结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a表达变化及其与患者临床病理特征的关系

181a(miR-181a)表达变化及其与患者临床病理特征的关系。方法选择结直肠癌组织与癌旁正常组织各91例

份，采用RT-qPCR法检测lncRNA CRNDE、miR-181a表达，并分析二者表达的关系及其与患者临床病理特征的关

系。结果 与癌旁正常组织比较，结直肠癌组织lncRNA CRNDE相对表达量明显升高,miR-181a相对表达量明显 降低(P均＜0. 05)。结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a相对表达量与肿瘤临床分期、组织分化程度有关(P

均＜0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位及淋巴结转移无关(P均＞0. 05)。结直肠癌组织lncRNA

CRNDE相对表达量与miR-181a相对表达量呈明显负相关关系(=-0. 632,P ＜0.05)。结论 结直肠癌组织ln­cRNA CRNDE表达升高、miR-181a表达降低,二者共同参与结直肠癌的恶性进展。关键词：结直肠癌;长链非编码RNA；结直肠肿瘤差异表达基因;微小RNA-181a；临床病理特征doi ： 10. 3969/j. issn. 1002-266X. 2019.19. 015中图分类号:R735.3 文献标志码:A 文章编号：1002-266X(2019) 194057Q4结直肠癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤之 分子，可作为分子海绵结合miRNA或染色质修饰因

子，调节靶基因表达。lncRNA结直肠肿瘤差异表达

一，近年来随着人民饮食结构和饮食习惯改变以及 人口老龄化加剧，其发病率呈逐年上升趋势［,］。

目前,结直肠癌的治疗已取得了巨大进步,如微创手

基因(CRNDE)是结直肠肿瘤差异表达基因的表达 产物，定位于人16号染色体上，可在多种恶性肿瘤 组织中异常表达［］。本研究观察了结直肠癌组织

lncRNA CRNDE、miR-181a表达变化,并探讨二者在

术普及、新型化疗药物和分子靶向药物临床应用,明 显提高了治疗效果［］。但对于中晚期结直肠癌患

者，失去了手术根治的机会,内科治疗效果亦不理 想,患者预后往往较差。因此,有必要深入研究结直

肠癌发生、发展的分子机制,寻找更可靠的肿瘤标志 物用于疾病筛查以及指导临床治疗⑷。随着RNA

结直肠癌发生、发展中的作用。现报告如下。1资料与方法1.1临床资料 选择2016年4月~2018年10月

南方医科大学深圳医院收治的结直肠癌患者91例。

所有患者经术后组织病理检查明确诊断。纳入标

检测技术的发展，在肿瘤组织中发现了多种非编码 RNA(ncRNA)异常表达，并参与肿瘤的发生、发展。

准:①符合结直肠癌诊断,病理类型为腺癌;②初诊,

年龄24 ~78岁；③行结直肠癌切除手术，术前未接 受任何抗肿瘤治疗；@Karnofsky评分M60分，预计

微小RNA (miRNA)是一类内源性非编码小分子 RNA,长度为18 ~25个核=酸，通过结合mRNA的

3'非编码区，改变mRNA的稳定性,影响靶基因表 生存期M3个月；⑤临床病理资料完整。排除标准: ①合并结直肠其他疾病、其他部位恶性肿瘤以及心、

肝、肺、肾等重要脏器严重疾病者;②术前已接受任

达,不仅可参与正常细胞的增殖、分化、凋亡等 过程，还可参与肿瘤细胞的恶性增殖、浸润和迁移 等［］。miR-181a是miRNA家族成员之一，属于

miR-181家族，定位于人5号染色体上。有研究发

何抗肿瘤治疗者;③临床病理资料不完整者。其中,

男56例、女35例，年龄(54. 1 ±8.7)岁；肿瘤类型: 结肠癌52例，直肠癌39例；肿瘤直径：＜5 cm 41

例，M5 cm 50例；临床分期：I、11期44例，皿、1¥期 47例;组织分化程度：高中分化61例，低分化30

现,miR-181a可调节下游抑癌基因PTEN表达，影响

下游细胞信号传导,从而促进结直肠癌细胞增殖、侵 袭和迁移等⑷。长链非编码RNA(lncRNA)是一类 长度大于200个核=酸、具有多种功能的RNA通信作者：周义文(E-mail: yiwenzhou21@ aliyun. com)

例;有淋巴结转移19例,无淋巴结转移72例。本研

经 医 深圳医院医 理 准57患者或其家属知情同意。山东医药2019年第59卷第19期1.2

lncRNA CRNDE、miR-181a 表达检测 采用

0. 8 pL, TaqMan Universal PCR Master Mix I 20 pL,

RT-qPCR法。将手术切除的结直肠癌组织及其配 small RNA Assay 2 pL,无菌水补足至40 pL；反应条

对的癌旁正常组织（距肿瘤组织边缘M5 cm ）置于 件：95 C 10 min,95 C 15 s、60 C 1 min 共 40 个循

液氮中速冻，-80七冰箱保存备用。实验前取冻存

组织20 ~30 mg,液氮下研磨成粉末，采用TRIzol法 提取组织总RNA,经紫外分光光度计鉴定，OD26。/ OD280为1.8~2.0,可用于后续实验。按反转录试剂

