大肠杆菌和大肠菌群计数方法

大肠杆菌和大肠菌群计数方法

Enumeration of Escherichia coli and the coliform

章节内容：

•传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法

•LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌

（除双壳类软体动物制品外）

•瓶装水检测方法

•贝类和贝类肉制品检测方法

•柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法

•大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法

•参考文件

大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维

持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。

大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏

菌，可引起人类腹泻。

12年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生

气体。与已知的非产气致病菌容易区别开来。

因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂 。于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。1914年，每国公共健康协会把大肠菌群

作为一个重要的卫生标准。

虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。首先由Eijkman提出，指的是在高温下发酵乳糖，是总大肠菌群的亚群，同时也称为耐热大肠菌群。粪大肠菌群的检测，除水、贝类、贝类养殖水在44.5℃进行，其他所有食品都在45.5℃进行。粪大肠菌群包含绝大部执蟪Ω司? 克雷伯氏菌也作为粪大肠菌群,但克雷伯氏菌的检出被认为与粪便污染并无关系。因此,大肠杆菌又被作为一个重要指标。快速鉴定大肠杆菌的新方法采用，使检测大肠杆菌

相对容易了。

现在,在不同的应用中,大肠杆菌,大肠菌群和粪大肠菌群这三种类型作为污染指标。大肠菌

群常用于水或食品加工过程中卫生状况的指标。粪大肠菌群用于贝类和贝类养殖水的标准指标。大肠杆菌用于近期粪便污染或不卫生的处理过程指标。几乎所有的检测方法都是基于发酵乳糖。最可能数值法(MPN)是一种统计学方法,包括近似确证和完全验证。在检测过程中,样品要进行系列稀释。实验操作要记录发酵乳糖产气的阳性管数,然后进行另外两步实验,利用阳性结果查统计表(见附录2),估计细菌的数量,仅前两步用于检测大肠菌群和粪大肠菌群,所有三步用于检测大肠杆菌。3管 MPN法用于检测大部分食品,5管 MPN法用于检测水,贝类和贝类养殖水。10管 MPN法用于检测瓶装水或估计本样品为受到严重污染.

另外还有一种固体平板计数法,使用VRBA培养,其含有中性红作指示剂,当发酵乳糖时产生红色菌落。还有一种膜过滤法检测大肠菌群和粪大肠菌群,主要根据发酵乳糖产酸形成不同的菌落颜色。本章节也介绍荧光法检测大肠杆菌；检测贝类的特殊方法；一种简单的瓶装水检测方法；和一种与HACCP法规中相关的检测柑桔类水果汁中大肠杆菌的方法.

1. 传统方法检测大肠菌群、粪大肠菌群、和大肠杆菌

A．设备和材料

1.水浴箱：44.5±0.2℃，水浴箱中的水应高于试管中的培养基液面。

2.插入型温度计：1-55℃，大约长55cm，精度为0.1℃，必须经NIST或相关部门检测合

格

3.培养箱：35±1.0℃

4.电子天平：感量0.1g，称量范围大于2Kg

5.均质器或均质瓶（见第1章）

6.无菌吸管：1.0ml和10.0ml

7.无菌器皿：（用于样品处理）

8.无菌稀释用带盖玻璃瓶

9.菌落计数器或同等产品

10.长波紫外灯:（-365nm）不超过6w

11.PH计

B．培养基和试剂

煌绿乳糖胆盐肉汤，2% （M25）

LST肉汤（M76）

EC肉汤(M49)

