维普资讯 http://www.cqvip.com ７３４ 中国公共卫生２００７年６月第２３卷第６期 ｃ＾ ＪＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＪｕｎ ２００７＂Ｃｏ１．２３Ｎｏ．６ 文章编号：１００１．０５８０（２００７｝０６．０７３４．０２ 中圉分类号：Ｒ ９９４．６ 文献标志码：Ａ 【实验研究】 甲醛吸人对小鼠免疫系统毒性作用 梁瑞峰，原福胜，白剑英，赵五红 摘要：目的通过吸入甲醛（ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ，ＦＡ）染毒小鼠观察其免疫损伤作用。方法选用健康清洁级昆明种 小鼠３０只，随机分成５组（即阴性对照组１，３，５ ｍｇ／ｍ 染毒组和阳性对照组），每组６只，用静式吸入染毒方式染毒１４ ｄ处死后，计算脾脏系数、胸腺系数；测定脾脏和胸腺ｃＤ３含量、ＣＤ４含量、ｃＤ８含量；测定巨噬细胞吞噬功能、迟发超 敏反应、抗体生成细胞数及脾脏淋巴细胞功能转化。结果 甲醛吸入染毒可以引起小鼠脾脏系数、胸腺系数减小（Ｐ ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；脾脏和胸腺ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８含量降低，ＣＤ４／ＣＤ８明显增大（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；脾淋巴细胞转 化功能、迟发变态反应强度、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬功能均随染毒剂量的升高而下降（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。 结论 吸入甲醛可导致小鼠免疫系统的全面损伤。 关键词：甲醛；免疫损伤；免疫功能 Ｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ＬＩＡＮＧ Ｒｕｉ－ｆｅ．ｇ．ＹＵＡＮ Ｆｕ－ｓｈｅｎｇ。ＢＡＩ Ｊｉａｎ－ ｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｔａｉｙｕａｎ ０３０００１，Ｃ＾ｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ｏｆ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ（ＦＡ）ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｉｒｔｙ ＫＭ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ５ ｇｒｏｕｐｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，１，３，５ ｍｇ／ｍ ＦＡ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ ｏｆ ＦＡ ｂｙ ｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｓｔａｔｉｃ ｔｏｔａｌ ｅｎｃｌｓｕｒｅ ｃｈａｍｂｅｒ ｆｏｒ １４ ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｏｒｅｌａｔｉｖｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｔｈｙｍｕｓ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ；Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤｓ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｔｈｙｍｕｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｔｈｅ ｓｗａｌｌｏｗ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＣＲＢＣ ｓｗａｌｌｏｗ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；Ｔｈｅ ｄｅｌａｙｅｄ ｔｙｐｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｉｃｅ，ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｌｍｐｈｏｃｙｔｅ ｙｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍｅａ． ｓｕｒｅｄ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ ｂｙ ｔｈｅ ｔｙｐｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｔｈｙｍｕｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５ ｏｒＰ＜０．０１）；ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤｓ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｔｈｙｍｕｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｌｓｏ，ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ＣＤ４／ＣＤ８ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ（Ｐ＜０．