2015年9月 西南民族大学学报(自然科学版) Journal of Southwest University for Nationalities(Natural Science Edition) Sept.2015 Ve1.41 No.5 第41卷第5期 doi:10.1 1920/xnmdzk.2015.05.009 民族药艳山姜提取物对实验性动脉粥样 硬化大鼠血管舒缩因子的影响 邵君傲 。李佳川 曾,敏 ,顾健 ,张彦燕。 (1.西南民族大学民族医药研究院,四川 成都 610041;2.贵州医科大学药理教研室,贵州 贵阳550004) 摘要:研究采用连续给予高脂饲料24周建立实验性动脉粥样硬化大鼠模型,分别检测大鼠血管活性物质NO、ET一1、 AngII、TXA2和6-K—PG的含量或活性,并计算血管舒缩因子NO/ET一1比值、血栓因子TXA2/6一K—PG的平衡比值,探讨 民族药艳山姜提取物对实验性动脉粥样硬化大鼠血管舒缩活性因子的作用.实验结果表明,艳山姜提取物能明显 升高大鼠血清NO和6一K—PG含量,降低ET-1、AngII和TXA2含量,分别改善血管舒缩因子NO/ET一1及血栓因子TXA2/ 6一K.PG的比值,恢复各血管舒缩因子之间的平衡失调.上述结果提示,艳山姜提取物具有较好的调节血管舒缩功能,保 护血管内皮功能,有效阻止AS进一步发生和发展的作用. 关键词:艳山姜提取物;动脉粥样硬化;血管舒缩因子 中图分类号:R285:R29 文献标志码:A 文章编号:2095-4271(2015)05-0571-04 Effect of Alp Zerumbet Extract on vascular vasomotor factors in experimental atherosclerosis rats SHAO Jun-ao ,LI Jia—chuan ,ZENG Min ,GU Jian ,ZHANG Yan.yan (1.Southwest University orf Nationalities,Chengdu 610041,P R.C.;2.Guiyaug Medical Uuiversity,Guiyang 550004,P.R.C.) Abstract:This research used the experimentl ataherosclerosis rat model,which was established by feeding high cholesterol diet f0r 24 weeks,and measured nitirc oxide(NO),endothelin一1(ET一1),angiotensinII(AngII),thromboxaneA2(TXA2)and calcu— lated 6-Keto—prostaglandinF1ct(6-K・PG)contents,and the ratios of NO/ET一1,TXA2/6一K—PG to investigate the effects of Al— pinia Zerumbet Extract on the vasomotor factors of vascular endothelium in experimental atherosclerosis rats.The results showed that Alpinia Zerumbet Extract could increase the contents of NO,6-K-PG and the ratio of NO/ET一1,and also decrease the levels of ET一1,AngII,TXA2 and the ratio of TXA2/6一K-PG.All these results indicated that Alpinia Zerumbet Extract could effectively improve the atherosclerosis,the mechanism may relate to the improvement of the secretion function of endothelil celal,and the protection of vascular endothelial cells of atherosclerosis Ilat. Key words:Alpinia Zerumbet Extract;atherosclerosis;vasomotor factors 心脑血管疾病是严重危害人类生命健康的第一 杀手,而动脉粥样硬化(AS)的发生是引起心脑血管 疾病及其并发症发病和发展的共同病理基础….