维普资讯 http://www.cqvip.com ・５０・ 哈尔滨医药２００８年第２８卷第１期 ・综述・ 纤维蛋白原及其检测进展 段樱，刘树业（审校） （天津市第三中心医院，天津３００１７０） ［中图分类号］Ｒ４４６ ［文献标识码］Ｂ 学科分类代码：３２０．１ １６０ 文章编码：１００１—８１３１（２００８）Ｏ１—００５０一ｏ２ 纤维蛋白原（ｆｌｂｒｉｎｏｇｅｎ，ＦＩＢ）为血浆凝血因子中含量最 高的一种蛋白质，血浆中的正常参考范围为２～４ｇ／Ｌ。国内 外众多研究都已证实血浆纤维蛋白原水平为心脑血管病独 立的危险因素，同时亦有研究证明ＦＩＢ基因多态性与心脑血 管疾病相关 Ｊ，因而有关ＦＩＢ方面的研究越来越受到人们 的重视，现就其结构与功能及相关检测做以简单综述。 １ 结构 纤维蛋白原由肝细胞合成，是大分子糖蛋白，分子量为 ３４０ ０００，是由三对不同的多肽链组成的对称性二聚体，其中 ３种多肽链分别命名为Ａｃｔ、ＢＢ和 。纤维蛋白原分子 有链内及链间二硫键２９个 Ｊ。Ａｃｔ、ＢＢ和 链是借助１２个 二硫键连在一起；而纤维蛋白原分子中两条 链的半胱氨酸 ８和９及两条Ａｃｔ链的半胱氨酸２８间形成的３个二硫键将 它的两个组分在多肽链氨基端连接起来，该连接部位称为中 央区（Ｅ区），而远离这一连接部位的区域称为外围区（Ｄ 区）。据研究，在纤维蛋白原的区，两条 链的半胱氨 酸８、９相互形成二硫键，这样就使两条 链是以反相平行方 式排列，多肽链的这种排列方式也使纤维蛋白原的两个组分 以同样方式定位。电镜下，纤维蛋白原分子呈相连的三联球 形，两端对称的球体较大，中间球体较小，球体间连以带状结 构，是由三条多肽链经螺旋形成 Ｊ。 编码纤维蛋白原的基因位于第４号染色体的长臂 （４ｑ２８），３条多肽链分别由各自不同的基因所编码。经基因 同源性分析，这３种基因可能起源于同一基因祖先 Ｊ。３种 基因的转录是相互协调的，任意一种的ｍＲＮＡ转录均能促 进其他ｍＲＮＡ的转录，其中Ｂ链的合成被认为是合成整个 分子的限速步骤【２］。纤维蛋白原分子的构建过程能在多肽 链合成后很快于粗面内质网中完成，之后还需要经过修饰加 工如糖基化、部分磷酸化才能向外分泌。生理情况下，３条 纤维蛋白原多肽链ｍＲＮＡ水平的约占肝细胞总ｍＲＮＡ水平 的３％，而在急性炎症反应时，纤维蛋白原的ｍＲＮＡ水平会 明显升高，这可能与炎症时细胞因子（如白介素６，ＩＬ一６）和 糖皮质激素刺激纤维蛋白原基因表达有关。 ２功能 纤维蛋白原主要功能是使纤维蛋白原转为纤维蛋白。 纤维蛋白原先形成蛋白单体，由纤维蛋白单体聚合纤维蛋 白。纤维蛋白单体的形成是由凝血酶对纤维蛋白原分子的 有限水解作用来实现的。凝血酶生成后即与纤维蛋白原的 底物部位作用，首先裂解纤维蛋白原分子中２条Ａｃｔ链并释 放出一对纤维蛋白肽Ａ（ＦＰＡ），生成纤维蛋白单体Ｉ；其后 凝血酶再裂解纤维蛋白单体１分子中２条ＢＢ链释放出一 对纤维蛋白肽Ｂ（ＦＰＢ），生成纤维蛋白单体Ｉ１；凝血酶对纤 维蛋白原的 链无酶解作用。纤维蛋白单体生成后即开始 聚合。纤维蛋白单体通过分子间Ｅ—Ｄ区和Ｄ—Ｄ区的相 互作用可形成双股的初纤维，当初纤维有足够长度时即进行 边一边非共价连接而形成粗的纤维蛋白纤维。纤维蛋白与 凝血酶有高亲和力，因此纤维蛋白生成后即能吸附凝血酶， 这样不仅有助于局部血凝块的形成，而且可以避免凝血酶向 循环中扩散 。 纤维蛋白原除作为凝血因子Ｉ而直接参与凝血过程外， 还具有其他多种功能，如与血小板膜糖蛋白ｌｉｂ／Ｉｌｉａ结合而介 导血小板聚集反应、参与动脉粥样硬化及肿瘤血行转移等，纤 维蛋白原水平还影响血液粘度，众多研究发现血浆纤维蛋白 原水平升高是心、脑血管血栓性疾病发病的重要危险因素 Ｊ。 ３浓度检测 纤维蛋白原的检测方法多达数十种，按原理分为三类： 热／盐沉淀法，可凝固蛋白法和免疫法。热盐沉淀法将血浆 用ＰＨ６．３、ＫＨ ＰＯ 一ＮａＯＨ缓冲液稀释后，加热５６℃，使纤 维蛋白原凝集而呈现浊度，用比浊法测定其含量。此类方法 是根据蛋白质的理化特性而建立的，特异性不高，影响因素 多，血浆中其他蛋白影响其测定，所以结果往往偏高【９ 。 免疫学法是以被测物质（纤维蛋白原）作为抗原，然 后用免疫动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异 性结合反应来对被检测物质进行定量。