特产研究 Ｓｐｅｃｉａｌ Ｗｉｌｄ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６ｌ 文章编号：１Ｏ０１－４７２１（２０１０）０３—００６１—０４ 犬瘟热病毒分离技术研究进展 闫如勋１．。， 赵建军 ， 闰喜军 麟， 吴威 ， （１＿中国农业科学院特产研究所，吉林吉林１３２１０９；２．吉林特研生物技术有限责任公司，长春１３０１２２： ３．江苏科技大学生物与环境工程学院，江苏镇江２１２００３） 摘要：由犬瘟热病毒感染引发的犬瘟热是多种动物共患的重要传染疾病。病毒分离技术是对该疾病诊断和病原研究方面的必 要手段和基础。目前，多种不同动物来源的原代细胞、传代细胞及稳定表达犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子的细胞 系在犬瘟热病毒分离研究巾均得到广泛应用。综述当前犬瘟热病毒分离技术的研究进展，并对不同分离方法优缺点进行比较 分析。 关键词：犬瘟热病毒；信号淋巴细胞激活因子；病毒分离 中图分类号：Ｑ９３９．４ 文献标识码：Ａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ Ｃａｎｉｎｅ Ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ Ｖｉｒｕｓ ＹＡＮ Ｒｕ－ｘｕｎ ～，ＺＨＡＯ Ｊｉａｎ－ｊｕｎ ，ＹＡＮ Ｘｉ＿ｊｕｎ ’２※，ＷＵ Ｗｅｉ ， （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｗｉｌｄ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ ａｎｄ Ｐｌａｎｔｓ，ＣＡＡＳ，Ｊｉｎｌｉｎ １ ３２ １ ０９，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｊｉｌｉｎ Ｔｅｙａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１２２，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２ １ ２００３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｓ ａｎ ａｃｕｔｅ，ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｈａｔ ｃａｎ ｉｎｆｅｃｔ ｍａｎｙ ｋｉｎｄｓ ｏｆａｎｉｍａｌｓ． Ｖｉｒａｌ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｓ ｔｈｅ ｎｅｃｅｓｓｉｔｙ ａｎｄ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ．Ｉｔ ｉｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｎｉｍａｌｓ，ｐａｓｓａｇｅ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ａｒｃ ｓｔａｂｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃ— ｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｒｅ ｂｅｉｎｇ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ＣＤＶ．Ｔｈｉｓ ｒｅｖｉｅｗ ｍａｉｎｌｙ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ＣＤＶ ｉｓｏ—— ｌａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｍｅｒｉｔｓ ａｎｄ ｄｅｍｅｒｉｔｓ ｏｆ ｔｈｅｍ． Ｋｅｙ ＷＯｒｄ：Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｕｒｓ；ＳＬＡＭ；Ｖｉｕｒｓ ｉｓｏｌａｒ／ｏｎ 犬瘟热（Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ，ＣＤ）是由犬瘟热病毒 高发病率和死亡率。