维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病理生理杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２００７，２３（４）：７３９—７４３ ・７３９・ ［文章编号］１０００—４７１８（２００７）０４—０７３９—０５ Ｅｇｒ一１基因剔除减少炎性相关因子在 实验性胰腺炎中的表达半 段佑才 ，姜泊 ， 马高峰 ，徐智民 ， 陈晓文 ，程天明 ，戴益琛 ， 陈学清 （ 广东省第二人民医院内科，广东广州５１０３１７； 广州南方医院消化内科，广东广州５１０５１５） ［摘要］ 目的：探讨Ｅｇｒ一１基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。方法： 利用Ｅｇｒ一１基因剔除小鼠，采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型，观察Ｅｇｒ一１基因剔除后，胰腺组织水肿、 ＭＰＯ水平、血清淀粉酶水平、肺组织ＭＰＯ水平的改变。并利用定量ＰＣＲ的方法，检测胰腺组织中炎症相关因子组 织因子（ＴＦ）、纤维蛋白溶酶原激活因子抑制因子（ＰＡＩ一１）、单核细胞趋化吸引蛋白１（ＭＣＰ一１）、Ｇｒｏ一１、ＩＬ一６和 细胞间黏附分子一１（ＩＣＡＭ一１）ｍＲＮＡ的表达。结果：Ｅｇｒ一１基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显轻于野生型，但组 织ＭＰＯ水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显差异；肺组织ＭＰＯ水平明显低于野生型。定量ＰＣＲ检测结果 表明，Ｅｇｒ一１基因剔除组，胰腺组织中ＴＦ、ＰＡＩ一１，以及ＭＣＰ一１、ＩＣＡＭ一１和ＩＬ一６ ｍＲＮＡ的表达，明显少于野生 型组。结论：Ｅｇｒ一１基因剔除可明显减轻急性胰腺炎的严重程度，其作用可能通过减少胰腺组织中ＴＦ、ＰＡＩ一１，以 及ＭＣＰ一１、ＩＣＡＭ一１和ＩＬ一６的表达而实现。 ［关键词］胰腺炎；早期生长反应因子；基因，Ｅｇｒ一１；基因敲除；趋化因子，巨噬细胞 ［中图分类号］ Ｒ３６３ ［文献标识码】 Ａ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ－－ｒｅｌａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａ・－ ｃｕｔｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｉｎ Ｅｇｒ－－１ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ＤＵＡＮ Ｙｏｕ—ｃａｌ一，ＪＩＡＮＧ Ｂｏ ，ＭＡ Ｇａｏ—ｆｅｎｇ ，ＸＵ Ｚｈｉ—ｍｉｎ ，ＣＨＥＮ Ｘｉａｏ—ｗｅｎ ， ＣＨＥＮＧ Ｔｉａｎ—ｍｉｎｇ ，ＤＡＩ Ｙｉ—ｃｈｅｎ ，ＣＨＥＮ Ｘｕｅ—ｑｉｎｇ （ Ｔｈｅ ＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３１７，Ｃｈｉｎａ； ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＮａｎｆａｎｇＨｏｓ— ｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｃｈｉａ）ｎ ［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ ＡＩＭ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｇｒ一１ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｌｆａｍｍａｔｏｒｙ—ｒｅｌａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ａｃｕｔｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｍｏｄｅ１．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ ｏｆ ｃｅａｒｕｌｅｉｎ ｉｎ ｗｉｌｄｔｙｐｅ ｍｉｃｅ ａｎｄ Ｅｇｒ一１ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｉｎｄｅｘｅｓ，ｓｕｃｈ ａｓ ｓｅｒｕｍ ａｍｙｌａｓｅ， ｐａｎｃｒｅａｔａ ｅｄｅｍａ，ａｎｄ ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＭＰＯ）ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔａ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ ｗｅｒｅ ｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ（ＴＦ），ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＰＡｌ一１），ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔｎｔａ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＭＣＰ一１），Ｇｒｏ一１，ＩＬ一６ ａｎｄ ＩＣＡＭ一１ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｃｏｎｔｒａｒｙ ｔｏ ｗｉｌｄｔｙｐｅ ｍｉｃｅ，ｔｙｐｉｃａｌ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ Ｗａｓ ｎｏｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ ｃｅａｒｕｌｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｇｒ一１ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ，ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ ｅｄｅｍａ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔａ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ，ｂｕｔ ｄｅ— ｃｒｅａｓｅｄ ＭＰＯ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｌｕｎｇｓ ａｓ ｗｅｌｌ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｏｆＴＦ，ＰＡｌ，ＭＣＡＰ，ＩＣＡＭ一１ ａｎｄ ＩＬ一６ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔａ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ Ｅｇｒ一１ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ． ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｄａｍａｇｅ ｉｓ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ ｉｎ Ｅｇｒ一１ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｃｅａｒｕｌｅｉｎ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｐｒｏｂａｂｌｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｌａｆｎｍｍａｔｏｒｙ—ｒｅｌａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔａ，ｓｕｃｈ ａｓ ＴＦ，ＰＡＩ，ＭＣＰ一１，ＩＣＡＭ一１ ａｎｄ ＩＬ一６． ［ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ］Ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ；Ｅａｒｌｙ ｇｏｗｔｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｆａｃｔｏｒ；Ｇｅｎｅｓ，Ｅｇｒ一１；Ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋ—ｏｕｔ；Ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｆａｃ— ｔｏｒｓ，ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ 促炎性转录因子及炎性因子在急性胰腺炎的发 因子【 ， 。最近，我们的研究表明，在实验性胰腺炎 生和发展中的作用已引起人们的重视 ｌ２Ｊ。早期生 早期Ｅｇｒ一１高表达，而且，基因剔除Ｅｇｒ一１后，实验 长反应因子一１（ｅａｒｌｙ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ一１，Ｅｇｒ一１）是 性胰腺炎胰腺组织水肿和肺部的炎症明显减轻 川。