L-EMB琼脂（M80）

胰蛋白胨（色氨酸）肉汤（M1）

MR-VP肉汤（M104）

Koser枸橼酸盐肉汤（M72）

PCA（标准方法）（M124）

Butterfield`s磷酸盐缓冲液（R11）或同等稀释液（贝类除外）

Kovacs`试剂（R38）

V-P试剂（R）

革兰氏染色液（R32）

甲基红指示剂（R44）

结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）（M174）

VRBA-MUG琼脂（M175）

EC-MUG培养基（M50）

LST-MUG肉汤（M77）

0.1%蛋白胨水稀释液（R56）

C、MPN法—用于大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的计数

称取50g样品加入高速捣碎杯中，见第1章或现在FDA器械 。冷冻样品在2-5℃解冻(≤18h)，但不要融化。加入450ml 磷酸盐缓冲液，搅拌2分钟，如果样品量小于50g，称取一半样品加入足够体积的无菌稀释液，制成1：10的样品液，在捣碎杯中的液体应完全覆盖刀片。稀释倍数根据大肠菌群对样品的污染情况，用稀释液将样品制成一系列十倍递增的样品稀释液，以30cm幅度于7s内将样品振摇25次（或以器械振摇器震荡）。选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种3管LST，每管接种1ml，以一定的角度，使吸管的尖部在试管壁上停留2-3s，从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不要

超过15min。

（注意：用5管MPN法检测贝类食品和贝类养殖水）将接种的LST管放置35℃培养，检查和记录在24±2h时倒管内产气的试管，未产气的试管继续培养24h，在48±2h时检查

和记录产气情况，对所有产气的试管进行确证试验。

D、MPN法—大肠菌群确证试验

将所有LST肉汤产气管，用接种环接种一环到煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤中。置BGLB试管于35℃培养48±2h，记录所有BGLB肉汤管的产气管数。按BGLB肉汤产气管数，

查MPN表（见附录2 ），计数出大肠杆菌的最可能数值。

E、MPN法—粪大肠菌群和大肠杆菌确证试验

从产气LST肉汤管中接种一环培养物到EC肉汤管中（木制接种棒也可以使用）。将所有接种的EC肉汤管放入带盖水浴箱中，45.5℃培养24±2h，检查产气情况。如果不产气，继

续培养至48±2h，检查产气情况。按产气管数，查MPN表计数出粪大肠菌群MPN值。继续大肠杆菌分析，按以下F部分进行。EC肉汤MPN方法可用于海水和贝肉类的粪大肠

菌群检测。

注意：除水、贝类和贝类养殖水中的粪大肠菌群检测的培养温度为44.5±0.2℃外，其他所

有食品中粪大肠菌群的培养温度为45.5±0.2℃。

F、MPN法—大肠杆菌的完全测定

进行大肠杆菌完全测定前，轻轻摇匀产气的EC肉汤试管，取产气管的培养物划线接种于伊红美蓝平板（L-EMB），35℃培养18-24h，检查L-EMB平板上有无具黑色中心的有金属光泽或无金属光泽的扁平菌落。挑取5个典型菌落接种到PCA斜面培养基上，35℃培

养18-24h，进行进一步检测。

注意：检测5个可疑菌落中任何一个为大肠杆菌，都可以确证EC肉汤管为阳性。因此，

并非5个菌落都必须检测。

革兰氏染色：所有为革兰氏染色阴性短杆菌的培养物，都应进行IMVIC生化反应检测和重

新接种到LST肉汤进行产气确证试验。

吲哚试验：将PCA斜面纯培养物接种到胰蛋白胨肉汤中，35℃培养24±2h，加Kovacs

氏试剂0.2-0.3ml。上层出现明显红色为靛基质阳性反应。

VP试验：将纯培养物接种到MR-VP肉汤中，35℃培养48±2h，以无菌操作称取培养物1ml至13*100mm试管中，加入0.6mlα-萘酚溶液，0.2ml 40%KOH溶液和少许肌酸结

晶。振摇试管后静置2h。如出现伊红色，为VP阳性反应。

甲基红试验：在VP试验完后，试管中MR-VP培养物剩余部分继续在35℃培养48±2h；滴加5滴甲基红溶液，培养物变为明显红色为甲基红试验阳性，若变为黄色则为阴性反应。