Ｌａｉｄｌａｗ和Ｄｕｎｃａｎ（１９２６年）利用完 （Ｃａｎｉｎｅ Ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ Ｖｉｅｒｓ，ＣＤＶ）引起的一种犬科和鼬科 全隔离饲养的犬和易感性极高的雪貂进行人工感染试 等动物共患的高度接触性传染病Ｉ”，其引起感染动物较 验，证实了本病的病原为病毒。在我国，随着近几年来 收稿日期：２０１０—０１—２６ 基金项目：农业部科技成果转化资金项目（２００９ＧＢ２Ｂ １ ０００８４） 作者简介：闫如勋（１９８４一），男，河北省邢台人，在渎硕士，从事犬瘟热病毒分子生物学方向研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｖａｎｍ ｕｔｔ１０６＠１６３．ｃ０ ． 通讯作者：闫喜军，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙａｎｘｉｊｌＪｎｇｍｐ＠１６３．ｃｏｎ． ６２ 特 产 研 究 ２０１０年第３期 军犬、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅度增加以 及异地交流的增多，犬瘟热在犬中的发病率和致死率均 有升高的趋势，而且临床症状也与以往的表现有所不同 闭。泛的ＣＤＶ受体。Ｆｕｊｉｔａ等（２００７）用重构ＣＤＶ成功感染 不表达ＳＬＡＭ的２９３细胞（人胚上皮细胞），感染不能 被特异的抗人ＳＬＡＭ分子的单抗阻断，但能被硫酸乙 酰肝素（Ｈｓ）类似物肝素阻断埘。ＨＳ是一种多聚阴离子 碳水化合物，广泛存在于真核细胞膜和细胞基质。研究 表明，副流感病毒、腺病毒Ⅱ型、伪狂犬病毒等均能利用 同时，我国大熊猫等珍稀野生动物及猕猴等灵长类动 物也感染ＣＤＶ１３：ｔ，使ＣＤＶ的致病地位日益突出。但由 于犬瘟热病毒（尤其强毒株）在体外培养时缺乏敏感且 适用的细胞或细胞系，造成犬瘟热病毒分离成功率较 低（一般低于２０％），其严重阻碍了对犬瘟热病毒病原 ＨＳ作为病毒的受体或共受体入侵细胞㈣。研究表明，Ｈ 蛋白和Ｆ蛋白是病毒侵染细胞所必需的。ＣＤＶ的Ｈ蛋 学生物学及致病机制方面的研究。近来，犬瘟热病毒受 体一信号淋巴细胞激活因子（ｓＬＡＭ）的发现及应用 ， 为犬瘟热病毒体外分离和研究提供了新的方法。 １ 犬瘟热病毒分子特性及感染受体 ＣＤＶ属于副黏病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）麻疹病毒 属（Ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ）的不分节片的负链ＲＮＡ病毒［９１。ＣＤＶ 基因组ＲＮＡ，呈线性排列，全长１５ ６９０ ｎｔ，基因组成按 ３’端到５’顺序依次为Ｎ—Ｐ—Ｍ—Ｆ—Ｈ—Ｌ。ＣＤＶ粒子呈多 形性，多数为球形，直径在１２０～３３０ ｎｍ之间，蔗糖中的 浮力密度为１．１８０～１．２１８，峰值为１．１９５ｔ￣Ｏｌ。构成病毒粒 子的结构蛋白质有核衣壳蛋白（Ｎ）、磷蛋白ｆＰ）、大蛋白 （Ｌ）、基质膜蛋白（Ｍ）、融合蛋白（Ｆ）、附着或血凝素蛋 白（Ｈ）［１Ｏｌ。负链ＲＮＡ被一个螺旋状的核衣壳包裹，核衣 壳主要是由Ｎ蛋白组成，Ｐ蛋白和Ｌ蛋白也是核衣壳 的成分，后两者具有聚合酶活性，Ｐ、Ｎ和Ｌ为髓芯蛋 白，与ＲＮＡ转录和复制有关…１。核衣壳由囊膜包裹，其 内部为Ｍ蛋白，Ｍ蛋白在病毒囊膜内侧与核衣壳的连 接中起桥梁作用。囊膜表面分布有Ｈ和Ｆ两种糖蛋白 组成的纤突，二者在病毒的吸附和侵入宿主细胞过程 中起作用，Ｈ蛋白起细胞趋向作用，而Ｆ蛋白是融合过 程中所必需的，二者缺一不可【１２１，具有中和作用的抗Ｈ 蛋白抗体和抑制细胞融合的抗Ｆ蛋白抗体在抗ＣＤＶ 感染的机制中发挥重要作用【１Ｉ。 犬瘟热病毒识别的细胞受体一信号淋巴细胞激活 因子（ＳＬＡＭ）是近些年才被证实为麻疹病毒属病毒的 识别受体【５Ｉ。该受体是一种分布在细胞膜上的糖蛋白， 主要分布于未成熟的胸腺细胞、记忆Ｔ细胞、部分Ｂ细 胞、巨嗜细胞以及成熟的树突状细胞『１ Ｉ。经抗原或 素刺激后所有的Ｂ细胞和Ｔ细胞都能表达ＳＬＡＭｔ“】。因 此，ＳＬＡＭ主要决定了犬瘟热病毒的组织嗜性。ＣＤＶ以 ＳＬＡＭ作为感染的受体，很好地解释了病毒在细胞内组 织定位及其感染的淋巴细胞嗜性和造成感染宿主的机 体免疫抑制等病理现象，但却很难解释ＣＤＶ在感染宿 主体内肺脏、肝脏、胃肠道等非表达ＳＬＡＭ的组织细胞 大量分布的现象。