一种促炎性核转录因子，被认为是炎症启动的关键 因此，我们认为Ｅｇｒ一１可能在急性胰腺炎的发生中 ［收稿日期］２００５—０８—３０ ［修回日期］２００６—０ｌ一２０ ［基金项目］国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０３７０６４８） 维普资讯 http://www.cqvip.com 起着重要的作用。为进一步研究Ｅｇｒ一１在急性胰 （５０ ｇ・ｋｇ～・ｈ～，体积约５０ Ｌ）诱导实验性胰 腺炎中的作用机制，本研究拟检测炎性相关的细胞 腺炎。实验结束时，小鼠用乙醚麻醉后，剪开胸腔， 因子在Ｅｇｒ一１基因剔除小鼠中的表达，并对其在胰 用注射针头沿心尖刺人心脏抽取血液，并取少量肺 腺炎中的作用进行探讨。 组织。然后，剪开腹腔，显露胰腺组织，小心剪下放 材料和方法 人预冷的中性磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，ｐＨ ７．４）中，并 剔除脂肪。胰腺组织一部分分别固定于中性１０％ １ Ｅｇｒ一１小鼠 的多聚甲醛，其它放人液氮中冷冻后，一７０℃保 ＥｇＴ一１基因缺失（Ｅｇｒ一１ ＫＯ）小鼠 （美国华 存。血液离心后取血清，分装后一７０℃保存。正 盛顿大学Ｊｅｆｆｒｅｙ Ｍｉｌｂｒａｎｄｔ同意使用）饲养于１２ ｈ间 常对照组（ｃｏｎｔｒｏ１）小鼠注射同体积的生理盐水。 隔的明亮／黑暗的环境中，自由进食和饮水。由于 各组小鼠为５只。 Ｅｇｒ一１ ＫＯ的小鼠无生殖能力，故用杂合子的Ｅｇｒ一１ ３胰腺炎指标的检测 基因缺失小鼠交配繁殖可得到Ｅｇｒ一１ ＫＯ小鼠、杂 包括血清淀粉酶（Ｐｈａｄｅｂａｓ淀粉酶试验）、组织 合子小鼠及正常小鼠（野生型，ｗｉｌｄｔｙｐｅ，ｗＴ）。小鼠 髓过氧化物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）、组织含水的 基因型分析鉴定采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法。 比率参考我们以前的有关文献 Ｊ。 简述之：将出生３—４周的小鼠用蛋白酶Ｋ ５５℃过 ４ 定量ＰＣＲ 夜消化后，加５ ｍ０ｌ／／Ｌ的氯化钠离心得上清，再将上 新鲜胰腺组织剪下后立即放人Ｔｒｉｚｏｌ中匀浆，加 清置人预冷的乙醇中，其沉淀物即基因组ＤＮＡ。基 入氯仿和异丙醇，离心上清经乙醇沉淀后得到ＲＮＡ。 因型鉴定用常规ＰＣＲ方法，引物为：ｅｇｒ一１上游 其进一步用ＤＮＡ酶Ｉ消化及ＲＮＡ纯化试剂盒纯化。 ５’一Ａ ＡＣＣＧＧＣＣＣＡＧＣＡＡＧＡＣＣ一３’，下游５’一 ＲＮＡ经定量后，用ＲＴ试剂盒转录得到ｃＤＮＡ。产物 ＧＧＧＣＡＣＡＧＧＧＧＡＴＧＧＧＡＡｒＩ１Ｇ一３’产物片段４００ ｂｐ； 用常规ＰＣＲ试剂盒扩增，加入ＳＹＢＲ（Ｂｉｏ—Ｒａｄ）染 ｎｅｏ基因：５’一ＣＴＣＧＴＧＣ Ｉ’丌ＡＣＧＧＴＡＴＣＧＣ一３’，和 料，扩增２７—３２个循环，用定量ＰＣＲ仪检测产物相 ｅｇｒ一１上游引物一起使用，产物片段４２０ ｂｐ。 对产量，结果用与ＡＰＲ０的比值表示。所用的引物见 ２急性胰腺炎模型 表１。 小鼠（雌雄不拘，２２—２６ ｇ）在实验前禁食２４ ｈ， ５统计学处理 但可自由饮水。雨蛙素（ｃｅａｒｕｌｅｉｎ，Ｓｉｇｍａ）溶于生理 数据均用面±Ｓ表示。用ＳＳＰＳ １．０软件Ｆ检验 盐水中。实验时，腹腔内注射大剂量的雨蛙素 对数据进行分析。 表１检测小鼠基因表达的引物 Ｔａｂ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ 结果 羹 嚣 差篓 从图１Ａ、Ｂ的结果可以看到，我们用大剂量的雨 水肿）及胰腺和肺组织中ＭＰＯ水平升高（炎性细胞 维普资讯 http://www.cqvip.com 维普资讯 http://www.cqvip.com 维普资讯 http://www.cqvip.com ・７４３・ 陈学清，姜泊，宋于刚，等．早期生长反应因子一１和 靶因子，其调节可能是受控于ＮＦ—ＫＢ。所以，急性 ［５］胰腺炎的早期炎症反应中，Ｅｇｒ一１可能不是唯一的 始动因子。 总之，本研究结果表明，Ｅｇｒ一１基因剔除可减轻 实验性胰腺炎；还可以明显减少胰腺组织中ＴＦ、ＰＡｌ １以及ＭＣＰ一１、ＩＣＡＭ一１和ＩＬ一６ ｍＲＮＡ的表达。 一组织因子在大鼠胰腺炎组织中的表达［Ｊ］．第一军医 大学学报，２００４，２４（１１）：１２４５—１４７．２ ［６］ 段佑才，姜泊，智发朝，等．Ｅｇｒ一１基因剔除对雨蛙 素诱导小鼠胰腺炎的影响［Ｊ］．第四军医大学学报， ２００５，１６（１６）：１４８１—１４８３． ［７］ 李丽娟，李永渝，张红，等．急性胰腺炎大鼠腹水自 提示Ｅｇｒ一１在急性胰腺炎的发病中起着重要作用， 细胞ｃＰＫＣ一０【水平的变化及汉防己甲素等的影响 ［Ｊ］．中国病理生理杂志，２００４，２０（ｔ１）：２０６３—２０６６． 可能通过调节ＴＦ和ＰＡｌ，加重组织的水肿，并通过上 调ＭＣＰ一１、ＩＣＡＭ—ｌ和ＩＬ一６等表达，促进和加重 ［８］ Ｙａｎ ＳＦ，Ｚｏｕ ＹＳ，Ｇａｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ 胰腺和肺组织的炎症。 ［参考文献］ ［１］ Ｇｕｋｏｖｓｋｙ ｌ，Ｇｕｋｏｖｓｋａｙａ ＡＳ，Ｂｌｉｎｍａｎ ＴＡ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｔｙ ＮＦ・—ｋａｐｐａ Ｂ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ・—ｉｎ・・ ｄｕｃｅｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｄｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９８，２７５（６ Ｐｔ１）：Ｇ１加２一Ｇ１４１４． ［２］ Ｃｈｅｎ Ｘ，ｊｉ Ｂ，Ｈａｎ Ｂ，ｅｔ ａ１．ＮＦ—ｋａｐｐａ Ｂ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅ－ ｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００２，１２２（２）：４４８－４ ． ［３］ Ｙａｎ ＳＦ，Ｆｕｊｉｔａ Ｔ，Ｌｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｇｒ～１，ａ ｍａｓｔｅｒ ｓｗｉｔｃｈ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｎｇ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｕｎｄｅｒ・ ｌｙｉｎｇ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，２０００，６（１２）：１３５５ —１３６１． ［４］ 初令，曾庆富．转录因子Ｅｇｒ一１及其在肺病变中的 研究进展［Ｊ］．中国病理生理杂志，２００４，２０（２）：２６８ —２７２． ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ Ｅｇｒ—ｌ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｐｕｌｍｏ－ ｎａｒｙ ｉｆｂｒｉｎ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉａ［Ｊ］，Ｐｒｏｃ Ｎａｉｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９８，９５（１４）：８２９８—８３ｏ３． ［９］ Ｗｕ Ｑ，Ｚｈａｏ Ｚ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＰＡＩ—ｌ：ａ ｎｅｗ ａｎｔｉ—ｔｈｒｏｍ－ ｂｏｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｈａｅｍａ－ ｔｏｌ Ｄｉｓｏｒｄ，２００２，２（１）：２７—４２． ［１０］ Ｇｕｌｌｏ Ｌ，Ｃａｖｉｃｃｈｉ Ｌ，Ｔｏｍａｓｓｅｔｔｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｓ－ ｃｈｅｍｉａ ｏｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ， ｌ９９６，１１１（４）：１０３３—１０３８． ［１１］ Ｇｒａｄｙ Ｔ，Ｌｉｎａｇ Ｐ，Ｅｒｎｓｔ ＳＡ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｇｅｎｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ａｃｉｎａｒ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ａｎ ｅａｒｌｙ ｅｖｅｎｔ ａｓ－ ｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｕｔｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｏｒｌｏｇｙ， １９９７，１１３（６）：１９６６—１９７５． ［１２］ Ｆｒｏｓｓａｒｄ ＪＬ，Ｓａｌｕｊａ Ａ，Ｂｈａｇａｔ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒ－ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ １ ａｎｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｐａｎ－ ｃｒｅａｔｉｔｉｓ ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｇａｓ・ ｔｏｒｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９９９，１１６（３）：６９４—７０１．
