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一 新医学导刊 异有显著性（Ｐ＜０．０５）。 ２００８年３月第７卷第３期 ’．， ｚ眦，ｌ ●临床研究● 治疗后＞２０ｍｇ％者３例，有效率为３８．５％。两组治疗后比较差 ２．５并发症Ａ组重型１０例，并有上消化道出血３例；Ｂ组重 有此种情况，应考虑加大东莨菪碱用量。本药不但能兴奋呼吸 中枢，而且具有安定大脑皮层，解除平滑肌痉挛，改善脑、肺的微 循环，增加肺的通气与换气功能等多种药理作用，因此在肺性脑 病抢救中其疗效较尼可刹米为优。尤其是对后者无效者，使用 东莨菪碱仍可使ＰａＣＯ 下降，ＰａＯ 上升，低氧血症改善。脑血 流量的增加，阻断了脑水肿所致呼衰的可能性。此外，东莨菪碱 通过其抗胆碱作用，解除支气管痉挛，控制支气管腺体的过度分 型８例，并有上消化道出血２例。发现在出血前均有显著腹胀， 测定血小板均在１００×１０ ／Ｌ（１０万／ｍｒｎ３）以下，凝血酶原时间４ 例较正常对照延长，而纤维蛋白原只有１例下降。可见前两项 检查灵敏度较高。两组５例合并上消化道出血者均加用小剂量 肝素（５０ｍｇ静滴）。每日１次。其中Ａ组３例两天后病情缓解， Ｂ组２例病情继续加重，无效死亡。 ２．６药物副作用东莨菪碱的副作用少，仅有颜面潮红，暂时 泌，从而使气道阻塞减轻；微循环（包括肺微循环）也得到改善， 本组治疗前后的微循环观察证实了这一点。 在应用中我们的体会是：①应及早使用，尤其是在患者尚处 轻微口干，视力模糊，但不影响治疗。用药过程中无１例因无法 于兴奋，躁狂之肺性脑病早期阶段应用，效果更好。对昏迷较深 适应而中途停止，也未见药物过敏反应。 病例，即使采用超大剂量，亦难奏效。②剂量上必须注意个体差 ３讨论 异，而且对危重病例宜用大剂量。③静脉推注给药的疗效比静 肺性脑病是慢性肺心病的一种晚期并发症，而东莨菪碱在 滴好。尤其对重危病例，可采用短期内间歇多次静脉推注，待患 一定的剂量范围内有很好的呼吸中枢兴奋作用和恢复血压作 者神志转清，病情好转后再用静滴维持，才不致延误抢救时机。 用。从本组看，用此药治疗肺性脑病，特别是用于抢救中、重型， ④在应用东莨菪碱抢救肺性脑病的同时，应注意与其他必要治 疗效更明显。观察到静注用较大剂量（０．６～１．２ｍｇ／次）时，患者 疗措施密切配合，且不可单纯依赖于此药。总之，以东莨菪碱为 呼吸加深，频率减至接近正常，支气管痉挛现象缓解，肺部哮鸣 主综合治疗肺性脑病，本组的总有效率为９５．１％，特别对中、重 音及湿罗音减少，安静入睡。经１小时后检测血气：可见原增高 型显示的疗效令人鼓舞；故有推广使用的价值，同时也有待进一 的ＰａＣＯ 明显下降、低氧血症得到改善；而当剂量偏小时，患者 步完善、总结、提高。 仅表现为呼吸平静，肺部哮鸣音少有改变，ＰａＣＯ 则无下降。遇 激素性股骨头坏死早期股骨头局部 ＴＧＦ—ｐ 表达的实验研究 万政佐 支满霞 杨玉红 褚春华２ 。中国中医科学院望京医院（北京 １００１０２） 浙江省人民医院 中图分类号：Ｒ９６５．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—３７８３（２００８）一３—００３７—０２ 【摘要】目的 通过内毒素联合大剂量激素冲击，小剂量激素长期应用两种方法制备大鼠股骨头坏死模型，探讨生长因子在激素造 成股骨头坏死中的变化情况。方法选取Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２６只，随机分为三组，Ａ组：６只，空白组；Ｂ组：１０只，每只每次１０１ｘｇ／ｋｇ剂量于 大鼠尾静脉注射内毒素１次，注射内毒素２４小时后，腹腔注射醋酸强的松龙每２０ｒａｇ／ｋｇ．ｄ，连续３天，每次间隔２４小时。