国外医药抗生素分册２０１４年１１月第３５卷第６期 ・研究进展・ 新技术在聚酮组合生物合成中的应用研究进展 黄传龙，谭树华’，顾觉奋 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘要：本文综述了生物信息学软件、光交联技术、异源表达以及底盘细胞在聚酮组合生物合成中的应用。并尝试将其整 合为一粗略的开发思路，即“计算机虚拟设计一高通量技术筛选一（底盘细胞作宿２ａ）异源表达”。希望通过引入新技术，能进 一步提高聚酮组合生物合成的开发效率。 关键词：聚酮；组合生物合成；ＣｌｕｓｔＳｃａｎ；光交联；异源表达；底盘细胞 中图分类号：Ｒ９８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１．８７５１（２０１４）０６—０２４１—０５ Ｎｅｗ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎ Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｈｕａｎｇ Ｃｈｕａｎ—ｌｏｎｇ，Ｔａｎ Ｓｈｕ—ｈｕａ， Ｇｕ Ｊｕｅ—ｆｅｎ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｍｉｎｇ ２ １ ０００９） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｅｖｅｒａｌ ｎｅｗ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ－ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ ｓｏｆｌｗａｒｅｓ，ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ，ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈａｓｓｉｓ，ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｗｅｒｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｗｅ ａｌｓｏ ｔｒｉｅｄ ｔｏ ｉｎｔｅｇｒａｔｅ ｔｈｅｓｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｉｎｔｏ ａ ｎｅｗ ｒｏｕｔｅ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｅｆｉｆｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ｔｈａｔ ｉｓ“ｆｉｃｔｉｔｉｏｕｓ ｄｅｓｉｇｎ ｉｎ ｃｏｍｐｕｔｅｒ—｝Ｖｅ“ｆｙｉｎｇ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ－－－￣ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ｂｙ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈａｓｓｉｓ）”． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ； ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ； ｃｌｕｓｔＳｃａｎ； ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ；ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈａｓｓｉｓ 聚酮是天然产物大家族，在医药产业中有着重 三种思路如图ｌ所示。 要地位，如常见的抗感染药物大环内酯类、免疫抑 为了排除不合理组合，科研人员开发了聚酮虚 制剂他克莫司，以及降血脂的他汀类等。而且聚酮 拟组合的软件，引入了交联技术来检测聚酮合成酶 可以通过组合生物合成，得到大量新结构的化合 ｆＰＫＳ）结构域间的匹配性。此外，组合途径向聚酮 物，因此具有很好的开发潜力。 产物的转化需借助异源表达。笔者在阅读相关文献 途径设计是组合生物合成的重要内容，理想的 的基础上，发现这几种技术分别适用聚酮组合的不 方式是通过“理性设计”直接得到预期产物，然而 同时期，可以尝试将其整合，粗略成为一条开发路 这目前很难。另一种思路是通过随机组合建立化合 径，如图２所示：计算机虚拟组合，在设计的同时初 物库，然后从中筛选有成药潜力的化合物，这种方 步排除一些不合理的选项一高通量技术（如光交联）， 法虽然技术上没有困难，但会引入很多不合理的组 对途径进一步筛选、验证一异源表达，将设计出的 合，导致库的质量较低，筛选工作量很大。