TQD 操作手册 2011-04-15 日常操作步骤：
准备UPLC 设置样品表 运行样品 定量 打印报告 注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。 建立新方法和project的操作步骤：
准备UPLC 建立新的project 用标准品调谐 编辑质谱方法 编辑UPLC方法 设置样品表 运行样品 定量 打印报告 1. 开机
1.1. 打开电脑，打开质谱电源和UPLC各电源，各部件通过自检后，点击
进入工作站。
1.2. 选择Instrument > MS Tune进入调谐页面。
1.3. 从调谐页面选择Vacuum> pump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和分子涡轮泵开始
工作。
1.4. 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿色，不再闪烁。如果达到
实验状态大约要抽真空12小时 1.5. 气源压力设置
氮气：90 – 120 psi
2. 准备UPLC系统
2.1. 准备流动相 用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水
和缓冲液使用不得超过二天。
2.2. 所有样品都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22um的膜过滤。 2.3. 初始化UPLC泵 在Masslynx主页面上选择 将 出现下面的画面。
氩气：7 psi
2.4. 点击 进入UPLC控制台，见下图。
2.5. 湿灌注UPLC泵 选择CONTROL>Prime A/B solvent
2.6. 选择A1/B1或A2/B2 输入时间1min，如果更换了流动相则输入3min,按star.
2.7. 初始化UPLC自动进样器 在UPLC控制台上选择Sample Manager 2.8. 选择Control >> Prime syringes
2.9. 灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and wash syringes
2.10. 参数 Number of cycles 平时选1，但在更换洗针溶液时选5。 2.11. 点击OK 开始。
2.12. 完成后，UPLC可以正常的工作。
2.13. 0.3的流速，乙酸胺溶液:乙腈=5:95的条件下平衡色谱柱。 3.准备进样
3.1 在整个仪器稳定以后（大约在平衡色谱拄之后半小时，压力变化范围小于50），从
Masslynx的主画面选择，打开调谐页面。在调谐页面下，设置去溶剂气流量为
800L/hr,按“Gas”按扭，打开氮气。
3.2 打开高压，使质谱进入Operate状态。 3.3 等温度升到450度以后打开氩气。
3.4 点击Inlet Method 进入方法编辑页面，点击加载方法。
4、 设置样品表
4.1 在Masslynx主页面下选择File>New打开一个新的样品表。按下列方法调入一个新的样品表格式，
4.2输入样品表中的信息：
File Name File Text MS File Inlet File MS Tune File Bottle Sample Type Conc A
原始数据的文件名 (为了便于查找我们一般用日期) 样品或标样的细节 运行质谱方法的文件名 运行UPLC方法的文件名 运行时的调谐方法 样品所在位置
从下拉菜单中选择样品的类型
标准品的浓度，如不必要可以不输入
4.3 选择，或者在主菜单选择 File > Save As，输入这个样品表的名称 (后缀为.SPL)。
样品表就已经编好等待运行。
样品表的实例
5、运行样品
5.1 点击状态 图标，确认MS和 LC状态已经 Ready。
5.2选黑要运行的样品点击 按扭，运行样品。
5.3 如果样品没有开始运行，请确认暂停键
6、结果分析
6.1从主页面左边选择Quanlynx.
是否被按下。
6.2在样品表编辑中选择Samples>Customize>Load并调出“quantify”列 6.2.1按下图格式输入相关的信息。
6.2.2选中中间浓度的标准品，点击Chromatogram，出现总离子流色谱图。
6.3在总离子流色谱图中选择Display>Mass，出现以下窗口，选择相应的‘Function’ 和
‘Channels’，选择‘Replace trace’ 和 ‘select All’之后出现各数据通道下的色谱图。
6.4点击Edit Method出现以下页面，在下面画面中点击Add New Compound按键
6.4.1输入化合物的名称。
6.4.2在出现的各通道的质谱色谱图上，按住右键拉过目标峰，定量离子的参数（定量离子、保留时间、及保留时间窗口）自动添加到方法编辑器内。
6.5在Compound Properties表中按下面的要求输入相关的信息：
Acquisition Function Number
此选项可以从MS方法中得到，一定要和MS的方法对应 Concentration of Standards
内标法：对于内标物选择Fixed，并输入1.0的浓度。对于标准品，选择Conc A，并保证样品表中浓度是正确的。
外标法：对于标准品，选择Conc A，并保证样品表中浓度是正确的。 Time Window 最大的保留时间窗口，一般输入0.2 Peak Selection 通常设置Nearest. Response Type
在使用内标法定量时，内标物应选择External (absolute)，标准品应选择 Internal (relative)；在使用外标法定量时，标准品应选择External (absolute)
6.5.1在Calibration Properties表中，设置以下参数：
Polynomial Type – Linear
选择Liner
Point of Origin – Exclude
选择Exclude Fit Weighting
通常选择None，关注低浓度时选择1/X
Axis Transformation 选择None
Concentration Units 可以不输入
Calibration Reference Compound
应和化合物的名称一样
6.6在Integration Properties表中输入以下信息：
建议使用Smoothing Enabled和ApexTrack Peak Integration Smoothing method
对于色谱图 – 选择 Mean
6.7在Targeting Properties中输入以下信息：
Update Ion Ratios Using Multiple Samples
如选YES，样品的平均离子比经过计算并进行更新，但要在样品表中Quan Ref列中标记。 Ratio
选择后 Calculate Ion Ratio Tolerance进行计算 Quan/Target
对Target Ion Ratio Method进行编辑 Target Ion Trace
输入参与离子比计算的离子 Target Ion Must Exist
选择后则定性离子峰被检出后才对定量离子进行定量 Target Ion Must Pass Ratio
选择后则离子比符合预设值后才对定量离子进行定量
6.8在Calculation Factors页面中输入以下信息
Signal to Noise Method 选择Peak to Peak
Signal to Noise Factor 输入1
Noise Window Start End 指定的噪声计算范围
Measure Peak Signal level From 选择Average Noise
6.9点击File>Save As，保存处理方法。
6.9.1在Masslynx主页面下点击“Process Samples”
6.9.2下面画面出现后，选择相应的QuanLynx的处理方法，并使Integrate Samples,
Calibrate Standards and Quantify Samples都被选上
6.9.3点击OK，察看结果。
