瘦素对糖尿病大鼠糖脂代谢及炎性因子的影响

瘦素对糖尿病大鼠糖脂代谢及炎性因子的影响

朱建忠，赵　灿，隋月林，刘媛媛，乔跃兵△

（沧州医学高等专科学校解剖教研室，河北沧州０６１０００）

【摘要】　目的：探讨瘦素对糖尿病大鼠糖脂代谢及相关炎症因子的影响。方法：将健康Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠６０只随０只作为对照组，５０只给予高糖高脂饲料喂养加腹腔内注射链脲佐霉素（ＳＴＺ，２５ｍｇ／ｋｇ）的方法诱发并建机选取１

立糖尿病大鼠模型。并随机分为模型组、瘦素低剂量组、瘦素中剂量组和瘦素高剂量组，每组１０只。４组大鼠造模０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ和１００μｇ／ｋｇ，连续５ｄ。ＧＯＤ成功后均持续给予高糖高脂饲料喂养，瘦素低、中、高剂量组给予２ＰＡＰ法检测大鼠血糖（ＦＢＧ），放射免疫法测定胰岛素含量（Ｉｎｓ），全自动生化分析仪测定血清中三酰甘油（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬＣ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬＣ）。采用酶联免疫方法（ＥＬＩＳＡ）测定丙二醛（ＭＤＡ）、白细胞介素６（ＩＬ６）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）。采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测糖尿病大鼠脂肪组织中瘦素表达情况。结αα果：与对照组比较，各组大鼠血糖水平均显著升高（Ｐ＜０．０１）；与模型组比较，瘦素中、高剂量大鼠血糖显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；瘦素高剂量组胰岛素水平显著降低（Ｐ＜０．０１）。不同剂量瘦素组间比较，给药后三组大鼠ＦＢＧ及ＩＮＳ无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。与模型组比较，瘦素中、高剂量组ＴＣ水平显著下降（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；高剂量组ＴＧ、ＬＤＬＣ水平显著降低（Ｐ＜０．０５），高剂量组ＨＤＬＣ水平显著升高（Ｐ＜０．０１）。不同剂量瘦素组进行组间比较，高剂量组在降低ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬＣ水平，升高ＨＤＬＣ水平优于中、低剂量组（Ｐ＜０．０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，与模型５２．２７±１０．９３）比，瘦素高剂量组１００μｇ／ｋｇ（４０．１３±９．８７）、中剂量组５０μｇ／ｋｇ（４４．６８±１０．２３）、低剂量组２０μｇ／组（

ｋｇ（４７．３５±１２．０９）脂肪中瘦素表达水平依次降低。结论：瘦素水平分泌异常是诱发糖尿病因素之一，在给予一定浓度外源性瘦素（１００μｇ／ｋｇ）干预下，能显著降低ＭＤＡ、ＴＮＦ提高ＩＬ６水平，其机制可能与瘦素在减轻炎症α水平，反应、氧化应激，纠正血脂异常紊乱有密切关系。【关键词】　瘦素；糖尿病；糖脂代谢；炎症因子；大鼠

【中图分类号】Ｒ３３８　　　　【文献标识码】Ａ　　　　　【文章编号】１０００６８３４（２０２０）０３１９７００６【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５９６０．２０２０．０４４

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｅｐｔｉｎｏｎｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ

ｆａｃｔｏｒｓｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ

△

ＺＨＵＪｉａｎｚｈｏｎｇ，ＺＨＡＯＣａｎ，ＳＵＩＹｕｅｌｉｎ，ＬＩＵＹｕａｎｙｕａｎ，ＱＩＡＯＹｕｅｂｉｎｇ

（ＣａｎｇｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎａｔｏｍｙ，Ｃａｎｇｚｈｏｕ０６１０００，Ｃｈｉｎａ）

