其中的3株进行生物学鉴定。结果:分离株均为兼性厌氧菌,在MRS培养基上,菌落较大、透明、灰白色,镜检为杆状细菌,革兰氏染色阳性,过氧化氢酶试验为阴性,乳糖发酵阳性,牛乳发酵试验阳性,符合乳杆菌的特性。
关键词:牦牛;酸奶;乳杆菌
中图分类号:S852.61+2 文献标识码:B 文章编号:100327950(2007)0320018202IsolationandIdentificationofLactobacillusinYakYoghourtinPartpastureofQinghaiProvincl
HUYongetal(QinghaiAcademyofAnimalandVeterinarySciences,Xining810016)
Abstract:9StrainsofsuspectLactobacillaswereisolatedfrom15samplesofyakyoghourtthatwerecollectedinthepartpastureofQinghaiprovincewithMRSculturemedium,and3strainsofthemwereidentifiedwithbiochemistrytest.TheresultsshowedthatthesuspectLactobacillusisolatedwerefacultativeanaerobes,andthecoloniesoftheminMRSculturemdeiumwerehyaline,biggerandgray-whitecolour,ThesesuspectLactobacilluswererodshapeundermicroscopy.andgram-positive.Thecatalasetestwasnegativereactionandlactosefermentedtestandmilkfermentedtestwerepositivereaction.Theseresultsindicatedthat3strainsofisolafeswereidentifiedasLactobacillus.
Keywords:Yak;Yoghourt;Lactobacillus
青海省现有牦牛380万头,占全国总数的37.8%。牦牛乳的乳汁浓稠、营养价值高,蛋白质和脂肪含量分别达5.24%和7.0%,且含有大量的挥发性脂肪酸,并富有良好的风味。由于地理环境所限,牦牛乳产品的开发仍处于原始落后的现状。牦牛乳主要是牧民自食、打酥油,没有形成商品。广大牧区居住着以藏族和蒙古族为主的纯牧区牧民,他们沿用传统而古老的方法加工乳制品,这种方法生产的乳制品较好地保存了当地自然环境中的有益微生物(特别是乳酸菌)。本研究的目的在于从青海省藏区牦牛酸奶中分离得到具有较好的生物学特性的乳酸菌,以此来开发出具有高原特色的绿色无污染的风味牦牛酸奶、饮料、酸牛奶等奶产品,推向市场,这样既可增加牧民的收入,也为青海省牦牛乳走向市场打开了一条出路。为此,我们于2006年6～10月份进行了青海藏区牦牛酸奶中乳酸菌的分离与初步鉴定。1 材料与方法1.1 样品来源:样品采自青海省玉树州、果洛州和大通种牛场的牧民家的牦牛酸奶样品15份。其中玉树州的3份,果洛州的5份,大通种牛场7份。无菌操作每份样品各收集20mL,在4℃保存带回实验室分菌。1.2 培养基
〔1〕
1.2.1 MRS培养基:葡萄糖20g;蛋白胨10g;牛肉膏10g;酵母提取物5g;柠檬酸二铵2g;磷酸氢二钾2g;MgSO4・7H2O0.58g;MnSO4・4H2O0.25g;吐温80为1mL;蒸馏水1L;琼脂15g。
〔2〕
1.2.2 牛乳培养基:将鲜奶脱脂(含有1%酵母浸膏、1%葡萄糖),分装,121℃灭菌15min,冷却后供活化菌株,测试发酵性能使用。1.3 仪器:恒温培养箱 酸度计 显微镜1.4 方法
〔3〕
