维普资讯 http://www.cqvip.com 第２８卷第２期 西 南 农 业 大 学 学 报（自然科学版） Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．２ ２００６年４月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ） Ａｐｒ．２００６ 文章编号：１０００—２６４２（２００６）０２—０１９０—０５ 姬松茸菌丝体多糖的分离纯化及抗疲劳研究 刘新海 ，冯培勇 ，史亚丽 ，杨立红 ，蔡德华 （１．烟台师范学院生命科学院，山东烟台２６４０２５；２．烟台师范学院体育学院，山东烟台２６４０２５） 摘要：通过液体深层发酵获得姬松茸（Ａｇａｒｉｃ ， ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｒｉｌｌ ）菌丝体。用水提法提取姬松茸菌丝体多糖（即胞内多糖），井通过葡聚糖凝胶ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分离纯化出２种姬松茸多糖组分ＡＢＰ—Ｉ和ＡＢＰ－ＩＩ，紫外光谱检测表明２种多 糖均不舍核酸和蛋白质。红外光谱和高效液相色谱测定结果表明，ＡＢＰ．Ｉ和ＡＢＰ・ＩＩ均为合有葡萄糖醛酸的Ｄ－葡聚 糖。对力竭小鼠抗疲劳作用研究结果表明，姬松茸胞内多糖具有明显的抗疲劳作用。 关键词：姬松茸；胞内多糖；抗疲劳 中图分类号：Ｓ ４６６．１９９ 文献标识码：Ａ ＳＴＵＤＹ ＯＦ ＩＳＯＬＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＰＵＲＩＦＩＣＡＴ１０Ｎ ０Ｆ Ｐ０ＬＹＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥＳ ＦＲ０Ｍ ＦＲＥＳＨ ＭＹＣＥＬＩＡ ０Ｆ ＡＧＡ脚 Ｓ ＢＬ４ ＭＵＳＳＩＬＬ ＡＮＤ ＩＴＳ ＡＮＴＩ—ＦＡＴＩＧＵＥ ＥＦＦＥＣＴ ＬＩＵ Ｘｉｎ—ｈａｌ ，ＦＥＮＧ Ｐｅｉ—ｙｏｎｇ ，ＳＨＩ Ｙａ—ｌｉ ，ＹＡＮＧ Ｌｉ—ｈｏｎｇ ，ＣＭ Ｄｅ—ｈｕａ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｎｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。Ｙａｎｔａｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ－Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６４０２５。Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈｙｓ・ ｉｃａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｙａｎｔａｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６４０２５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｗｏ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＡＢＰ・Ｉ ａｎｄ ＡＢＰ—ｌＩ】ｗｅｌ＂￣ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｉｆｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｆｒｅｓｈ ｍｙｃｅｌｉａ ｏｆ Ａｇａｒ／ｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｓｓｉｌ１．ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ—ｆｒｅｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ・ｆｒｅｅ．