很可能在细胞上还存在一种分布广 白和Ｆ蛋白都能与固化肝素（ＨＳ的类似物）结合Ｉ ３１。ＨＳ 是否为ＣＤＶ的受体有待进一步证实，但如果ＨＳ为 ＣＤＶ的第二受体能很好解释ＣＤＶ感染宿主的非淋巴 细胞。 ２ 犬瘟热流行病学 ＣＤ是由该病毒引起的一种急性、高度接触传染性 疾病 。该病的ｌ 床症状为发热、流鼻涕、肺炎、厌食、结 膜炎、腹泻、淋巴球减少症和脑炎Ｉ９ｊ。报道证实，野毒株 Ａ７５／１７一ＣＤＶ持续感染中枢神经系统能造成慢性髓鞘 脱失病。患病动物在康复后还易留有麻痹、抽搐、癫痫 样发作等后遗症ｌｌ６１。 ＣＤ可引起大批犬、狐、貉和貂等动物发病，是当前 养犬业和毛皮动物养殖业危害最大的疫病旧，经常引起 大批犬、貂、狐等动物发病，病死率３０％～８０％，雪貂高 达１００ Ｏ￣１１８１。犬瘟热主要危害断奶后失去母源抗体的幼 兽。本病多发生于寒冷季节（１０月到翌年２月），但现在 由于各个地方交流频繁，这种周期性不明显，常年发 生。因此，犬瘟热的防制显得尤为重要。 ３ 犬瘟热病毒分离技术 病毒分离技术是病原诊断及病毒研究的基础。 ＣＤＶ负链ＲＮＡ病毒抵抗力不强，对热、干燥、紫外线和 有机溶剂敏感，易被日光、酒精、乙醚、甲醛与煤酚皂等 灭活Ｉ嘲。在炎热季节，ＣＤＶ在犬群中不能长期存活，这 可能是犬瘟热多流行于冬、春寒冷季节的原因。ＣＤＶ不 易存活，给病毒的分离带来了不便。此外，病料采集的 部位、时间、样品处理、发病动物的抗病毒抗体水平等 因素对病毒分离成功与否也有一定的影响，但最主要 的是分离病毒的细胞是否敏感和有效。因此，选择适合 培养的细胞是关键。目前，分离犬瘟热病毒用的组织细 胞主要分为原代细胞和传代细胞系两大类Ｉｌ９１。 ３．１原代细胞 分离ＣＤＶ的原代细胞有犬或貂的肺和腹腔巨噬细 胞、肾细胞、胚胎细胞、外周血淋巴细胞、Ｔ淋巴细胞、犬 脑细胞、犊牛的肾细胞和Ｔ淋巴细胞、牛胚胎肺细胞和 鸡胚成纤维细胞（ｃＥＦ）嘞。鸡胚的绒膜囊可以用于少量 第３期 闫如勋，等：犬瘟热病毒分离技术研究进展 ６３ 病毒的分离，但要求几周连续接新的鸡胚，才可以产生 明显的细胞病变（ＣＰＥ），并Ｆ］ｌ成本比较高不适合生产１２ １。 用雪貂腹腔巨噬细胞成功分离到了ＣＤＶｍｌ。最有效的 生长性能。结果表明，该细胞系能用于快速分离不同基 因型的ＣＤＶ。稳定表达ＳＬＡＭ的细胞系分离ＣＤＶ，克 服了原代细胞传代次数的同时还具有安全的优 方法是用幼犬或雪貂的肺巨噬细胞进行培养。Ｖａｎｔｓｉｓｆ２３１ 用被感染动物的肺巨噬细胞直接培养，比较容易地分 离出该病毒。用原代细胞分离ＣＤＶ的优点是能快速的 分离并且很好的保持病毒的毒力特性，但是原代细胞 传代次数较少，对病毒培养不利。 ３－２传代细胞 点。构建的细胞系能很好的分离病毒Ｆｊｌ产生比传代细 胞明显的ＣＰＥ，而且该细胞系分离得到的病毒的毒力 不会丧失Ｉ６ｔ７／。 ４ 结语 原代细胞能快速地从病料中分离得到ＣＤＶ且能 保持毒株的病原性，但因传代次数的并不适合用 此方法研究病毒。现在，分离ＣＤＶ常用的传代细胞系 有Ｖｅｒｏ、Ｂ９５ａ和稳定表达易感动物ＳＬＡＭ的细胞系。 分离ＣＤＶ的传代细胞系有犬肾细胞系（ＭＤＣＫ）、 猫胚胎细胞系（ＦＥ）、乳仓鼠胎肾细胞系（ＢＨＫ） 、非洲 绿猴肾细胞系Ｖｅｒｏ）及其克隆株（ｖｅｍ Ｅ６）、ＢＧＭＫ细胞 系、绒猴Ｂ淋巴细胞系（Ｂ９５ａ）、人子宫颈癌细胞系 （Ｈｅｌａ）、人喉头癌细胞系（ＨＥＰ一２）、ＣＶ—ｌ（Ｔｃ７ ｃｌｏｎｅ）细 但当１株病毒适应Ｖｅｒｏ细胞系后，很快的会导致致病 性和侵染性的丧失［３０１。用Ｂ９５ａ细胞分离ＣＤＶ过程中对 实验人员存在安全隐患。现在的ＣＤＶ的分离培养方法 极大了对该病毒的病毒学、血清学和病理学的研 究。用表达易感动物ＳＬＡＭ的传代细胞系分离ＣＤＶ能 快速地产生ＣＰＥ，且分离敏感性比Ｂ９５ａ高 ，该方法将 成为ＣＤＶ分离方法的发展趋势。构建稳定表达犬瘟热 受体的细胞系后可以更加深人的了解病毒感染的分子 机制，对犬瘟热的防控具有重要的意义。 参考文献 【１ Ｊ殷震，刘景华．动物病毒学（第２版）【ＭＪ．北京：科学出版 礼，１９９７：７３６—７６７． 胞系、Ｂｓｃ一１细胞系、兔肾细胞系（ＲＫ１３）、ＢＤ细胞系等。 近年来，用Ｖｅｒｏ细胞分离培养ＣＤＶ很有希望，被认为 是首选细胞圆。已有用Ｖｅｒｏ和ＭＤＣＫ成功分离出ＣＤＶ 的报道［２０１。 传代细胞虽然克服了传代次数的，能较好地 分离得到ＣＤＶ，但是由于传代细胞本身缺少ＣＤＶ的主 要受体一ｓＬＡＭ闱，ＣＤＶ不能与之很好地结合，从而 了用传代细胞对犬瘟热的分离与培养。