第２９卷２０１０拄第２期４月大豆科学ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＶ０１．２９Ａｐｔ．ＮＯ．２２０１０大豆脂肪酸组分的快速气相色谱分析苗兴芬Ｌ２，朱命喜１，徐文平２，申宏波２，杜升伟１，裴宇峰３，陈庆山１，胡国华Ｌ３（１．东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨１５００３０；２．黑龙江农业职业技术学院，黑龙江佳木斯１５４００７；３．黑龙江农垦科研育种中心，黑龙江哈尔滨１５００９０）摘要：探讨了大豆脂肪酸快速气相色谱分析方法，不需从原料中提取脂质，直接将磨碎原料中的脂质皂化、甲脂化后，利用色谱柱ＨＰ５１９０９１Ｊ－－４１３，进行气相色谱分析。结果表明：软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸的出峰时间依次为６．５７、７．８３、８．７３、８．８６、９．０６ｍｉｎ。这种方法的优点是快速、操作方便、节省药品；即使在较低的杂交世代样品很少，用普通法不易提取脂质时，此法也能顺利地完成分析工作。关键词：大豆；脂肪酸；气相色谱分析中图分类号：￥５６５．１ＲａｐｉｄＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ文献标识码：Ａ文章编号：１０００—９８４１（２０１０）０２—０３５８－０３ｏｎＦａｔｔｙＡｃｉｄｓＣｏｎｔｅｎｔｂｙＧａｓＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｉｎＳｏｙｂｅａｎＭＩＡＯＸｉｎｇ．ｆｅｎｌ・２，ＺＨＵＭｉｎｇ．ｘｉｌ，ＸＵＷｅｎ．ｐｉｎ９２，ＳＨＥＮＨｏｎｇ．ｂ０２，ＤＵＳｈｅｎｇ．ｗｅｉｌ，ＰＥＩＹｕ．ｆｅｎ９３，ＣＨＥＮＱｉｎｇ—ｓｈａｎｌ．ＨＵＧｕｏ．ｈｕａｌ，３（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０；２．ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇｏｆＡ加ｃｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｏｃａｔｉｏｎａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｍｕｓｉ１５４００７；３．ＬａｎｄＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ＆ＢｒｅｅｄｉｎｇＣｅｎｔｒｅＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｈａｒｂｉｎ１５００９０，Ｈｅｉｔｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｉｓｃｕｓｓｅｄｔｈｅｒａｐｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔｂｙｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｉｎｓｏｙｂｅａｎ，ｗｈｉｃｈｔｏｅｘｔｒａｃｔｊｕｓｔｓａ－ｐｏｎｉｆｉｃａｔｅａｎｄＭｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｅｔｈｅｌｉｐｉｄｓｆｒｏｍｓｒｉｎｄｉｎｇｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｓｄｉｒｅｃｔｌｙｗｉｔｈｏｕｔｈａｖｉｎｇｔｈｅｎｇｅｔｌｉｐｉｄｓｆｒｏｍｓｏｙｂｅａｎ，ｔｈｅｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｂｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｌｕｍｎＨＰ５１９０９１Ｊ．．４１３．Ｔｈｅｔｉｍｅｏｆｐｅａｋｖａｌｕｅｏｆｐａｌｍｉｔｉｅａｃｉｄａｎｄｌｉｎｏｌｅｎｉｃａｃｉｄｔｏａｃｉｄ。ｓｔｅａｒｉｃａｃｉｄ，ｏｌｅｉｃａｃｉｄ，ｌｉｎｏｌｅｉｃｍｅｔｈｏｄｐｒｏｖｅｄｔｏｗａｓ６．５７，７．８３，８．７３，８．８６，９．