【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌｅｐｔｉｎｏｎｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｒｅｌａｔｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｅｎｈｅａｌｔｈｙｍａｌｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｆｉｆｔｙｒａｔｓｗｅｒｅｆｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｓｕｇａｒａｎｄｈｉｇｈｆａｔｄｉｅｔａｎｄｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ（ＳＴＺ，２５ｍｇ／ｋｇ）ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ．Ｔｈｅｙｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｌｅｐｔｉｎｌｏｗ，ｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒａｔｓｉｎｔｈｅｌｏｗ，ｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅｆｅｄｗｉｔｈｌｅｐｔｉｎａｔｔｈｅｄｏｓｅｓｏｆ２０，５０ａｎｄ１００μｇ／ｋｇｆｏｒ５ｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ（ＦＢＧ）ｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＧＯＤＰＡＰｍｅｔｈｏｄ，ｉｎｓｕｌｉｎｃｏｎｔｅｎｔ（ＩＮＳ）ｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ｔｈｅｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ（ＴＧ），ｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ（ＴＣ），ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＤＬＣ）ａｎｄｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＨＤＬＣ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｕｔｏｍａｔｉｃｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｚｅｒ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ），ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６（ＩＬ６）ａｎｄ（ＴＮＦ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒαｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｌｅｐｔｉｎｉｎａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅｌｅｖｅｌｓｏｆｏｔｈｅｒＰ＜０．０１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅｌｅｖｅｌｓｏｆｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｌｅｐｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（ｔｉｎｒａｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅｉｎｓｕｌｉｎｌｅｖｅｌｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅｌｅｐｔｉｎｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）．ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎＦＢＧａｎｄＩＮＳａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ＴＣｌｅｖｅｌｓｏｆＰ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）．ＴＧａｎｄＬＤＬＣｌｅｖｅｌｓｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅｌｅｐｔｉｎｇｒｏｕｐｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｌｅｐｔｉｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（ｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５），ＨＤＬＣｌｅｖｅｌｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆｌｅｐｔｉｎ（１００μｇ／ｋｇ）ｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＴＣ，ＴＧａｎｄＬＤＬＣ，ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＨＤＬ，ｗｈｉｃｈｗａｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｍｉｄｄｌｅａｎｄｌｏｗｄｏｓｅｏｆｌｅｐｔｉｎ（Ｐ＜０．０５）Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（５２．２７±１０．９３），ｔｈｅＣ

ｌｅｖｅｌｓｏｆｌｅｐｔｉｎｉｎｌｏｗ，ｍｉｄｄｌｅａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗｅｒｅ（４７．３５±１２．０９），（４４．６８±１０．２３）ａｎｄ（４０．１３±９．８７）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙｌｅｐｔｉｎｉｎａｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｌｅｐｔｉｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｉｎｄｕｃｉｎｇｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｏｆａｃｅｒｔａｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｌｅｐｔｉｎ（１００μｇ／ｋｇ），ｉｔｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｔｈｅ

１９８ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（３）

ｌｅｖｅｌｏｆＭＤＡ，ＴＮＦ，ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＩＬ６．Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｂｅｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅαｓｐｏｎｓｅ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ．Ｌｅｐｔｉｎａｌｓｏｒｅｄｕｃｅｓｔｈｅｒｉｓｋｏｆｄｉｓｅａｓｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉａｂｅｔｅｓｔｒｅａｔｍｅｎｔ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】　ｌｅｐｔｉｎ；　ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ；　ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓ；　ｒａｔｓ

　　糖尿病是以高血糖为主要特征的代谢性障碍类疾病，为临床上常见疾病。随着我国生活水平的不断提高，饮食结构的富营养化，使得糖尿病的发病率

１］越来越高，且发病群体逐年趋近于年轻化［。瘦素

是研究过程中的重点。因此，本研究通过建立糖尿病大鼠模型，并给予不同剂量的外源性瘦素，探讨瘦素对糖尿病脂代谢的影响及炎症因子表达，为瘦素治疗糖尿病提供借鉴与参考。

是一种肽类激素，由肥胖基因编码，在脂肪组织中合成并分泌，对控制摄食，增加机体能量消耗，以及抑

２］制脂肪的合成起到重要的作用［。研究表明人类

１　材料与方法

１．１　材料与仪器

健康Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠６０只，体重１８０～２２０ｇ，由河北医科大学动物中心提供，合格证为医动字第０４０５７号。饲养于沧州医学高等专科学校动物房。饲养条件：大鼠分笼喂养，自由饮水进食，保持室内０～２４℃，相对湿度维持在４０％～５０％，实验温度２

