高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量分析
发表时间：2014-01-16T10:00:18.327Z 来源：《医药前沿》2013年12月第34期供稿 作者： 陆广马[导读] 黄芪是中医临床最常用的大宗药材之一，具有营养和抗氧化等药理活性和药用价值。
陆广马 （广西百色食品药品检验所 广西百色 533000）
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量测定体系。方法：应用高效液相色谱法测定蒙古黄芪和甘肃红芪的黄芪甲苷含量，色谱柱：Agilent Eclipse XBD-C18柱(150×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(44∶56)；柱温：26℃；流速：0.5mL/min；检测波长：335 nm。结果：黄芪甲苷测定的回归方程为Y=13.614X-1.47，r=0.9999，线性范围为10.2-102μg/mL-1。测定蒙古黄芪和甘肃红芪中的黄芪甲苷回收率分别为95.9%与94.5%，在3 d内基本能保持稳定，含量分别为0.2mg/g和0.284mg/g。结论：高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量方法简便、灵敏度高、重现性好，可作为首选方法之一。 【关键词】高效液相色谱法 黄芪 黄芪甲苷
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0192-02
黄芪是中医临床最常用的大宗药材之一，具有营养和抗氧化等药理活性和药用价值，主要生长在西北干旱地区。当前由于市场需求量不断增加，其野生资源受到极大威胁[1]。其含有多糖、甲苷等主要生物活性成分，有抗心肌缺血、缺氧、病毒性心肌炎的作用[2]。当前黄芪甲苷的测定方法有薄层色谱法与毛细管电泳法等[3]。本文建立了高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量体系，希望为从天然植物中寻找低毒或无毒的抗氧化活性成分提供参考。现报告如下。 1 实验仪器与方法 1.1 实验仪器
日本岛津公司LC-20AT高效液相色谱仪与色谱工作站，十万分之一电子天平XS205DU型，SQ21198B多功能食品加工机，UV-2450型紫外-可见分光光度计，DELTA320型pH计。黄芪甲苷对照品购自中国药品生物制品鉴定所，石油醚、氯仿、正丁醇为色谱纯，甲醇、甲酸、无水乙醇、冰醋酸为分析纯，水为超纯水。黄芪(本地区药材公司)经鉴定分别为蒙古黄芪和甘肃红芪。 1.2 实验方法 1.2.1 色谱条件
色谱柱：AgilentTC-C18柱（Z）(150×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(44∶56)；柱温：26℃；流速：0.5 mL/min；检测波长：335 nm。 1.2.2 样品制备
将黄芪药材经高速中药粉碎机粉碎混匀后，准确称取中药细粉2.0g放入25mL容量瓶中，用提取液约15mL浸泡，室温下放置4h，超声提取30min，过滤后滤渣用提取液洗涤两次，合并到滤液中，滤液于恒温水浴上蒸干，然后用6mL的甲醇-甲酸溶解，定容于10mL容量瓶中，低温保存。
1.2.3 对照品制备
取得样品溶液后，进行色谱分析，以峰面积积分值为纵坐标，黄芪甲苷对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：黄芪甲苷Y=13.614X-1.47，r=0.9999，线性范围为10.2-102μg/mL-1。 2 结果
2.1 回收率实验
精密称取已知含量的蒙古黄芪和甘肃红芪样品(5份)，按样品处理方法制备，然后加入一定量的对照品溶液，计算回收率，回收率分别为95.9%与94.5%。见表1。
表1：中药样品黄芪甲苷的回收率(n=5)
3 讨论
黄芪是中医临床最常用的大宗药材之一，当前以黄芪主要成分为原料的新药开发成为热点。在其有效成分中，黄芪甲苷可改善心肺功能，加强心脏收缩力，改善皮肤血液循环和营养状况，扩张血管，降低血压；并能保护肝脏，对慢性活动性肝炎，有良好作用，防止肝糖元减少。
高效液相色谱法是在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的新型分离分析技术。其在应用中具有简便、快速、灵敏、准确
的特点，至今已在生物工程、药物工程、食品工程、环境工程、石油化工工程等领域获得广泛的应用。本文采用的HPLC并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度[2]。能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高效率、功能齐全的分析工具。本文通过HPLC分析得到了黄芪甲苷测定的回归方程为Y=13.614X-1.47，r=0.9999，线性范围为10.2-102μg/mL-1。测定蒙古黄芪和甘肃红芪中的黄芪甲苷回收率分别为95.9%与94.5%，在3 d内基本能保持稳定，含量分别为0.2mg/g和0.284mg/g。结果表明该方法简便、准确、灵敏度高，重现性好，可用于黄芪中微量黄芪甲苷的测定
同时在黄芪的利用中，人工栽培是合理利用的一条途径，但药用植物需3-5年生长时间，而且引种栽培代数越多，中药材质量退化就越厉害。当前也有学者通过引进德国先进的中药单体纯化技术、防潮及缓释微丸技术，与中国传统中药黄芪有机结合，应用黄芪甲苷缓控释、靶向给药技术，与国际新药新剂型接轨，取得了很好的效果。
总之，高效液相色谱法测定黄芪中的甲苷含量方法简便、灵敏度高、重现性好，可作为首选方法之一。 参考文献
[1] 魏月，章竹君，孙永华，等.高效液相色谱化学发光法测定淫羊霍甙[J].陕西师范大学学报，2006，34(3)：63-. [2] 戴薇.高效液相色谱法测定复方斑蝥胶囊中野黄芩苷含量[J].中国药业，2011，20(1)：256-257.
[3] 陈楚萍，王建壮，周晔.灯盏花颗粒中野黄芩苷的含量测定[J].广东药学院学报，2010，26(3)：77-78.