在ＣＤＶ的体外 研究中，习惯上用ＭＤＣＫ细胞和Ｖｅｒｏ细胞 ，但这些细 胞并不表达ＣＤＶ感染的受体ＳＬＡＭ，囚此分离得到的 ＣＤＶ，短时间不出现明显的ＣＰＥＩ６１。同时有报道称，用 １２］遇秀玲，田克恭，吴娜．犬瘟热病毒的分离鉴定、敛病特点 和单克隆抗体的研究ＩＪＪ＿动物医学进展，１９９９，２０（３）：１７８ Ｖｅｒｏ细胞培养的麻疹病毒使其致病性丢失，而用绒猴 Ｂ淋巴细胞系（Ｂ９５ａ）培养的始终保持其毒力Ｉ １。Ｂ９５ａ １７９． 细胞经ＥＢ病毒转化的绒猴淋巴母细胞，该细胞表达 ＳＬＡＭ基因，用该细胞分离培养ＣＤＶ易出现明显的 ＣＰＥ，为研究ＣＤＶ提供了好的方法。但Ｂ９５ａ细胞在培 养过程中会分泌少量的ＥＢ病毒，不能用于新疫苗的研 制，而因其对实验人员存在潜在的危险，所以实验室的 等级要求比较高。 ３．４稳定表达ＳＬＡＭ的细胞系 【３］Ｓｕｎ，Ｚ．Ｎａｔｕｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｈａｎｄ－ ｆｅｅｄｉｎｇ Ｒｈｅｓｕｓ ｍｏｎｋｅｙｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，１４１ （３－４）：３７４—３７８． 【４Ｊ Ｙｏｓｈｉｋａｗａ．Ｙ．，Ｏｃｈｉｋｕｂｏ．Ｆ．，Ｍａｔｓｕｂａｒａ．Ｙ．，ｅｔ ａ１．Ｎａｔｕｒａｌ ｉｎ－ ｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ａ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｍｏｎｋｅｙ （Ｍａｃａｃａ ｆｕｓｃａｔａ）［ＪＪ．Ｖｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１ ９８９，２０：１ ９３—２０５． 【５Ｊ Ｔａｔｓｕｏ．Ｈ．，Ｏｎｏ．Ｎ．，Ｙａｎａｇｉ．Ｙ．Ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｕｓｅｓｒ ＵＳｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（ＣＤ１５０）ａｓ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ 构建稳定表达ＳＬＡＭ的细胞系是一种快速、敏感 地分离ＣＤＶ的一种方法。麻疹病毒和ＣＤＶ同属于麻 疹病毒属，两者具有很近的亲缘关系。稳定表达ＳＬＡＭ 的Ｖｅｒｏ细胞分离麻疹病毒的敏感性优于传统上认为 【Ｊ Ｊ．Ｊ．Ｖｉｏｌ，ｒ２００１，７５：５８４２—５８５０． 【６Ｊ Ｎａｋａｎｏ．Ｈ，，Ｋａｍｅｏ．Ｙ．，Ａｎｄｏｈ．Ｋ．，ｅｔ ａ１．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｃａ－ ｎｉｎｅ ａｎｄ ｆｅｌｉｎｅ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃａｎｉｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｆｏｒ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｕｓｒ ｓｔｕｄｙ【Ｊ】，Ｖｅｔ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，１３１（１—２）：１７９—１８３． 敏感的Ｂ９５ａ细胞已被证实［２８．２９Ｉ。Ｎａｋａｎｏ等 ｌ用ＣＲＦＫ和 Ａ一７２细胞分别构建稳定表达ＳＬＡＭ的细胞系，在分离 ＣＤＶ病毒方面敏感性远优于没有表达ＳＬＡＭ的ＣＲＦＫ ［７Ｊ Ｌａｎ．ＮＴ．，Ｙａｍｍｇｕｃｈｉ．Ｒ．，Ｕｃｈｉｄａ．Ｋ．，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｐｍ— ｉｌｅｓ ｏｆ Ｆｈｒｅｅ Ｔｙｐｅ ｏｆ Ｃａｎｉｆｎｅ Ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ Ｖｉｒｕｓ ｏｎ Ｖｅｒｏ Ｃｅｌｌｓ 和Ａ一７２细胞。