比较合 途径表达出产物。另外随着合成生物学的兴起，底 理的方法是二者的折中，即通过一定的理性指导， 盘细胞有望成为未来的异源宿主。 排除掉大多数不合理的组合，留下相对比较合理的 本文将就图２思路展开，分别对相应的虚拟组合 组合，再建库筛选，可以减少工作量，提高效率。 软件、交联技术、异源表达、基因组精简及底盘细 收稿日期：２０１４—０９一ｌ５ 作者简介：黄传龙，在读研究生，研究方向：生物学专业。 ．通讯作者：谭树华，教授，博士生导师，从事新药基因工程和蛋白质工程教学与研究。 顾觉奋，教授，研究生导师，从事微生物制药教学与研究。 国外医药抗生素分册２０１４年１１月第３５卷第６期 ２４３ ．．｜ — — ，‘ 曩 誊 慧 蓼 美蓦氍嚣 ～ 麓 嚣 ｌｌ嚣 港ｌ ； 《 ＿嚣笺 糕 篝 ｔ鬃 ｔ 端 鬟誊 篇篇拳 。 ∞ 纂 ｌ ｌ曩 《蘩 ｑ 雹 ——一墨嗣ｌ ＿冒— ｂ ［Ｃ＠＠Ｈ】（Ｃ）Ｃ（＝０）ＣＣ＝Ｃ（Ｃ）Ｃ＝ＣＣ＝［Ｃ＠＠Ｈ］（Ｃ）Ｃ（＝０）Ｃ ［Ｃ＠＠Ｈ】（０）Ｃ［Ｃ＠＠Ｈ】（０）Ｃ［Ｃ＠＠Ｈ】（０）ＣＣ＝ＣＣ（：０） Ｈ二差 一一一 注：（ａ）是ＣｏｍｐＧｅｎ上ｃａｒｔｏｏｎ窗口的截图，简单示意了雷帕霉素（黑色箭头）与阿维菌素（灰白色箭头）模块间的杂交组合， ×表示进 行组合，＝表示得出组合结果；Ｃｏ）是预测的相应杂交产物的结构，￣ＳＭＩＬＥＳ格式给出；（ｃ）是使用ｃｈｅｍＡｘｏｎ显示的产物结构。 图４应用ＣｏｍｐＧｅｎ设计聚酮杂交（以雷帕霉素与阿维菌素为例）示意＿４＿ 主要在于反应条件的改进，从化学试剂到酶促反应再 优点是培养容易，增殖速度快，基因操作技术成熟； 到紫外光照，步骤更加简单，检测速率加快，尤其是 缺点是前体合成不足或者缺乏，产物的后修饰酶系 光交联，符合高通量微量、快速、大规模的特点。 缺乏【 ”。链霉菌由于是聚酮的天然产生菌，因此具 以结构域ＡＣＰ（酰基载体蛋白）与ＫＳ（酮合成酶）的 有较好的翻译后修饰、前体合成酶系等，缺点是生 光交联简单介绍其过程［１０】：首先ＡＣＰ上的丝氨酸残 长周期较长，基因操作比较困难，而且自身的聚酮 基与ｐＢｐａ（对苯甲酰苯丙氨酸）反应，生成ＡＣＰ Ｓｅｒ一 合成系统可能会干扰异源聚酮（目的产物）的表达［１１１。 ｐＢｐａ；然后将其与ＫＳ置于３６５ｎｍ紫外光下进行交联 异源表达的问题在于产量不够理想，转录调 反应，通过凝胶电泳检验分子量，可以判断是否发 控、条件优化可以在一定程度提高产量，如Ｓｔｅｖｅｎｓ 生交联。图５ｔ 。】为示意图，图６１１ｏ￣是Ｙｅ等的凝胶实验 等［１２】综述了转录在Ｅ．ｃｏｌｉ异源表达聚酮中的应 结果分析。 用，另外他与Ｃｏｎｗａｙ等还发现ａｓ 因子的存在可以提 ３异源表达——途径转化为产物 高某些基因的表达量，过量表达０ｓ 因子在一定程度 组合途径转化为聚酮产物需要借助异源表达。 上可以提高聚酮的产量【＂］。但这种提高方式繁琐而 常见的异源表达宿主有Ｅ．ｃｏｌｉ以及天蓝色链霉菌 效果有限，而宿主性状的优良依然是决定产量的最 （Ｓ．ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）、变铅青链霉菌（Ｓ．１ｉｖｉｄａｎｓ）等。Ｅ．ｃｏｌｉ￣ 基本要素。近年来随着合成生物学的兴起，构建基 Ａ Ｂ 因组精简的底盘细胞作为发酵工厂，逐渐成为更好 的选择【 ４＿ｌ５］。 ４异源宿主展望——基因组精简与底盘细胞 ＡＣＰ￣Ｋ￥ ＳＨ 底盘细胞是合成生物学家引用汽车的术语，底 ＠ ＋回一 回 盘是一辆车的基本，在此基础上可以安装其它部 注：（Ａ）同源ＡＣＰ与ＫＳ紫外光下发生交联，而非同源的则 件，造出不同功能的车；底盘细胞与此类似，它本 不能；（Ｂ）凝胶电泳检测分子量，判断是否发生交联。 身是一个精简的细胞，通过导入各种生物组件（比如 图５光交联检测ＡＣＰ与ＫＳ相互作用的示意图【 ０］ 一条代谢途径中的酶１，使其具备不同的特性。 Ａ Ｂ ∞ 墨 基因组精简是构建底盘细胞的途径，即通过各 喁 【工一【工－ 种基因敲除手段，逐步去掉不必要的ＤＮＡ片段， 黪 ： ・ 最终得到一个无冗余的基因组。基因组精简的微生 ＿ 物，由于其代谢负担的减轻，通常表现出生长速 ０ｌ譬≥ ＡｃｐＰ ｉｉｉ￣ｉｉｌ ４－ｚ 度快、资源消耗少的特点ｒｌ５】，作为异源宿主用于发 酵，有望得到较高的产量和转化率。精简的基因组 注：ＦａｂＢ、ＦａｂＦ和ＦａｂＨ都是ＩＩ型ＫＳ，与ＡｃｐＰｆＩＩ型ＡＣＰ）亲缘 关系近，可以观察到交联；与ＡＣＰ２（Ｉ型ＡＣＰ）。 更加可控，基因操作将更加精准，外源基因表达受 图６不同类型ＡＣＰ与ＫＳ交联后的凝胶实验结果【１０］ 抑制的情况也将大大减 ”】。另外，精简的基因组 ２４４ Ｗｏｒｌｄ Ｎｏｔｅｓ ｏｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２０１４，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．