1.4.1 乳杆菌的分离:把牦牛酸奶样品直接划线接种到MRS平板培养基上,37℃下48h厌氧培养后,挑取可疑菌落,染色镜检。
1.4.2 乳杆菌的分离纯化:把可疑乳杆菌直接划在MRS培养基上,37℃下48h厌氧培养后,挑取单个菌落,接种到脱脂乳中进行厌氧或需氧培养,然后做触酶试验和革兰氏染色,镜检,用MRS固体斜面培养基接种纯培养,并保存在4℃下备用或冻干保存。
1.4.3 厌氧培养方法:本试验采用在干燥器中按100mL体积加1g焦性没食子酸的比例,加入适量的2molΠLNaOH溶液,使其接触发生吸氧反应。同时放入事先准备好的厌氧指示剂,若指示剂无色,则表示为
〔3,4〕
厌氧状态的方法进行厌氧培养。将酸乳稀释到所需的
稀释度,用接种环将酸奶接入MRS培养基平皿中,接好的培养皿倒置培养,置于干燥器中,37℃培养48～72h。1.4.4 被检菌的活化:把被检菌按下列程序接种:脱脂乳培养基→MRS液体培养两代→备用。1.4.5 生长温度试验:将活化的被检菌种接种在MRS液体培养基中,在15℃、45℃两种温度下培养,48～72h,判定其结果,试管内浑浊为细菌生长,判定为阳性(+),试管内透明者判定为阴性(-)。1.4.6 牛乳发酵试验:将菌株的培养物以10%的接种量接种于灭菌脱脂乳中培养24h测pH。1.4.7 糖发酵试验:将活化的被检的杆菌接在糖发酵管内,37℃培养48～72h,根据管内颜色变化来判定结果。1.4.8 生理生化反应:吲哚反应、产硫化氢试验、盐还原试验、明胶水解试验、联苯胺反应试验。2 结果2.1 牦牛酸奶样品中乳杆菌的分离结果:本次试验中从15份牦牛酸奶样品中分离出了9株疑似乳杆菌,对其中的3株(QMB1,QMB2和QMB3)进行了以下生化试验。2.2 形态及菌落特征:三株菌革兰氏染色均为阳性,触酶试验为阴性,在MRS培养基生长的菌落形态为灰
Ξ收稿日期:2007-03-16 基金项目:西部专项(2003BA90IA25)青藏高原牦牛产业化生产关键技术的研究。
193Π2007青海畜牧兽医杂志
ChineseQinghaiJournalofAnimalandVeterinarySciences
37卷3期Vo1.37,No.3
白色,表面粗糙:QMB3菌株的菌落中间有白色的小突起;菌体细长杆状,两端椭圆,单个或成链状出现。2.3 生长温度试验:3株菌株在15℃和45℃的条件下生长良好。2.4 牛乳发酵试验:牛乳发酵试验结果见表1。
表1牛乳发酵试验结果
菌种QMB1QMB2凝固+-pH3.684.12 注:+为凝固;-为不凝固;
QMB3+3.75
2.6 糖发酵试验:三株菌对不同糖的利用结果见表
2。3 讨论3.1 进行鉴定的3株菌均为革兰氏阳性菌,触酶试验阴性,呈长链或短链状的杆状菌。从培养特性来看,3个菌株全部为兼性厌氧菌,并且牛乳发酵试验都使牛乳的pH下降,根据以上结果初步鉴定3个菌株均为乳
2.5 生理生化反应:3株菌的吲哚反应、产硫化氢试
验、盐还原试验和明胶水解试验均为阴性。
表2
糖发酵葡萄糖乳糖麦芽糖苷露醇蔗糖半乳糖纤维二糖蜜二糖松三糖七叶苷木糖山梨醇阿拉伯糖甘露糖棉子糖鼠李糖蕈糖果糖
三株乳杆菌的碳水化合物反应
QMB1QMB2
-----+---+--------+-+--+++---------+
QMB3-----+---+---+---+
杆菌。
3.2 通过温度试验可看出,这3个菌株在15℃和
〔5〕
45℃两种温度都生长、糖发酵试验中的结果与中乳杆菌鉴定特性有所差异,这可能与青海牧区特殊的生态环境和气温温差大,牧民的传统制品制造工艺有一定的关系,也可能属于一个新种,需对其进行全面系统的研究,筛选出优良菌种,研制具有民族风味的新型乳制品。参考文献〔1〕郝士海.现代细菌学培养基和生化试验手册〔M〕.北京:中国科学出版社,1992.
〔2〕谢正 ,吴挹芳.现代微生物培养和试剂手册〔M〕.福建科学技术出版社,1994.