柠檬酸盐试验：接种纯培养物到Koser’S枸橼酸盐肉汤中清澈液体，避免接种量过量产

生浑浊。35℃培养96h，培养物为明显浑浊为阳性反应。

发酵乳糖产气试验：接种纯培养物到LST肉汤中，35℃培养48±2h，产气或轻轻摇动试

管产生气泡为阳性反应。

结果报告：所有培养物（A）在35℃培养48±2h内发酵乳糖产酸产气（B）革兰氏阴性无芽孢杆菌 （C）IMVIC试验为+ + - -或- + - -为大肠杆菌。再根据EC肉汤中阳性管数（连续3个稀释度）查MPN表（见附录2）计算出每克（毫升）样品大肠杆菌MPN值。

注意：可以选用API20E或VITEK生化分析，鉴定大肠杆菌，替代IMVIC生化试验。

G．大肠菌群固体培养基测定法

按照生产厂家说明制备结晶紫中性红琼脂（VRBA）冷至48℃时备用。样品制备按照以上

I.C部分制备。

每个稀释度分别移取2个1ml样品液到2个灭菌平皿中,根据细菌受损和挤压的程度。取10ml冷至48℃的VRBA培养基加入平皿中，小心旋转平皿，将培养基与样品液充分混匀。待琼脂凝固后，再加入5mlVRBA培养基覆盖平板表层，以防止细菌蔓延生长。如果细菌细胞受损严重，需要复苏修复，取8-10ml冷至48℃的胰蛋白胨大豆琼脂，将培养基与样

品液充分混匀，在室温中放置2±0.5h，再加入8-10ml冷至48℃的VRBA培养基覆盖平

板表层。

把凝固后的平板，35℃倒置培养18-24h，检测乳制品时，放置32℃培养18-24h，用带光源的放大镜下检查平板。选用有25-250个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群，典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。为了确证大肠菌群，从VRBA平板至少挑取10个典型菌落，接种于BGLB肉汤内，35℃培

养24h和48h，观察产气情况。

注意：将出现产气的BGLB肉汤管判为大肠菌群阳性。对形成菌膜的阳性管应进行革兰氏染色，以便挑除革兰氏阳性杆菌。每克样品中的大肠菌群数量等于经最后证实为阳性的试

管百分比乘以VRBA上的可疑菌落，再乘以稀释倍数。

另外一种方法：大肠杆菌可以与大肠菌群进行区别，在每毫升VRBA覆盖琼脂中加入100ug MUG，经培养后，大肠杆菌在长紫外灯下出现蓝色荧光。（详见LST-MUG部分Ⅱ）

H、膜过滤法(MF)检测大肠菌群：见部分Ⅲ，瓶装水检测。

注意：由于大多数食品容易粘在膜上，因此，MF法最适合于检测水样品，MF法也可用于

含微量颗粒少的液体食品。

Ⅱ.LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中大肠杆菌(除双壳类软体动物制品外)

LST-MUG法原理基于β-葡萄糖苷酶能降解MUG成4-MU，在长紫外灯下时（365nm），MU在菌落周围培养基显示出蓝色荧光，非常容易辨别。95%以上的大肠杆菌产生β-葡萄

糖苷酶（包括一些不产气的菌株），而大肠杆菌O157：H7不产生此酶。经常通过β-葡萄糖苷酶来区别大肠杆菌与大肠杆菌O157：H7，虽然β-葡萄糖苷酶阳性的O157：H7确实存在。肠杆菌科中除了一部分志贺氏菌（44-58%）和沙门氏菌（20-29%）含有此酶以

外，其他细菌都不含有此酶。

因此，从公共卫生角度来分析，并不认为通过β-葡萄糖苷酶来检测致病菌出现疏忽是一个

缺点。

β-葡萄糖苷酶的活性是受催化抑制影响的，有些大肠杆菌为β-葡萄糖苷酶阴性，甚至有时携带有编码这个酶的Vida基因。然而，在研究表明，大约96%的大肠杆菌为β-葡萄糖苷酶阳性而不需要此酶的诱导。除一些培养基外，例如EMB培养基，含有一些荧光物质，会掩盖MU荧光，MUG能加入几乎任何培养基中进行大肠杆菌检测。当MUG加入LST中后，大肠菌群可以通过发酵乳糖产气进行检测，大肠杆菌可以在长紫外灯光观察荧光进行检测，这样可以在24h内进行大肠杆菌近似鉴定。LST-MUG培养基已经被AOAC作为对除贝类外的冷藏和冷冻食品的大肠杆菌检测。对于MUG分析的方法可联系Peter Feng博

士、FDA、CFSAN、大学公园、MD、20740、301-436-1650

注意：观察LST-MUG试管的荧光时，应在黑暗紫外灯（365nm）下，手提式6w的紫外灯完全可以满足要求且非常安全。当使用更大功率的紫外灯时，例15w紫外灯，应带上防紫外线的眼镜和手套。同时，在采用MUG方法前，检测所有玻璃试管是否本身含有荧光，有时二氧化铈加入玻璃中进行质量控制检测，在紫外灯下会产生荧光，干扰MUG

检测。因此，在MUG检测方法中，把阳性菌株和阴性菌株进行对照非常必要。

1、 设备和材料：见前面部分I.A

玻璃试管：新的、一次性（100*16mm）

玻璃试管：新的、一次性（50*9mm）

长紫外灯6w或相当的。

2、 培养基和试剂：见前面部分I.B

3、 LST-MUG法近似检测大肠杆菌

除了LST-MUG肉汤代替LST肉汤外,样品制备和检测过程与前面部分I相同,需用β-葡萄糖苷酶阳性大肠杆菌(ATCC25922)和阴性肠杆菌(ATCC13048)作对照。35℃培养24至48±2h,检查产气和浑浊的试管，然后在长紫外灯下(365nm)观察荧光，呈现蓝色荧光的为大肠杆菌假定阳性。Moberg研究表示，使用荧光方法，24h判定大肠杆菌的准确度为83-95%，48h后判定准确度为96-100%。进一步证实实验，接种一环假定阳性试管的培养物到L-EMB培养基上，35℃培养24±2h，接着往下的操作方法与前面部分I相同。

Ⅲ.瓶装水大肠菌群和大肠杆菌检测方法

瓶装水的消耗量在全球范围内迅速升高，仅在美国，1988年就消耗了36亿加仑的瓶装水(国际瓶装水协会，Alexandria，VA)不象常用水，是由美国EPA监管，瓶装水在美国法律上定义为食品，是由FDA监管。FDA定义瓶装水为装在密封瓶中或其他容器中的水，不含有任何添加剂，除一些安全抗菌剂外，在范围内，有些被添加了氟化物。瓶装水本身就是一种饮料或作为其他饮料的一种成分。这些法规不适合于软饮料或其他相似饮料，除瓶装水或饮用水外，在FDA CFR103节也定义了不同类型的瓶装水来满足一定的标准。

这些定义包括“自流井水”、“地下水”、 “矿物质水”、“纯化或纯净水”、 “苏打瓶装水”、“泉水”和“井水”。另外“无菌水”美国药品局定义为经无菌检测后合格的

水.

在瓶装水中，大肠菌群并不一定是致病菌，而且很少检测出，但是作为一个卫生指标或可能受到微生物污染的指标，大肠菌群作为瓶装水质量控制是一个非常有用的指标。但有些国家也检测其他的微生物数量作瓶装水的质量指标。在现有瓶装水质量标准下，FDA已经建立了一套检测大肠菌群的方法，可通过膜过滤法或10管MPN法。详细的标准方法可联

