国际检验医学杂志２０１１年ｌ２月第３２卷第２Ｏ期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ。Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．２０ ・ ２３１７ ・ ・临床检验研究・ 慢性肾功能衰竭患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变迁 刘 霞 ，胡宗海 ，刘毓刚 ，帖儒修 ，吴丽娟 △ （１．成都军区总医院检验科，成都６１００８３；２．第三军医大学大坪医院检验科，重庆４Ｏ０Ｏ４２） 摘 要：目的 了解慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化规律，探讨ＣＲＦ患者的免疫功能状态。方法 采用三色流式细胞学检测技术，检测３４例ＣＲＦ患者，３４例非ＣＲＦ患者和１９４例健康体检者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群水平，并 对其结果进行比较分析。结果ＣＲＦ组总Ｔ细胞、Ｔ 细胞、Ｔ８细胞的百分含量（ ）依次为６２．６９±２．Ｏ０、３５．６９±１．３８和２Ｏ．９０ ±１．５８；Ｔ ／Ｔ８比值２．１９±０．２４，总Ｔ细胞、Ｔ４细胞、Ｔ８细胞的绝对含量（×１０。／Ｌ）依次为０．８８±Ｏ．０８、０．５０±０．０５和０．３０± ０．０３。与非ＣＲＦ组和对照组比较发现，患者总Ｔ细胞、Ｔ 细胞、Ｔ 细胞绝对含量的减少（Ｐ＜ｏ．Ｏｌ，Ｐ＜０．０５），总Ｔ细胞、Ｔ 细 胞在淋巴细胞中所占比例的减少（Ｐ＜ｏ．０ｌ，Ｐ＜Ｏ．０５），Ｔ ／Ｔｓ比值升高（Ｐ＜ｏ．ｏ１）。结论 ＣＲＦ患者机体免疫功能紊乱，且以Ｔ 细胞功能减低和Ｔ 细胞功能相对亢进为特征。流式检测ＣＲＦ患者Ｔ淋巴细胞亚群有助于病情和疗效监测。 关键词：慢性肾功能衰竭；Ｔ淋巴细胞亚群； 流式细胞术； 免疫功能 ＤｏＩ：１Ｏ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１１．２０．００９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２０ｌ１）２０—２３１７一Ｏ２ Ｔｈｅ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＲＦ Ｌｉｕ Ｘｉａ ，Ｈｕ Ｚｏｎｇｈａｉ ，Ｌｉｕ Ｙｕｇａｎｇ ，Ｔｉｅ Ｒｕｘｉｕ ，Ｗｕ Ｌｉｊｕａｎ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００８３，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｄａｐｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ Ｔ—ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ（ＣＲＦ ｇｒｏｕｐ），ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅｉｒ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｔａｔｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ Ｔ—ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃ— ｔｅｄ ｂｙ ３－ｃｏｌｏｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｉｎ ３４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＲＦ，３４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ－ＣＲＦ（ｎｏｎ—ＣＲＦ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ １９４ ｈｅａｌｔｈ ｐｅｏｐｌｅ（ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ＣＲＦ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＣＤ４ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｄ ＣＤ８ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｓ ｗｅｌ１ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＣＤ４ ／ＣＤ８ ｗｅｒｅ ６２．６９±２．００，３５．６９士１．３８，２０．９０士１．５８ ａｎｄ ２．１９±０．２４，ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＣＤ４。。Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｄ ＣＤ８’。Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｗｅｒｅ ０８８４－０．０８、０．５０４－０．０５ ａｎｄ ０．３０±０．０３． ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｎ—ＣＲＦ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ．ＣＤ４ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｄ ＣＤ８ Ｔ ｌｙｍ— ｐｈｏｃｙｔｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＣＤ４ ／ＣＤ８。。ｗａｓ ｃｌｅａｒｌｙ ｈｉｇｈｅｒ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ８ Ｔ—ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｄｅｃｒｅａｓｅ，ｏｆ ＣＤ８。。Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｒｉｓｅ。ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＲＦ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ Ｔ—ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＲＦ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｃｏｎｄｕｃｅ ｔｏ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｍｏｎｉｔｉｏｎ． Ｋｅｙ・ｗｏｒｄｓ：ｋｉｄｎｅｙ ｆａｉｌｕｒｅ，ｃｈｒｏｎｉｃ；Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｓｕｂｓｅｔｓ； ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ； ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ 慢性肾功能衰竭（ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ，ＣＲＦ）又称慢性肾 功能不全，是指各种原因造成的慢性进行性。肾实质损害，致使 例，年龄２３～７Ｏ岁，平均４２．４１岁，其慢性肾炎８例，肾结石８ 例，肾盂肾炎７例，多囊肾７例，贫血患者１例、乙肝相关性肾 病１例、狼疮性肾炎１例、类风湿关节炎１例。