前将大鼠在动物房中适应性饲养７ｄ。

链脲霉菌素（ＳＴＺ，Ｓｉｇｍａ公司）；重组瘦素购自厦门慧嘉生物科技有限公司；胰岛素放射免疫分析试剂盒（１００管／盒，上海荣生生物技术有限公司）；ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ），血清总胆固醇（ｔｏｔａｌ甘油三酯（

ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＴＣ），低密度脂蛋白胆固醇（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＬＤＬＣ），高密度脂蛋白胆固醇（ｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＨＤＬＣ），脂质过ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅｐｅｒｏｘｉｄｅ，ＭＤＡ），氧化产物丙二醛（

白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６，ＩＬ６），肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）试剂盒购自南京建αα成生物工程研究所。

ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ）；ＧＦ８００型全自电子分析天平（

动自动生化分析仪（武汉市天安医疗器械有限公司）；ＨＧＭ１１１血糖仪（欧姆龙）；ＧＬ１６ＧⅡ型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；超声匀浆机（上海乔枫实业有限公司）。１．２　糖尿病大鼠模型建立及分组

选取６０只大鼠适应性喂养７ｄ，随机选取１０只大鼠作为对照组，对照组给予基础饲料（购自中国医学科学院协和动物研究所，其配方为：面粉２５％、麦片２５％、玉米面２５％、豆面１０％、鱼粉８％、骨粉４％、酵母粉２％、精盐１％）常规喂养。５０只大鼠用作糖尿病造模，方法为持续高糖高脂饲料（江苏协２０１９０７３０，配方为：５ｋｇ同生物有限公司，生产批号：标准饲料含：基础饲料４７．７％，麦麸２０％，鱼粉５％，谷粉１％，食盐０．５％，胆固醇１％，牛胆盐０．２％，蛋黄粉１０％，猪油１０％）喂养一个月，实验

７］

期间观察动物体重、饮食、饮水和尿量的变化［。

Ｌｅｐｔｉｎ）抵抗关系密切，血清瘦素与的肥胖与瘦素（

胰岛素水平在糖尿病的发病过程中具有潜在作

３］

用［。Ｌｅｐｔｉｎ前体是由１６７个氨基酸残基组成，Ｎ

末端有２１个氨基酸残基信号肽，通过抑制体内神经肽Ｙ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ，ＮＰＹ）基因活跃程度，从而增ａｌｐｈａｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ强体内荷尔蒙黑色素刺激激素（

ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ，αＭＳＨ）活跃度增强来调节体重

［４］

。以下丘脑为作用介质将Ｌｅｐｔｉｎ与胰岛素紧

密联系起来，形成Ｌｅｐｔｉｎ神经肽Ｙ（ＮＰＹ）胰岛素负反馈环，胰岛素可促进瘦素的分泌，瘦素对胰岛素的合成和分泌发挥负反馈调节作用

［５］

。炎症介质在

糖尿病发生、发展中发挥着重要的作用，炎症因子可导致Ｂ细胞功能受损，使机体血糖水平升高，而慢性高血糖状态同时也能进一步造成氧化应激增加，加强炎性反应。目前已有研究表明机体处于炎症状态时血清瘦素水平升高，瘦素在调节能量代谢的同时，还能对炎性因子和交感神经兴奋有重要作用。姚艳敏

