酶活力计算公式

固态发酵漆酶活性测定：

酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200 r/min摇3h，之后5000 r/min离心20min。（上清用0.45µm滤纸过滤，于-20℃保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。）

酶活反应体系3.0mL（2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L的ABTS） 420nm处测定吸光值的变化。 此实验固态发酵漆酶活性计算公式：

NV总OD420103100mLU(/g)V酶36000TL0.5mL5g

N：酶液稀释倍数

V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）

△OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值 36000: 420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/mol·cm) T：反应时间（min） L为比色皿的直径（cm）。

100mL/(0.5mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数

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液态发酵漆酶活性测定：

酶活反应体系3.0mL（2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L的ABTS）

U(/g)N：酶液稀释倍数

NV总OD420103V酶36000TL

V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）

△OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值 36000: 420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/mol·cm) T：反应时间（min） L为比色皿的直径（cm）。

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固态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：

酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角瓶中，加入 100 mL H2O，在 200 r / min 的摇床中振荡提取 3 h，之后5000 r/min离心20min。（用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP 酶活性。）

在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 ～5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 ℃ 时，加 1. 6 mmol / L的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫外光处，测定反应 4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1 μmol/L的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位( U) 。(ε238 = 6.5mM-1.cm-1) 此实验固态发酵MnP活性计算公式：

NV总OD238103100mLU(/mL)V酶6500TL0.4mL5g

N：酶液稀释倍数

V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）

△OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值 6500: 238nm处Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数(L/mol·cm) T：反应时间（min） L：比色皿的直径（cm）

100mL/(0.4mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数

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液态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定： 锰过氧化物酶（MnP）活性测定

在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 ～5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 ℃ 时，加 1. 6 mmol / L的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫外光处，测定反应 4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1 μmol/L的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位( U) 。(ε238 = 6.5mM-1.cm-1) 此实验固态发酵MnP活性计算公式：

U(/mL)N：酶液稀释倍数

NV总OD238103V酶6500TL

V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）

△OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值 6500: 238nm处Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数(L/mol·cm) T：反应时间（min） L：比色皿的直径（cm）

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固态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：

酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200 r/min摇3h，之后5000 r/min离心20min。（上清用0.45µm滤纸过滤，于-20℃保存滤液，取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。）

测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM， pH 3.0），0.1mL 10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在30±1℃下温浴5min后，于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测OD310(ε310= 9.3×103M−1cm−1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1μM藜芦醛消耗的酶量。 此实验固态发酵LiP活性计算公式：

NV总OD310103100mLU(/mL)

V酶9300TL0.4mL5gN：酶液稀释倍数

V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）

△OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值 9300: 310nm处摩尔吸光系数(L/mol·cm) T：反应时间（min） L：比色皿的直径（cm）

100mL/(0.4mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数

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液态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：

测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM， pH 3.0），0.1mL 10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在30±1℃下温浴5min后，于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测OD310(ε310= 9.3×103M−1cm−1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1μM藜芦醛消耗的酶量。 此实验固态发酵LiP活性计算公式：

U(/mL)N：酶液稀释倍数

NV总OD310103V酶9300TL

V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL） V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）

△OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值 9300: 310nm处摩尔吸光系数(L/mol·cm) T：反应时间（min） L：比色皿的直径（cm）

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