酶法提取羊肚菌菌丝体中鲜味物质

了液体发酵对羊肚菌进行发酵培养得到羊肚菌菌丝体进行本实验研究。在pH为6、提取时间为4h条件下，以

0. 6%的外肽酶与外切B -葡聚糖酶(1 ： 1比例)于50T提取羊肚菌菌丝体中谷氨酸，经高效液相色谱检测，谷氨酸

含量达到2.091g/100go【关键词】羊肚菌；谷氨酸；鲜味物质；酶法提取【基金项目】本文为吉林省大学生科技创新创业训练计划项目“羊肚菌菌丝体中鲜味物质的分析及产品开发”(编号：吉农院合

字［2018］第042号)研究成果。【作者单位】王尊渝，吉林农业科技学院食品工程学院【通讯作者】刘超(1982 ~),女，吉林农业科技学院食岛工程学院教师，博士;研究方向：生物活性物质分离提取及高质化利用—、引言羊肚菌［Morchella esculenta( L. ) Pers.］隶属于子囊菌亚

2.菌种培养。将灭菌后培养基分装在固体培养基中，在 无菌环境下用接种环挑取羊肚菌菌种，于28咒恒温培养箱中

培养7d。活化后的茵种接种于液体培养基中，置28t恒温摇

门(Ascomycotina )、盘菌纲(Discomycetes )、盘菌目(Pez-

izales)、羊肚菌科(Morchellaceae) o羊肚菌肉质脆嫩,风味独 特，维生素和氨基酸含量丰富，营养和药用价值较高，是世界 公认的珍稀食药用菌。床振荡培养，转速130r/min,培养5d得一级种子培养液，再 移至6L液体发酵罐中，制备羊肚菌菌丝体。2. 菌丝体处理。取发酵液，以4, 000r/min离心20min,得

到菌丝体,用蒸憎水冲洗菌丝体，收集菌丝体，进行冷冻干

氨基酸是构成蛋白质的基本单位,是构建生物机体的众

多生物活性大分子之一，是构建细胞、修复组织的基础材料。 鲜味氨基酸是各种食用菌中主要的鲜味成分，其中，谷氨酸

燥,备用。3. 高效液相色谱分析鲜味氨基酸。用高效液相色谱仪

测定氨基酸组成和含量。色谱条件:安捷伦250mm x 4. 6mm 色谱柱，柱温40t ,流速1. 0miymino流动相A：20mmol醋酸

鲜味最为强烈。本文以液体发酵制备的羊肚菌菌丝体为原

料，利用外肽酶与外切0-葡聚糖酶水解菌丝备鲜味氨

基酸(谷氨酸)，为进一步研究液体发酵羊肚菌菌丝体鲜味物

钠;流动相B：醋酸钠：甲醇:乙睛=l：2：2(V),20mmol。检测 波长：338nm。质提供理论依据。二、材料与方法4. 酶法提取液的制备。精确称取5. 0g原料加入酶液中 并搅拌均匀，放入一定温度的水浴锅中，在搅拌条件下酶解

(—)材料。羊肚菌(Morchella esculenta):吉林食用菌研 究所提供。方法(二)。一定时间。酶解完毕后将酶解提取液放人沸水浴中1 ~2min

使酶失汛离心(4,000r/min)10mino取上清液即为酶解提

1.培养基及试剂配制。将去皮洗净后的200g马铃薯切 成小块煮沸30min左右，用四层纱布过滤，马铃薯液中加入

葡萄糖20g、蛋白腺0.5g、牛肉膏0.5g、琼脂20g,加入水至

取液。5. 酶法提取谷氨酸实验。通过正交试验考察酶解温度 (40t、50£、60咒)、酶解 pH(5、6、7)、酶量(0. 4%、0.6%、

l.OOOmL,混合均匀，灭菌制得固体培养基。准确称取的马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白腺0. 5g、牛肉 膏0.5g、水l,00OmL,pH值自然。分装在250mL三角瓶中，

灭菌制得液体培养基。0. 8% )、酶解时间(3、3. 5、4h)四个因素对菌丝体中鲜味氨基

酸(谷氨酸)提取量的影响。提取量以酶解液中谷氨酸含量

为指标。三、结果与分析(一)高效液相色谱分析鲜味物质。按1.2.3方法，检测

液体发酵羊肚菌菌丝体中含有多种呈鲜物质氨基酸,其中鲜 味物质谷氨酸含量最为突出，达到2. 5g/100go表1因素水平表0. lmol/L柠檬酸水溶液:取柠檬酸晶体(C6H8O7 - H2O)2. 10g溶于100mL蒸憎水。lmol/L柠檬酸钠水溶液：取柠檬酸三钠晶体 (C6H5O7Na3 -2H2O)2.94g 溶于 100mL 蒸僧水。0. lmol/L柠檬酸-柠檬酸钠水溶液:溶液将25mL柠檬 酸钠水溶液加入100mL柠檬酸水中，即为125mL的pH =3.4