［６］

等研究不同剂量瘦素对兔急性肺栓

塞的炎症因子影响，结果提示经５０μｇ／ｍｌ瘦素处理后，炎症因子（ＴＮＦ、ＩＬ８）４ｈ明显下降，其认为可α能与外源性瘦素通过降低中性粒细胞的聚集和浸润，减轻脂质过氧化和自由基损伤等关系密切。机体内瘦素水平失衡能引起肥胖和糖尿病等疾病的发生，炎症因子与细胞表明的受体结合后可干扰胰岛素受体信号正常转导，降低胰岛素敏感性。然而一定量外源性瘦素的摄入能发挥由“脂肪胰岛素”内分泌轴激素双向调节反馈作用。高剂量瘦素预处理可能并未降低机体内实际瘦素水平，会加剧炎性反应及机体氧化应激状态。控制外源性瘦素摄入量也

　【基金项目】国家卫生计生委计划生育与优生重点实验室开放

性课题（２０１５０００２）；河北省科技厅指令课题（０８２７６１０Ｄ—２０）；２０１９年度教育部人文社科研究项目（１９ＹＪＡ８９００１０）【收稿日期】２０１９１０２４【修回日期】２０２００３２６通讯作者】Ｔｅｌ：０３１７５５０７６３３；Ｅｍａｉｌ：ｑｉａｏｙｂ２００４＠１６３．ｃｏｍ　△【

中国应用生理学杂志，２０２０，３６（３）１９９

大鼠造模前禁食、不禁水１２ｈ，给予腹腔注射２５ｍｇ／ｋｇＳＴＺ（以ｐＨ４．２的０．１ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸缓冲液配成０．２５％浓度）一周后采血，以随机血糖≥１３．８

８］ｍｍｏｌ／Ｌ为糖尿病模型标准［。选取造模成功大鼠

ＧｅｌＰｒｏ３１）进行分析。分析软件（１．５　统计学处理

计量资料以均值±标准差（ｘ±ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ珋１６．０统计软件进行统计分析，多组间差异采用单因检验。素方差分析的方法，均数间的两两比较用ｑ

４０只随机分为模型组、瘦素低剂量组（２０μｇ／ｋｇ）、瘦素中剂量组（５０μｇ／ｋｇ）和瘦素高剂量组（１００μｇ／ｋｇ）每组１０只。模型组给予灌胃等剂量生理盐水，其它各组对应每日给予灌胃瘦素，持续给药５ｄ，并继续给予高糖高热量饲料喂养。１．３　指标测定

于末次给药后，大鼠禁食１２ｈ后尾静脉取血５ｍｌ，摇匀，４℃加入抗凝剂，２０００ｒ／ｍｉｎ低温离心１０ｍｉｎ，取血清。大鼠血糖含量采用ＧＯＤＰＡＰ法进行ＴＧ、ＴＣ、测定，放射免疫法测定血清中胰岛素含量，ＬＤＬＣ、ＨＤＬＣ采用全自动生化分析仪，ＥＬＩＳＡ方法测定ＭＤＡ、ＴＮＦＬ６。α及Ｉ

１．４　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测脂肪组织中Ｌｅｐｔｉｎ表达

末次给药后完成取血的大鼠，将大鼠断头处死后，选取大鼠股部皮下脂肪组织充分匀浆后，加入裂解液冰盒上裂解，超声波处理后１２０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ，吸取上清液，测定总蛋白质含量。根据蛋白质浓度，将已溶解于加样缓冲液的总蛋白质经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电泳结束后转移至纤维素膜上，脱脂奶粉封闭液封闭２ｈ，加入抗瘦素多克隆抗体Ⅰ抗（１∶５００，兔抗鼠多克隆抗体，美国ＳＩＧＭＡ公司）进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ蛋白印迹杂交。置于４℃冰箱过夜，ＰＢＳＴ洗膜，加抗兔Ⅱ抗（１∶５０００，碱性磷酸酶偶联的小鼠抗兔ＩｇＧ，美国ＳＩＧＭＡ公司）４℃孵育６ｈ，ＰＢＳＴ洗膜，按照化学发光试剂盒说明书操作加入发光液，发光显色，用计算机图像