Ｌａｎ等ｎＩ用构建的稳定表达犬ｓＬＡＭ的 Ｖｅｒｏ细胞系Ｖｅｒｏ—ＤＳＴ，来探索不同基因型的ＣＤＶ的 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｃａｎｉｎｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ 【ＪＪ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ，２００７，６７（５）：４９１—４９５． 【８】 Ｓｅｋｉ．Ｆ．，Ｏｎｏ．Ｎ．，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ．Ｒ．，Ｙａｎａｇｉ．Ｙ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｉｓｏｌａ— 特 产 研 究 ２０１０年第３期 ｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｖｅｔｏ ｃｅＵｓ ｅｘ— （４）：９９—１０２． ｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃａｎｉｎｅ ＳＬＡＭ（ＣＤｌ５０）ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｍａｒ— 【２ｏ］鲜思美，徐在－ ，张登祥，等．犬瘟热病毒的分离【Ｊ】．山东 农业生物学报，２００５，２４（５）：３８６—３８９． ［２１】Ａｐｐｅ１．Ｍ．Ｊ．Ｇ．，Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ．Ｊ．Ｈ．Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｖｉ－ ｏ１．Ｍｏｎｏｇｒ，１９７２，１１：１—９６．ｒ ｍｏｓｅｔ Ｂ９５ａ ｃｅｎｓ０］．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，２００３，７７：９９４３—９９５０． 【９］陆承平．兽医微生物学．第三版【Ｍ】．北京：中国农业出版社， ２００１：５２０—５２６． 【１ ｏ】乔军．犬瘟热病毒分子生物学特征研究进展【ＪＪ．塔里木农 垦大学学报，２００２，１４（１）：３９—４４． 【１１］Ｙａｎａｇｉ．Ｙ．，Ｔａｋｅｄａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｏｈｎｏ．Ｓ．Ｍｅａｓｌｅｓ ｖｉｒｕｓ：ｃｅｌｌｕｌａｒ 【２２】Ｗｈｅｔｓｔｏｎｅ．Ｃ．Ａ．，Ｂｕｎｎ．Ｔ．Ｏ．，Ｇｏｕｒｌａｙ．Ｊ．Ａ．Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｅｒｒｅｔ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ【Ｊ］．Ｃｏｒｕｅｌｌ Ｖｅｔ，１９８１，７１：１４４—１４８． ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｔｒｏｐｉｓｍ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ【ＪＪ．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｅｌｒ，２００６， ８７：２７６７—２７７９． 【２３】Ｎ Ｈｉｒａｙａｍａ．犬瘟热病毒株之间的生物学和分子学特性 比较［Ｊ】．国外兽医学一畜禽传染病，１９８７，７（２）：２７—２９． 【２４】Ｓｕｌｔｎ．ａＳ．，Ｌａｎ．ＮＴ．，Ｕｅｄａ…Ｔ ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｓｉａｎ 【１２】Ｐｈｉｌｉｐｐｅ Ｐｌａｔｔｅｔ，Ｊｅａｎ－Ｐａｕｌ Ｒｉｖａｌｓ，Ｂｅｎｏｉｔ Ｚｕｂｅｒ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｓ ａ ｍａｊｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ【Ｊ】．Ｖｉｒｏｌ，２００５，３３７：３ １ ２ －ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｕｓ（ＣＤＶ）ｒｉｎ ｈａｍｓｔｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ 【Ｎ／ＯＵ．