０５ ｏｒ Ｐ＜０．Ｏ１）ｗｈｅｎ ｍｉｃｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ＦＡ ｖａｐｏｒ．Ｂｏｔｈ ｌｍｐｈｏｙｃｙｔｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｔｅｒ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｅｃｌｉｎｅ ｔｅｎｄｅｎ． ｃｙ ｗｉｔｈ ｄｏｓｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ＦＡ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５ ｏｒ Ｐ＜０．０１）；Ｔｈｅ ｓｗａｌｌｏｗ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ＦＡ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜ ０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｏｖｅｒａｌｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ；ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｉｎｊｕｒｙ；ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ 近年来，随着社会发展和人民生活水平的不断提高，室内 空气污染已成为一个公众所关注、迫切需要解决的卫生问 题【１］。甲醛（Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ，ＦＡ）是造成室内空气污染的主要 物质６２２，其对人体的健康危害不容忽视。目前。对甲醛造成的 免疫损伤国内外研究较少。因此，本文从免疫病理、细胞免 采样仪；ＶＩＳ一７２２０分光光度计：ＰＲＥＣＩＳＡ ３００ＭＣ电子天平； ＳＨＺ一２２水浴恒温振荡器；光学显微镜，ＢＨ一２（Ｅｔ本ＯＬＹＭ ＰＵＳ公司）；ＱＬ一９０１旋涡混合器等。 １．３实验方法采用健康昆明种纯系小鼠３０只，鼠龄７周， 体重１８～２２ ｇ（山西医科大学动物中心）。将动物随机分为５ 组（即阴性对照组，１，３，５ ｍｅ，／ｍ 染毒组和阳性对照组），每组 疫、体液免疫及非特异性免疫等４个方面对甲醛的免疫毒性 作用进行了研究，为建立甲醛免疫毒性的卫生标准提供理论 依据。 ｌ材料与方法 １．１主要试剂 甲醛，分析纯（上海溶剂厂）；注射用环磷酰 胺（ＣＰ）（上海华联制药有限公司）；淋巴细胞分离液，ＯＪＧＨＳＢ ６只，雌雄各半。采用甲醛静式吸入染毒，每天染毒２ ｈ。连续 染毒１４ ｄ。阴性对照组吸入过滤的新鲜空气，处理时间与染 毒组相同。阳性对照组从第８ ｄ开始，每Ｅｔ按４０ｍｇ／（ｋｇ・ｂｗ） （用生理盐水配制）腹腔注射环磷酰胺（ＣＰ），连续７ ｄ。染毒 结束次Ｅｔ称重小鼠后，颈椎脱臼处死，无菌取脾脏、胸腺，除去 血液。滤纸吸干，称重。 ８５—２００１（上海恒信化学试剂有限公司）；３一氨丙基三乙氧硅 烷（ＡＰＥＳ），３２Ｋ１２６５（武汉博士德生物工程有限公司）；兔抗 鼠ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤｓ单克隆抗体，即用型ＲＳＣ７２１９Ｋ（天津灏洋 生物工程有限责任公司）；浓缩型二氨基联苯胺显色（ＤＡＢ）试 剂盒（天津灏洋生物工程有限责任公司）；刀豆蛋白Ａ （ＣｏｎＡ）、四甲基偶氮噻唑蓝（Ｍ１ｖｒ）试剂盒（北京夏斯生物技 术有限公司）。 １．２仪器及设备５０ Ｌ静式染毒柜；ＧＳ一３交直流两用大气 １．４免疫指标测定（１）计算脾脏（胸腺）系数：脾脏（胸腺）系 数＝器官重量（ｎａｇ）／体重（ｇ）；（２）脾脏和胸腺ＣＤｓ含量、ＣＤ４含 量、ＣＤ 含量测定：将取出的小鼠脾脏、胸腺按文献Ｃ３］方法制备 成浓度为１×１０ 的细胞悬液，再取其５０ 滴于经ＡＰＥＳ处理 过的载玻片上，制成淋巴细胞涂片，之后分别按试剂盒说明书 对脾脏、胸腺ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ 含量进行测定，计算阳性细胞率； （３）脾脏淋巴细胞功能转化测定：采用四甲基偶氮噻唑蓝 ＊基金项目：山西省自然科学基金项目（２００３１０９８） 作者单位：山西医科大学公共卫生学院环境卫生教研室，太原 ０３０００１ （Ｍ１ｖｒ）法㈨；（４）迟发型超敏反应测定：采用足垫增厚法【５ ； （５）抗体生成细胞数测定：采用溶血空斑试验（ＰＦＣ试验）Ｃ６３； （６）巨噬细胞吞噬功功能测定：采用鸡红细胞吞噬实验［７］。 １．５统计分析采用ｓＰＳＳ １０．０统计软件进行方差齐性检 验、方差分析、相关分析。 作者简介：梁瑞峰（１９７６一），男，山西太原人，助教，硕士，主要从事 环境毒理学研究。 通讯作者：原福胜 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国公共卫生２００７年６月第２３卷第６期 Ｃｈｉｎ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｊｕｎ ２００７ Ｖｏ１．２３ Ｎｏ．６ ７３５ ２结果 ２．４迟发型超敏反应测定 随甲醛染毒剂量的升高。各染毒 剂量组小鼠迟发超敏反应强度呈明显下降趋势，３个染毒组 小鼠足垫厚度差分别为（０．０５９±０．０２５），（０．０４８±０．０２１）， （０．０３６±０．０１８）ｍｒｌｌ，与对照组小鼠足垫厚度差（０．０７５± ０．０２１）ｍｍ比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 ２．