２　结果

２．１　瘦素对大鼠血糖及胰岛素水平的影响

对照组大鼠实验前后血糖水平维持正常没有显ＢＧ水著变化。与对照组比较，模型组大鼠建模后Ｆ平显著增加（Ｐ＜０．０１），表明糖尿病大鼠模型构建成功；与模型组比较，各组瘦素组均能降低大鼠ＦＢＧ水平，且瘦素中、高剂量大鼠血糖显著降低（Ｐ＜，Ｐ＜０．０１）；瘦素高剂量组胰岛素水平显著降０．０５低（Ｐ＜０．０１），表明瘦素对胰岛素的合成和分泌发挥负反馈调节作用。与模型组比较，瘦素表达量显著Ｐ＜０．０１）。对各组瘦素组间比较，给药后三组降低（

大鼠ＦＢＧ及ＩＮＳ无统计学差异（Ｐ＞０．０５，表１）。２．２　瘦素对大鼠血脂水平的影响

与对照组比较，模型组及各组瘦素组ＴＣ、ＴＧ和ＬＤＬＣ水平显著升高（Ｐ＜０．０１），ＨＤＬＣ水平均显著降低（Ｐ＜０．０１）。与模型组比较，瘦素高、中、低剂量组大鼠ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬＣ水平有降低作用；ＨＤＬＣ水Ｃ水平显著下降（Ｐ平有升高作用；且中、高剂量组Ｔ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；高剂量组ＴＧ、ＬＤＬＣ水平显著降低（Ｐ＜０．０５）；高剂量组ＨＤＬＣ水平显著升高（Ｐ＜０．０１）。不同剂量组瘦素组间比较，瘦素高剂量组在降低ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬＣ水平，升高ＨＤＬＣ水平优于中、低剂量组（Ｐ＜０．０５，表２）。

＝１Ｔａｂ．１　ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｌｅｐｔｉｎｏｎＦＢＧａｎｄＩＮＳｉｎｒａｔｓ（ｘ±ｓ，ｎ）０珋

ＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＭｏｄｅｌＬｏｗＭｅｄｉｕｍＨｉｇｈ

Ｄｏｓａｇｅ（ｇ／ｋｇ）μ

——２０５０１００

ＢｅｆｏｒｅＦＢＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）

５．３５±０．９８



１９．２９±２．７１



１９．５３±１．１９



２０．３２±０．９８



１９．６８±１．３２

ＡｆｔｅｒＦＢＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）

５．２９±１．１１



２１．５９±２．２１２０．８７±２．１４

＃

１８．１７±１．３５

＃＃

１６．３６±３．３２

ＩＮＳ（ｍＵ／Ｌ）

１５．３２±１．３７



２５．９３±１．６５



１９．２１±１．４５



１８．１４±２．３１

＃＃

１７．８０±１．２９

Ｌｅｐｔｉｎ（ｇ／Ｌ）μ

３．０１±０．１０



２９．８７±２．４３



２２．１０±３．７５



２０．２５±４．２１

＃＃

１８．３７±５．０１

　　ＦＢＳ：Ｆａｓｔｉｎｇｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ；ＩＮＳ：Ｓｅｒｕｍｉｎｓｕｌｉｎ

＃＃

　　Ｐ＜０．０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１ｖｓｍｏｄｅｌ

＝１Ｔａｂ．２　Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｌｅｖｅｌｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆｒａｔｓ（ｍｍｏｌ／Ｌ，ｘ±ｓ，ｎ０）珋

ＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＭｏｄｅｌＬｏｗＭｅｄｉｕｍＨｉｇｈ

Ｄｏｓａｇｅ（ｇ／ｋｇ）μ

——２０５０１００

ＴＣ

１．５７±０．３１



４．１８±０．３７



３．７２±０．５１

＃

２．１１±０．０９

＃＃

１．９２±０．６３

ＴＧ

０．６７±０．３１



２．５６±０．３７



１．７５±０．６１



１．６２±０．２６

＃

１．４８±０．３４

ＨＤＬＣ

１．７１±０．１０



０．６４±０．２２



０．９１±０．１２

＃

１．０５±０．１１

＃＃

１．３２±０．２３

ＬＤＬＣ

０．５１±０．０４



１．５８±０．２４



１．３６±０．３５



１．１７±０．３６

＃＃

０．８３±０．２１

＃＃

　　Ｐ＜０．０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１ｖｓｍｏｄｅｌ

２００ＣｈｉｎＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，３６（３）

２．３　瘦素对大鼠ＭＤＡ、ＴＮＦ、ＩＬ６水平的影响α

与对照组比较，模型组及各组瘦素组大鼠ＭＤＡ、ＴＮＦ、ＩＬ６水平均显著升高（Ｐ＜０．０１）；与模α型组比较，瘦素低、中、高剂量组均能降低大鼠ＭＤＡ、ＴＮＦ且瘦素高剂量组大鼠ＭＤＡ、ＴＮＦα水平，

