放射免疫学杂志２０１２年第２５卷第３期Ｊ ｏｆＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｌｏ￣ｗ２０１２．２５（３ ［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９８１０．２０１２．０３．０２２ ・论著・ 粪肠球菌毒力基因及耐药性分析 祝进ｈ 白永凤。 陆军 陈晓 陈瑜 摘要目的：了解临床标本与健康人群肠道来源粪肠球菌（Ｅｎｔｅｒｃｏｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ，Ｅｒａ）的毒力基因分布，探 讨毒力基因与细菌致病性及抗生素耐药性之间关系。方法：收集８９株分离临床标本和２４株健康人群的粪肠 球菌，采用ＰＣＲ方法检测ａｇｇＡ、ｅｙｌＡ、ｅｙｌＢ、ｃｙｌＭ、ｅｅｐ、ｅｆａＡ、ｅｒｄａ、ｅｓｐ和ｇｅｌＥ基因，Ｋ—Ｂ法测定临床分离株对万古 霉素、四环素、环丙沙星、高浓度链霉素、青霉素、拉宁、呋喃妥因的敏感性。结果：８６．７％的粪肠球菌携带 有毒力基因，以ｅｅｐ（７６．１％）、ｅｆａＡ（７４．３％）、ｅｓｐ（５２．２％）和ａｇｇＡ（５２．２％）基因为多，其他毒力基因的阳性率 为３１．９％一４７．８％。除了毒力基因ｅｎｌＡ以外，临床分离菌株其他毒力基因的阳性率明显高于健康人分离菌 株。所有菌株中携带８种毒力基因的菌株最为多见，占总菌株的２３．９％。粪肠球菌对四环素、环丙沙星和青 霉素耐药率较高，对呋喃妥因耐药率低，未检出对万古霉素和拉宁耐药株。除了高浓度庆大霉素，携带毒 力基因数的多少与抗菌药物的耐药性之间不存在关联。结论：粪肠球菌毒力因子的携带与致病性密切相关，与 耐药性之间的关系需进一步研究。 关键词粪肠球菌毒力基因耐药性 Ｔｈｅ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ ｉｎ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｆａｅｃａｌｉｓ Ｓｔｒａｉｎｓ Ｚｈｕ Ｊｉｎ’，Ｂａｉ Ｙ０ｎｇ—ｆｅｎｇ，Ｌｕ Ｊｕｎ，ｅｔ ａ１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆＱｕｚｏｈｏｕ，Ｑｕｚｈｏｕ ３２４０００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｍｅｔ ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｋｎｏｗｎ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ａ ｇｒｏｕｐ ｏｆ Ｅ．ｆａｅｃａｉｌｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ，ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｔｏ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅ— ｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ｌ１３ Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ，ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｌｉｉｎｃａｌ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ（８９ ｓｔｒａｉｎｓ）ａｎｄ ｈｅａｌｈｔｙ ｉｎｄｉｉｄｕａｖｌｓ（２４ ｓｔｒａｉｎｓ），ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅｄ ｆｏｒ ｈｅ ｔｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆｎｉｎｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｓｇＡ，ｃｙｌＡ，ｃｙｌＢ，ｃｙｌＭ，ｅｅｐ，ｅｆａＡ，ｅｎｌＡ，ｅｓｐ ｎｄ ａｇｅｌＥ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ．Ａｎｔｉｍｉｅｒｅｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｔｍｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｋ．Ｂ ｍｅｔｈｏｄ ａｍｏｎｇ ｃｌｉｉｃａｎｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｄａｔａ ｓｈｏｗｅｄ ８６． ７％ｏｆ ｈｅｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｃａｒｒｉｅｄ ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｍａｒｋｅｒ．Ｍｏｓｔ ｏｆ ｈｅｔ ｓｔｒａｉｓ ｃａｒｎｒｉｅｄ ｅｅｐ（７６．１％），ｅｆａＡ（７４．３％），ｅｓｐ（５２．２％）ａｎｄ ａｇ吕Ａ（５２．２％）ｇｅｎｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｅｅａｓｒ ｔｈｅ ｒｅｍａｉｉｎｇ ｎｉｖｒｕｌｅｎｃｅ ｍａｒｋｅｒ８ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｒｎｇｉａｎｇ ｆｒｏｍ ３１．９ ｔ０ ４７．８％．Ｅｘｃｅｐｔｉｎｇ ｅｎｌＡ．ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅｓ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｉｒｕｌｖｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｍｏｒｅ ｃｏｍｍｏｎ ｈａｔｎ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｍｏｓｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ（２３．９％）ｃａｒｒｉｅｄ ８ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｃｌｉｉｃａｌｎ ｉｓｏ． １ａｔｅｓ ｔｏ ＣＩＰ，Ｐ， ＩＥＴ ｗｅｒｅ ｈｉｓｈ，ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｆ／Ｍ ｗａｓ ｌｏｗ，ｗｈｉｌｅ ｎｏｎｅ ｏｆ ｓｔｒｉｎｓａ ａｐｐｅａｒｅｄ ｔｏ ｂｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ＶＡＮ ａｎｄ Ｉ＇ＥＣ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｅｘ— ｃｅｐｔｉｎｇ ＧＥＨ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｎｌａｒｋｅｒ８ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｍｏｎｇ Ｅ．ｆａｖｃｅａｌｉｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｌｌ ｔｌｌｅ ｉｎｅｒｅａｓｅｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃａｕｓｉｎｇ ｅｌｉｉｃａｎｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｅｔｂｗｅｅｎ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｄｅｔａｉｌ． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ ｅｎｔｅｒｅｅｅｃｃｕｓ ｆａｅｅａｌｉｓ，ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅ，ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ 肠球菌属（Ｅｎｔｅｅｃｏｒｃｅｕｓ）细菌为兼性厌氧革兰阳性球 菌，是人类和动物胃肠道正常菌群之一，也广泛分布于土壤、 水、食物中，近年来肠球菌引起的感染呈上升趋势…。２０１０ 年中国ＣＨＩＮＥＴ细菌耐药性监测肠球菌属细菌的分离率居 阳性球菌第二位，其中粪肠球菌占优势４５．２％ 。 肠球菌感染的致病机制复杂，其中毒力因子的存在与表 达是主要原因之一。目前认为，粪肠球菌的毒力因子细胞溶 素（ｃｙｔｏｌｙｓｉｎ，Ｃｙ１）、聚集物质（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ＡＳ）、肠 球菌表面蛋白（ｅｎｔｅｒｏｃｏｅｅａｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｅｓｐ）、心内膜炎 抗原Ａ（ｅｎｄｏｃａｒｄｉｔｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ Ａ，ｅｆａＡ）、明胶酶（ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ， 细菌的致病中起着重要作用 ］［３－８］。