Ｉｎｆｒａ－ｒｅｄ ａｎｄ ＨＰＬＣ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＡＢＰ Ｉ ａｎｄ ＡＢＰ ｌＩ ａｒｅ Ｄ－ｐｏｌｙｇｌｕｃｏｓａｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｇｌｕｅｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ．Ａ ｔｅｓｔ ｗｉｔｈ ｍｉｃｅ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ＡＢＰ Ｉ ａｎｄ ＡＢＰⅡ ｈａｖｅ ａｎ ａｎｔｉ・ｆａｔｉｇｕｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍｙｃｅｌｉａ ｏｆ Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｓｓｉｌｌ；ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ａｎｔｉ・ｆａｔｉｕｇｅ 姬松茸（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｓｓｉｌ１）在真菌分类上属 人们的关注 Ｊ。日本国际健康科学研究所所长冈 担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，蘑菇科，蘑菇属，原产于 本丈先生称姬松茸是“地球上拯救晚期癌症患者的 巴西，又名巴西蘑菇。其肉质鲜美可口，子实体内含 最后食物”＿６ Ｊ。传统的食用菌多糖提取多采用子实 有多糖、核酸、甾醇类等多种活性成分，对肿瘤，特别 体为材料，但由于子实体栽培周期长，劳动强度大，受 是腹水瘤、痔疮、神经痛等具有一定疗效。经常食用 气候、环境的影响，易造成重金属富集，其产量和质量 具有降血脂、降低胆固醇作用。近年来日本东京药科 没有保证。采用深层发酵培养菌丝体提取多糖，不仅 大学证实，姬松茸所含多糖的抗肿瘤活性远远高于灵 可避免上述弊端，而且，由深层发酵培养获得菌丝体， 芝，在被研究的１５种具有抗癌活性的食用菌中位居 产量大，易控制，便于大规模工业化生产。因此，在姬 首位¨］，姬松茸多糖作为其主要有效成分，具有增加 松茸多糖的开发应用上具有广阔的前景。本文对姬 机体免疫力，抗肿瘤、抗病毒等作用而受到越来越多 松茸深层发酵菌丝体多糖（即胞内多糖）进行了分离 收稿日期：２００５—１１—０８ 基金项目：山东省科技厅资助项目［鲁农科字（２００１）５００号］ 作者简介：刘新海（１９６４一），男，山东文登人，烟台师范学院讲师，从事食用菌活性物质开发应用研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com 第２８卷第２期 刘新海等 姬松茸菌丝体多糖的分离纯化及抗疲劳研究 １９１ 纯化和组分分析，并对其抗疲劳作用进行了初步研 究，旨在为采用深层发酵技术大规模工业化生产姬松 １０５０，色谱柱：ＺＯＲＢＡＸ Ｃａｒｄｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ４．６ ｍｍ ＩＤ×２５０ ｌｎｌｎ，填充物直径５ ｍ。流动相：乙腈：水 （８５：１５）柱温３０℃，流速：２．０ ｍＬ／ｍｉｎ，检测器ＨＴＬＣ １０４７ ＲＩＤ（视差检测器）。 １．２．４ 多糖的红外光谱测定 茸多糖保健食品上的开发应用提供理论依据。 １材料与方法 １．１ 材料 姬松茸胞内多糖级分干粉用ＫＢｒ压片，在ＭＡＧ— ＮＡ ５５０型红外光谱仪描记红外光谱。 １．２．５姬松茸胞内多糖抗疲劳作用 １．１．１ 菌种 姬松茸（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｓｓｉｌ１）菌种购于华中农 业大学真菌研究所，编号：华农姬松茸１号。 １．１．２深层发酵 菌种ＰＤＡ斜面保藏，３级发酵，液体培养基为： 马铃薯２０％，蛋白胨０．２％，葡萄糖２．５％，磷酸二氢 钾０．０５％，氯化钠０．０ｌ％，ＭｇＳＯ ・７Ｈ２Ｏ ０．０５％，维 生素Ｂ １０ ｍｇ／Ｌ，红糖１．５％。 １级摇瓶（２５０ ｍＬ三角锥形瓶，装液量５０ ｍＬ，接 种块０．５ ｃｍ ×３块）摇床培养８ ｄ；２级摇瓶（２５０ ｍＬ 三角锥形瓶，装液量５０ ｍＬ，接人１０ ｍＬ液体菌种）摇 床培养４ ｄ；３级发酵１００ Ｌ发酵罐培养４ ｄ。