对照组为１９４ 肾脏明显萎缩，不能维持其基本功能，临床出现以代谢产物潴 留，水、电解质、酸碱平衡失调，全身各系统受累为主要表现的 临床综合征，也称为尿毒症。通常认为ＣＲＦ患者存在机体免 例健康体检人群中被证实的健康个体，男９６例，女９８例，年龄 在１９～６２岁之间，平均年龄为３７．４岁。 疫功能受损与紊乱，临床表现为感染和肿瘤的发病率增高口。］。 为了探讨７ＣＲＦ患者的细胞免疫功能，本研究采用流式细胞术 （ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）对ＣＲＦ患者、临床非ＣＲＦ患者和健康 人群的外周血Ｔ淋巴细胞亚群进行了测定和分析，拟通过外 周皿Ｔ淋巴细胞亚群的变迁规律，探讨ＣＲＦ患者的免疫功能 １．２标本采集 清晨采集静脉血２～３ｍＬ，ＥＤＴＡ－Ｋ。抗凝 （紫头真空采血管），立即检验。 １．３ 流式Ｔ细胞亚群的检测 采用双平台法三色流式细胞 术、ＳＳＣ／ＦＳＣ设门淋巴细胞，分析总Ｔ细胞（ＣＤ３ ）、Ｔ 细胞 （ＣＤ３ ＣＤ４ ）、Ｔｓ细胞（ＣＤ３。。ＣＤ８ ）的百分含量和绝对含量， 改变，为临床患者的病情判断及疗效监测提供理论依据。 １资料与方法 并计算Ｔ ／Ｔｓ细胞比值。全部试剂（如同型对照抗体ＩｇＧ１一 ＦＩＴＣ／ＩｇＧ１一ＰＥ／ＩｇＧ１一ＰＣ５，测定抗体ＣＤ４一ＦＩＴｃ／ＣＤ８一ＰＥ／ ＣＤ３一ＰＣ５、标本预处理试剂等）均为美国ＢＥＣＫＭＡＮ—ＣＯＵＬ— ＴＥＲ公司产品，仪器采用ＢＥＣＫＭＡＮ—ｃ０ＵＬＴＥＲ ＸＬ４一ＭＣＬ １．１一般资料慢性肾功能衰竭患者（ＣＲＦ组）３４例，为重庆 市某三甲医院住院患者中被确诊的ＣＲＦ患者，男１６例，女１８ 例，年龄３７～７３岁，平均５３．５３岁，患者无感染、肿瘤等并发 症，肾小球滤过滤（ＧＦＲ）１０～２０ ｍＬ／ｍｉｎ，内生肌酐清除率 型流式细胞仪。具体检测方法见参考文献［４］。 １．４统计学处理所有统计学处理均采用ＳＰＳＳ １３．０软件进 行，数据以ｊ士ｓ表示，百分数的组间比较采用方差分析，计量 资料组间比较采用ｔ检验。 （Ｓｃｒ）４５１～７０７￣ｍｏｌ／Ｌ，临床分期处于肾功能衰竭期。对照组 为该院同期住院患者中的非ＣＲＦ患者３４例，男２１例，女１３ 共同第一作者。 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｕｌｉｊｕａｎ１６３８＠１２６．ＣＯＩＴＩ。 国际检验医学杂志２０１１年１２月第３２卷第２Ｏ期２ 结 果 Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．２Ｏ （Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），Ｔ４／Ｔ８比值明显升高（Ｐ＜０．０５），总Ｔ 细胞绝对含量明显减少（Ｐ＜Ｏ．０５）。上述结果表明，ＣＲＦ患者 与对照组比较，ＣＲＦ组总Ｔ细胞、Ｔ 细胞百分含量明显 下降（Ｐ＜Ｏ．０１，Ｐ＜Ｏ．０５），Ｔ ／Ｔ８比值明显升高（Ｐ＜ｏ．Ｏ１），总 Ｔ细胞、Ｔ 细胞和Ｔｓ细胞绝对含量均明显减少（Ｐ＜０．０１，Ｐ ＜Ｏ．０５）；非ＣＲＦ组总Ｔ细胞、Ｔ４细胞和 细胞的百分含量 体内存在明显的免疫功能紊乱，表现出总Ｔ细胞、Ｔ 细胞、Ｔ。 细胞绝对含量的减少以及总Ｔ细胞、Ｔｓ细胞在淋巴细胞中所 占比例的减少和Ｔ４／ｒｒ８比值升高的特点，提示机体免疫功能 降低，且以Ｔｓ细胞功能减低和Ｔ 细胞功能相对亢进为特征。 结果见表１。 无明显改变，但是绝对含量均明显减少（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。 非ＣＲＦ组与ＣＲＦ组比较，ＣＲＦ组总Ｔ细胞、Ｔ 细胞明显减少 表１ 流式外周血Ｔ淋巴细胞亚群检测结果（ｉ±Ｓ） ：Ｐ＜Ｏ．０５， ：Ｐ＜０．０１，与对照组比较；ｃ：Ｐ＜０．Ｏ１， ：Ｐ＜０．０１，与非ＣＫＤ组比较。 论 ３讨 阴性细胞和双阳性细胞为Ｔ 细胞和Ｔｓ细胞的前体细胞，是 ＣＲＦ免疫功能紊乱各家文献报道出入较大，如高玲等［５］ 采用流式细胞术检测２３例ＣＲＦ患者外周血Ｔ细胞发现，患者 免疫学标志尚未完全成熟的Ｔ细胞。