目前，此类研究主要集 中在国外，国内相应数据较少。本文以分离自健康人群的粪 肠球菌为对照，分析临床标本中分离的菌株毒力基因分布和 药物敏感性，旨在探讨毒力基因和致病性、耐药性之间的 关系。 １材料和方法 １．１试验菌株 １．１．１临床分离株：８９株粪肠球菌，分离自２０１０年１月～ ｇｅｌＥ）、溶菌素（ｅｎｔｅｒｅｌｙｓｉｎ Ａ，ｅｎｌＡ）、信息素增强表达物质 （ｅｎｈａｎｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ，Ｅｅｐ）等，这些毒力基因在 ２０１０年ｌ２月浙江大学医学院附属第一医院患者的血液、尿 液、胆汁、引流液等临床标本。其中来自血液标本１６株，尿 液２２株，胆汁１６株，引流液１８株，导管４株及其他标本 １３株。 １．１．２健康人分离株：２４株粪肠球菌分离自该院正常体检 人群的肛拭子。 菌株采用３０％甘油肉汤冻存管一７０￣Ｃ保存。试验时，菌 株接种血琼脂平板３７℃培养１８ｈ。 衢州市人民医院（３２４ＯＯＯ） 浙江大学医学院附属第一医院（３１０００３） 通讯作者 志２０１２年第２５卷第３期Ｊ ｏｆＲａｄｉｏｉｍｒｎ ２７７－－—— １．２细菌ＤＮＡ的提取刮取血平板上过夜新鲜培养物（１ ２）环至ｌｍｌ的０．８５％灭菌生理盐水的ＥＰ管内，混匀。在 ～２．ｏｖａ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶（１０Ｕ／ ）０．１５ 、正、反向引物（１０ （ｉｘｍｏｌ／Ｌ）各１ 、模板ＤＮＡ２ 。反应程序如下：９５￣Ｃ预变性 ５ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，退火（温度见表１）ｌｍｉｎ，７２￣Ｃ １ ｍｉｎ，进行３０ ４℃～８￣Ｃ，１２０００ｒ／ｒａｉｎ离心１５ｍｉｎ，弃去上清。沉淀加入到 １００ 灭菌去离子水中，混匀。１００℃煮沸１２ｒａｉｎ，１２０００ｒ／ｒａｉｎ 离心５ｍｉｎ，上清即为ＰＣＲ扩增模板，可直接用于ＰＣＲ 反应 。 １．３毒力基因的ＰＣＲ扩增ＰＣＲ反应在ＤＮＡ Ｅｎｇｉｎｅ ＰＣＲ 扩增仪（美国，Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司）进行，反应体系的总体积为２５ ，个循环；最后于７２℃延伸１０ ｍｉｎ。ＰＣＲ产物在１％琼脂糖凝 胶电泳，由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序后 并证实。各种毒力基因均按参考文献设计，引物由上海生工 生物工程技术服务有限公司合成，引物序列、扩增片段长度 及退火温度，见表１。 其中１０×ｂｕｆｆｅｒ（含Ｍｇ２ ）２．５ 、ｄＮＴＰ（２．５ｒｅｏｔｏｌ／Ｌ） 表１ ９种毒力基因ＰＣＲ扩增§ｌ物序列及反应条件 １．４药敏试验用Ｋ－Ｂ法对分离自临床标本的８９株粪肠 球菌进行药物敏感性试验，操作和结果判读根据ＣＬＳＩ２００９ 年版 Ｊ。所测试抗生素包括：万古霉素（ＶＡＮ）、四环素 （ＴＥＴ）、环丙沙星（ｃｉ１．）、高浓度庆大霉素（ＧＥＨ）、青霉素 （Ｐ）、拉宁（ＴＥＣ）、呋喃妥因（Ｆ／Ｍ）。药敏纸片及Ｍ—Ｈ 株检出毒力基因，阳性率为８６．７％；各基因的阳性率由高到 低依次是ｅｅｐ（７６．１％）、ｅｆａＡ（７４．３％）、ｅｓｐ（５２．２％）、ａｇｇＡ （５２．２％）、Ｓ．１Ｅ（４７．８％）、ｏｙｌＭ（＊６．Ｏ％）、ｏｙｍ（４３．４％）、．ｙｌＡ （３８．９％）、ｅＩ （３１．９％）。８９株临床分离株粪肠球菌的阳 性率分别是８７．６％、８４．３％、６０．０％、６０．７％、５０．１％、５０． １％．４８．３％、４７．２％、３６．Ｏ％，２４株健康人分离株的阳性率分 另ｑ是３３．３％、３７．５％、２５．０％、２０．８％、２０．８％、１２．５％、２５． Ｏ％、８．３％、１６．７％。除了ｅｎｌＡ基因外，粪肠球菌的其他毒力 培养基购于英国Ｏｘｏｉｄ公司；质控菌株为金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ２５９２２、粪肠球菌ＡＴＣＣ２９２１２。 １．５统计学处理 试验数据处理使用ＳＰＳＳ１５．０软件，统 计处理采用ｘ 检验，Ｐ≤０．０５具有统计学差异。 基因的阳性率均是临床分离株高于健康人分离株，差异具有 统计学意义，结果见表２。 ２结果 ２．１ ９种毒力基因的ＰＣＲ扩增结果表２ １１３株粪肠球菌中９８ 不同来源粪肠球菌分离株的毒力基因分布 放射免疫学杂志２０１２年第２５卷第３期Ｊ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０１２，２５（３ ２．２粪肠球菌携带的毒力基因数８６．