它包括免疫扩散法、免 疫电泳酶联免疫吸附实验和免疫比浊等。此法特异性不强，因 为这些方法所针对的纤维蛋白原的抗原决定簇也存在于纤维蛋 白单体、纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰｓ）和异常纤维蛋白原中。 凝块分离双缩脲比色法属于可凝固蛋白法，为《全国临 床检验操作规程》推荐的方法，其原理是于稀释血浆中加入 钙离子，全纤维蛋白原形成纤维蛋白凝块，取出并洗涤后，用 双缩脲法测定蛋白含量。本法与参考方法－－Ｊｏｅｏｂｓｓｏｎ法相 似，只是后者将凝块用高浓度的尿素和／或氢氧化钠等溶解 后，用２８０ｍｍ波长紫外光直接比色计算纤维蛋白原含量，此 参考方法尿素含量很高（４００ｇ／Ｌ），操作极为不便。双缩脲 法是经典的蛋白定量法，但用于纤维蛋白原的测定有明显的 不足之处；首先用的是血清蛋白标准，而非纤维蛋白原的标 准；形成的凝块稀软，不易收集；凝块溶解时间长；洗涤凝块 时不能达到完全除去凝块中残留的其他血浆蛋白。 适于常规工作的纤维蛋白原测定方法为Ｃｌａｕｓｓ法，将凝 血酶加到血浆中，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，使出现凝固。 在有足量的凝血酶时，与不同含量的纤维蛋白原作用，其出 现凝固的时间与纤维蛋白原含量呈负相关。手工法用双对 数计算纸作图，以凝固时间为纵坐标，纤维蛋白原浓度为横 坐标，将各相应浓度的标准管对凝固时间，在图上标出相应 的点并连成直线，制成标准曲线。然后根据患者和质控血浆 所得的凝固时间，在图上查到纤维蛋白含量。如血浆纤维蛋 ［下转第５３页］ 维普资讯 http://www.cqvip.com
哈尔滨医药２００８年第２８卷第１期 肉的疗效观察［Ｊ］．医学理论与实践，２００７，４（２０）：４４Ｏ一４４１． ［７］ 李健鹰，汪贺媛，黄健，等、小剂量长时间【１服罗红霉索治疗常年 性变应性鼻炎的临床研究［Ｊ］．河北医药，２００６，２（２８）：８８—８９． ［Ｊ］．西北国防医学杂志，２００６，２７（１）：４４． ・５３・ ［１３］ 李清，王美玲．罗红 索敛急性过敏ｌ例［Ｊ］．临床医药实践 杂志，２００５，１０（１４）：７９１． ［８］ 刘瑞清，董庆汉，孙希才．香菊片加罗红霉素治疗慢性副鼻窦 炎２８０例疗效观察［Ｊ］．云南中医中药杂志，２００６，２（２７）：２９． ［１４］ 李向平，李电明，郭庭江．罗红惫索致全身性药疹ｌ洌【Ｊ］． 药物流行病学杂志，２００５，５（１４）：２７１． ［１５］ 魏庆华．口服罗红霉素致荨麻疹ｌ例［Ｊ］．中国药师，２００５。ｌ１ （８）：９６３． ［９］ 王道福。菊保文，王莹．罗红霉素为主的三联疗法根除幽门螺 杆菌的效果［Ｊ］．实用医药杂志，２００７，３（２４）：３０９． ［１Ｏ］ 李勇，李万吉，张文国．罗红霉索、甘露醇联合治疗原发性胃 轻瘫患者的疗效观察［Ｊ］．巾华现代内科学杂志，２００６，６ （３）：６４６—６４７． ［１６］ 蔡丽丹，杨品品，漆析友、口服罗红霉索致头痛２测［Ｊ］、中 国医药导报，２００７，９（４）：ｌ１４． ［１７］ 王宏泽，罗智翔，张贡和．口服罗红霉素致龟头部血管性水肿 ［１１］ 唐巧萍．口服罗红霉索引起的过敏反应１例［Ｊ］．中华现代 内科学杂志，２００６，１（３）：１１３． ｌ例［Ｊ］．西南军医，２００６，６（８）：４４． ［１８］ 张永雪．罗红霉索引起脱发１例［Ｊ］．实用临床医学，２００５，２ 【１２］ 陆雪梅，马海林，申长清．罗红霉素分散片致过敏反应１例 （１９）：３． 收稿日期：２００８—０１—０４ 参考文献 ［上接第５Ｏ页］ 白含量大于４ｇ／Ｌ，应稀释血浆后重测，结果乘以稀释倍数。 如血浆纤维蛋白含量低于０．８ｇ／Ｌ，需浆原血浆改为ｌ：２或 １：５稀释，在标准曲线上查得结果后除以５或除以２。仪器 法可用自动或自动凝血仪，按凝血酶时间（１－Ｉ＇）测定法测定。 ［１］Ｓａｍｉａ Ｍｏｒａ。Ｎａｄｅｒ Ｒｉｆａｉ，Ｊｕｌｉｅ Ｅ．Ｂｕｆｉｎｇ，ｅｔ １ａ．