ＧｒｏｕｐＣｏｎｔｒｏｌＭｏｄｅｌＬｏｗＭｅｄｉｕｍＨｉｇｈ

Ｄｏｓａｇｅ（ｇ／ｋｇ）μ

——２０５０１００

ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／ｍｇ）

７．５４±０．３１



１４．１８±２．３７



１３．７１±０．５１



１０．１１±０．２９

＃

８．０２±１．１１

Ｐ＜０．０１）；瘦素中、高剂量组的ＩＬα水平显著降低（

６水平显著升高（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。不同剂量瘦素组间比较，高剂量组ＭＤＡ、ＴＮＦ中剂量α水平与低、组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。ＩＬ６水平三组比Ｐ＞０．０５，表３）。较无统计学差异（

ＴＮＦ（ｐｇ／ｍｌ）α

３．６７±１．２１



４５．５６±１．３７



４１．７５±６．６１



４１．９２±７．２６

＃＃

３１．４８±０．３４

ＩＬ６（ｇ／Ｌ）μ

１４．７３±０．３５



３１２．６４±３３．２２



３３１．９１±６７．１２

＃

４０１．２５±７２．９０

＃＃

４７５．３２±８０．２１

＝１Ｔａｂ．３　ＴｈｅＭＤＡ，ＴＮＦ，ＩＬ６ｌｅｖｅｌｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆｒａｔｓ（ｘ±ｓ，ｎ０）α珋

＃＃

　　Ｐ＜０．０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１ｖｓｍｏｄｅｌ

２．４　糖尿病大鼠脂肪组织中瘦素表达变化

Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测糖尿病大鼠脂肪组织中瘦素表达情况。与对照组（３８．３８±１２．１９）相比，模型组（５２．２７±１０．９３）脂肪中瘦素水平表达显著升高。与４０．１３±９．８７）、中剂量模型组相比，瘦素高剂量组（４４．６８±１０．２３）、低剂量组（４７．３５±１２．０９）依次表组（

达降低。与模型组相比，瘦素高、中、低剂量组分别下降１８．９９％、１６．６７％和１１．８５％，表明在外源性瘦素作用与糖尿病大鼠，大鼠脂肪中瘦素表达呈现逐）。渐降低趋势（图１

究检测糖尿病大鼠脂肪组织中瘦素表达情况，结果显示模型组脂肪组织中瘦素表达增高，瘦素高、中、低剂量组依次表达下降，表明在外源性瘦素作用于糖尿病大鼠，其脂肪瘦素表达呈现逐渐降低趋势。这可能与瘦素及胰岛素对机体代谢起到双向调节作用相关，外源性瘦素进入体内，脂肪组织内的瘦素水平反而增高，可能与通过调节机体内实际瘦素水平，胰岛素”内分发挥着由瘦素与胰岛素介导的“脂肪泌轴激素双向调节反馈作用。目前另有部分研究证

１２］

实［，在给予外源性瘦素高剂量（含量＞１００μｇ／ｋｇ）

干预，会导致炎症反应加剧，使机体处于氧化应激状态，脂肪内瘦素表达明显降低，外源性瘦素干预用量选择为实验研究的重点。本研究结果发现，在造模成功的糖尿病大鼠中，给予不同剂量瘦素进行干预