７％的粪肠球菌携带 至少一种毒力基因，７９．７％的菌株携带２种以上毒力基因， 其中携带８种毒力基因的菌株最为多见，占总菌株的２３． ９％。粪肠球菌中临床分离株与健康人分离株的分布也存在 差异，临床分离株携带至少一种毒力基因的菌株数明显高于 株（６０．７％）；健康人分离株中基因数≤４的有２１株 （８７．５％），毒力基因数≥５的有３株（１２．５％），临床分离株 中毒力基因数目≥５的阳性率明显高于健康人分离株，差异 具有统计学意义（）（２＝１７．５４９，Ｐ＝０．０００）。２４株健康人分 离株最常见的是不携带任何毒力基因的菌株有１１株占４５． ８％，而８９株临床分离株中最常见的是携带８种毒力基因的 菌株有２６株占２９．２％，见表３。 健康人分离株（Ｘｚ＝２８．Ｏ６０，Ｐ＝０．０００）。临床分离株中毒 力基因数≤４的有３５株（３９．３％），毒力基因数≥５的有５４ 表３ 不同来源粪肠球菌分离株携带毒力基因数目 ２．３抗菌药物敏感性与毒力基因关系 临床标本中分离的 粪肠球菌对青霉素、环丙沙星、四环素耐药率分别为２２．６％、 ４３．９％和５７．３％；对呋喃妥因的耐药率较低，为３．６％；检出 １株对万古霉素中介的菌株，但未发现对拉宁耐药的菌 株。对万古霉素中介的菌株，经Ｅ－ｔｅ￣ｔ证实，ＭＩＣ＝４。药敏 结果见表４。 表４粪肠球菌临床分离株对７种抗菌药物的药敏率 ｃｙｌ操纵子是由ＣＣＡ、Ｂ、Ｌ、Ｍ、Ｉ等组分丛集而成，其中ＣｙｌＡ 参与细胞溶素的活化，ｃｙｍ、ＣｙｌＭ分别与细胞溶素的转运及 翻译后修饰相关。聚集物质可以介导肠球菌之间以及肠球 菌与宿主细胞之间的黏附，促进致病质粒的转移和感染的发 生。表面蛋白具有生物膜形成能力，可使细菌的感染更加持 久，呈慢性趋势。心内膜炎抗原可结合心脏组织基质，引起 心内膜感染。明胶酶是一种ｚｎ金属蛋白酶，可水解宿主细 胞壁和细胞间质中的胶原蛋白等，与肠球菌向感染灶周围扩 散有关。溶菌素是一种热稳定蛋白，能够降解敏感细菌的细 胞壁。信息素是潜在受体菌染色体编码的一种脂蛋白，促进 菌株之间质粒的接合转移，并可作为人白细胞的趋化剂，引 起粒酶的释放和呼吸爆发 Ｊ【 。 研究数据表明，ｔｅＡ、ｃｙｌＢ、ｃｙＩＭ基因在粪肠球菌的分布 处于４０％左右，Ｓｕｚａｒｔ等分离自临床的９５株粪肠球菌中ｃｙ一 １Ａ、ｃｙｍ、ｃＣＭ三种基因的阳性率分别为１６．８％、１４．７、１４． ７％＿４ ；Ｈｗａｎｇ等从家禽的粪便中分离的粪肠球菌三种基因 的阳性率分别为２４．４％、１７．１％、２６．８％＿１ ；而Ｃｒｅｔｉ等从心 携带毒力基因数≤４的粪肠球菌与携带毒力基因数目 ≥５的粪肠球菌除高浓度庆大霉素存在差异外，对环丙沙 星、四环素和青霉素的耐药率没有明显差异，见表５。 表５ 携带不同毒力基因数目的 内膜炎赘生物分离的粪肠球菌中未检测到ｃｙｌＡ基因 。结 果显示，５０％以上的菌株携带毒力基因ａｇｇＡ、ｅｓｐ、ｅｅｐ、ｅｆａＡ； 这与Ｓｕｚａｒｔ等的报道基本一致，在他们研究的９５株粪肠球 菌中，除了ａ 阳性率为３６．８％以外，ｅｆａＡ、ｅｓｐ、ｅｅｐ的阳性 率分别为５８．９％、５７．９％、５８．９％，均＞５０％ ；Ｅａｔｏｎ等发 现食物来源的粪肠球菌携带ａｇｇＡ６７％、ｅｓｐ３３％、 ｅｆａＡ８９％＿６ ；与我们不同的是Ｃｒｅｔｉ等检测６８株临床分离粪 肠球菌中ｅｆａＡ的阳性率为１００％，ｅｓｐ的阳性率为４４．６％，但 粪肠球菌抗菌药物耐药率 未在心内膜炎赘生物分离的粪肠球菌中检测到ｅｓｐ基因，尿 路感染者和菌血症患者的阳性率却较高 ；在国内马立艳等 人报道的粪肠球菌ａｇ吕Ａ、ｅｓｐ、ｅｆａＡ的阳性率分别是１９．０％、 ３７．９％和６０．３％［１１］。 另外，本文中ｇｅｌＥ、ｅｎｌＡ阳性的粪肠球菌分别占４７．８％、 ３１．９％，高于文献报道的４５．３％、９．５％ｌ４ Ｊ。由此可见，同地 ３讨论 粪肠球菌细胞溶素是一种比较特殊的细菌毒素，具有溶 血活性和杀菌活性，对真核和原核细胞都有杀伤作用，可以 裂解红细胞、多形核细胞、吞噬细胞等。粪肠球菌细胞溶素 基因以操纵子的形式存在，通过转座子插入等方法研究发现 区、不同来源粪肠球菌的毒力因子的检出率上有较大的差 异，本文与之相符。 经研究表明，粪肠球菌离开正常寄居部位进入其他组织 器官，首先在宿主组织局部聚集达到阈值密度，然后在黏附 素的作用下黏附于宿主细胞的胞外矩阵蛋白，分泌细胞溶解 素、明胶酶等毒性物质侵袭破坏宿主组织细胞，引起感染性 疾病的发生发展 ｊ。在本文检测的粪肠球菌中，８６．７％携带 放射免疫学杂志２０１２年第２５卷第３期Ｊ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０１２，２５（３ ．．——２７９．－—— 至少一种以上的毒力基因。除了毒力基因ｅｎｌＡ外，粪肠球 菌的其他毒力基因的阳性率均是临床分离株高于健康人分 离株，说明这些毒力基因与粪肠球菌的感染密切相关。