Ａｄｄｉｔｉｖｅ Ｖａｌｕｅ ｏｆ ｌｍｍｕｎｏａｓｓａｙ—－Ｍｅａｓｕｒｅｄ Ｆｉｂｆｉｎｏｇｅｎ ａｎｄ Ｈｉｓｈ—－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｃ—－ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｅｖｅｌｓ ｆｏｒ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ Ｉｎｃｉｄｅｎｔ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｅ— ｖｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００６，ｌ１４：３８１—３８７． 可自动打印出结果。一般仪器法比手工法精密度高，尤其是 在含量高时，仪器法比手工法更好。本法的干扰因素主要是 肝素。克劳斯法与另两类方法（沉淀法、免疫法）以及同类 ［２］ 邢宏运，廖小平，肖锋，等．Ｂ一纤维蛋白原基因启动子区单体 型与缺血性脑卒中的关联分析［Ｊ］．国际遗传学杂志，２００６， ２９（５）：３２８—３３５． 其他方法（双缩脲法）相比，简单、快速、准确，这是当前和今 后纤维蛋白原测定和标准化的必然趋势。 ４基因多态性研究 ［３］余元勋，王爱玲，陈森，等．１３纤维蛋白原基因一４５５ｎｔＧ／Ａ多 态性与急性心肌梗死的关系研究［Ｊ］．中国优生与遗传杂志， ２００７，１５（４）：２１—２２． ［４］Ｓａｔｏｍｉ Ｋａｎｉ，Ｆｕｍｉｋｏ Ｔｅｒａｓａｗａ，Ｋａｚｕｙｏｓｈｉ Ｙａｍａｕｃｈｉ，ｅｔ ａ１．Ａ— ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｆｉｂｆｉｎｏｇｅｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ａｔ ３８７Ｈｅ ｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅ ｓｉｄｅ ｃｈａｉｎｏｆ ３８７ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃ—ｔｅｒｍｉｎａｌ ｔａｉｌ ａｒｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｆｏｒ ａｓｓｅｍｂｌｙ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆｆｉｂｆｉｎｏｇｅｎ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｆｏｒｌａｔｅｒａｌ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｏｆｉｂｒｉｌｓ ａｎｄ Ｘｌｌｌａ—－ｃａｔａｌｙｚｅｄ—－ｄｉｍｅｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ 血浆纤维蛋白原升高是遗传和环境因素的共同作用的 结果，某些基因位点多态性被认为与血浆纤维蛋白原水平相 关。目前分析过的纤维蛋白原Ｂｐ基因多态性位点有１Ｏ余 个。纤维蛋白原的基因序列含有众多变异，从而产生个体间 性内切酶酶切位点的不同，为性片断长度多态分析 提供了可能Ｌ１ 。 ［Ｊ］．ＢＬＯＯＤ，２００６，１０８（６）：１８８７—１８９４． ［５］Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｌ．Ｍｕｌｌｉｎ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｏ．Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｐｅｔｅｒ Ｓ．Ｇａｎｌｙ，ｅｔ ａ１． Ｆｉｂｆｉｎｏｇｅｎ Ｈｉｌｌｓｂｏｒｏｎｇｈ：ａ ｎｏｖｅｌ Ｇｌｙ３０９Ａｓｐ ｄｙｓｉｂｒｆｉｎｏｇｅｎ ｗｉｔｈ 在单独分析大血管粥样硬化引起的脑血管病时发现一 ４５５Ａ基因纯合体更多，因此认为Ａ／Ａ基因型更易出现在脑血 ｉｍｐａｉｒｅｄ ｃｌｏｔｔｉｎｇ［Ｊ］．