６ 稳定性提高，有助于防止生产菌株退化，比如删除 ｓｉｌｉｃｏ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２００８，３６（２１）：６８８２ ［３］ Ｚｕｃｋｏ Ｊ，Ｓｔａｒｃｅｖｉｃ Ａ，Ｄｉｍｉｎｉｃ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆｒｏｍ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｔｏ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ——ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｍｉｎｉｎｇ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎｄ ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ ｄａｔａ ｓｅｔｓ ｆｏｒ ｎｅｗ ｎａｔｕｒａｌ 了转座相关序列，可以使自发突变率大大降低【 】。 目前用于基因组精简的微生物包括大肠埃希 菌、枯草芽孢杆菌、阿维链霉菌和酿酒酵母等。比 如 ．ｃｏｌｉ Ｋ１２，白２００２年起经过几次基因组精简， ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０，４８（２）：２３４ 得到一系列编号ＭＤＳ的菌株，精简率在１ ５％左右 ［１ ７＿。［４］ Ｓｔａｒｃｅｖｉｃ Ａ，ＷＯｌｆ Ｋ，Ｄｉｍｉｎｉｃ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ 与此类似的还有日本的ＭＧＦ（Ｍｉｎｉｍｕｍ ｇｅｎｏｍｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ， ２０１２，３９（３）：５０３ ｆａｃｔｏｒｙ）计￣ｌＪ［１７］。Ｌｅｅ等［Ｉ８］对ＭＤＳ４２菌株进行了苏氨酸 发酵实验，发现其发酵能力比野生菌株提高了大约 ８３％；Ｋｏｍａｔｓｕ ９］对阿维链霉菌进行精简，也发现 ｒｆｌ Ｓ，ＧｒａｍａｊＯ ＨＣ，Ｍｅｎｚｅｌｌａ ＨＧ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ［５］ Ｐｅｉａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｌａｒｇｅ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ 其发酵产量比在原产菌或野生阿维链霉菌中有明显 的提高。由于底盘细胞的兴起时间还不长，目前较 少有将其应用到聚酮异源表达的例子，但其作为宿 主的种种优点对于聚酮的发酵也将同样适用，有助 于聚酮产量的提高。 ５小结 他山之石，可以攻玉。本文简单介绍了软件、 光交联技术、异源表达以及底盘细胞在聚酮组合生 物合成中的应用，希望能借助生物信息学、高通量 技术以及合成生物学的进展，为聚酮类组合生物合 成的开发提高效率。 笔者发现这几种技术有内在联系，可以整合为 一条开发路径：即先用计算机虚拟组合，快速生成 大量组合方案；然后通过高通量技术，进一步对其 筛选、验证；最后通过异源表达，将途径转化为产 物，并设想以精简的底盘细胞作为异源宿主，借助 其在生长速率、转化率等方面的优势，得到较高的 产量，为聚酮组合合成的产业化铺平道路。 这其中，底盘细胞的研究还处于初级阶段，光 交联的高通量化也有待成熟，更多的高通量技术还 有待开发，软件预测的准确度也有待提高。希望本 文可以起到抛砖引玉的作用，希望聚酮的组合合成 走向产业化、为民众健康造福的一天早日到来。 参考文献 Ｂｌａｚｉｃ Ｍ，Ｓｔａｒｃｅｖｉｃ Ａ，Ｌｉｓｆｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｕｌａｒ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ ｎｏｎｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ ＮＲＲＬ１８４８８［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２０１２，７８（２３）：８１８３ ［２］ Ｓｔａｒｃｅｖｉｃ Ａ，Ｚｕｃｋｏ Ｊ，Ｓｉｍｕｎｋｏｖｉｃ Ｊ，ｅｔ ａ１．