从携 带的毒力数目上看，２４株健康人分离株最常见的是不携带 任何毒力基因的菌株占４５．８％，而８９株临床分离株中最常 见的是携带８种毒力基因的菌株占２９．２％；临床分离株中毒 力数目＞１５的阳性率明显高于健康人分离株，由此可见，粪 肠球菌由正常定植菌到致病菌的转变过程中，毒力因子的表 达同时增强，至于这些毒力因子的表达受什么信号因子的调 控仍需进一步研究。 由于肠球菌对一些抗菌药物固有耐药，并且很容易通过 各种机制获得对某些抗菌药物的耐药基因，逐渐形成了多重 高水平耐药菌株，对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、大 环内酯类、喹诺酮类、糖肽类抗菌药物有一种或数种耐药，给 临床抗感染治疗带来许多困难 Ｊ。本文的数据表明，粪肠球 菌对Ｆ／Ｍ、ＶＡＮ和ＴＥＣ的耐药率维持在较低水平，对临床常 用的抗菌药物ＣＩＰ、Ｐ、ＴＥ、ＧＥＨ均有不同程度的耐药，与全国 水平相近…。对来源于临床分离株的粪肠球菌所携带的毒 力基因数以及耐药率之间的比较发现，虽然菌株携带的毒力 数目存在很大差异，但耐药率之间的差异除了高浓度链霉素 外不存在统计学意义，但高浓度链霉素耐药基因是否与粪肠 球菌某种毒力基因的表达具有共同的调节机制目前还没有 这方面的报道。 测［Ｊ］．中国感染与化疗杂志，２０１１，１１（５）：３２１－３２９． ［２］ＢｅａｄｌｅｙＤ，Ｊｅｔｔ Ｔ，Ｍａｒｋ Ｍ Ｈｕｙｃｋｅ，ｅｔ ａ１．Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆＥｎｔｅｒｏ— ｃｏｃｃｉ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１９９４，７（４）：４６２－４７８． ｆ３］ Ｃｒｅｔｉ Ｒ，Ｉｍｐｅｒｉ Ｍ，Ｂｅｒｔｕｅｅｉｉ ｎＬ。ｅｔ ａ１．Ｓｕｒｖｅｙ ｆｏｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒ－ ｍｉｎａｎｔｓ ａｍｏｎｇＥｎｔｅｒｏｃｃｅｕｓｆｏａｅｃｌａｉｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｏｕｒｃｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｍｅｄ Ｍｉｃｍｈｉｏｌ，２００４，５３（１）：１３－２０． ［４］Ｂｉａｅｎｃｏｕ￣ｄｅ Ｍａｒｑｕｅｓ Ｅ，Ｓｕｚａｒｔ Ｓ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ—Ｓ．ＳＳＯ— ｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｌｏｎｄｒｉｎａ， Ｂｒａｚｉｌ［Ｊ］．Ｊ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，５３（１１）：１０６９・１０７３． ［５］Ｎｉｌｓｅｎ Ｔ，Ｎｅｓ ＩＦ，Ｈｏｌｏ Ｈ．Ｅｎｔｅｒｏｌｙｓｉｎ Ａ，ａ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ・ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ ｆｒｏｍ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＬＭＧ ２３３３［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉ— ｃｒｏｂｉｏｌ。２００３，６９（５）：２９７５－２９８４． ［６］Ｅａｔｏｎ ＴＪ，Ｇａｓｓｏｎ ＭＪ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｍ— ｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｌａ ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，６７（４）：１６２８－１６３５． ［７］马立艳，许淑珍，马纪平．肠球菌致病机制的研究进展［Ｊ］．中 华医院感染学杂志，２００５，１５（３）：３５６－３６０． ［８］Ｓｈａｎｋａｒ Ｖ，Ｂａｇｈｄａｙａｎ ＡＳ，Ｈｕｙｃｋｅ ＭＭ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ—ｄｅｒｉｖｅｄ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ ａ∞ｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎ ｅｓｐ．ａ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａｎｏｖｅｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ，１９９９，６７（１）：１９３－２００． 【９ｌ Ｃｌｉｉｃａｎｌａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＳｔａｎｄａｒｄｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｒ ｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｌ Ｓｕｓｃｅｐｔａｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ：Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ Ｓｕｐｐｌｅ・ ｍｅｎｔ［Ｓ］．Ｍ１００．Ｓ１９，２００９． ［１０］Ｈｗａｎｇ ＩＹ，Ｌｉｍ ＳＫ，Ｋｕ ＨＯ，ｅｔ ａ１．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒ－ ｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ｆｅｃａｌ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｅａｌｉｓ ｉｓｏｌａｔｄ ｆｅｒｏｍ ｐｉｇｓ ａｎｄ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｉｎ 虽然以上研究表明，粪肠球菌的多种毒力因子与致病性 密切相关，但其确切的致病作用及机制尚未清楚，还需要进 步研究和确定。同时加强粪肠球菌毒力基因及耐药监测， 一Ｋｏｒｅａ［Ｊ］．Ｊ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，２１（１２）：１３５２—１３５５． ［１１］马立艳，许淑珍，马纪平．肠球菌部分致病基因和表型的检测 ［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００５，２８（５）：５２９－５３２． （２０１２－０３－２０收稿） 将有助于防止其传播和扩散。 参考文献 ［１］朱德妹，汪复，胡付品，等．２０１０年中国ＣＨＩＮＥＴ细菌耐药性检 ［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９８１０．２０１２．０３．０２３ ・论著・ 酶联法抗・ＨＣＶ和ＨＣＶ・ｃＡｇ联检对丙型肝炎实验室诊断的应用价值 王燕 窦恒利 徐军 摘要 目的：探讨联合丙型肝炎病毒核心抗原（ＨＣＶ－ｃＡｇ）及抗－ＨＣＶ抗体酶联免疫检测对丙型肝炎实验 室诊断的应用价值。方法：２８９份血清标本按抗一ＨＣＶ阳性、弱阳性、阴性及ＨＣＶ—ｃＡｇ阳性、弱阳性及阴性分组， 用ＰＣＲ扩增法检测其ＨＣＶ ＲＮＡ含量。结果：单项抗－ＨＣＶ阳性及弱阳性标本其ＨＣＶ ＲＮＡ检测阳性符合率分 别为８７．７％和７０％。联合抗一ＨＣＶ和ＨＣＶ—ｃＡｇ酶联免疫检测结果为阳性或弱阳性者其ＨＣＶ ＲＮＡ阳性符合率 均＞９０％。结论：酶联免疫方法联合检测抗一ＨＣＶ及ＨＣＶ—ｃＡｇ，有利于ＨＣＶ感染的早期诊断，提高其检出率，缩 短窗口期，具有较高的临床应用价值。 关键词肝炎丙型酶联免疫分析ＨＣＶ核心抗原ＨＣＶ抗体 Ａｐｐｌｉｅｄ Ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｎ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｂｙ Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ＥＬＩＳＡ—Ａｎｔｉ－ＨＣＶ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｉｔｈ ＥＬＩＳＡ—ＨＣＶ Ｃｏｒｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＷａｎｇＹａｈ，Ｄｏｕ Ｈｅｎｇ－￣，Ｘｕ Ｊｕｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆＪｉｏｎａｎ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ａｒｅａ，Ｊｉｎａｎ（２５００３１），Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ８ｅｒｕｌｎ ａｎｔｉ－ＨＣＶ ａｎｄ ＨＣＶ ｃｏｒｅ ｎｔａｉｇｅｎ 济南军区总医院实验诊断科（２５００ｌ１） 济南市立四院（２５０ｏ３１）