０６ｍｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｂｅｔｉｍｅａｎｄｍａｔｅｒｉａｌｓａｖｉｎｇ，ａｎｄｅａｓｙｏｐｅｒａｔｅ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄａｌｓｏｈｅｌｐｆｕｌｆｏｒｓｏｙｂｅａｎａｃｉｄｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｅａｒｌｙｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｏｒｉｔｏｎｌｙｎｅｅｄｓｆｅｗｓａｍｐｌｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｏｙｂｅａｎ；Ｆａｔｔｙａｃｉｄｓ；Ｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ大豆油脂是由脂肪酸和甘油组成，其中脂肪酸占油脂总量的９０％以上，是油脂的主要成分。大豆油脂的特性与其所含不饱和脂肪酸的组成与配比有关。大豆油脂不饱和脂肪酸中所含的亚油酸（１８：２）和亚麻酸（１８：３）是哺乳动物自身不能合成的，该重要营养物质必须从植物油脂中获得…。大豆是亚油酸含量较高的油用作物，可防止血清中胆固醇的增加和沉积，软化血管，对防治高血压和心血管疾病均有重要作用。亚麻酸对维持细胞膜的稳定性和调节细胞膜适应性具有极其重要的生物学意义。大豆脂肪酸均采用色谱分析法测定，但不同研究者所采用的进样样品前处理方法和酯化试剂不同。前人分析大豆脂肪酸组分，通常采用索氏抽提法或二氧化碳临界萃取法先提取脂肪旧“Ｊ，提取脂肪要浪费大量的时间，提取脂肪后再使用有机溶剂溶解脂肪。现对Ｓｕｓａｎａ等ｐ１方法进行了改进，将磨碎原料中的脂质不进行提取直接用正己烷溶解浸提，取上清甲酯化，采用醇钾作为甲酯化试剂，酯化反应速度快并酯化完全，甲酯化后离心取上清用ＨＰ５色谱柱进行ＧＣ分析，获得了一种快速检测大豆脂肪酸组分的气相色谱分析法。１材料与方法１．１仪器和试剂Ａｇｉｌｅｎｔ６８９０气相色谱仪，购于安捷司。标准品：软脂酸（＞９９％）、硬脂酸（＞９９％）、亚油酸、油酸、亚麻酸（＞９９．３％，购于美国Ｓｉｇｍａ公司）。试剂：正己烷（＞９７％，ＡＲ）甲醇（＞９９．７％，ＧＲ）购于上海国药集团化学试剂有限公司。１．２甲酯化试剂制备取分析纯氢氧化钾２．２４４ｇ放入带磨１３的棕色试剂瓶中，取１００ｍＬ甲醇沿玻璃棒注入试剂瓶中，收稿日期：２００９・０８—０９基金项目：黑龙江省教育厅资助项目（１１５３５００３３）。作者简介：苗兴芬（１９７５一），女，副教授，在职博士，研究方向大豆育种与生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｎｚｙｍｘｆ＠１２６．ｃｏｒｎ。通讯作者：陈庆山，教授。Ｅ—ｍａｉｌ：ｑｓｈｃｈｅｎ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｒｎ；胡国华，研究员。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｇｈ７５７＠ｖｉｐ．１６３．ｃｏｒｎ。万方数据２期苗兴芬等：大豆脂肪酸组分的快速气相色谱分析３５９用玻璃棒搅拌３ｒａｉｎ，在室温下反应２ｈ后，待用，如不用立即放于４℃冰箱中保存，可使用３ｄ。１．３样品处理称取０．３３９已粉碎的大豆样品于１．５ｍＬ的离心管中，加入１ｍＬ正己烷，充分振摇０．５ｒａｉｎ，室温放置５ｈ，然后将上清液移人另一只１．５ｍＬ离心管中，在上清离心管加入已配好的Ｏ．５ｍＬ甲酯化试剂进行甲酯化反应，振荡２ｒａｉｎ，在室温下反应１ｈ。移上清，在６０００ｒ・ｍｉｎ“离心机离心５ｍｉｎ，然后上清进样ＧＣ分析。１．４ＧＣ分析条件色谱柱ＨＰ５１９０９１Ｊ４１３（３０ｍ×３２０斗ｍ×０．２５斗ｍ）；进样量ｌ¨Ｌ，分流进样方式，分流比５０：１；进样１２１温度：２２０℃；载气：Ｎｅ，４５ｍＬ・ｒａｉｎ～；氢气：４０ｍＬ・ｒａｉｎ～；空气４５０ｍＬ・ｍｉｎ～。程序升温：１５０。Ｃ下保持１ｍｉｎ，然后以２０。Ｃ・ｒａｉｎ“的速率升至２００℃，保持３ｒａｉｎ，再以１０℃・ｒａｉｎ‘１的速率升至２５０℃，保持２ｒａｉｎ。检测器：氢火焰离子检测器（ＦＩＤ），检测器温度恒温２７５℃。２结果与分析２．１与传统方法比较运用毛细管气相色谱进行分离，经甲酯化的脂肪酸成分，通过色谱数据工作站６８９０，利用峰面积归一化法，测得各化学组分在脂肪酸中的百分含量。