培养温 度２５ｃＩ二，转速１８０ ｒｏｍ。 １．２方法 １．２，１姬松茸胞内多糖的分离与纯化 发酵液过滤后，菌丝水洗３次，于烘箱中６０℃烘 干，粉碎机粉碎，过筛（８０目）。将菌丝粉末于氯仿一 甲醇（２：１）中６０￣Ｃ回流提取２次，每次２ ｈ，除去脂 肪，用适量的水（水料比＝２０：１）于１００ｏＣ水提取３ 次，每次２ ｈ，过滤，将３次滤液合并，并浓缩至原体积 的１／４，用４倍９５％乙醇沉淀，静置２４ ｈ后离心 （７ ５００ ｒ／ｒａｉｎ）２ ｈ，固形物依次用无水乙醇洗涤２次， 丙酮洗涤１次，通风橱内挥干，得菌丝体多糖粉末，将 多糖粉末配制成浓度为２％的多糖溶液，采用Ｓｅｖａｇｅ 法 脱蛋白，蒸馏水透析２４ ｈ，冷冻干燥，得姬松茸 胞内多糖。 将姬松茸胞内多糖用蒸馏水配成５ ｍｇ／ｍＬ的糖 溶液上ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶柱（１．６ ｃｍ×７０ ｃｍ）进行 纯化。用０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣＬ溶液洗脱，自动分部搜集 器搜集。上样量１０ ｍＬ，流速为１６ ｍＬ／ｈ，每１０ ｍｉｎ 搜集１管。苯酚．硫酸法 检测含糖量（以葡萄糖为 对照品）。在４９０ ｎｍ处测光密度，以管数对光密度 值绘制洗脱曲线。 １．２．２紫外光谱分析 取多糖洗脱液，在１９０～４００ ｎｍ波段进行光谱扫 描。 １．２．３单糖组分分析 高效液相色谱法测定，高效液相色谱仪：ＨＴＬＣ １．２．５．１试验对象 昆明种小鼠，雄性，鼠龄５０—６０ ｄ，体重３０～ ３７ ｇ。由烟台绿叶制药集团提供。将小鼠随机分２ 组，即对照组（５０只）、多糖组（５０只）。 １．２．５．２灌胃动物模型 多糖组依据依多灵（香菇菌多糖片）提供的成人 剂量，参考《药用实验方法学》规定的人与动物用药 剂量及比例要求，小鼠最佳用药剂量为人体的５—６ 倍＿９］。以每只小鼠标准体重３０ ｇ计算，将每１３所需 的姬松茸多糖配制成０．２ ｍＬ的制剂，早晚２次灌胃。 对照组灌胃生理盐水０．２ ｍＬ／ｒ，连续灌胃２０ ｄ。 １．２．５．３测试指标和方法 （１）力竭游泳时间：采用负重方式于鼠尾系１质 量为鼠重５％铅丝，强迫游泳至力竭（沉水底１０ ８为 止）。记录游泳时间。 （２）耐缺氧试验：于末次给药后１ ｈ分别放于装 有碱石灰ｌ０ ｇ的２５０ ｍＬ广Ｅｌ瓶内，石蜡封Ｅｌ，直至 小鼠窒息而死，记录坚持时间。 （３）血红蛋白测定：采用氰化高铁血红蛋白 ’法【 。。。 （４）大强度定量负荷运动后血乳酸水平：小鼠负 重５％铅丝，强迫游泳２０ ｍｉｎ，即刻鼠尾采血利用血 乳酸测试试剂条测试。 （５）血尿素测定：于大强度定量负荷运动后眼眶 采血，钡０试取血清１００ ＩｘＬ，采用中生北控生物科技股 份有限公司出品的试剂盒，以７２００型分光广度计测 定。 ２结果与分析 ２．１ 姬松茸胞内多糖的分离与纯化 姬松茸胞内多糖经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ一２００分离结果如 图１。由图１可以看出ＡＢＰ被分为ＡＢＰ－Ｉ和ＡＢＰ— ＩＩ２个组分，ＡＢＰ—Ｉ和ＡＢＰ—ＩＩ基本完全分开。由峰 面积可知，２组分含量之比即ＡＢＰ－Ｉ：ＡＢＰ—ＩＩ为 ０．９。 维普资讯 http://www.cqvip.com １９２ 西 南 农 业 大 学 学 报 （自然科学版） ２００６年４月 １ ０．８ 趔Ｏ・６ ０．４ Ｏ．２ ０ Ｏ ｌ０ ２Ｏ 试管编号 圈１ ＡＢＰ的ＳａｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析 Ｆｉｇ １ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＡＢＰ Ｏｉｌ ＳａｐｈａｄｅｘＧ－２００ 图３ ＡＢＰ，Ⅱ紫外光谮 ２．２紫外光谱分析 Ｆｉｇ ３ Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ＡＢＰ—ＩＩ ＡＢＰ・Ｉ和ＡＢＰ一Ⅱ紫外扫描结果表明，２种多糖组分 ２．３红外光谱分析 ２００ ｎｍ处有多糖特征吸收峰，无２６０ ｎｍ的核酸吸收峰 ＡＢＰ—Ｉ和ＡＢＰ－ｌＩ的红外光谱（ＩＲ）显示，在 和２８０ ｎｍ处的蛋白吸收峰，说明ＡＢＰ．