在前 期的研究中,已证实艳山姜对LPS诱导的HUVECs细 收稿日期:2015-07-30 胞损伤具有一定的保护作用 ,为进一步揭示艳山 姜提取物对动脉粥样硬化血管内皮功能的保护作用, 本研究通过建立实验性大鼠动脉粥样硬化动物模型, 探讨艳山姜提取物对实验性动脉粥样硬化大鼠血管 通信作者:李佳川(1984一),男,汉族,山西高平人,副教授.研究方向:中药及民族药物创新研究与开发,E—mail:ligat@163.eom 基金项目:国家自然科学基金(81102664、81302912、81560811);四川省大学生创新创业计划项目(¥201510656128);西南民族大学 校学术带头人培养基金(2015) 572 西南民族大学学报(自然科学版) 第4l卷 舒缩活性因子的作用,为艳山姜提取物的血管内 皮功能保护作用机制提供一定的科学依据. 1材料与方法 1.1 动物 Wister大鼠,SPF级,全雄,体质量200±20 g.实 验动物由四川省医学科学院实验动物研究所生产,动 物生产合格证号:scx ̄(川)2008—24. 1.2药物艳山姜提取物 采用水提法提取制备成1g(原药材)/ml药液,外 观棕褐色,批号:20140710.复方丹参片,广州白云山 和记黄埔中药有限公司,批号:20140620.一氧化氮检 测试剂盒(NO,还原酶法),南京建成生物工程研 究所,批号:20150312.大鼠内皮素(ET.1)、血管紧张 素1I(AngII)、血栓素A (TXA )、6酮前列腺素(6一K— PG)酶联免疫分析测定试剂盒,均由美国RD公司进 口分装,批号:201503. 1.3 仪器 SN-3001酶标仪(Thermo Formo公司). 1.4 方法 Wister大鼠,全雄,体质量200±20 g.实验时按 动物体质量分层随机分为空白对照组、模型对照组、 阳性对照组(复方丹参片)和艳山姜提取物高、中、低 剂量组.除模型对照组18只动物外(其中6只分别于 造模16周、20周和24周各取2只定期进行主动脉病 理HE检测,判定大鼠动脉粥样硬化模型的建立程 度),考虑到实验期间动物的部分死亡,其余各组分别 每组12只动物.实验时除空白对照组(给予大鼠基础 饲料)外,其余各组大鼠均给予自制高脂饲料 (配 方:猪油15%、胆固醇5%、胆酸钠0.5%,其余均为基 础饲料)20g/(只・d),建立实验性大鼠动脉粥样硬 化动物模型.在造模的同时,各组大鼠每日按相应设 计剂量同步灌胃给药1次,连续24周.除大鼠一般常 规观察外,第24周末次给药后40rain(期间禁食不禁 水8h),大鼠股动脉取血,3000r/min离心10min,分离 血清,EP管分装,-20oC冻存备用.测定时血清复溶, 依据各检测试剂盒说明书,分别采用还原酶法检 测血清一氧化氮(NO)的含量,ELISA酶联免疫法检 测血清内皮素一1(ET一1)、血管紧张素Ⅱ(Ang 1I)、血 栓素A:(TXA:)、6酮前列腺素(6-K—PG)的含量或活 性,并分别计算血管舒缩因子NO/ET一1比值、血栓因 子TXA /6.K.PG的平衡比值. 1.5统计学方法 所有实验数据均采用SPSS 15.0数理统计软件 进行分析,以( -s)表示结果,采用单因数方差分析 进行组间比较. 2 结果 2.1大鼠一般常规观察 大鼠连续造模24周后,除空白对照组外,其余各 组大鼠部分动物表现出行动稍显迟钝、困乏、目光呆 滞、进食饮水量略有减少,粪便稀溏等症状,各组均有 少量动物死亡.同时通过对模型组主动脉病理学HE 染色显示,主动脉内皮层有大量泡沫细胞及内皮脱 落,符合AS症的早期脂纹纤维斑块期改变,表明实验 性动脉粥样硬化大鼠模型建立成功. 2.2对大鼠NO、ET一1及NO/ET一1比值的影响 由表1结果可知,与空白对照组相比较,模型对 照组大鼠血管内皮细胞功能异常明显.