Ａｃｔａ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ，（２００９—１０—１６）［２０１０— ０３—１６］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｃｔｏｖｅｔｓｃａｎｄ．ｃｏｍ／ｅｏｎｔｅｎｔ１５１／１／３８． ３２６． 【１ ３】Ｆｕｊｉｔａ．Ｋ．，Ｍｉｕｒａ．Ｒ．，Ｙｏｎｅｄａ．Ｍ．，ｅｔ ａ１．Ｈｏｓｔ ｒａｎｇｅ ａｎｄ ｒｅ— ｃｅｐｔｏｒ ｕｔｉｈｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｒｅ－ ｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｖｉｒｕｓｅｓ：Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｒｉｎ—ｌｉｋｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎ 【２５】Ｗｒｉｇｈｔ－ＮＧ，Ｃｏｎｗｅｌｌ ＨＪＣ．Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｃｈｎｉｃｌａ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ【Ｊ】．Ｖｅｔ Ｒｅｃ，１９７４，９４： ８６－９２． ＣＤＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｖｉｍｌ，２００７，３５９：３２４—３３５． 【２６】Ｌｅｄｎｉｃｋｙ．Ｊ．Ａ．，Ｍｅｅｈａｎ．Ｔ．Ｐ．，Ｋｉｎｓｅ１．Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａ１．２００４．Ｅｆ－ ￣ｅｔｉｖｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ＭＤＣＫ．ＭＶ１ Ｌｕ ａｎｄ Ｖｅｒｏ ｃｅｎｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｎｕｅｌｅｏｆｉｄｅ ｓｅ— ｑｕｅｎｃｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｅｎｔｉｒｅ ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ 【ｌ４】独军政，常会芸，高闪电，等．硫酸乙酰肝素与口蹄疫病 毒感染【ＪＪ．微生物学通报，２００８，３５（４）：５７７—５８１． 【１５Ｊ Ｓｉｄｈｕ ＭＳ，Ｈｕｓａｒ Ｗ，Ｃｏｏｋ ＳＤ，ｅｔ ａ１．Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｔｅｒ— ｍｉｎａｌ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ｎｏｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｄｉｎｇ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕ－ ｎｄ ｉｎ ｓｕｂｇｅｎｏｍｉａｃ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｃｅｓ ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｔｉｒｅ ＣＤＶ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ】．Ｖ— ｉｒｏｌｏｇｙ，１９９３，１９３（１）：６６－７２． ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｏ１ｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００４，１１８：１４７—１５７． 【２７】Ｐｌａｔｔｅｔ…Ｐ Ｚｗｅｉｆｅ１．Ｃ．，Ｗｉｅｄｅｒｋｅｈｒ．Ｃ．，ｅｔ ａ１．２００４．Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｅｎｈａｎ－ 【１ ６】Ｂｏｌｌｏ．Ｅ．