[19]中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[21]申请号200910010107.3
[51]Int.CI.
A01H 1/02 (2006.01)
[43]公开日2009年9月23日[22]申请日2009.01.14[21]申请号200910010107.3
[71]申请连普瑞康生物技术有限公司
地址116200辽宁省大连市普兰店经济开发区长
店堡社区
共同申请人金银兵[72]发明人刘汉石
[11]公开号CN 101536668A
权利要求书 2 页 说明书 4 页 附图 1 页
[54]发明名称
铁皮石斛杂交授粉方法
[57]摘要
本发明建立了一种简易高效的不同种群间铁皮石斛的杂交授粉方法。通过该方法，不仅可以实现铁皮石斛的人工授粉，催进铁皮石斛结果，而且可以实现不同种群间的优势互补，实现杂交技术在铁皮石斛上的应用。此外本发明还建立了一种铁皮石斛花粉粒的简易保存方法，通过与杂交授粉技术的结合，可以将铁皮石斛杂交范围进一步扩展，解决了开花时间不同的两个种群之间授粉难的问题。通过本方法可以使铁皮石斛授粉率成功率达到95％以上，结出的果实籽粒饱满。
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权 利 要 求 书
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1 铁皮石斛杂交授粉方法，其特征包括：授粉时间的选择、授粉植株的选择、授粉工具的制作、花粉的保存方法以及铁皮石斛杂交授粉的整个过程。
2 根据权利要求1所述的铁皮石斛杂交授粉过程主要包括以下几个特征：
(1)：授粉时间的选择，晴天选择上午6:00到9:00或下午15:00～17:00；阴雨天全天；
(2)：授粉植株的选择，母本选择开花后7天内的花朵，父本选择开花3到8天的花朵，父本也可以选择低温干燥保存的花粉粒； (3)简易传粉工具的制作方法为：首先将竹签剪断成长为6cm左右的小段，将大头钉的尖端小心插入到竹签内，以不晃动为标准，这样一个简易的传粉工具就制作好；
(4)花粉粒保存：如果父本与母本开花时间不一致就需要将花粉粒保存期起来备用，保存方法：首先准备一个干净的干燥瓶模样的容器，接着小心将花朵唇瓣朝上，放在培养皿正上方，用①号镊子小心去除唇瓣，然后用②号镊子小心朝唇瓣的方向将药帽掰掉，接下来用授粉用的简易工具上的大头钉的头部先在柱头窝上方的隔膜处沾一下，然后小心的放到药室内轻轻将花粉粒粘起，最后将采集到的花粉粒放在干燥瓶内，干燥瓶放于干燥器内，4℃低温干燥存放；如果保存时间不是太久(15天以内)，也可以选泽能够密闭的其他器皿，放在干燥的地方室温(25℃)保存；
(5)杂交授粉过程，首先将母本花朵按唇瓣朝上的方向放在准本好
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的玻璃器皿(如培养皿、表面皿等)的上方，接着用镊子小心去除其上的唇瓣，最后采用特征(4)上描述的方法将花粉粒送到母本的柱头窝内。
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说 明 书
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铁皮石斛杂交授粉方法
技术领域
本发明专利申请涉及一种中药材的杂交育种技术领域，尤其涉及中药材铁皮石斛的杂交育种技术。背景技术：
铁皮石斛为中华十大仙草之首，由于自然繁殖率低下，随着市场需要量的增加，其野生资源由于过度采集，已接近绝迹。为了发展这一名贵的中药材，近年来许多厂家都采用现代生物技术对其进行了快速繁殖研究，纵观这些研究机构，多数以原球茎的方式进行扩繁，而经过扩繁之后的后代大多为同一个植株的后代，因此其优良的性状得不到开发，失去了自然繁殖中的杂交优势表现的机会。 为了更好的发展这一名贵中药材，本公司在长期的铁皮石斛种植过程中总结出一套适合铁皮石斛的杂交育种技术。