由于正常情况下，人体 外周血中双阴性细胞和双阳性细胞的含量极其稀少，习惯上将 Ｔ 细胞和Ｔ 细胞看做是Ｔ细胞的两大亚群，并用Ｔ 细胞与 Ｔ。细胞百分含量的比值（Ｔ ／Ｔ。）来评价它们在Ｔ细胞中的构 成。Ｔ 细胞为ＨＬＡ＿Ⅱ类，Ｔ 细胞活化后大量增殖并产 生细胞因子，进一步活化Ｂ细胞，导致Ｂ细胞大量增殖和产生 ＣＤ３ 、ＣＤ４ 淋巴细胞减少，ＣＤ８ 淋巴细胞增加，ＣＤ４／ＣＤ８比 值显著下降；而钟琼等＿６ 同样采用流式细胞术测定了４８例 ＣＲＦ患者外周血Ｔ细胞亚群，却发现患者ＣＤ３ Ｔ细胞的绝对 含量、ＣＤ３ ＣＤ４ Ｔ细胞（即Ｔ４细胞）和ＣＤ３ ＣＤ８。。Ｔ细胞 （即Ｔ８细胞）的百分含量均较健康组升高，Ｔ ／Ｔｓ比值升高。 出现上述不一致的结果，我们推测与所分析的ＣＲＦ患者筛选 标准不一致有关。众所周知，ＣＲＦ临床可分为四期，包括代偿 期、失代偿期、肾功能衰竭期和尿毒症期。代偿期肾单位受损 未超过５Ｏ ，ＧＦＲ在５Ｏ～８Ｏ ｍＩ ／ｍｉｎ，Ｓｃｒ １３３～１７７／￣ｍｏｌ／Ｌ， 无临床症状；失代偿期患者肾小球滤过滤（ＧＦＲ）５０～２０ ｍＬ／ ｍｉｎ，肌酐清除率（Ｓｃｒ）１８６～４４２／￣ｍｏｌ／Ｌ，临床上有乏力、轻度 贫血、食欲减退等全身症状；肾功能衰竭期患者ＧＦＲ １０～２Ｏ ｍＬ／ｍｉｎ，Ｓｃｒ ４５１～７０７”ｍｏｌ／Ｌ，患者出现严重贫血，代谢性酸 中毒，水电解质代谢紊乱；尿毒症期患者ＧＦＲ＜１０ ｍＬ／ｍｉｎ， Ｓｃｒ＞７０７ ｍｏｌ／Ｉ ，临床上代谢酸中毒加重，全身各系统症状突 出。处于不同临床分期的患者，其。肾功能受损程度不同，血液 抗体，诱导体内以体液免疫为主的免疫机制。活化的Ｔ 细胞 还可以刺激Ｔ 细胞活化与增殖，诱导Ｔｓ细胞的免疫功能。 Ｔ 细胞为ＨＬＡ—Ｉ类，Ｔ。细胞活化后大量增殖，通过诱导 靶细胞的程序化死亡来直接杀死靶细胞，体现以细胞免疫为主 的免疫机制。本研究发现ＣＲＦ患者外周血总Ｔ细胞、Ｔ 细胞 和Ｔｓ细胞的绝对含量均减低，说明患者免疫功能总体水平减 低；患者 细胞减低，Ｔ４细胞无消长，造成总Ｔ细胞在淋巴 细胞中的百分含量减低，支持患者Ｔ细胞免疫功能总体水平 减低，具体的以Ｔ。细胞的细胞免疫功能减低为特征。值得注 意的是，患者总Ｔ细胞喊来那个下降，但是Ｔ 细胞病未下降， 即出现Ｔ 细胞相对增加的情况，考虑到文献称ＣＲＦ患者体液 免疫无明显改变，作者推测ＣＲＦ患者Ｔ 细胞的相对增加与其 进一步活化Ｔ 细胞，导致Ｔ 细胞增殖相关。 中毒性物质的含量相差甚远，对淋巴细胞的影响可能存在差 异。同时，ＣＲＦ患者免疫功能异常，容易发生细菌感染和肿瘤 等。患者合并感染或肿瘤时，其淋巴细胞亚群的变迁将受到感 染和肿瘤刺激的影响。本研究以３４例无感染及肿瘤并发症的 处于肾功能衰竭期的ＣＲＦ患者为观察对象，结果证实患者总 另外，流式细胞术检测外周血Ｔ淋巴细胞亚型测定可作 为ＣＲＦ患者免疫功能检测的手段，用于病情判断和疗效监测。 对不同临床分期的ＣＲＦ患者进行大规模外周血Ｔ细胞亚群检 测，动态分析患者淋巴细胞亚群的变迁规律，适时掌握患者体 内的免疫功能状态，仍然是十分必要的。 参考文献 ［１］蔡蓓，王兰兰，冯伟华，等．尿毒症患者Ｔ细胞亚群共刺激分子 ＣＤ２８＋和ＣＤ１５２＋的表达分析［Ｊ］．国外医学临床生物化学与检 验学分册，２００５，２６（５）：２６卜２６３． Ｔ细胞、Ｔ 细胞在淋巴细胞中的百分含量明显下降，Ｔ 细胞 无明显消长（即相对增加），Ｔ ／Ｔ 比值明显升高，并且总Ｔ细 胞、Ｔ 细胞和Ｔｓ细胞的绝对含量均明显减少，与参考文献［５— ６］的报道均有所不同。结果表明，ＣＲＦ患者免疫功能低下，外 周血中的总Ｔ细胞、Ｔ 细胞和Ｔｓ细胞绝对含量降低；在淋巴 细胞构成中，Ｔ。细胞含量下降导致总Ｔ细胞含量降低。因此， ＣＲＦ患者体内Ｔ。细胞功能受到抑制，Ｔ 细胞功能相对亢进。 总众周知，淋巴细胞是人类最主要的免疫细胞。正常情况 下，Ｔ细胞占淋巴细胞总数的６５ 以上，是人类最重要的免疫 效应细胞。Ｔ细胞（ＣＤ３ 淋巴细胞）包括Ｔ 细胞（ＣＤ３ ＣＤ４ 淋巴细胞或ＣＤ４ Ｔ淋巴细胞）、Ｔｓ细胞（ＣＤ３ ＣＤ８ 淋 巴细胞或ＣＤ８ Ｔ淋巴细胞）、双阴性细胞（ＣＤ３ ＣＤ４ ＣＤ８一 ［２］高艳霞，周镔，高玲，等．慢性肾功能衰竭患者Ｔ淋巴细胞活化状 态的研究［Ｊ］．