该方法快速、操作方便、节省药品；即使在较低的杂交世代样品很少，用普通法不易提取脂质时，此法也能顺利地完成分析工作，与其它方法的区别见表ｌ。表１快速分析方法与其他方法比较Ｔａｂｌｅ１Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｎｒａｐｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ日ｎｄｏｔｈｅｒｍｅｔｈｏｄｓ快氅黔。索氏抽提法ｃ：搿ｄｅ协珊ｉ“６”，．Ｒ８７ｉ８．．５。…Ｔｈ…ｌｐｔ＝ｐｖｔ・＾ｒｉｕ…。ｔ；。“ｓｕｐ’ｅｒ。ｃ。、ｒｉ’４ｔｉｃａｌ”出ｏｄｃｏ，ｅｘｔｍ：ｎ２．２主要脂肪酸测定结果大豆籽粒中主要含有５种脂肪酸，按出峰顺序依次是软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸（图万方数据１）。从大豆样品脂肪酸色谱图（图２）中可以看到，整个色谱分析时间１０ｍｉｎ就可以完成，软脂酸的出峰保留时间为６．５７ｍｉｎ，硬脂酸为７．８３ｒａｉｎ，油酸为８．７３ｒａｉｎ，亚油酸为８．８６ｒａｉｎ，亚麻酸为９．０６ｒａｉｎ。出峰时间非常稳定，１０５４次分析中出峰时间结果一致，与王晓燕等…相比出峰时间早了１０ｍｉｎ。～Ⅳ踮Ｏ∞Ｏ∞Ｏ加ＯＯＩｎ图１大豆脂肪酸标准品气相色谱图Ｆｉｇ．１ＧＣｇｒａｐｈｏｆｓｔａｎｄａｒｄｓａｍｐｌｅｆａｔｔｙａｃｉｄｓ图２大豆脂肪酸样品气相色谱图Ｆｉｇ．２ＧＣｇｒａｐｈｏｆｔｅｓｔｉｎｇｓａｍｐｌｅｆａｔｔｙａｃｉｄｆｒｏｍｓｏｙｂｅａｎ２．３精密度分析对同一样品进行了５次分析，变异系数很小（表２），表明该方法精密度高，多次分析重现性好。表２大豆同一样品５种脂肪酸含量测定结果Ｔａｂｌｅ２Ｆｉｖｅｆａｔｔｙａｃｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｏｙｂｅａｎ３讨论建立了一种脂肪酸快速分析方法，该方法需要的样品量少，因此适合在较低的杂交世代分析脂肪大豆科学２期ｆａｔｔｙａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎＡｅｔａＢｏｔａｎｉｅａ酸含量，实现特异脂肪酸含量的低世代选择，提高育种效率。采用醇钾作为甲酯化试剂，酯化反应快速且完全。但是甲酯化试剂需要现用现配，甲酯化试剂只能使用３ｄ，超过３ｄ的试剂起不到酯化的效果，无法检出脂酸酸甲酯。结果发现，当甲酯化超过２０ｈ时，样品的检出效果不好，得到的峰值偏低。［５】ｔｈｅｓｅｅｄｏｆｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｏｆ鼬ｗ如［Ｊ】．Ｂｏｒｅａｌｉ・ＯｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａＳｉｎｉｃａ。２００５。２５（１０）：２０７７・２０８２．）师治贤，刘梅．胡凤祖，等．青藏茶子种子中的脂肪酸含量分析【Ｊ］，西北植物学报，２００４，２４（１）：１４９・１５１．（ＳｈｉＨｕＦＺ。ｅｔａ１．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｎｚＸ。“ｕＭ，ｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｓｅｅｄｓｏｆＲｉｂｅｓｑｉｎｇｚａｎｇ［Ｊ】．Ａｃｔａ１４９－１５１．）ＢｏｔａｎｉｃａＢｏｒｅａｌｉ－ＯｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａＳｉｎｉｅａ，２００４，２４（１）：因此，在做大量样品分析时，需要分批量做样品前处理，每次甲酯化２０份左右材料为宜，以免甲酯化超过２０ｈ导致检测结果不准确。［６］邢晓燕，回瑞华。侯冬岩．几种稻米中脂肪酸的研究［Ｊ］．鞍山师范学院学报，２００６（４）：４３－４５；（Ｘｉｎ８Ｙ．ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＸＹ，ＨｕｔＲＨ，ＨｏｕｏｆＤｆａｔｔｙａｃｉｄｏｆｓｅｖｅｒａｌｒｉｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌＡｎｓｈａｎ参考文献［７】［１］徐杰，胡国华。张大勇．大豆籽粒发育过程中脂肪酸组分的累积动态［Ｊ］．作物学报，２００６，３２（１１）：１７５９－１７６３．（ＸｕＪ，ＨｕＨ，ＺｈａｎｇＤＹ．ＤｙｎａｍｉｃａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙＧＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６（４）：４３４５．）王晓燕，张彩英，贾晓艳．河北省大豆品种脂肪酸组成与含量分析［Ｊ］．河北农业大学学报，２００７，３０（２）：１５－１８．（ＷａｎｇＸＺｈａｎｇｔｅｎｔＹ，ｃｏｎ・ＣＹ．ＪｉａｓｏｙｂｅａｎＸＹ．Ａｎａｌｙｓｉｓｖａｒｉｅｔｉｅｓｉｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄａｃｉｄｓｉｎｇｒａｉｎｍａｔｕ・ｉｎＨｅｂｅｉｐｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｂｅｉｒｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｏｆｓｏｙｂｅａｎ［Ｊ】，ＡｃｔａＡｇｒｏｎｏｍｉｃａＳｉｎｉｅａ，２００６，３２ＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００７，３０（２）：１５・１８．）（１１）：１７５９・１７６３．）［２］张学杰，翟传格，李法曾．蜀葵种油的脂肪酸组成分析［Ｊ］．植物资源与环境学报，２００３．１２（３）：５８－５９．（ＺｈａｎｇＧ，ＬｉｎＦｔｈａｅａｘ［８］崔昌浩，田晶，徐龙权．气相色谱法在检测细胞脂肪酸及菌种鉴定中的应用［Ｊ］．大连轻工业学院学报。２００７，２６（２）：１０４—１０７．（ＣｕｉｐｈｙｉｎＣＨ，ＴｉａｎＪ，ＣｈｅｎｇｏｆＣＪ，ＸｕｏｆＬＱ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｂｙａｎａｌｙｚｉｎｇｏｆｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ－ｆａｔｔｙｇ．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｏｆＰｌａｎｔｅｏｎｓｌｉｔｕｅｎＭｉｎｓｅｅｄｏｉｌＡＩ－ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｂａｃｔｅｒｉａａｃｉｄｉｎｃｅｌｌｓｒｏｏｅａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌＲｅｓｅｕｒｏｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ。【Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ１０４・１０７．）［９］ＳｕｓａｎａｏｆＤａｌｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙ，２００７，２６（２）：２００３，１２（３）：５８－５９．）［３］王宁惠．油菜耔中脂肪酸含量的气相色谱分析［Ｊ】，青海农林科技，２００６（４）：３５－３６．（ＷａｎｇｂｙｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｏｆｉｎａｎｄＮＨ．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｎＣａｓａＬ，ＢｅａｔｒｉｚＯＬｉｖｅｉｒａ．Ｆａｔｔｙｏｆａｃｉｄｓａｎａｌｙｓｉｓｂｙｇａｓｃｈｒｏ－ｆａｔｔｙａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ】．Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ１５．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２００７（２）：１・ｒａｐｅｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＱｉｎｇｌｌａｉＡｇｒ／ｃｕｈｕｒｅＦｏｒｅｓｔｒｙ，２００６（４）：３５－３６．）［１０】张颖君，高慧敏，蒋春志，等．大豆种子脂肪酸含量的快速溯定［Ｊ］．大豆科学，２００８，２７（５）：８５９－８６２．（ＺｈａｎｇＪｉａｎｇＣｇ，ｅｔＹ［４］于海芹。张天柱，魏春雁，等．