系Peter Feng博士、FDA、CFSAN、大学公园、MD、20740、301-436-1650

1. 设备和材料

a. 培养箱,35±0.5℃

b. 滤器： 玻璃的,塑料的或不锈钢的

c. 紫外灭菌室,进行滤器灭菌

d. 过滤管或真空瓶

e. 真空源(电动真空泵或其他)

f. 滤膜:无菌白色或隔栅 直径47mm,孔径0.45um

g. 平皿:无菌 塑料的 大小50*12mm 带盖

h. 无齿镊子

2. 培养基

a. LST肉汤(M76)

b. BGLB肉汤(M25)

c. M-ENDO培养基或LES ENDO琼脂

3. 10管近似MPN法检测和确证大肠菌群

在线瓶装水的检测：取100ml样品水，从中取10ml加入2 倍浓度的LST肉汤管中，共10管。35℃培养24±2h，观察是否产气(含有小导管)，或轻轻摇动试管，产生气泡为阳性

管。如果为阴性管，继续培养24h，观察是否产气。

确证实验

把产气的LST管轻轻摇匀，用直径为3.0-3.5mm的无菌接种环接种一环或几环到BGLB

肉汤中，也可用木制小钩接种，插入液面下2.5cm处。

把接种的BGLB肉汤放置35℃培养48±2h，检查产气情况。根据10管MPN表

(9221.III)P.9-52(水和污水的标准检测方法)计数出大肠菌群的MPN数。

4. 膜过滤法检测大肠菌群

过滤样品液100ml，把膜转移到M-Endo培养基中或LES Endo培养基上，35℃培养22-24h低倍显微镜计数, 大肠菌群为红色菌落或暗红色菌落,并有绿色金属光泽,有时菌落

中心或整个菌落显金属光泽.

确证实验:

滤膜上的有金属光泽的菌落在5-10之间，则分别挑取所有菌落，接种到LST肉汤中，35℃培养48h。滤膜上的有金属光泽的菌落10个以上时,随机选取10个菌落,分别接种到LST肉汤中,任何LST肉汤产气的培养物,再转接到BGLB肉汤中, 35℃培养48h,任何BGLB肉汤

中产气的试管,确证为大肠菌群,计数出每100ml样品液中所有大肠菌群数.

注意:1998年第20版P.9-60允许同时接种到LST肉汤或BGLB肉汤中培养.由于BGLB有

强抑制性,因此,此方法规定从LST产气,再转接到BGLB中培养是有更好灵敏度的.

Ⅳ.贝类和贝肉中大肠菌群检测方法.

官方FDA检测国产和进口的双贝类全部参考APHA1970年第四版,<<海水和贝类的检测方法>>.此方法包括传统的5管MPN法检测大肠菌群和粪大肠菌群,和标准细菌总数计数法,本方法适用于检测双贝类、鲜无壳肉、 鲜无壳冷冻肉 和半壳中冷冻双贝类,不适合于检测螃蟹、龙虾和虾米，或经预处理的双贝类肉制品,例烘烤、预炒和热处理的。许多其他方法用于检测环境水和双贝类养殖水此处不包括。美国EPA进行环境水的检测，贝类养殖水

的质量控制，分别由各个州自行检测。

1. 样品的制备：

随机挑选10-12个贝类，从中称取200g贝肉液体或贝肉，用200ml无菌磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白胨水进行样品1∶2稀释均质2min。泥土中贝类样品的分析需在均质后2min内