山东医药，２００５，４５（１０）：４０． ［３］Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ Ｙ，Ｓｍｇｉｍｏｔｏ Ｍ，Ｉｓｈｉｙａｍ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｔ—ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ（ＣＲＦ）ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ，１９８９，３２（６）：２７０—２７５． ［４］吴丽娟．Ｉ临床流式细胞学检验技术［Ｍ］．北京：人民军医出版社， ２Ｏ１Ｏ：７８—８８． （下转第２３２０页） 淋巴细胞）和双阳性细胞（ＣＤ３。。ＣＤ４ ＣＤ８ 淋巴细胞）等。双 国际检验医学杂志２０１１年１２月第３２卷第２Ｏ期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｉ￣ｅｃｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．２Ｏ Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ公司ＥＰＩＣＳ－ＸＬ４ ＭＣＬ流式细胞仪进行测 计学软件进行数据处理，多组间数据的比较采用方差分析，以 Ｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。 ２ 结 果 定。具体检验方法参见参考文献［２］执行。 １．４ Ｔ淋巴细胞亚群检测 于治疗前及治疗后１周，分别于 清晨抽取患者静脉血２～３ ｍＩ ，ＥＤＴＡ—Ｋ。抗凝（紫色采血管）。 肝硬化失代偿患者治疗前、后外周血Ｔ细胞亚群的检测 同型对照抗体ＩｇＧ１一ＰＣ５／ＩｇＧ１一ＦＩＴＣ／ＩｇＧ１一ＰＥ、测定抗体 ＣＤ３一ＰＣ５／ＣＤ４一ＦＩＴＣ／ＣＤ８ ＰＥ、标本预处理试剂等均购自 结果见表１。肝硬化失代偿患者治疗前，外周血总Ｔ细胞、Ｔ 细胞、Ｔ 细胞及Ｔ４／Ｔ 比值与健康对照组比较显著下降（Ｐ＜ ０．０５）；肝硬化失代偿患者干细胞治疗后，外周血总Ｔ细胞、Ｔ 细胞、Ｔ ／Ｔ 比值与治疗前比较显著升高（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｔｓ细胞 Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ公司，使用美国Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ公司ＥＰ— ＩＣＳ－ＸＬ４ ＭＣＬ流式细胞仪进行测定。具体检验方法参见参考 文献Ｅ２］执行。 １．５统计学处理全部数据以ｉ±５表示，使用ＳＰＳＳ１３．０统 表１ 与治疗前比较显著降低（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｔ ／Ｔ 比值较治疗前更接 近健康对照组水平。 肝硬化患者治疗前、后外周血Ｔ淋巴细胞亚群测定结果（ ±Ｓ） ：Ｐ＜Ｏ．０５，与健康对照组比较； ：Ｐ＜Ｏ．０５，ｃ：Ｐ＜Ｏ．０１，与肝硬化组治疗前比较。 论 ３讨 为体内启动细胞免疫的主要细胞，Ｔ 淋巴细胞的减少将引起 体内免疫机能调节能力下降。Ｔｓ淋巴细胞作为体内细胞免疫 的主要效应细胞，Ｔ 淋巴细胞的减少将引起体内清除靶细胞 的功能降低。肝硬化患者外周血Ｔ 细胞的下降程度高于Ｔｓ 近年来国内外大量基础研究发现，脐血干细胞在特定环境 下可分化为肝组织和干细胞从而参加肝脏的修复与重建。 Ａｖｉｔａｌ等［３ 研究证实从脐血分离的造血干细胞移植入受体后， 可整合到受体肝板，分化为成熟肝细胞并合成尿素。Ｈａｒｒｉｓ 等ｌ４］以绿色荧光蛋白报告基因转染干细胞并进行性别交叉移 植实验，发现分化的肝细胞没有表达荧光蛋白且仍为双倍体， 细胞，引起ｒｒ４／］ｒＢ比值下降。干细胞治疗后，上述被打破的Ｔ 淋巴细胞和Ｔ。淋巴细胞平衡向着逐步恢复的方向发展。