维普资讯 http://www.cqvip.com 齐齐哈尔医学院学报２００８年第２９卷第５期 ・论著・ 丹参注射液对小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌上皮型钙黏素 表达的影响 徐亚东 张 薇 尤立光 赵守梅 【摘要】 目的观察丹参注射液对小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌上皮型钙黏素（Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｅ—ｃａｄ）的表达。 方法 建立ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠模型，用免疫组织化学方法检测丹参对肿瘤细胞Ｅ—ｃａｄ表达的影响，测肿瘤 体积、瘤重。结果 生理盐水组Ｅ—ｃａｄ阳性表达率与丹参组和环磷酰胺组有显著性差异，而后两组差 异无显著性。结论丹参可抑制小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌上皮型钙黏素的异常表达并抑制小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌生长。 ｌｅｗｉｓ肺癌 上皮型钙黏素 【关键词】 丹参注射液Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｄａｎｓｈｅｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ——ｃａｄｈｅｒｉｎ ｏｆ Ｌｅｗｉｓ Ｃａｎｃｅｒ ｍｏｌｌｓｅ ＸＵ 一Ｄｏｎｇ，ｅｔ ａ１．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｔｈｅ Ｆｉｆｔｈ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄ— ｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ，ＨｅｉｌｏｎｇＪｉａｎｇ １６３３１８ Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｄａｎｓｈｅｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ Ｌｅｗｉｓ ｐｕｈｎｏｎａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｏｄｅｌｓ．ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＨＣ）ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ，ｔｕｍｏｒ ｗｅｉｇｈｔ ａｔ ｔｈｅ ｅｎｄ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｄａｎｓｈｅｎ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ Ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐｓ；Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｄａｎｓｈｅｎ ｇｒｏｕｐｓ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｔｈａｎ ｉｎ Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｄａｎｓｈｅｎ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｐｒｏｂａｂｌｙ ａｔ— ｔｒｉｂｕｔｅｄ ｔＯ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ ａｂｎｏｒｍａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｄａｎｓｈｅｎ Ｉｎｉｅｃｔｉｏｎ Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ 丹参为唇形科鼠尾草属植物，具有抗血小板聚 集、改善微循环、调节血液流变学、增强机体免疫、逆 转慢性肝病纤维化、抗脂质过氧化及对心肌细胞缺 血再灌注损伤的保护ｎ ；以及抗肿瘤、抗氧化、抗菌 抑菌抗炎、激素样活性及心血管方面等药理作用＿＿２］。 上皮型钙黏素（Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ，Ｅ—ｃａｄ）是一个钙依赖 性细胞黏附分子，可直接与ｐ一连环蛋白（ｐ—ｃａｔｅ— 羊抗鼠ＩｇＧ和链霉素卵白素过氧化物酶复合物购自 北京中杉金桥生物技术有限公司。 １．２ 方法 １．２．１ 动物 Ｃ５７ＢＬ／６纯系小鼠，雄性６～８周， （２０±２）ｇ，６０只，北京维通利华公司动物实验中心， 动物许可证号：ＳＣＸＫ（京）２００２—２００３。在ＳＰＦ级 实验动物房内养殖。 １．２．２瘤株Ｌｅｗｉｓ肺癌，ｌｅｗｉｓ肺癌荷瘤鼠由中科 院肿瘤研究所提供并传代保种；动物许可证号： ＳＣＸＫ（京）２００４—０００１，Ｌｅｗｉｓ肺癌维持在Ｃ５７ ＢＬ／ ｎｉｎ，ｐ—ｃａｔ）和７一连环蛋白结合，形成结合型的ｐ— ｃａｔ与Ｅ—ｃａｄ复合体，以维持上皮细胞之间的黏附。 本实验研究丹参对小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌Ｅ—ｃａｄ表达的影 响。 １材料和方法 ６小鼠体内，每２周传代１次。 １．２．３动物分组取Ｃ５７ ＢＬ／６小鼠６０只，随机分 １．１ 药物、试剂 丹参注射液（ＤＳ，正大青春宝药业 有限公司，每支１０ ｍｌ，相当于原生药１５ｇ，批号 ０１０１１５６）。注射用环磷酰胺（ＣＴＸ江苏恒瑞医药股 为３组：盐水空白对照组、丹参组、环磷酰胺组，每组 ２０只。各组间小鼠体重差异无显著性。 １．２．４ 荷瘤动物模型的建立 取传代后１４ ｄ的 Ｌｅｗｉｓ肺癌瘤源小鼠，颈脱臼处死，固定于鼠板上， 份有限公司，每支２００ ｍｇ，批号０６０５２０２１国药准字 Ｈ３２０２０８５７）。鼠抗人Ｅ—ｃａｄｈｅｒｉｎ单克隆抗体，山 作者单位：哈尔滨医科大学附属第五医院呼吸科（徐亚东），普外科 （尤立光、赵守梅） 常规消毒，于超净工作台中，从腋部皮下剥取肿瘤组 织，剔除纤维包膜和坏死组织，在无菌平皿中剪碎， 置组织研磨器中加４℃生理盐水，轻轻研磨过滤，制 成瘤细胞悬液，０．４％台盼蓝计数，细胞活力大于 ９５ 调整细胞为１×１０ ／ｍｌ。以上述瘤细胞悬液 哈尔滨医科大学附属第一医院呼吸科（张薇） 邮 编１６３３１８ 收稿Ｈ期２００８—０１—１５ 维普资讯 http://www.cqvip.com Ｊ ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｉｑｉｈａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．５ ０．２ ｍｌ于右腋部皮下注射，以建立模型。 ２结果 １．２．５给药方法 从接种肿瘤第６日开始腹腔注 ２．１ Ｅ—ｃａｄ在小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌细胞各组中的表 射药物，盐水组日腹腔注射０．９％生理盐水０．２ ｍｌ； 达Ｅ—ｃａｄ阳性细胞在各组中数量及表达强弱不 丹参组日腹腔注射丹参注射液０．２ ｍｌ稀释液（相当 一．ＣＴＸ组阳性细胞数量最多。阳性信号表达较 于生药４０ｇ／ｋｇ）；ＣＴＸ组日腹腔注射ＣＴＸ ０．２ ｍｌ稀 强，呈深棕黄色，且阳性信号多在细胞膜中。丹参组 释液（相当于ＣＴＸ药量２５ｍｇ／ｋｇ）；连续１０ ｄ。末 Ｅ—ｃａｄ阳性细胞略少，阳性细胞的信号表达较弱， 次给药后２４ ｈ，小鼠处死，剥取瘤块称重，肿瘤组织 呈浅棕色，主要分布在胞膜，偶见胞浆。生理盐水组 制成蜡块。 Ｅ—ｃａｄ阳性细胞数量明显减少，且阳性细胞的信号 １．３ 观察指标与测定方法 瘤体积：瘤体积一 表达也比较弱，主要分布在胞核和胞浆，并且肿瘤组 ０．５２ａｂ （注：ａ为瘤体的最长径，ｂ为瘤体的最短 织有较多的片状坏死（见图１）。 径）。瘤重：剥取瘤块称重。抑瘤率（ ）一（模型组 平均瘤重一治疗组平均瘤重）／模型组平均瘤重× １００％。 Ｅ－－ｃａｄ计数：用Ｅ—ｃａｄ标记指数，指每个标本 随机检测５个以上视野，数５００个以上肿瘤细胞，按 其阳性百分数分为４级：Ｉ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为０、０～ ■圆圈 Ａ ＣＴＸ组 Ｂ丹参组 Ｃ生理盐水组 图１ Ｅ－ｃａｄ在小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌细胞各组中的表达 ２５ 、２６～７５ 、７６～１００ ，其中“Ｉ”为阴性，“Ⅱ、 ２．２丹参对小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌细胞Ｅ—ｃａｄ的表达的 Ⅲ、Ⅳ”为阳性。 影响丹参组肿瘤细胞Ｅ—ｃａｄ标记指数高于生理 １．４ 免疫组化染色及评估 应用免疫组化ＳＰ法。 盐水组（Ｐ＜０．０１），略低予ｃＴｘ对照组，但差异无 以正常肺粘膜表达的强度及方式为阳性对照。Ｅ— 显著性（Ｐ＞０．０５）。丹参组的瘤重和瘤大小明显小 ｃａｄ免疫染色阳性物质呈棕黄色，主要定位于细胞 于盐水对照组的瘤重和瘤大小（Ｐ＜０．０１），生长抑 膜，即连续的细胞膜染色。 制瘤率分别为４５．３０ 。丹参组瘤体大小明显小于 １．５ 统计学处理 数据以（ｚ±ｓ）表示，采用 盐水对照组（Ｐ＜０．０１）（见表１）。 ＳＰＳＳ１２．０统计软件进行单因素方差分析。 衰１ 丹参注射液对小鼠ｌｅｗｉｓ肺癌细胞Ｅ—ｃａｄ的表达的影响（；±ｓ。”一２０） ３讨论 行ＤＮＡ复制，从而起到抑制肿瘤细胞生长和抗转移 人类型Ｅ—ｃａｄ基因定位于１６ｑ２２，１，Ｅ—ｃａｄ与 的作用。本实验丹参组的瘤重及瘤体大小明显小于 其相关蛋白链接素（Ｃａｔｅｎｉｎ）结合形成复合体介导同 盐水对照组且有较好的量效关系，丹参组肿瘤细胞Ｅ 种细胞的联结，是介导细胞间及细胞与细胞外基质 —ｃａｄ标记指数高于生理盐水组（Ｐ＜０．０１），略低 粘附的主要分子，功能维持上皮细胞间连接，控制 于ＣＴＸ组，差异无显著性（Ｐ＞０．０５），说明丹参能 细胞极性、分化及组织形态发生，在肿瘤浸润转移中 有效抑制肿瘤细胞Ｅ—ｃａｄ的异常表达，使肿瘤细胞 发挥重要作用。Ｅ—ｃａｄ的低表达导致癌细胞间的粘 停滞于Ｇ。、Ｇ。期起到抗肿瘤的作用。 附力减弱，易使癌细胞弥漫生长，不能形成腺管，容易 参 考文献 脱落并向远处转移。 ［１］郭海平，吴乃峰．复方丹参临床药理研究新进展［Ｊ］．药学 中医药的抗癌机理与现代医学化疗药物的抗癌 学报，２０００，１６（２）：１０５—１０６ 作用有相同之处，均具有影响细胞周期中的Ｇ。／Ｓ调 Ｅ２３袁淑兰，王修杰．魏于全．丹参酮抗肿瘤作用及其机制的研究 ｒ门．癌症，２００３．２２（１２）：１ ３６３—１ ３６６ 控点，使肿瘤细胞停滞于Ｇ。、Ｇ。期，而不进入Ｓ期进