环。所有反应在ABI 7900型实时荧光定量PCR仪上 完成。采用2-AACt法计算目的基因相对表达量。实

验重复3次，取平均值°1.3统计学方法 采用SPSS22. 0统计软件。计量

盒说明将总RNA逆转录为cDNA,逆转录反应条件:

16 °C 30 min ,42 °C 30 min ,85 °C 5 min ° 以 cDNA 为

资料以X ± 5表示，结果比较采用样本t检验。

相关性分析采用Pearson相关分析。P <0.05为差

异有统计学意义。模板，按RT-qPCR试剂盒说明进行PCR扩增。所有 引物序列由深圳华大基因股份有限公司设计合成。

lncRNA CRNDE 上游弓| 物 5'-GCGGAGGAGAGGTGT-

2 结果2.1 结直肠癌组织与癌旁正常组织lncRNA CRNDE、miR-181a表达比较结直肠癌组织与癌旁

TAAGTGT-3，,下游引物 5'-AACAGGTTTTACCTCCT- TATCTTCAGAA-3'；内参 GAPDH 上游引物 5'-GGTG-

正常组织lncRNA CRNDE相对表达量分别为0. 6 ±0.120,0. 124 ±0.057,miR-181a 相对表达量分别

GTCTCCTCTGACTTCAACA-3',下游引物 5'-GTTGCT- GTAGCCAAATTCGTTGT-3'° miR-181a

物 5'-为 0.326 ±0.072、2.307 ±0.259° 结直肠癌组织 ln­cRNA CRNDE相对表达量明显高于癌旁正常组织, miR-181a相对表达量明显低于癌旁正常组织（t分

AACAUUCAACGCUGUCGGUGAGU-3',下游引物 5'-

UUGUACUACACAAAAGUCUG-3'；内参 U6 上游引物 5 '-CTCGCTTCGGCAGCACA-3',下游引物 3'-ACGCT- TCACGAATTTGCGTGTC-5'° lncRNA CRNDE PCR 反

别为 55.434,70.298 ,P 均 <0.05） °2. 2 结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a表达

应体系共20咽：cDNA模板2咽,上下游引物各0.8 p,L,2 x SYBR Premix Ex TaqH 10 »L,50 x ROX Dye

与患者临床病理特征的关系结直肠癌组织ln­cRNA CRNDE、miR-181a表达与肿瘤临床分期、组

0.4 pl,无菌水6 pl；反应条件：95 C 2 min,95 C 10 s、54 C 35 s、72 C 30 s 共 40 个循环° miR-181a PCR

织分化程度有关（P均<0. 05）而与患者性别、年

龄、肿瘤类型、肿瘤直径和淋巴结转移无关（P均> 0.05）° 见表 1°miR-181 a

PX 土 St

反应体系共40 pL：cDNA模板2.6 pL,上下游引物各

表1临床病理特征性别男5635lncRNA CRNDE结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a表达与患者临床病理特征的关系X 土 SntP0.875 ±0.1260.922 ±0.144女年龄<60岁1.6380. 1050.317 ±0.00.334 ±0.0830.340 ±0.0921.0980. 2753160520.881 ±0.1140.906 ±0.126=s60 岁1.2710. 2070.311 ±0.0730.335 ±0.0750.318 ±0.0680.338 ±0.0870.315 ±0.0510.394 ±0.0940.254 ±0.0621.10. 104肿瘤类型结肠癌直肠癌肿瘤直径< 5 cm0.875 ±0.1230.920 ±0.12139411.7390. 0851.1130. 2690.875 ±0.1170.920 ±0.125工5 cm5044471.7580. 0821.5700. 120临床分期I、I期叭IV期组织分化程度高中分化低分化淋巴结转移有无0.743 ±0.1151.037±0.1390.721 ±0.11010. 9520. 0018. 4380. 0016130191.229±0.1370.872±0.12119. 0680. 0010.373 ±0.0780.242±0.00.336 ±0.0667. 9680. 000720.903 ±0.1250. 9080. 3360.325 ±0.0570. 7240. 4712. 3 结直肠癌组织lncRNA CRNDE表达与miR-相对表达量与miR-181a相对表达量呈明显负相关

181a表达的关系 结直肠癌组织lncRNA CRNDE 58关系（=-0.632,P <0.05）° 见图 1°山东医药2019年第59卷第19期结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a表达变化