给予高脂饲料 后,大鼠血清NO含量明显降低,ET一1含量和血管舒 缩因子NO/ET.1的比值明显升高,血管舒缩功能异 常.与模型对照组相比较,艳山姜提取物能明显或部 分升高血清NO含量,降低ET一1含量,改善血管舒缩 因子NO/ET.1的比值(均P<0.05~0.01),恢复血 管中NO与ET之间的动态平衡,显示艳山姜提取物 具有较好的改善大鼠血管内皮功能异常,有效保护血 管内皮细胞,进而阻止AS发生和发展的作用. 2.3对大鼠血清Ang1I含量的影响 由表2结果可知,与空白对照组相比较,模型对 照组大鼠血管活性物质Ang II含量明显升高.与模型 对照组相比较,艳山姜提取物能明显或部分降低大鼠 血清Ang II含量(均P<0.05~0.01),调节血管舒缩 功能,有效阻止血管重构. 2.4对大鼠TXA2、6.K—PG及TXA2/6.K-PG比值的 影响 由表3结果可知,与空白对照组相比较,模型对 照组大鼠血清中血管活性物质血TXA 含量和血栓因 子TXA /6 K.PG的比值明显升高,6.K.PG含量明显 降低,表明大鼠血管内皮TXA /6一K-PG平衡失调.与 模型对照组相比较,艳山姜提取物能明显升高血清6一 第5期 邵君傲,等:民族药艳山姜提取物对实验性动脉粥样硬化大鼠血管舒缩因子的影响 573 K—PG含量,降低TXA2含量,改善TXA:/6一K—PG的比 值(均P<0.01),恢复HA2与6-K—PG之间的平衡失 调,显示出艳山姜提取物具有较好的保护大鼠血管内 皮细胞功能,减少血管活性物质的释放,抑制血栓形 成,进而阻止AS的发生和发展. 表1对大鼠血清NO、ET-1及NO/ET一1比值的影响《孟±s) Table 1 E ̄cts on serum NO,ET一1and the ratio of NO/ET一1 in rats(元±s) 与模型组比较, P<0.05,{ P<0.O1 表2对大鼠血清AngⅡ的影响( ±s) Table 2 E ̄cts on semmAngⅡin Fats( ±s) 与模型组比较, P<0.05,} P<0.01 表3对大鼠血清TXA2、6-K-PG及TXA2/6一K—PG比值的影响(孟±s) TaJ)le 3 E ̄cts on serum TXA26-K—PG and the ratio off XA2/6一K—PG in rats(面±S) .与模型组比较, P<0.05, P<0.O1 3 讨论 现已公认,动脉粥样硬化(AS)的发生是由长期 PGI 等),诱导加重血管内皮的损伤 J,动脉粥样硬 化斑块形成.NO和ET均是由血管内皮细胞分泌的 重要血管活性物质,NO/ET的平衡失调与AS的形成 直接相关 J.NO的生物活性变化反映了血管内皮功 能的状态,能抑制ET等缩血管活性物质的分泌,并抑 的高脂血症、高血压、高血糖等多种损伤因素所造成, 尤其长期的脂质浸润,脂质过氧化物的产生,血小板 在动脉壁上异常的粘附聚集,这一系列的危险因素均 作用于血管内皮细胞,导致动脉内膜受到损伤,进而 动脉对内膜的损伤作出一系列的炎症-纤维增生性反 制血小板的聚集,减少粘附因子的表达.因此,NO在 早期阻止AS的病程发展起到了保护性的作用;而ET 是目前已知最强的内源性血管收缩因子,ET的表达 增加,能加速血小板的聚集,引起内皮粘附、血管平滑 肌细胞(VSMC)增殖增加,从而加重血管内皮炎症.纤 应,血管内皮细胞发生功能障碍 ;同时受损的血管 内皮细胞在炎性的表达下,进一步又释放出各种血管 活性物质及黏附分子(如NO、ET-1、AngⅡ、TXA2和 574 西南民族大学学报(自然科学版) 第41卷 维增生的表达 .因此,NO释放减少,ET释放增加, NO与ET的平衡失调是反映内皮细胞功能障碍的关 键指标.通过上述实验结果表明,大鼠连续给予高脂 饲料连续24周后,动物血清NO含量明显降低,ET-1 [4]樊利娜,张鑫,赵兴冉,等.葛根一丹参组方对动脉粥样硬化鹤鹁 血管内皮组织的影响[J].西南民族大学学报:自然科学版,2014, 40(1):58-62. 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