５抗体生成细胞测定 随染毒剂量的增加，小鼠抗体生成 ２．１小鼠脾脏、胸腺系数测定（表１） 从表１可知，各甲醛 染毒剂量组小鼠脾脏、胸腺系数随染毒剂量升高呈明显下降 趋势。除１ ｍｇ／ｍ３染毒组脾脏系数与对照组比较差异无统计 学意义外，其他各染毒剂量组与对照组比较，差异均有统计学 意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。 表１甲醛对小鼠脾脏、胸腺系数的影响（ｘ±ｓ，ｎ＝６。ｍｇ／ｇ） 细胞数依次为（０．８５５±０．１０６），（０．４４５±０．０８１），（０．３２３± 注：与阴性对照组比较，＊Ｐ＜０．０５。＊＊Ｐ＜０．０１ ２．２ 甲醛对小鼠脾脏、胸腺ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８含量的影响（表 ２、表３） 从表２可知。各甲醛染毒剂量组小鼠脾脏ＣＤ３、 ＣＤ４、ＣＤ８阳性细胞数随甲醛染毒剂量的升高呈明显下降趋 势，除ｌｍｇ／ｍ 染毒组ＣＤ３含量、ＣＤ４含量及３ｍｇ／ｍ３染毒组 ＣＤ４含量外，其他各测量值与对照组比较差异有统计学意义 （Ｐ＜０．０１），并且两者间呈剂量反应关系（ｒ：０．７７１，Ｐ＜ ０．０１；ｒ＝０．６６０，Ｐ＜０．０１；ｒ＝０．９１４，Ｐ＜０．０１）；且ＣＤ４／ＣＤｓ 明显增大，与对照组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 表２甲醛对小鼠脾脏ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤｓ的影响（ｘ±ｓ。，ｌ＝６） 注：与阴性对照组比较。＊Ｐ＜Ｏ．０５。＊＊Ｐ＜Ｏ．０１ 表３甲醛对小鼠胸腺ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤｓ的影响（ｘ±ｓ。，ｌ＝６） 注：与阴性对照组比较。＊Ｐ＜０．０５。＊＊Ｐ＜Ｏ．０１ 从表３可知，各染毒剂量组小鼠胸腺ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤｓ阳性 细胞数明显低于对照组，除１ ｍｇ／ｍ３染毒组外．其他组与对照 组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０，０１），小鼠胸腺 ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤｓ阳性细胞数与甲醛染毒剂量间有明显剂量一 反应关系（ｒ＝０．８８１，Ｐ＜Ｏ．０１；ｒ＝０．７６３，Ｐ＜０．０１；ｒ＝ ０．９６９，Ｐ＜０．０１）。ＣＤ４／ＣＤｓ明显增大，与对照组比较差异有 统计学意义（Ｐ＜０．０１）。 ２．３脾淋巴细胞功能转化实验 １，３，５ ｒａｇ／ｍ 甲醛染毒组 小鼠脾淋巴细胞转化功能吸光度（Ａ）值分别是（０．２６７± ０．１２４），（０．２３５±０．０５８），（０．２２７±０．１５８），与对照组小鼠脾 淋巴细胞转化功能吸光度（Ａ）值（０．４６７±０．０８９）比较，差异 有统计学意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。 ０．０５６）个，与对照组（１．０１８±０．２４５）个比较，差异有统计学意 义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。 ２．６巨噬细胞吞噬功能测定从表４可知，各剂量甲醛染毒 组小鼠巨噬细胞吞噬功能随甲醛染毒剂量的升高呈明显下降 趋势，除１ ｍｇ／ｍ３染毒组与对照组比较差异无统计学意义外， 其他各组与对照组比较差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ ＜０．０１），并存在剂量一反应关系（ｒ＝０．９３，Ｐ＜０．０１；ｒ＝ ０．９５２，Ｐ＜０．０１）。 表４甲醛对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响（ｘ± 。 ＝６） 注：与阴性对照组比较，＊＊Ｐ＜０．０１ ３讨论 研究认为，现在室内空气污染已经取代过去的煤烟型污 染和光化学烟雾型污染，而成为危害人们健康的主要污染 源［８）。居民室内装修后空气中甲醛严重超标。有研究认为， 吸入甲醛可导致机体免疫系统自稳功能破坏，引起免疫功能 损害，继而出现一系列相关症状［９）。本次研究发现，甲醛在低 剂量和高剂量时均可引起小鼠脾脏、胸腺重量下降，导致小鼠 脾脏、胸腺ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤｓ阳性细胞数减少，ＣＤ４／ＣＤ８比值增 大；也能抑制脾淋巴细胞功能转化、迟发型超敏反应、抗体生 成细胞数及巨噬细胞吞噬功能。脾脏、胸腺系数降低，表明甲 醛可引起机体的免疫病理损伤；Ｔ细胞亚群阳性细胞数减少， 以及脾淋巴细胞功能转化、迟发型超敏反应减弱．提示机体的 细胞免疫也受到了明显的抑制；同时，抗体形成细胞数减少、 巨噬细胞吞噬功能减弱证明甲醛对体液免疫和非特异性免疫 均有不同程度的损伤。因此，认为甲醛可对机体的免疫系统 造成全面的损伤，其作用机制有待进一步研究。 参考文献 ［１］ 戴天有，刘德全，曾燕君，等．装修房屋室内空气污染［Ｊ］．环境科 学研究，２００２，１５（４）：２４—２９． ［２］ 王南南，叶琳．甲醛暴露的生物标志物研究现状［Ｊ］．中国公共卫 生。２００４，２２（８）：１００４—１００６． ［３］ 朱立平，陈学清．免疫学常用实验方法［Ｍ］．北京：人民军医出版 社．２０００：３８４． ［４］ 薛彬，雷志明．用一种改良的ＭＴＴ颜色反应法测定淋巴细胞转 化［Ｊ］．卫生毒理学杂志，１９８８，２（１）：６１—６３． ［５］ 刘国谦．细胞毒理学［Ｍ］．北京：军事医学科学出版社，２００１：２． ［６］ 文育峰，姚应水，王金泉，等．甲醛对小鼠免疫系统的影响［Ｊ］．皖 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