Ｆｉｇ．１　ＬｅｐｔｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ

ｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓ

能显著降低大鼠ＦＢＧ水平，瘦素高剂量组胰岛素水平显著降低（Ｐ＜０．０１）。与模型组相比，机体内瘦素水平也随着外源性瘦素干预表达逐渐降低。

１３］

。糖脂代谢紊乱是糖尿病主要表现症状之一［

３　讨论

糖尿病是一种常见的代谢紊乱疾病，以胰岛素分泌或作用缺陷为主要特征，是引起心脑血管疾病

９］

高危险因素［。糖尿病易引发多种疾病，如合并心

长期糖脂代谢紊乱可导致大鼠机体氧化应激和抗氧

１４］

化防御体系失衡［。有研究表明瘦素能降低人肝

Ｌ０２脂变细胞内ＴＧ的含量，呈剂量依赖关系，其作用机制可能与ＰＰＡＲα及其目标基因表达上调有

１５１６］关［。血清中瘦素水平与血脂、血压之间存在复

脑血管疾病、肾病、眼病，也有研究证实糖尿病易于诱发抑郁症，瘦素是脂肪细胞为保持能量平衡分泌ｂ基因（Ｏｂｅｓｉｔｙｇｅｎｅｓ）编码的蛋白的一种激素，为Ｏ质产物，其参与机体摄食、体温及能量平衡的，

１０］

调节脂类代谢及胰岛素分泌［。在许多疾病如肥

杂的相互关系，正常体重组血清瘦素水平与ＴＧ呈正相关，在男性血清瘦素水平还与ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬＣ

１７］

呈正相关［。本研究结果显示在给予一定浓度瘦

胖、糖尿病等生理病理过程中均发挥着重要生物学活性。有研究发现人体内存在“脂肪瘦素胰岛素轴”，瘦素与胰岛素之间存在双向负反馈作用，在肥胖者体内存在高瘦素血症、瘦素抵抗和２型糖尿病中的胰岛素抵抗相并行，这与另外一种研究证明促进脂肪成熟细胞瘦素可能是抑制性信号相吻合，瘦

１１］

素可能参与胰岛素抵抗和糖尿病的发生［。本研

素干预能够改善血脂代谢紊乱，抑制胰岛素水平，这与“脂肪胰岛素”轴脂肪增加可促进胰岛素分泌有相关性，其机制为通过抑制胰岛素分泌减少脂肪的合成与贮存。

瘦素在人体内对人体起到双向调节作用，瘦素水平上升易造成瘦素抵抗，加剧炎性反应。瘦素水平下降能促进信号传导的缺失，从而造成生理水平

中国应用生理学杂志，２０２０，３６（３）２０１

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Ｉｃｏｌｌａｇｅｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｄｂ／ｄｂｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅｌｌｓ：ＧｌｕｃｏｓｅｕｐｔａｋｅａｎｄＴＧＦｔｙｐｅＩＩｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＫｉｄｎｅｙＩｎｔ，２００１，５９（４）：１３１５１３２３．

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ｐｌａｓｍａｌｅｐｔｉｎｌｅｖｅｌｓａｎｄｃｈｒｏｎｉｃｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ［Ｊ］．ＭｅｔａｂＳｙｎｄｒＲｅｌａｔｅｄＤ，２０１０，８（６）：４９９５０３．

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与２型糖尿病的相关研究［Ｊ］．现代生物医学进展，２０１１，１１（２４）：４９０８４９１１．

［１８］ＤｉａｎａｔＭ，ＨａｍｚａｖｉＧＲ，ＢａｄａｖｉＭ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ

ｌｏｓａｒｔａｎａｎｖａｎｉｌｌｉｃａｃｉｄｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｎｉｓｃｈｅｍｉａ󰀡ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｒａｔｈｅａｒｔ［Ｊ］．ＩｒａｎＲｅｄＣｒｅｓｃｅｎｔＭｅｄＪ，２０１４，ｌ６（７）：ｅ１６６６４．［１９］周伟杰，王　声，夏书官．靶向沉默ＩＬ６对乳腺癌细