〔3〕王琦,周雨霞,李少英,等.内蒙古地区乳制品中乳酸菌的分离、鉴定〔J〕.内蒙古农业大学学报,1997,(2)∶1—6.
〔4〕敖敦格日勒,王琦,李少英,等.内蒙古锡林郭勒盟两个旗乳与乳制品中乳杆菌的分离与鉴定〔J〕.内蒙古农业大学学报,1998,(2)∶1—10.
〔5〕布坎南RE,吉本斯NE.伯杰氏细菌鉴定手册〔M〕.北京:科学出版社,1984.
致谢:在乳杆菌的分离和鉴定过程中得到青海省畜牧兽医科学院兽医所李小卉和马利青两位副研究员的大力支持;同时,青海省畜牧兽医科学院畜牧所的柴沙陀、吴克选和叶成君副研究员提供部分牦牛酸奶样品,在此致谢。
・牧医简报・
藏獒的应激综合症的防治
Ξ
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李 敏,宋永鸿(执笔)
(1.青海省贵南县沙沟乡兽医站,813100;2.青海省畜牧兽医总站,西宁,810003)
中图分类号:S829.2 文献标识码:C 文章编号:100327950(2007)0320019201 近年来,人们对藏獒的重视越来越高,促使藏獒的养殖和贩运也越来越热。其交易市场也不断增加扩大,用汽车、火车、或飞机长途贩运,反复上市出售,几易其主。期间,环境、气候、海拔等不断更换,饲养模式和方法也不断改变,再加上在运输途中又经历饥饿、寒冷、饱食、闷热恐惧等不良刺激,促使藏獒在途中引发了应激综合症。1 临床症状
病犬近期有长途贩运和市场交易的病史,临床表现为精神不振,眼睛无神,鼻部干燥,饮食欲不振或废饱,有的流涎,有呕吐,结膜潮红,眼角有分泌物,或伴有腹胀症状。粪便干燥或腹泻,心跳加快,呼吸增数,初期体温无明显变化,如无及时治疗或治疗护理不当,往往造成死亡。2 病因分析
犬只在长途贩运中受到各种因素的刺激,致使机体呈现以交感神经兴奋,肾上腺素分泌增高为主的一系列神经内分泌机能失调,并由此引起多种功能和代谢的改变。尤其是在运输过程中受到持续颠簸振动,从而表现出心跳、呼吸加快,血压升高,或因组织胺的蓄积引起胃肠和呼吸道黏膜充血、水肿,加之气候、环境的改变,水土不服,途中饥饱不均,或突然喂大量高脂肪、高蛋白食物,则更加重胃肠负担,使病情进一步恶化。3 治疗
3.1 有胃肠道症状的应清理胃肠,可用温的0.1%高锰酸钾进
行深部灌肠,反复进行几次,排净肠道的恶臭粪便,在灌肠时,先插管后缓慢注入,防止损伤肠壁。3.2 控制和预防病原菌继发感染,可选用氨苄西林,头孢菌素等抗菌药物。3.3 补充水分,电解质和防止酸中毒。可口服补液盐,静注复方盐水、葡萄糖盐水、碳酸氢钠、乳酸钠林格氏液等。为加强抗病力可加入葡萄糖酸钙、维生素B6、维生素C。3.4 对症治疗,腹泻伴有呕吐症状者,则给予犬吐停等止吐药,有腹泻症状的选用犬毒瘟灵等抗病毒止泻药。4 护理及预防4.1 在运输途中,为防止晕车发生,可提前口服镇静剂苯巴比(妥片剂,按1～2mgΠkg体重),下车后,将藏獒带到清静环境处休息,饮糖盐水或口服补液盐。4.2 在长途贩运中多给饮水,喂给易消化的食物,到达目的地后喂给少量稀粥样食物,待犬精神恢复,排粪正常时再转入正常饲喂。4.3 为了防止引起传染病,可在贩运前先注完预防针,未注完或未注预防针的应肌注五联高免血清。经过2～3周后再注射疫苗。
Ξ收稿日期:2006204219