ＣｌｕｓｔＳｃａｎ： ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｐｒｏｇｒａｍ ｐａｃｋａｇｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｍｉ—ａｕｔｏｍａｔｉｃ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｄｕｌａｒ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒｓ ａｎｄ ｉｎ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０，７（２）：１０５ ［６］ Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ ＡＳ，Ｒｉｖｅｒａ Ｈ，Ｔｏｒｐｅｙ ＪＷ ｅｔ ａ１．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ— ｂａｓｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｒｏｓｓ—ｌｉｎｋｉｎｇ ｐｒｏｂｅｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＡＣＳ Ｃｈｅｍｌ Ｂｉｏｌ，２００６， １（１ １）：６８７ ［７］ Ｓｃｈｎａｒｒ ＮＡ，Ｋｈｏｓｌａ Ｃ．Ｔｒａｐｐｉｎｇ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ， ２００６，１（１ １）：６７９ ［８］ Ｍｅｉｅｒ ＪＬ．Ｈａｕｓｈａｌｔｅｒ ＲＷ，Ｂｕｒｋａｒｔ ＭＤ．Ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｂａｓｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ ｆｏｒ ａｃｙｌ ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅｓ［Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ，２０１０，２０（１６）：４９３６ ［９］ Ｐｈａｍ ＮＤ，Ｐａｒｋｅｒ ＲＢ，Ｋｏｈｌｅｒ ＪＪ．ＰｈＯｔＯｃｒＯｓｓｌｉｎｋｉｎｇ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｉｎｔｅｒａｃｔｏｍｅ ｍａｐｐｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，２０１３，１７（１）：９０ ［１０］ Ｙｅ Ｚ，Ｂａｉｒ Ｍ，Ｄｅｓａｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａ ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ａｎｄ ｆｌａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ ＢｉｏＳｙｓｔ，２０１１，７（１１）：３１５２ 胡春生，吴祖泽，张庆林．聚酮类化合物异源表达研究进 展［Ｊ］＿生物技术通讯，２０ １ ３，２４（４）：５７３ ［１２］ Ｓｔｅｖｅｎｓ ＤＣ，Ｈａｆｔ ＴＰ，Ｂｏｄｄｙ ＣＮ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｒｔａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｈｏｓｔｓ［Ｊ］． Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ，２０１３，３０（１１）：１３９１ ［１３］ Ｓｔｅｖｅｎｓ ＤＣ，Ｃｏｎｗａｙ ＫＲ，Ｐｅａｒｃｅ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｓｉｇｍａ ｆａｃｔｏｒ ｏｖｅｒ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｎａｂｌｅｓ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｔｙｐｅ ＩＩ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１３，８（５）：１ ［１４］ Ｍａｔｓｕｍｕｒａ Ｉ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｍｏｄｅｌ ｆａｃｔｏｒｉｅｓ［Ｊ］．ＡＪＯＲ， ２０１３，３（１Ａ）：８１ ［１５］ 王嫒嫒，郭文斌，宋存江．工业微生物菌种改造的新方 法——优势小基因组生产菌的构建［Ｊ］．