ｃ组：１０只， 腹腔注射醋酸强的松龙６．７ｍｇ／ｋｇ，３次／周，连续三周。给药后８周将动物处死，进行免疫组化观察。结果 激素可以明显抑制股骨 头内ＴＧＦ—Ｂ 的表达。内毒素联合大剂量激素，小剂量激素长期应用两种方法均可成功的制备股骨头坏死模型。 【关键词】激素性股骨头坏死ＴＧＦ—Ｂ 实验研究 生长因子是由造血系统、免疫系统或炎症反应中的活化细 析ＴＧＦ—Ｂ 与股骨头坏死之间的联系。 胞产生的、高活性的多肽、蛋白质或糖蛋白，是细胞分化、增殖、 ｌ材料与方法 基质合成和的重要信息物质，是具有刺激细胞生长作用的 １．１实验动物Ｗｉｓｔａｒ雄性成年大白鼠，２６只，体重２９０±２０ｇ， 细胞因子，在股骨头坏死（ＯＮＦＨ）的发病和修复过程中有着重要 由中国中医科学院实验动物中心提供，合格证号为ＳＣＸＫ（军） 的作用。其中转化生长因子一Ｂ、血管内皮细胞生长因子、骨形 （２００２—００１）。实验前行一星期的适应性饲养。 成蛋白与股骨头内的成骨活动、基质干细胞的转化及血管生成 １．２方法与分组选取Ｗｉｓｔｅｒ大鼠２６只，随机分为三组，Ａ组： 密切相关，而且均已经在临床使用，在ＯＮＦＨ的发病及治疗中具 ６只，作为空白组，常规饲养；Ｂ组：１０只，每只每次１０１ｘｇ／ｋｇ剂量 有重要作用。因此，本研究主要运用免疫组织化学染色的方法， 于大鼠尾静脉注射内毒素１次，注射内毒素２４小时后，腹腔注 定量分析激素性股骨头坏死过程中，ＴＧＦ—Ｂ。变化情况，进而分 射醋酸强的松龙每２０ｒａｇ／ｋｇ．ｄ，连续３天，每次间隔２４小时。Ｃ 一３７— 维普资讯 http://www.cqvip.com
●临床研究● ２００８年３月第７卷第３期Ｍｗ ＆ ｃ 新医学导刊 ● 组：１０只，腹腔注射醋酸强的松龙６．７ｍｇ／ｋｇ，３次／周，连续三周。 所有大鼠于造模后第９周的第一天，用０．３％戊巴比妥钠腹 腔注射麻醉（１ｍｌ／ｌＯＯｇ），处死大鼠，取下大鼠右侧股骨头，用４％ 多聚甲醛（０．０１ＭＰＢＳ液配制，ＰＨ值７．２～７．４）固定，待检。 １．３免疫组织化学染色切片常规脱蜡至水，双氧水封闭１０ 分钟，蒸馏水冲洗，０．０１ＭＰＢＳ浸洗３ｍｉｎ×３；１０％的正常山羊血 清封闭，室温孵育１０ｍｉｎ，倾去血清勿洗；滴加ＧＦＡＰ工作液， ３７℃孵育２ｈ，０．０１ＭＰＢＳ浸洗３ｍｉｎ×３；生物素标记羊抗兔ＩｇＧ二 图３模型２组ＴＧＦ—Ｂｌ的表达 ３讨论 抗工作液，３７℃孵育１５分钟，０．０１ＭＰＢＳ浸洗３ｍｉｎ×３；低价ｓ— Ａ／ＨＲＰ工作液，３７℃孵育１５分钟，０，０１ＭＰＢＳ浸洗３ｍｉｎ×３； ＤＡＢ溶液室温显色５ｍｉｎ，自来水冲洗终止显色；脱水，二甲苯透 明，树脂胶封片。 １．４图像分析及统计学处理用日本Ｎｉｋｏｎ Ｈ８—２０２ ＡＮ科研 显微镜对股骨头切片进行组织病理学观察和摄像；用美国ＭＩＳ 一２０００ ＳＰ型３Ｙ显微图象分析仪，测定股骨头切片各生长因子 （ＴＧＦ—Ｂ、ＶＥＧＦ、ＢＭＰｓ）阳性表达产物的平均光密度值（ｍｅａｎ ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ，ＯＤ）和阳性细胞计数，细胞中含有棕黄色颗粒者 为阳性。其记数采用平均值，即在每个样本按照“ｚ”字型，每条 线上取一个点作为取图点，每个观察指标在同一张切片取３个 视野的图像，计数每个视野的阳性细胞数，测定其ＯＤ值及阳性 细胞数。所得数据以均数±标准差表示，采用Ｆ检验及单因素方 差分析，以上统计均用ＳＰＳＳ １１．０统计软件包完成，Ｐ＜０．０５认 为有显著统计学意义。 ２结果 转化生长因子（ＴＧＦ—Ｂ，）：ＴＧＦ—Ｂ，表达主要在软骨细胞核和 胞浆，成骨细胞内及胞外基质，有的骨细胞的胞核均有阳性着色。 表１ ＴＧＦ—Ｂ 阳性表达物ＯＤ值组间比较 及阳性细胞数平均值组间比较表（ ±ｓ）％ 组别 样本数 阳性面积比 阳性细胞数目比 △，★与空白组比较，差异显著Ｐ＜０．