，Ｚｕｒｂｒｉｇｇｅｎ．Ａ．，Ｖａｎｄｅｖｅｌｄｅ．Ｍ．，ｅｔ ａ１．Ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓ－ ｔｅｍｐｅｒ ｖｉｕｓ ｃｌｒｅａｒａｎｃｅ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｅｍｙｅｌｉｎａ－ ｃｅｄ ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｃｌｏｎｅｄ ｃＤＮＡ ＩＪ】．Ｖｉｒｕｓ ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１９８６。７２（１）：６９－７３． Ｒｅｓ，２００４，１０１（２）：１４７—１５３． 【１ ７】Ｊｉａｎ－ｊｕｎ Ｚｈａｏ，Ｘｉ－ｊｕｎ Ｙａｎ，Ｘｉｕ－ｌｉ Ｃｈａｉ，ｅｔ ａ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｇｅｎｅ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｆｏｘｅｓ，ｒａｃｃｏｏｎ ｄｏｇｓ ａｎｄ ｍｉｎｋｓ 【２８】刘冷，郑焕英，郭雪，等．Ｖｅｒｏ／Ｓｌａｍ细胞在麻疹病毒分离 中的应用【ＪＪ．中国计划免疫，２００６，１２（５）：３５３—３５６． 【２９】唐伟，王建国．Ｖｅｒｏ／Ｓｌａｍ细胞在麻疹病毒分离中的应用 【ＪＪ．上海预防医学杂志，２００７，１９（１０）：５０５—５０６． ｉ３０】Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ．Ｄ．，Ｇｒｉｏｔ．Ｃ．，Ｚｕｒｂｒｉｇｇｅｎ．Ａ．，ｅｔ ａ１．Ｌｏｓｓ ｏｆ ｖｉｍ— ｌｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｕｓ ｉｒｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｖｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，１４０（２０１０）：３４—４２． 【１８】Ｌｏｆｉｔｅｒ Ｓ，Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ Ｆ，Ｌａｎｚａ Ｆ，ｅｔ ａ１．ＣＤ９，ａ ｔｅｔｒａｓｐａｎ ｔｍｎ— ｓｍｅｍ—ｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｒｅｎｄｅｒｓ ｃｅｌｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓ－ ｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，１９９７，７１（１）：４２－４９． ｃｈａｎｇｅ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ａ ｍｏｎｏｅｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｆｉｅｎｔｉａ， ｌ９９１，４７：８４２－８４５． －－０・Ｉ●・－●－●●－●■－－■・ｌ■一ｌ●＿－●・●●－－●・●■・－■－－●．－●一●■＿ 【１９Ｊ杨应丽．犬瘟热病毒研究进展【Ｊ】．河北农业科学，２００６，１０ ｌｓｔ＿－●＿ｌ■－－●・－■一●■・●■－－●・●■一●■－●■＿ｌｈ■・－■一－■・－■＿－●・－● （上接第５７页） 【３】周永红，乔红运，王立升，等．容县沙田柚果皮挥发油成分 的ＧＣ—ＭＳ分析【ＪＪ．广西大学学报，２００４，２９（１）：７０—７２． 开发利用海南蜜柚皮挥发油提高了科学依据。 参考文献 【１Ｊ江苏新医学院．巾药大词典【Ｍ］．上海 海科学技术出版 社，１９８６：１５０５． 【２】朱岳麟，郑晓梅，邹卓，等．ＧＣ—ＭＳ法分析红肉蜜柚果皮香 【４赵雪梅，４】叶兴乾，朱大元，等．胡柚皮挥发油的化学成分和 抗菌活性初步研究【ＪＪ＿中国中药杂志，２００３，２８（Ｉ１）：１０８７一 ｌ０８９． 【５］杨晓红，张桂霞，崔鹏．蜜柚果皮挥发油成分的ＧＣ—ＭＳ分 析【Ｊ】．武汉化工学院学报，２００１，２３（２）：１３—１５． 精油的化学成分ｌＪ１．广东化工，２００８，３５（９）：１２９—１３１．
