99mTc-放射性药物的正辛醇-水分配系数的测定

实验九 99mTc-放射性药物的正辛醇-水分配系数的测定

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一、实验目的

1．掌握药盒法制备99mTc-MIBI。

2．掌握99mTc-放射性药物的正辛醇-水分配系数的测定方法。 二、实验原理

脂-水分配系数是分子亲脂特性的量度，在药剂学研究中主要用于预见药物对在体组织的渗透或吸收难易程度。根据相似相容原理，脂水分配系数是指化合物在脂(油)相和水相的分配比例，化合物的水溶性与脂溶性间达到平衡时，其平衡常数称为脂水分配系数。药物脂水分配系数大小影响药物的吸收、分布、转运、代谢和排泄。脂水分配系数决定了药物能否进入人体的特定器官，对于脂溶性的器官，要求药物的脂水分配系数大，这样药物容易进入，进而产生药效；对于非脂溶性器官，要求药物的脂溶性低，进而产生药效。因此，药物要有适当的脂溶性。

鉴于正辛醇的结构和理化性质特点更接近生物相，目前认为正辛醇－水是一种良好的模拟系统，从而被广泛采用。正辛醇-水分配系数是平衡状态下的比值。即：

Pco cw99m

Tc-

放射性药物在正辛醇相的浓度Co和水相中的中性（未解离的）形态的浓度Cw

其中P为分配系数；co为平衡时99mTc-放射性药物在正辛醇相中的浓度；cw为平衡时99mTc-放射性药物在水相中的浓度。log P为P的常用对数。log P值越大，表明物质对有机相的亲和性（亲脂性）越高，亲水性越低。

测定分配系数最经典的方法是振荡法，将无载体放射性示踪剂加到一定量的正辛醇和水中，充分混合并静置直至达到平衡，然后利用计数器测定两相中的放射性活度，算出分配系数。

PAo Aw其中，Ao为放射性药物在正辛醇相的放射性活度，Aw为放射性药物在水相的放射性活度。

本实验用正辛醇—PBS缓冲溶液（pH值为7.4）测定

99m

Tc-MIBI配合物的

正辛醇-水分配系数。为了降低实验操作不当给实验结果带来的误差，目前常用的方法是先用移液抢从正辛醇和PBS缓冲溶液中取出相应的体积，然后加入到

放射性药物化学基础实验

已知质量的试管中，利用分析天平分别称量上述体积的质量，根据密度计算出相应准确体积，再根据体积和对应放射性活度计算99mTc-MIBI配合物的正辛醇-水分配系数。 三、仪器与试剂

仪器：NaI（Tl）γ-井型闪烁探测器，毛细管，聚酰胺薄片，烧杯，试管，离心

试管，离心机，振荡器，加热装置等。

试剂：高锝酸钠淋洗液(99TcmO4-)，乙腈，MIBI药盒，正辛醇—PBS缓冲溶液。 四、实验步骤

1. 制备99mTc-MIBI配合物

将高锝酸钠淋洗液注入MIBI药盒中，沸水浴下加热15 min，平行点样三次，在乙腈-聚酰胺薄膜体系中展开，用γ-井型闪烁探测器测量，计算标记率。 2. 99mTc-MIBI配合物的脂水分配系数的测定 体积法：

(1) 取3.0 ml正辛醇，2.9 ml PBS（pH=7.4）注入1号离心试管中，再向其中加入0.1 ml 99mTc-MIBI溶液，涡旋振荡5 min，离心5 min，使两相明显分层后分离正辛醇相和PBS相。

(2) 用移液取出PBS相、正辛醇相各0.2 ml，平行三次，测定其放射性计数，计算P1值。

(3) 取出1号离心管中的油相2 ml加入2号离心管中，再加入1 ml正辛醇、3 ml PBS溶液，涡旋振荡5 min，离心5 min，使两相明显分层。重复(2)实验步骤，并计算P2值。

(4) 重复(2)和(3)实验步骤，直到前后两次计算的Px值非常接近，取最后一次计算的P值作为次测量结果。

(5) 重复(1)-(4)实验步骤2次。 五 、实验数据处理

1. 99mTc-MIBI配合物的标记率。

表一 99mTc-MIBI在乙腈-聚酰胺薄膜体系的计数率

Rf 平行1 平行2 平行3

0-0.1 0.1-0.2 0.2-0.3 0.3-0.4 0.4-0.5 0.5-0.6 0.6-0.7 0.7-0.8 0.8-0.9 0.9-1.0 107 114 262

7 19 10

6 18 8

3 16 7

12 34 25

24 32 28

41 24 27

62 33 42

161 105 103

2152 31 3381

标记率 .83% 91.91% .49%

99m

Tc-MIBI配合物的正辛醇—PBS缓冲溶液（pH值为7.4）的一

放射性药物化学基础实验

99m

2.

Tc-MIBI配合物的脂水分配系数计算值及标准偏差。

表二 99mTc-MIBI在正辛醇和水中的计数及相关数据的处理结果 1-1 1-2 1-3 2-1 2-2 2-3 3-1 3-2 3-3 4-1 4-2 4-3 5-1 5-2 5-3 lg D的平均值 lg D的标准偏差

油相 1160014 1141965 1155470 457693 454110 459046 230117 229344 229687 95127 95343 94417 38833 38778 38325

水相 5824 501502 584094 368550 377251 3650 69802 69974 70439 39318 39405 40346 17929 18821 17975

0.33 57.05%

385.33

18241.67

0.33

94962.33

396.67

0.38

229716

70071.67

0.52

456949.7

370296.7

0.09

1152483

557340

0.32

油相平均 水相平均

lg D

注：本底已扣除

由以上三组数据可以看出，随着脂水分配次数的增加，lgD波动不稳定，最终测定值为lgD=0.33，D值为2.14。 五、实验结果分析及思考

1. 实验中lg D值波动不稳定，最终没有达到稳定结果分析

首先测定次数不够，如果再多测量几次，则能得到较稳定的lg D值。此外，五次的测量结果没有是成增加趋势而后趋于平稳，而是波动状，可能是涡旋和震荡不够充分，使得物质在两相的分配不够充分。还有水相中头没有留在试管中一起测定，也带来了误差，是造成实验结果不稳定的原因之一。

2. 测定99mTc-MIBI配合物的脂水分配系数的用途是什么？ 答：测定99mTc-MIBI配合物的脂水分配系数是为了看该药物的脂溶性是否适当。看该药物是否可以进入人体的特定器官。对于脂溶性器官，要求药物的脂水分配系数大，这样药物容易进入，进而产生药效。对于非脂溶性器官，要求药物的脂水分配系数小，进而产生药效。

放射性药物化学基础实验

3. 影响99mTc-MIBI配合物的脂水分配系数测定的因素是什么？

答：影响99mTc-MIBI配合物的脂水分配系数测定的因素有：

①所用的正辛醇-PBS溶液是否互相饱和； ②正辛醇-PBS溶液的温度和pH值；

③漩涡震荡和离心的时间要够，使两相明显分层； ④测定取样时油相水相是否达到分配平衡; ⑤取水相样本时要避免油相的污染等； ⑥选用的体系。本实验选用的正辛醇-PBS溶液是比较接近真实体内环境的。