０５。★与模型１组比较，差异 显著Ｐ＜０．０５。 ＴＧＦ一１３１：阳性面积比与阳性细胞数目比，模型２组表达低 于模型１组，低于空白组，与两组比较差异均显著Ｐ＜０．０５，且模 型２组与模型１组差异亦显著Ｐ＜０．０５（见图１、２、３）。 图１空白组ＴＧＦ—Ｂ 的表达图２模型１组ＴＧＦ— 的表达 一３８一 李雄袁浩…等发现激素的冲击疗法与长期应用都能促进 股骨头坏死的发展。因此必须重视预防。王氏 发现大量激素 的使用，可以造成血管内膜的炎症。Ｊｏｎｅｓ【３ 认为，脂肪栓塞仅仅 造成骨软化不可能成为导致骨坏死的最后途径，而认为脂肪的 过量，血流瘀滞，游离脂肪酸（ＦＦＡ）对血管内皮的损伤，导致血 管内栓塞，特别是栓塞于毛细血管和血窦，以及继发纤溶是骨坏 死的原因。Ｍａｔｓｕｉ【４ 认为，血管的病变是股骨头坏死的关键。但 是到目前为止，仍没有一种普遍满意的治疗股骨头坏死的疗法。 在体内，外源性ＴＧＦ—Ｂ可以启动正常的，与骨折愈合过程 一致的成骨过程。Ｂｅｃｋ【５ 等的研究表明，外源性ＴＧＦ—Ｂ注入 到兔颅骨缺损内，能明显促进成骨细胞的增殖和骨基质的合成， 其组织学结构与周围正常骨相同，已钙化骨的间隙中可见含细 胞成分的骨髓腔。而不加ＴＧＦ—Ｂ的为纤维愈合，仅有少量新 生骨。本实验的研究结果表明：大剂量激素冲击与小剂量激素 长期应用均可以抑制ＴＧＦ一１３１的生成。且小剂量激素长期应用 后ＴＧＦ一１３１的表达较大剂量激素冲击应用明显降低，二者比较 差异显著Ｐ＜０．０５，说明小剂量激素长期应用更能抑制ＴＧＦ一１３１ 的生成。骨诱导、骨形成是一个由多种生长因子参与并调节的 过程。生长因子能够促进骨形成和血管再生，因此就有可能成 为改善股骨头坏死的新方法。本实验结果为进一步探讨激素性 股骨头坏死的发病机理提供新的思路与途径，同时，也为临床治 疗该病提供一个新思路，即若能提高坏死区局部ＴＧＦ—Ｂ１的表 达水平，其自身修复能力势必会明显提升，也许会成为一种有效 的治疗方法。 参考文献 ［１］李雄，袁浩，贝美莲，等．大剂量激素长期冲击应用与长期 应用对股骨头坏死影响的动物实验［Ｊ］．骨与关节损伤杂 志，１９９９，１４（４）：２４１—２４４． ［２］ 王海彬，赵启爱，沈培芝，等．激素性股骨头缺血性坏死动 物血管内皮的变化及中药作用［Ｊ］．中国中医骨伤科杂志， ２０００，８（３）：７—１０． ［３］ Ｊｏｎｅｓ ＪＰ．Ｆａｔ ｅｍｂｏｌｉｓｍ，ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏａｇｌａａｔｅｏｎ ａｎｄ ｏｓｔｅｏ— ｎｅｃｒｉｓｉｓ【Ｊ］．Ｃｌｉｎｉ Ｏ￣ｈｏｐ，１９９３，２７８：２９４—３０８． ［４］ Ｍａｔｓｕｉ Ｍ．Ｅｘｐｅｉｒｍｅｎｔｌａ ｓｔｅｒｏｉｄ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｓｔｅｏｎｅｃｒｏｓｉｓ ｉｎ ａ— ｄｕｈ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｉｔｌｌ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｈｏｐ， １９９２，２７７：６１． ［５］Ｂｅｃｋ Ｌ Ｓ，Ｄｅｇｕｚｍａｎ Ｌ，Ｌｅｅ Ｗ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ． ＴＧＦ—ｂｅｔａ １ ｉｎｄｕｃｅｓ ｂｏｎｅ ｃｌｏｓｕｒｅ ｏｆ ｓｋｕｌｌ ｄｅｆｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ １９９１，６（１１）：１２＾５７—６５．