因素水平A酶解温度/*的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。酶液制备:于缓冲溶液里按照1：1的比例加入一定量外 肽酶与外切P-葡聚糖酶搅拌均匀制得酶液。123405060B pH567C加酶量/%0.40.60.8D酶解时间/h3.03.54.0• 54 •Industrial & Science Tribune2019 (18) 5产业与科妆论転2019年第18卷第5期长葫灌区水土保持对策探索□官慧敏【内容摘要】本文从长葫灌区实际出发，分析水土保持工作在大型灌区运行管理过程的重要性，提出水土流失对灌区水利工作

的危害，对如何做好灌区水土保持工作提出对策，为加强大型灌区水土保持工作提供参考。【关键词】水土保持；水土流失；可持续发展【作者简介】官慧敏(1984 -),女，四川自贡人；四川葫灌区管理局；研究方向：水利管理—、引言长葫灌区是四川省大型灌区之一,位于四川盆地中部，

被后,水土流失更为严重。我国是水土流失极为严重的国家 之一。作为长葫灌区来讲，水土流失造成了长葫水库的淤

地跨内江市威远县和自贡市，设计灌面32. 45万亩，实际灌面

积，降低了水库发电、灌溉和防洪效益,影响长葫水库水质，

30. 99万亩，灌区总幅员面积550km*2 1 o长葫灌区是四川省的 3严重缺水地区，水资源人均和亩均拥有量仅为全省的10%和

淤塞水库，影响渠道工程供水，降低水利工程效益，甚至导致

水旱灾害发生，影响灌区的正常运行,对水库及下游河道带

26%。四川葫灌区管理局是直属于省水利厅的水利工

程管理单位。长葫灌区水利工程包括两个：中型水库、工业

来严重威胁，严重影响了灌区工农业生产。水土保持是指对自然因素和人为活动造成水土流失所

及生活用水管道和渠道灌溉工程，长葫灌区的水源是自贡 采取的预防和治理措施。加强长葫灌区的水土保持工作，是 实现长葫灌区可持续发展的基础和保证，具有重要的经济效 益和现实意义。市、威远县人民的重要生活和生产水源。防止水土流失，加

强水土保持工作，对实现灌区的良性运行，创造人与自然和

谐的生态灌区，促进灌区生态文明建设和经济社会发展具有

重要的意义。二、加强水土保持工作是实现长葫灌区良性运行的根本

保证加强水土保持工作，对于长葫灌区的良性运行，实现可

持续发展具有重要的作用，具体体现在以下方面。水土流失是指由于自然或人为因素的影响，雨水不能就

地消纳、顺势下流、冲刷土壤，造成水分和土壤同时流失的现

象。在自然状态下，纯粹由自然因素引起的地表侵蚀过程非

减少洪涝灾害的发生(一)。一是水土保持的植物措施，

常缓慢。但在人类活动影响下，特别是严重地破坏了坡地植如林地，能够拦截降雨，枝、叶可以截流，林下枯落物能像海棉 ＞酶解温度(A)。其中,pH和酶解时间的影响较为显著。在

(二)酶法提取工艺优化。根据1-2.5方法，设计正交试 验，其因素与水平如表1所示。表2正交试验设计及结果试验设计范围内，优化得到酶解提取氨基酸的最佳条件为

A2B2C2D3,gp酶解温度50t、pH为6、加酶量0. 6%、酶解时

氨基酸含量

间4h,谷氨酸含量为2. 091g/100g四、结语试验号A1112BCD(g/100g)2. 0702. 0852.07512341231212利用复合酶法对呈鲜氨基酸进行提取能达到较高的提

取效果，提取液中谷氨酸含量接近于高效液相色谱检测的菌

33丝体中谷氨酸含量。以上实验表明，通过酶法提取羊肚菌菌

123121232. 0802. 0902. 0652. 0652. 0852. 075丝体中鲜味氨基酸是较为理想的方法,有助于利用发酵技术 制备羊肚菌鲜味物质,实现其高质化利用。

567ki2233332. 2302. 2352. 2251232.215121【参考文献】232. 2352. 0215[1] 孙慧娟.林芝野生羊肚菌资源调查初报[J].中国林副特 产,2018,5：61 -6232. 2202. 2402. 2302. 0065[2] 魏云云，宫雪，辛广等.基于化学分析与电子舌研究干燥 方式对点柄粘盖牛肝菌鲜味的彩响[J].食話科学,2018,39

k2k32. 2602.2152. 02402. 0085(18)：192~198[3] Kenzo Kurihara. Glutamate:from discovery as a food flavor to

R2. 00352. 0150role as a basic taste ( umami) [J]. Am J Clin Nutr,2009,90(3): 719s-22s由表2的极差分析结果可以看出，四个因素对氨基酸含

量的影响大小依次为:pH(B) ＞酶解时间(。)＞ 加酶量(C)Industrial & Science Tribune2019 (18) 5• 55 •