ＣＪＣＭ中医临床研究２０１０年ＶＯＬ．（２）ＮＯ．７ ．．７５．． 大血藤的最佳提取工艺研究 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｓｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ 张海龙 李光喜 王淑美。梁生旺 （１．河南中医学院，河南 郑州，４５０００８ ２．广东药学院，广东广州，５１０００６） 中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４．７８６０（２０１０）０７．００７５．０２ 【摘要】 目的：建立大血藤的最佳提取方法。方法：利用ＨＰＬＣ法，比较超声提取、回流提取、不同 溶媒、不同提取时间对绿原酸提取率的影响。结果：５０％甲醇，回流提取１．５ｈ为最佳条件。结论：该方法稳定、 重现性好，可作为大血藤的最佳提取工艺。 【关键词】大血藤；ＨＰＬＣ；绿原酸；回流提取法 ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｎｓｔｒｕ—ｕｍ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｒｅｓｕｌｔ：ｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｒｅ ａｄｄｅｄ ５０％ｍｅｔｈａｎｏ１．ｅｘｔｒａｃｔｅｄ １．５ ｈ ｂｙ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｔａｂｉｌｅ，ｇｏｏｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｏｆ ｈｔｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ；ＨＰＬＣ；Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ；ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ 大血藤为木通科植物大血藤Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ 图２。 （Ｏｌｉｖ．）Ｒｅｈｄ．ｅｔ Ｗｉｌｓ的干燥藤茎…。主要含黄酮、有 机酸、生物碱、鞣质等化合物 Ｊ，具有抗氧化，防癌， 抗病毒及抑菌等作用，常用于治疗妇科炎症、消化道 溃疡及各种肿瘤［４－５］等。然而，目前尚未见ＨＰＬＣ法对 其绿原酸含量测定的报道，故本研究对其提取方法进 行研究并建立其含量测定方法，为进一步开发大血藤 药材提供基础资料。 １仪器与试药 大连依利特高效液相色谱仪（ＥＣ２０００），ＵＶ２３０ 图１样品色谱图 ＋紫外．可见检测器，ＫＱ３２００ＶＤＢ型超声波清洗器（昆 山市超声仪器有限公司），ＣＰ２２５Ｄ型分析天平 （Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ），绿原酸对照品（中国药品生物制品检定 所，批号：１１０７５３—２００４１３）；乙腈为色谱纯，其余试 剂为分析纯。大血藤购自广州致信药业（批号：０９０９１０ ），经鉴定为Ｓａｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａ的藤茎。 ２方法与结果 ２．１色谱条件 大连依利特Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ ＯＤＳ—ＢＰ色谱柱（２００×４．６ 图２标准品色谱图（１为绿原酸） 衄，５ ｌａｍ），乙腈．０．４％磷酸水（１０：９０）为流动相； ２．２对照品溶液的制备 柱温３Ｏ℃，流速：１．ＯＯｍｌ／ｍｉｎ；检测波长３２７ｎｍ。理 精密称取经五氧化二磷减压干燥３６小时的绿原 论塔板数以绿原酸峰计算应不低于３０００。结果见图１、 酸对照品２０．