本发明专利是本公司在长期的石斛种植过程中总结出来的，在这个过程中，首先对现有的铁皮石斛种内群体进行了初步调查，发现现有的铁皮石斛按不同的方法可以分为很多变种或栽培种，如按假鳞茎颜色可以明显将石斛种类分为两类，一类为靑杆类，另一类为铁黑色杆类；根据根的质地可以将现有的铁皮石斛分为软脚和硬脚两类；根据铁皮石斛花的香味，可以将现有的铁皮石斛分为：具有清香气味的铁皮石斛、无气味的铁皮石斛、具有闷香气味的铁皮石斛；按照铁皮石斛叶片的颜色可以将现有的铁皮石斛分为：青叶类铁皮石斛、灰紫色铁皮石斛、铁青色铁皮石斛等。
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发展不同铁皮石斛栽培种之间的杂交技术，一方面可以解决铁皮石斛自然繁殖率低下的问题，开发杂交优势在铁皮石斛育种中的应用，培育优良的铁皮石斛栽培新种，另一方面可以为产业化生产铁皮石斛提供充足的种原，避免长期使用同一个植株的后代造成原球茎繁殖能力降低以及克隆与繁殖中优良性状的退化。发明内容：
铁皮石斛杂交授粉的具体过程：
工具准备：洁净的培养皿2个、大头钉数十根、竹签数根、镊子两把。
传粉工具的制作：将直径在3.5mm左右的竹签剪断成长为6cm的小段，将大头针的尖部小心插入到竹签内，以不晃动为标准，这样一个简易的授粉工具就制作好了。
传粉过程：首先将两朵花唇瓣朝上放在准备好的培养皿的正上方，用①号镊子将两朵花的唇瓣掰掉，然后用②号镊子小心去除父本花朵的药帽。注意药帽去除方法：用镊子小心朝唇瓣的方向将药帽掰掉，药帽去掉后即可看到药室里的四个乳黄色的花粉块，其中两两粘在一起。用大头钉的头部先在柱头窝上方的隔膜处沾一下后，接着小心深入到药室内，轻轻将花粉粒粘起，最后小心的将其送到母本花朵的柱头窝内，如果花粉块还有一半在柱头窝外，可以用大头钉的头部轻轻的将其推入柱头窝，保证每个花粉块都送到柱头窝内。注意，每传粉一次要更换传粉工具一次，使用过的传粉工具要经过彻底消毒后方可再次使用。切忌不可用沾过同一朵花的传粉工具传送花粉到该多
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花的药室内。
传粉后的植株要小心的转移到有防虫网的温室内进行培养，培养温度为19～30℃。空气湿度不可过低，而基质湿度不可过大，以防烂根，培养过程中要每隔一两周喷施一次肥，肥料可以选择市售的NPK比例平衡的复合肥，稀释2000倍后进行叶面喷施，注意培养过程中最高气温不可超过32℃。培养过程中还要注意病虫害的防治特别是蜗牛，其专吃刚开的花朵与刚刚授粉的果实，此外要加强通风防止软腐病等常见病虫害的发生。一般经过90～120天果实即可成熟。 成熟后的果实采用组织培养技术进行培养，经过6～8个月，转接三四次后即可长出健康的小苗。
花粉粒的保存：如果父本与母本开花时间不一致就需要将花粉粒先保存期起来备用，保存方法：选择一个干净的干燥瓶模样的容器，小心将花朵唇瓣朝上，放在培养皿正上方，用①号镊子小心去除唇瓣，然后用②号镊子小心朝唇瓣的方向将药帽掰掉，接着将授粉用的简易工具上的大头钉的头部先在柱头窝上方的隔膜处沾一下，然后小心的放到药室内轻轻将花粉粒粘起，送到准备好的干燥瓶内，最后将干燥瓶放于干燥器内，4℃低温干燥存放。如果保存时间不是太久(15天以内)，也可以选泽能够密闭的其他器皿，放在干燥的地方室温(25℃)保存。通过这种方法保存的花粉粒在30天内可以保持100％的成活率。附图说明：
图1授粉工具：(A：培养皿；B：镊子；C：简易传粉工具)
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图2铁皮石斛杂交授粉全过程；
(A：去除唇瓣；B：去除药帽；C：传递花粉块；D：花粉粒的显微照片；E：授粉；F：授粉后的局部结构；G：授粉30天后的果实；1.花粉粒；2.药帽；3.隔膜；4.柱头窝)
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说 明 书 附 图
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图1
图2
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