３种碱蓬属植物种子含油量及其脂肪酸组成研究［Ｊ】．西北植物学报，２００５，２５（１０）：２０７７—２０８２．（ＹｕＨＪ，ＧａｏＨＭ，ａ１．ＦａｓｔａｎａｌｙｓｉｓｏｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓｏｆｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｂｙｇａｓＯ，ＺｈａｎｇＴｚ，ＷｅｉＣＹ，ｅｔａ１．Ｆａｔｃｏｎｔｅｎ协ａｎｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ［Ｊ】．ＳｏｙｂｅａｎＳｃｉｅｎｃｅ．２００８，２７（５）：８５９－８６２．）（上接第３５７页）［９】孙酉石，王淑英，王玉芝，等．回归旋转组合设计方法在玉米模式化栽培研究中的应用［Ｊ】．吉林农业大学学报，１９８９，１１（３）：ｌＯ・１３．（ＳｕｎｓｉｏｎＹＱ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｓｏｙｂａｎｎｐｌａｎｔｄｅｎｓｉｔｙａｎｄｉｔｓｉｎｄｅｘｏｆｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｔｒｕｔ・ｔＵｒｅ［ＪＪ．ＳｏｙｂｅａｎＳｃｉｅｎｃｅ，１９８７，６（１）：Ｉ－ｌＯ．）［１２］王继安，徐杰。宁海龙，等．施用大、中、微量元素对大豆品质及其它性状的影响［Ｊ】．大豆科学，２００３，２２（４）：２７３－２７７．（ＷａｎｇＸＡ．ＸｉｕＳ，ＷａｎｇＳＹ，ＷａｎｇＹＺ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｎｒｅｇｒｅｓ・ｃｕｌｔｕｒｅｒｏｔａｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｅｓｉｇｎｍｅｔｈｏｄｍｏｄｅｌｉｚｅｄｃｏｒｎＪ。ＮｉｎｇＨＬ，ｅｔａＩ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｎｓｏｙｂｃａｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｏｉｌＣＯＵ－［Ｊ】．ＪｏｕｒｎａｌＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖａｍｉｔｙ，１９８９．１１（３）：１０・１３．）ｔｅｎｔａｎｄｏｔｈｅｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｂｙａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｍａｊｏｒ，ｍｉｄｄｌｅａｎｄｍｉ・［１０］涂前程．罗英．玉米闽单８８高产制种综合农艺措施的数学模型［Ｊ】．福建农业大学学报，１９９９，２８（３）：２７４－２７８．（ＴｕＱＡｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌｙｉｅｌｄｉｎｇｓｅｅｄｃ，ＬｏｕＹ．ｈｉｓｈ・ｎｏｒｅｌｅｍｅｎｔｓｏｉｌ［Ｊ】．ＳｏｙｂｅａｎＳｃｉｅｎｃｅ，２００３．２２（４）：２７３－２２７．）［１３】郭庆元，李志玉。涂学文．大豆高产优质施肥研究与应用［Ｊ】．中国农学通报，２００３，１９（３）：８９－１０４．（ＧｕｏＱＹ。ＬｉｚＹ，ＴｕＸＷ．Ｓｔｕｄｉｎ８ｍｏｄｅｌｏｆｃｏｍｐｏｓｉｔｅｏｆｃｏｒｎａｇｒｏｎｏｍｉｃｍｅ∞ｕｒｅ８ｆｏｒｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＭｉｎｄａｎ８８［Ｊ】．ＪｏｕｒｎａｌＦｕｊｉａｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｆｏｒｉｎＨｉｇｈ—ｙｉｅｌｄａｎｄＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．１９９９，２８（３）：１０－１３．）ｇｏｏｄｑｕａｌｉｔｙＳｏｙｂｅａｎ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｌｅｔｉｎ，［１１］刘金印，张恒善，王大秋．大豆种植密度和群体结构指标的研究［Ｊ］．大豆科学，１９８７．６（１）：１－ｌＯ．（Ｌ／ｕＪＹ，ＺｂｅｎｇＨ２００３．１９（３）：８９－１０４．）Ｓ，ＷａｎｇＤ万方数据