及二者表达关系的报道较少。本 结 现,结直肠癌组织miR-181a相对表达量明显低于癌旁正常组织，与以往报道］基本

［6致。其具体原因尚不清楚，可能与miR-181a的杂

合性缺失有关， 与miR-181a表观遗传学修饰结果还发现，结直导致其

0.2

0.4

0.6

失活有关。本

0.8 1.0 1.2IncRNA CRNDE相对表达星：肠癌组织miR-181a表达与肿瘤临床分期、组织分化

图1 结直肠癌组织IncRNA CRNDE表达与miR-181a表达的关系程度有关,而与患者性别、年龄、肿瘤、肿瘤直径

淋巴结转 关。表明miR-181a

性肿瘤，每人民饮食结与结直肠3讨论结直肠癌是临床常见的消化系

癌的恶性进展。本 结直肠癌组织lncRNA CRNDE相对表达量明显高于癌旁正常组织。其具

年导致近70 人 ,

胃癌的

仅次于肺癌、肝癌体原因亦不清楚，可能是抑制lncRNA CRNDE表达

的miRNA,女口 miR-384表达下调，导致lncRNA CRNDE mRNA 定 性 增 , 进 而 lncRNA

致命癌症。近年来

构和饮食习惯改变以及人 龄化 ，其发病率呈逐年上升趋势⑷。结直肠癌的病因与遗传因素、 境因素、饮食习惯等有关，但其确切发病机制尚不

CRNDE转录后表达上调〔15］。本 结果还显示,结直 癌组织 lncRNA CRNDE 表达与肿瘤临床分

期、组织分化程度有关。表明lncRNA CRNDE亦参 与结直 癌的 性进 。清楚。 认为，结直肠癌的、 个多因素、多步骤参与的复杂过程⑼。因此，深入研究结 直肠癌、发展的分子机制,对疾病早期筛查和指

导临床

有 现, lncRNA CCAT1 作 分 海绵具有重要意义。RNA检测技术的

年 现了

，在肿瘤组织中结合miR-181a,进而影响下 基因HOXA1表达, 从而促进肿瘤细胞增殖和迁移［16］;高度保守的异质

ncRNA异常表达,并参与肿瘤的核糖核 U 2能够增加lncRNA CRNDE。有 现,ncRNA通过靶基因参与相10关 转导通路，继而 肿瘤 增殖、侵袭、迁移及血管生成等过程「］。基于核=酸长度，可将 ncRNA 分为短 ncRNA ( <200 nt)和长 ncRNA ( > 200 nt) o miRNA

的稳定性，并通过活化Ras/MAPK信号通路，促进 肿瘤 增殖和迁移\"］。但结直肠癌组织lncRNA CRNDE表达与miR-181a表达的关系尚不清楚。本结 现, 结直 癌组织 lncRNA CRNDE 表达

短ncRNA, 过直接抑制与miR-181a表达呈明显负相关关系。其机制 ： 是lncRNA CRNDE表达升高后,其结合miR-181a明

显增多，从而使miR-181a的肿瘤抑制

mRNA 过结合其3'非 降解mRNA分子,在转录 平靶基因表达,从而参与细胞抑增殖、分化、凋亡等生物学过程。miR-181a miR-

NA家族成员之一，属于miR-181家族，定位于人5

制，结直肠癌 增殖和迁 力明显增强;而当敲

除lncRNA CRNDE表达后，miR-181a表达明显升

高，其对肿瘤的促进作用得 转。染色体上。miR-181a在乳腺癌、非

质瘤等组织中异常表达，可通过

,miR-181a 够通过

肺癌、STAT3、MET综上所述，结直肠癌组织miR-181a低表达、ln­cRNA CRNDE高表达，二者共同参与结直肠癌的恶

等基因表达,参与肿瘤的恶性进展⑴\"3〕。在结肠癌PRKCD基因表达，发挥肿瘤细胞生长作用酗］。lncRNA是一类长 ncRNA,可作为分子海绵结合miRNA,参与神经元

性进展，有望成为结直肠癌早期诊断的指标和潜在

的 点。参考文献：的分化发育、配子形成及肿瘤进展等过程。lncRNA

CRNDE 结直肠肿瘤差异表达基因的表达产物，定

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析［J］.中国癌症杂志,018,8(3) ： 177-183.享双 动子。lncRNA CRNDE具有组织特异性，在人体正常组织中几乎不成为肿

关于

点。

间特异性表达

［3］ 汪建平，王磊.当前中国结直肠癌诊治所面临的问题和挑战

［］.中华胃肠外科杂志,2014,17(6)521-524.表达，但在肿瘤组织中表达明显升高，有 瘤早期诊断的指标和潜在的

第81页)59山东医药2019年第59卷第19期Jarabak头影测量分析时应充分考虑到种族差

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异[12~15] °因此,Jarabak参考值对于黄种汉族人可 能并不适用，尤其在预测个体生长发育方面。本研

32.究Jarabak头影测量的线性误差＜0.7 mm,角度误 差＜ 0.4°。按Dahlberg's公式⑷说明，本研究测量 误差较力、，在可接受范围内,有可重复性°[ 8 ] Markkanen S, Niemi P, Rautiainen M, et al. Craniofacial and oc­

clusal development in 2. 5 -year-old children with obstructive sleep apnoea syndrome[ J] . Eur J Orthod, 2019. pii： cjz009.总之,本研究57例正常骨面型青年女性的颅面

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种族差异。但本研究样本量较少且仅限于青年女

性,结果可能存在偏倚,在今后的研究中应扩大样本 量和研究对象范围进一步验证。参考文献[1 Keshvad AWinstanley RB. An appraisal of the literature on cen­

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