Ｉ和ＡＢＰ一１１ ２种 ３ ２００／ｃｍ～３ ６００／ｃｍ区有一宽展、圆滑的强带是 多糖均不含核酸和蛋白质。见图２和图３。 一ＯＨ的伸缩震动，２８０ ５７７．０９０—３ Ｏ００／ｃｍ的一组峰 善 是ｃ—Ｈ伸缩震动，这些区域的吸收峰是糖类的特征 一 吸收峰。１ ６００／ｃｍ左右的吸收峰为Ｃ＝Ｏ非对称伸 营 缩振动所致，说明羧基的存在，在１ １５４／ｃｍ至 墨 ｌ １５５／ｃｍ区的吸收是葡萄糖醛酸的吸收峰， 量 一 ９３０．０３／ｃｍ和９２０．４８／ｃｍ是Ｃ—Ｏ—Ｃ是Ｄ－葡萄糖吡喃 环非对称环伸缩振动，说明有Ｄ－吡喃糖环存在， 营 ｃ； ８５３．９４／ｃｍ是吡喃葡萄糖环 端基差向异构体变角 ／ｒｉｍ 振动…Ｊ。由此可见，姬松茸菌丝体多糖ＡＢＰ—Ｉ和 圈２ ＡＢＰ・Ｉ紫外光谱 ＡＢＰ—ｌＩ均为含有葡萄糖醛酸的Ｄ一葡聚糖。见表１和 Ｆｉｇ ２ Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓ￣ｅｔｒｕｍ ｏｆ ＡＢＰ－Ｉ 图４和图５。 裹１ ＡＢＰ—Ｉ和ＡＢＰ一Ⅱ红外光谱解析结果 Ｔａｂｌｅ １ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆＡＢＰ．Ｉ＆ＡＢＰ Ⅱ ２．４单糖组成 相色谱中的保留时间见表２所示。由图谱可以看出， ＡＢＰ－Ｉ和ＡＢＰ－ｌＩ的高效液相色谱的结果见图６，７， 在溶剂峰之后均出现２个吸收峰，对照标准单糖的保 ８。高效液相色谱中，混合标准单糖所代替的各个峰及 留时间，可知ＡＢＰ－Ｉ和ＡＢＰ－ｌＩ均含有葡萄糖，２个组分 ＡＢＰ—Ｉ和ＡＢＰ－Ⅱ经三氯乙酸水解后的衍生物在高效液 中在３．４ ｍｉｎ左右出现的１个峰，根据红外光谱分析结 维普资讯 http://www.cqvip.com 第２８卷第２期 刘新海等 姬松茸菌丝体多糖的分离纯化及抗疲劳研究 １９３ 果，可能是葡萄糖醛酸的吸收峰。 ∞ ∞ 田 ∞ 帕 ∞ ∞ ｍ ０ ∞ ３０００ ２５００ ２０００ １ ５００ Ｗ却，ｅｎ ｒｔｘｒｓ ） 图４ ＡＢＰ—Ｉ红外光谱 Ｆｉｇ４ ＩＲ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆＡＢＰ—Ｉ 图５ ＡＢＰ—ＩＩ红外光谱 Ｆｉｇ ５ ＩＲ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ＡＢＰ－ＩＩ 图６ ＡＢＰ—Ｉ ＨＰＬＣ图谱 围７ ＡＢＰ－ⅡＨＰＬＣ图谱 图８标准单糖ＨＰＬＣ图谱 Ｆｉｇ ６ ＨＰＬＣ ｍａｐ ｏｆ ＡＢＰ—Ｉ Ｆｉｇ ７ ＨＰＬＣ ｍａｐ ｏｆ ＡＢＰ—ＩＩ Ｆｉｇ ８ ＨＰＬＣ ｍａｐ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ２．５姬松茸胞内多糖抗疲劳作用实验结果 ． ．． ．． 姬松茸胞内多糖抗疲劳作用实验结果见表３。 Ｊ ．Ｊ 由表３可见多糖组力竭游泳时问明显延长Ｐ＜０－０５， 本工艺提取的姬松茸胞内多糖与一般水提法相 大负荷定量运动后多糖组血乳酸、血尿氮明显低于对 比，增加了脱脂一步，使粗品纯度增加，有利于后续纯 照组Ｐ＜０．０５。血红蛋白变化不明显。 维普资讯 http://www.cqvip.com １９４ 西 南 农 业 大 学 学 报 （自然科学版） ２００６年４月 化。 由ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分子筛分离曲线表明，ＡＢＰ－Ｉ 和ＡＢＰ．Ｉ１２组分基本完全分离，但没有彻底分开，可 能是２组分分子量相差较小所致。组分分析结果表 明，２种多糖主要为含有葡萄糖醛酸的Ｄ．葡聚糖。有 报道¨ 认为糖醛酸的存在，是许多酸性多糖具有特 征生理活性的重要原因之一，这为姬松茸多糖进一步 进行生理和药理研究提供了理论依据。研究表 明¨ ，多糖的生物活性不仅决定其单糖的组分，同时 还与单糖之间的连接方式及分子量大小有关。因此， 关于２种多糖组分的糖苷键类型及分子量还有待于 进一步测定分析。 