因 此，对于肝硬化失代偿患者来说，早期利用脐血干细胞修复肝 进一步证实了脐血造血干细胞可横向分化为肝细胞。杨宏丽 等＿５ 将自体脐血干细胞通过介入移植到８６例肝硬化病患者肝 内，发现患者肝功能、凝血机制较对照组有明显提高。 本实验通过检测５１例干细胞治疗后肝硬化失代偿患者Ｔ 淋巴细胞亚群，观察治疗对机体免疫功能的影响。从结果可以 看出，于细胞治疗后，外周血总Ｔ细胞、Ｔ 细胞、Ｔ ／Ｔ 比值与 治疗前比较显著升高（Ｐ＜ｏ．０５）；Ｔ 细胞与治疗前比较显著降 低（Ｐ＜０．０５）。上述结果表明，患者在接受干细胞治疗后机体 免疫功能得到了显著提升。 细胞在体内能够诱导细胞凋亡，清除分泌自身抗体的 Ｂ细胞，干细胞治疗后Ｔ 细胞升高，表明机体为了增强免疫抑 制功能，通过增加Ｔ 细胞的比例来发挥抑制作用＿６］。Ｔｓ细胞 具有细胞毒作用，对机体具有免疫调节功能，干细胞治疗后Ｔｓ 细胞明显降低，表明在干细胞治疗后，降低了细胞毒作用的Ｔｓ 细胞的数量，抑制了自身反应性的Ｔ 细胞的细胞毒作用，从 而达到抑制自身免疫性反应的作用 ］。干细胞治疗后肝硬化 损伤、改善遗传性缺陷组织的功能以及代替退行性组织，在一 定程度上可以恢复肝功能，提高机体免疫功能，可缩短治疗时 间，改善预后，提高病人生存质量。 参考文献 Ｅｌｉ张丽欣，邢利和，张丽丽，等．脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬 化的Ｉ临床效果研究［Ｊ］．中国全科医学，２０１０，１３（８）：２６８０—２６８２． Ｅ２］吴丽娟．临床流式细胞学检验技术［Ｍ］．北京：人民军医出版社， ２Ｏ１ｏ：６６—７０，７９—８２． Ｅ ｓ ３ Ａｖｉｔａｌ Ｉ，Ｆｅｒａｒｅｓｓｏ Ｃ，Ａｏｋｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｌｉｖｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｍａｔｕｒｅ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｅｎｇｒａｆｍｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒｓ ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｕｒｇｅｒｙ，２０００，１３２：３８４—３９０． Ｅ４］Ｈａｒｒｉｓ ＪＲ，Ｂｒｏｗｎ ＧＡ，Ｊｏｒｑｅｎｓｅｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ ｈｏｍｅ ｔＯ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ａｆｔｅｒ ｉｍＵ— ｒｙ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，２００６，４７（５）：２１０８—２１１３． Ｅｓ］杨宏丽，于发涛，李桂杰，等．脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬 化８６例疗效观察ＥＪ］．山东医药，２０１０，５０（４５）：１６—１７． 失代偿患者Ｔ ／ 细胞比例显著升高，更接近健康对照组水 平，表明机体的免疫功能得到了明显提升ｌ５］。 Ｅ６］王剑虹，吴建波．肝硬变患者的细胞免疫状态研究［Ｊ］．世界华人 消化杂志，２０００，８（１Ｏ）：１１７８—１１ ９０． （收稿日期：２０１１－０８—０８） 总之，肝硬化患者由于肝纤维化导致肝脏功能丧失，肝脏 对淋巴细胞的拮抗作用引起Ｔ淋巴细胞减少。Ｔ 淋巴细胞作 （上接第２３１８页） Ｅ５］高玲，高艳霞，周镔．慢性肾功能衰竭患者Ｔ淋巴细胞亚群测定分 析［Ｊ］．泰山医学院学报，２００６，２７（４）３７３—３７４． 活性与淋巴细胞亚群的关系［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１０，３１ （７）：６２５－６２６． ６］钟琼，刘尧娟．欧超伟，等．慢性。肾功能衰竭患者血清腺普脱氨酶 （收稿日期：２０１１ ０８—０８）