６８ｍｇ，置ｌＯＯｒｎｌ容量瓶中，加５０％甲醇 ．．７６．． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１０年ＶＯＬ．（２）ＮＯ．７ 使溶解稀释至刻度，摇匀，即得（每ｌｍｌ中含绿原酸 ２１６ ｕ ｇ）。 精密吸取样品溶液及对照品溶液各２０ ｕ ｌ，按２．１ 项下色谱条件进样，计算即得。 ２．５．２提取溶媒的选择 ２．３标准曲线的绘制 分别取２．２项下溶液２、４、８、ｌ２、１６、２０ｍｌ， ５０％甲醇定容到２０ｍｌ。按２．１项下色谱条件各进样， 记录峰面积，以峰面积积分值（Ｙ）为纵坐标，浓度 为横坐标（Ｘ，ｍｇ／ｍ１），绘制标准曲线，结果表明，绿 原酸在０．２０６８ｍｇ￣２．０６８ｍｇ范围内，峰面积和浓度呈 良好线性，回归方程为Ｙ＝６５７５９７１．２Ｘ一２２３６２．５，Ｙ －－取大血藤粗粉分别精密加入３０％、５０％、７０％甲 醇提取，按２．１项下色谱条件进样测定绿原酸的含量， 结果见表１。结果表明，甲醇含量高于５０％时，对结 果无显著影响，故选５０％甲醇作为提取溶媒。 表１不同洛剂提取绿原酸含量的比较（％） ０．９９９７（疗＝６）。 ２．４精密度试验 精密吸取上述绿原酸对照品溶液２０ ｌ－ｔ １，按２．１项 目下色谱条件，连续进样５次，测定峰面积，绿原酸 峰面积的平均值为９０２００１６．３７５，ＲＳＤ为１．６２％，表 明仪器精密度良好。 ２．５提取工艺的优选 ２．５．１样品测定 表２ 不同提取方法对绿原酸含量的影响 ２．５．３不同提取方法的比较 以５０％甲醇分别超声及加热回流提取等量药材， 结果见表２。由结果可看出，回流提取得率明显高于 超声提取法，故确定回流提取法对药材进行提取。 ２．５．４提取时间的确定 别为甲醇一水，乙腈．水系统，乙腈．０．４％磷酸水系统， 结果后者分离最好，故选择其流动相为乙腈一０．４％磷酸 水。 精密称取四份药材粗粉各约０．５ｇ，置于带塞锥形 瓶中，分别精密加入５０％甲醇２５ｍｌ，精密称重，静置 ３０ｍｉｎ后，分别回流提取１ｈ、】．５ｈ、２ｈ、２．５ｈ，放冷， 再称重，５０％甲醇补足减失重量，摇匀，过滤，取续 ３．４试验中对提取溶媒乙醇进行了考察，效果不如甲 醇，故选甲醇作为溶媒。 参考文献： 【１】国家药典委员会．中华人民共和国药典一部［Ｓ】．北京：化学工业出版社， ２００５．１５ 滤液，得样品溶液，按２．１项下色谱条件进行含量测 定，并计算含量，结果分别为：４．２６％、４．５０％、４．５１％、 ４．３６％。结果表明，回流时间高于１．５ｈ后，对结果影 响不大，故确定回流时间为１．５ｈ。 由以上结果表明，最佳提取条件为：５０％甲醇回 流提取１．５ｈ。 ２．６验证实验：精密称取三份药材粗粉各０．５ｇ，按最 佳条件进行提取及２．１项下色谱条件进行验证试验， 【２】倪 ：峰，傅承新，吴平．大血藤化学成分及药学研究进展【Ｊ】坤国野生植物 资源，２００４，２３（４）：８—１０ 苗抗立，张建，王飞音，等红藤化学成分的研究【Ｊ］．中草药，１９９５，２６．４）：１７１． １７３ ［４Ｊ毛水春，顾谦群，崔承彬，等中药大血藤中酚类化学成分及其抗肿瘤活性 ｆＪ】中国药物化学杂，２００４，１４（６）：３２６．３３０ 计算含量，得结果为：４．５０％、４．４８％、４．５】％， ＲＳＤ＝０．３４％。表明工艺稳定，可行。 ［５】全国ｒ”草药 ：编编写组．全国中草药汇编［Ｍ】 Ｅ京：人民卫生出版社， ｌ９７５：５６—５７ ３讨论 ３．１在回流提取时，时间过久所测含量反而偏低，可 作者简介： 张海龙（１９８３．），男，河南遂平人，在读研究生，研究方向：中药质 量控制研究。 能和绿原酸的水解有关。 ３．２本研究证明，回流提取法对大血藤中的绿原酸提 取率远高于超声法。因２００５版《中国药典》中没有对 其含量测定进行收录，故可为药典的修订提供参考。 通讯作者：李光喜（１９６３一），男，硕士，讲师，长期从事药物分析的 教学科研工作。 ３＿３在实验过程中，本研究对流动相进行了考察，分 编号：Ｙ－１００３１５５８（修回：２０１０．ｏ４ １９）