表２标准单糖殛水解液的保留时间 Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｅｒｖｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｅ 表３姬松茸多糖对小鼠机体抗疲劳能力的影响．／ｘ ４－Ｓ Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｓｓｉｌｌ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ Ｏｎ ａｎｔｉ —ｆａｔｉｇｕｅ ｉｎ ｍｉｃｅ 注： Ｐ（０．０５， Ｐ＜０．Ｏ１，｛｛｛Ｐ＜０．００１表示多糖组与 对照组比较差异显著。 Ｎｏｔｅ：Ｔｈｉｓ ｍｅａｎｓ ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｐｏｌｙａｓｃｃｈａｒｉｄ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｍｌ ｇｒｏｕｐ． 姬松茸胞内多糖的抗疲劳作用研究结果表明，姬 松茸胞内多糖能明显的延长负重小鼠游泳时间及耐 缺氧时间。本研究中负重、耐缺氧为应激因子，姬松 茸多糖可使机体对应激因子的适应能力明显增加。 因为耐缺氧能力的提高，大强度定量负荷运动后血乳 酸、血尿氮水平明显降低。陈智毅¨ 报道姬松茸对 循环系统具有强心、强壮、补充体力及应激作用，在应 激因子的刺激下，可反射性引起下丘脑一垂体一肾上 腺皮质系统功能增加，通过一系列自我调节以适应恶 劣的环境条件。因而表明姬松茸胞内多糖具有抗疲 劳作用。 实验表明¨ ，由Ｄ一葡聚糖组成的真菌多糖往 往具有许多生物活性和药效，本研究不仅为姬松茸胞 内多糖抗疲劳作用提供了结构基础，同时，姬松茸发 酵菌丝体中的粗多糖含量（１７．４８％）高于子实体部 分（１３．３７％）ⅢＪ，因此，为采用深层发酵技术大规模 工业化生产姬松茸多糖在保健食品的开发应用上提 供了理论依据。 致谢：对给与本文高效液相色谱和红外光谱测定 的烟台进出口检验检疫局阮新老师和烟台师范学院 化学学院的纪春暖老师表示深深的谢意！ 参考文献： ［１］黄年来．姬松茸及药效［Ｊ］．江苏食用菌，１９９４，１５（４）： ３０—３１． ［２］ 陆利霞，谷文英，丁霄霖．姬松茸多糖体外免疫及抗肿瘤 作用初步研究［Ｊ］．药物生物技术，２００２，９（６）：３２６—３２９． ［３］ 张欣，高娃，韩增华，等，北方姬松茸免疫调节作用的研 究［Ｊ］．生物技术，１９９９，９（６）：２５—２７． ［４］ 曹剑虹，吴胜，陈珊珊．姬松茸提取物Ｅ一１对小鼠移植性 肿瘤Ｓ－１８０的抑制作用［Ｊ］．福建医药杂志，２０００，２２ （１）：８６—８７． ［５］ 沈爱英，孙震，刘平，等．姬松茸多糖的分离纯化及其对 白血病细胞的抑制作用［Ｊ］．无锡轻工大学学报，２００１， ２０（４）：３８０—３８２． ［６］ 郭倩，周昌艳，宋春艳．姬松茸研究进展［Ｊ］．食用菌学 报，２００４，ｌ１（２）：５９—６４． ［７］ 中山大学生物系生化微生物教研室．生化技术导论 ［Ｍ］．北京：人民教育出版社，１９７９：１３８—２４８． ［８］ 张睢杰．糖复合物生化研究技术（第二版）［Ｍ］．杭州： 浙江大学出版社，１９９９：９． ［９］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［Ｍ］．北京：人民 卫生出版社，２００２：２０４—２０８． ［１０］许豪文．运动生物化学［Ｍ］．北京：高等教育出版社， １９９８：１８８—１８９． ［１１］ 张惟杰．糖复合物生化研究技术（第二版）［Ｍ］．杭州： 浙江大学出版社，１９９９：１９５—２００． ［１２］林启．中草药成分化学［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７７： ｌ１３—１４０． ［１３］吴东儒．糖类的生物化学［Ｍ］．北京：高等教育出版社． １９８７：８６０． ［１４］ 陈智毅，李清兵，吴娱明，等．巴西蘑菇的食疗价值 ［Ｊ］．中国食用菌，２００２，２０（４）：８８—９１． ［１５］吴东儒．糖类的生物化学［Ｍ］。北京：高等教育出版社， １９８７：６１８． ［１６］ 张云凌．浅谈姬松茸的药效［Ｊ］．中国林副特产，２００１， ５９（４）：４０—４１． ［１７］ 沈爱英．姬松茸姬松茸子实体与菌丝体营养成分比较 ［Ｊ］．食用菌，２００２（４）：７．