ＢＬＯＯＤ，２００２，９９（１０）：３５９７—３６０１． ［６］ Ｆｅｆｆｒｅｙ Ａ．Ｋａｎｔ，Ｓｕｓａｎ Ｔ．Ｌｏｒｄ，Ｇｅｒａｌｄ Ｒ．Ｃｒａｂｔｒｅｅ．Ｐａｒｔｉｌａ ｍＲＮＡ Ｓ￣ｌｕｅｎｃｅ８ｆｏｒｈｕｍａｎＡａｌｐｈａ，Ｂ ｂｅｔａ，ａｎｄ ｇａｍｍａｆｉｂｒｉｎｏ－ 管病中，能使血浆纤维蛋白原水平提高，从而增加发病率。在一 项冠状动脉粥样硬化患者（ＣＡＤ）的研究中发现，在一４５５Ａ／Ａ ｇｅｎ ｃｈａｉｎｓ：ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｒｃｃ Ｎａｉｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，１９８３，８０（１３）：３９５３—７． 基因型患者较一４５５Ｇ／Ａ、一４５５Ｇ／Ｇ基因型患者ＣＡＤ病程进 展快，一４５５Ｇ／Ａ多态性与ＣＡＤ的进程有关。推测可能一４５５Ａ 等位基因引起了更强烈的纤维蛋白原急性期反应，导致更高的 血浆ＦＩＢ水平，形成ＣＡＤ进展的病理学基础。 研究显示：ＴＴ基因型组较Ｃ／Ｔ、Ｃ／Ｃ基因型组颈动脉粥 ［７］李家增，贺石林，王鸿利．血栓病学［Ｍ］．北京：科学出版社， １９９８．３８—４０． ［８］Ｍａｒｇａｒｅｔ Ａ．Ｋｅｌｌｅｒ，Ｊｏｓｅ Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｃ．Ｂａｒａｄｅｔ，ｅｔ ａ１． Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ａ ｈｙｐｏｄｙｓｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎｅｍｉａ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ａｂｎｏｒｍａｌ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｆｉｎｏｇｅｎ ｈｙｐｅｒｃａｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｕｅ ｔｏ 样硬化的程度重，其危险性增加了６．１７倍，与ＦＩＢ浓度、吸 烟摄人量无关。进而推论一１４８Ｔ／Ｔ基因型与无症状的颈动 脉粥样硬化有关，一１４８Ｔ／Ｔ基因型和ＦＩＢ水平是除年龄、载 ￥３７８Ｐ ｍｕｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢＬＯＯＤ，２００５，１０５（８）：３１６２—３１６８． ［９］彭黎明，曾着黎．血浆纤维蛋白原测定方法［Ｊ］．检验医学， ２００４，１９（２）：１６３—１６６． 脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）、吸烟摄入量和心血管危险因素外与颈动 脉粥样硬化相关的预示因素；Ｆｇ启动子区一１４８Ｔ／Ｔ基 ［１Ｏ］ 刘蕊，段樱．州国产凝血酶测定血浆纤维蛋白原方法与评价 ［Ｊ］．临床检验杂志，２０００，１８（１）：２８—２９． ［１１］史文斌，郑妙卢，侯进军．四种血浆纤维蛋白原测定方法比 较［Ｊ］．青海医药杂志，２００４，３４（２）：４１—４２． ［１２］程烽，朱忠勇 ５种纤维蛋白原测定方法比较［Ｊ］．临床检验 杂志，２０００，１８（１）：ｌ２一ｌ４． 因型是中老年人颈动脉粥样硬化的遗传性危险因素Ｌｌ 。 ５总结 血浆纤维蛋白原水平为心脑血管病的危险因素，其 浓度测定成为常规检测项目中重要一项。随着相关技术的 不断发展，全自动血凝分析仪以其简单、快速、准确的特点， 是今后检测纤维蛋白原水平的必然趋势。同时随着分子生 物学诊断技术飞速发展，纤维蛋白原基因多态性检测不仅只 限于一些科研目的及前瞻性研究，必将走向临床成为常规的 检测项目。 ［１３ Ｊ 刘蓉，李家增，穆红．纤维蛋白原基因多态性与缺ｍ性一Ｃ憎血管 病的关系［Ｊ］．中华血液学杂志，２００２，２３（９）：４５３—４５６． ［１４］ 杨美荣，张海霞，王英曼．纤维蛋白原基因多态性及纤维蛋 白原水平与心脑血管病的关系［Ｊ］．中国煤炭工业医学杂 志。２００７，ｌＯ｛２）：１１６—１１７． 收稿日期：２０ｏ７一Ｉｌ一２ｌ