微生物学报，２０１２， ５２（３）：２８６ ［１６】 Ｕｍｅｎｈｏｆｆｅｒ Ｋ，Ｆｅｈ６ｒ Ｔ，Ｂａｌｉｋ６ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｄｕｃｅｄ ｅｖｏｌｖａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＭＤＳ４２，ａｎ ＩＳ－ｌｅｓｓ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈａｓｓｉｓ ｏｆｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］． Ｍｉｃｒｏｂ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔ，２０１０，９（３８）：１ ［１７】 Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ Ｈ，Ｍｏｒｉ Ｈ，Ｆｕｊｉｏ Ｔ．Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｍｉｎｉｍｕｍ ｇｅｎｏｍｅ ｆａｃｔｏｒｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ａｐｐｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００７， 国外医药抗生素分册２０１４年１１月第３５卷第６期 ４６（ｐｔ３）：１ ５７ ［１ ８］Ｌｅｅ ＪＨ，Ｓｕｎｇ ＢＨ，Ｋｉｍ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ａ ｒｅｄｕｃｅｄ—ｇｅｎｏｍｅ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｆｏｒ Ｌ—ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ２４５ ［１９］Ｋｏｍａｔｓｕ Ｍ，Ｕｃｈｉｙａｍａ Ｔ，Ｏｍｕｒａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｅ－ ｍｉｎｉｍｉｚｅｄ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｏｓｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ】．ＰＮＡＳ，２０１０， １０７（６）：２６４６ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔ，２００９，８（２）：１ 《国外医药抗生素分册》投稿须知 《国外医药抗生素分册》为双月刊，是由四川抗菌素工业研究所、中国医学科学院医药生物技术研究所 共同主办的国家级抗生素药学类科技期刊，国内外公开发行，并被国内外主要检索系统收录。 本刊着重报道抗生素药物的科研、生产和临床应用等方面的学科进展，内容包括抗生素类药物的筛选、 合成工艺、药物分析、药剂学、药理学、临床应用、生产情况、新药介绍及新技术新设备介绍等方面。报道 形式以综述、编译、临床报告、信息及文摘等为主。 １投稿要求及注意事项 １．１以Ｅ．ｍａｉｌ方式发送文章电子文稿，并邮寄审稿费５Ｏ元。 １．２凡投至本刊稿件，２月内向作者反馈处理意见，未收到处理意见者可通过电子邮件或电话询问。经审 阅后需修改的稿件退回作者修改，若修改期超过２个月即作为新稿处理。 ２文稿的撰写要求 ２．１文题：题名应简明、切题，论文、综述和研究简报应同时提供中、英文题名，文题中不宜出现化学 式及不为人们熟悉的缩写。中文题目一般不超过２０个字。 ２．２摘要：是以提供文章内容梗概为目的，不加评论和补充解释，简明、确切地记述文献重要内容的短 文。摘要应具有性和自明性，并且拥有与文献同等量的主要信息，即不阅读全文，就能获得必要 的信息。尽量避免使用特殊符号、公式，切忌把应在引言中出现的内容写入摘要，３００字左右为宜。 ２．３关键词：选择能反映论文特征内容、通用性较强的术语３～８个为关键词，中、英文关键词排列应一致。 ２．４正文：应尽量减少层次，一般不宜超过３层。 ２．５参考文献：必须以作者亲自阅读过的近期公开文献为限，力求精选。 ３文稿撰写要求的补充说明 ３．１综述：综述文章需选题新颖，层次清晰，应结合文献扼要评述国内外学者在该领域的研究进展，不要 泛泛罗列文献；文章要述评结合，不可只述不评；述要有深度和广度，既要全面，又要有侧重点； 评既要客观公正，又要有独到见解。文章全部字数一般不应超过８０００字。 ３．２临床报告：围绕抗生素应用，密切结合临床，反映药物治疗过程中产生的问题，并提供预防和解决方 法，可包括特定药物、疾病和药学服务模式等。可以是研究报告、特殊个案报道等，个案报道也可以 以一个药或一类药积累较多例数后作深入探讨。 ３．３编译：围绕某一专题，综合编译几篇或节译一篇外文文献的主要内容。字数一般在５０００字以内，译文 均以编写名义发表，且不注明出处，但来稿时请附原文复印件。作者简介请注明工作单位。 ３．４文摘：以能说明原文的基本内容和观点为原则，字数一般以８００￣１０００字为宜，请附原文复印件。