开始，用0.5%无菌的胰胨水或无菌的磷酸盐缓冲液进行系列样品稀释。

2. MPN法-大肠菌群近似检测和确证

取分装有乳糖肉汤（M74）或LST肉汤（M74）的试管，进行以下实验：

a. 取5支试管，每管加入2ml均质液（相当于1g贝类）

b. 取5支试管，每管中加入2ml 1∶10稀释液（相当于0.1g贝类 ）

c. 取5支试管，每管中加入2ml 1∶100稀释液（相当于0.01g贝类 ）

d. 取5支试管，每管中加入2ml 1∶1000稀释液（相当于0.001g贝类）

若结果不准确时，需进一步稀释。放置于35℃培养，余下的实验方法与1.C部分和上面的

1.D相同。

但结果报告时，此处是每100g样品中的MPN数，而不是1g样品中的MPN数。

3、MPN法-贝肉中粪大肠菌群的近似计数和确证实验

近似的检验方法同前面的第2部分。

确证实验：从阳性的LST肉汤中，接种一环到EC肉汤中，置于带盖的水浴箱中，44.5±0.2℃

培养24±2h。EC肉汤中产气的管为确证的粪大肠菌群，根据前面的方法计算出MPN数。

4、 MPN法————EC-MUG法检测贝肉中大肠杆菌

前面章节的MUG法也可用检测贝鱼肉中的大肠杆菌，但需稍做修改，由于贝鱼肉中含有天然的β-葡萄糖苷酶活性，例如：牡蛎肉样品加入LST-MUG培养基会产生假阳性。因此， 贝类肉中大肠杆菌检测，加MUG到EC肉汤中，44.5℃培养，按传统5管进行粪大肠菌

群确证实验。

通过在紫外灯下可以进行大肠杆菌的MPN计数。

贝类中粪大肠菌群的检测，以EC-MUG肉汤替代EC肉汤，其他的操作方法与部分3相同。检测EC-MUG肉汤中荧光，还需做3个对照，一管为大肠杆菌阳性菌，一管为肺炎克雷

伯氏菌作荧光阴性对照，一管为空白对照，水浴培养。

待检测样品、阳性对照同时置44.5±0.2℃培养24h，按上面LST-MUG法检测荧光。注意有些大肠杆菌不产气，但荧光阳性。计数每个稀释度的所有产荧光的阳性管数，根据MPN

表，计数出大肠杆菌的MPN数。

材料和试剂部分见上面的1.A和1.B，可用商品化的脱水的培养基。也可配制培养基，把

MUG（0.05g/L）加入EC肉汤中（M50），以下的几个厂家的MUG可以使用。

分装新玻璃试管（100*16mm）每管5ml，并加入一个新的倒管，121℃高压灭菌15min，

室温下可保存一周，冰箱可保存一个月以上。

V. 柑桔类水果汁中大肠杆菌检测

检测大肠杆菌可做果汁受到污染与否的指标，和没有灭菌的果汁在HACCP过程中影响效果。通常用于大肠杆菌检测的MPN标准法，由于果汁偏酸性（PH3.6-4.3），干扰实验，因此检测果汁中的大肠杆菌并不是那么令人满意，而且仅允许取样品3.33ml。并不象大多数检测大肠杆菌的方法，需许多步骤，以下方法很简单，可检测10ml样品，命名为改良Colicomplete（cc）法，是AOAC管方方法992.30的改良，用MUG法检测大肠杆菌

（LST-MUG法）

1. 设备和材料

水浴箱：44.5±0.2℃ 水平面高于培养基表面

培养箱：35.5±0.5℃

长紫外灯（-365nm） <6w

2. 培养基和试剂

UPEB肉汤 （M188）

EC培养基（M49）

Colicomplete（CC）碟——Biocontrol，Bellview，WA

3. 样品准备、增菌和鉴定

取10ml果汁加90mlUPEB增菌液，混匀，35℃培养24h，做2个重复。接种1mlUPEB

增菌液到9ml含CC碟的EC肉汤中，放置水浴箱中44.5℃培养24h，同时以MUG阳性的大肠杆菌和MUG阴性的肺炎克雷伯氏菌试管作对照，在暗处检查是否有荧光，大肠杆

菌为蓝色荧光。

Ⅵ.其他检测大肠菌群和大肠杆菌的方法

附录I表中列出一些可用的检测方法，许多方法都是使用荧光试剂，例如MUG或显色产物用于近似检测食品中的大肠菌群和大肠杆菌。大部分检测方法前后被AOAC官方采纳，例如：Petrifilm法、HGMF/MUG法、CC法等。许多改良的膜过滤法用于检测大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌，其中一部分用于牛奶和乳制品中检测，大部分用于饮用水、环境

水和贝类养殖水的检测。