胞侵袭和迁移能力的影响［Ｊ］．中国病理生理杂志，２０１９，３５（１）：８７９２．

（下转第２２７页）

瘦素对心脏功能调节失衡。炎症是连接糖尿病与其

１８］并发症之间的纽带［。ＴＮＦα为巨噬细胞分泌的

小分子蛋白，是直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性

１９］２０］因子之一［。余帆等［对比不同剂量瘦素对２型

糖尿病大鼠心肌功能影响，给予一定浓度外源性瘦ＮＦ表明瘦素可以减轻炎素预处理能降低Ｔα水平，症反应。ＩＬ６为一种细胞因子能刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。糖尿病患者血浆中ＩＬ６水平高于正常非肥胖者，且两者呈正相关，有研究在评估糖尿病患者疾病进展中，通过在外周Ｌ６水平升高，推测瘦素参给予瘦素后，能使血清Ｉ与糖尿病发展机制可能与ＩＬ６相关。ＴＮＦＬα和Ｉ６可通过抑制胰岛素受体络氨酸激酶活性，降低胰ｌｕｔ４的表达，引起外岛素依赖的葡萄糖转运分子Ｇ

周组织中胰岛素抵抗。ＭＤＡ是重要的脂质过氧化代谢产物，可反应过氧化程度及自由基活性，糖尿病患者持续高血糖易引起氧化应激反应增强

［２１］

。本

研究结果提示，外源性瘦素干预能降低糖尿病大鼠ＭＤＡ、ＴＮＦ、升高ＩＬ６水平，并可能改善由ＭＤＡ和αＴＮＦ发挥出保护α所带来的炎症及机体应激状态，机体免受损害的作用，从而阻止糖尿病疾病进一步进展。

综上所述，瘦素在糖尿病发生、发展过程中起到重要的作用。瘦素的水平分泌异常是诱发糖尿病的因素之一。给予一定浓度外源瘦素干预能显著改善糖尿病大鼠糖脂代谢水平，显著降低ＭＤＡ、ＴＮＦα水平和升高ＩＬ６水平。在临床糖尿病的治疗过程中，给予一定浓度外源性瘦素能减轻由炎症反应，氧化应激，血脂代谢紊乱，以及胰岛素抵抗所带来的损伤，降低糖尿病疾病进展的风险，为临床上治疗糖尿病提供理论依据。【参考文献】

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中国应用生理学杂志，２０２０，３６（３）２２７

酵母膏作为增加嘌呤摄入的主要来源之一，存在消化速度慢、排空时间长的问题，虽然本研究结果显示，短期灌胃未发现对胃的重量产生明显影响，但使用剂量过大易造成动物消化不良甚至导致死亡，这种效应在联合腺嘌呤共同使用时更加明显，灌胃剂量在１０ｇ／ｋｇ时，在控制其他药物剂量的前提下有利于诱导模型，但是当酵母膏浓度升至２０ｇ／ｋｇ以

９］及３０ｇ／ｋｇ时，动物死亡明显增加，这与相关报道［

）１次的诱导方案短期快速诱导高尿酸血症模型，ｋｇ

可供模型使用者参考。

衷心感谢王永明老师对本研究提出的技术指导和支持。【参考文献】

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不太一致，可能是联合用药的种类有所不同，但从安０ｇ／ｋｇ左右。全角度考虑建议使用剂量应控制在１

１０］氧嗪酸钾［是一种常用的尿酸酶抑制剂，能够抑制

大鼠体内尿酸酶分解尿酸从而升高尿酸水平。本研究发现，腹腔内注射氧嗪酸钾对动物具有较强刺激性，可引起动物明显疼痛和抽动，抑制其日常活动和饮食，剂量过高可造成死亡。本研究发现，采用间断腹腔内注射氧嗪酸钾对于升高尿酸浓度效果明显，并且不易引起个体死亡，而增加注射频率（间接增加用药剂量）可导致个体死亡风险增高。而采用单次注射方案时，由于前期持续摄入较多嘌呤，尿酸及前体物质蓄积过多，注射后可能导致抑制尿酸分解的效应过强，进而导致死亡。多次注射则有利于缓解这种蓄积效应产生的过强反应，对实验动物具有一定的保护作用。本研究中不同剂量诱导模型均可引起明显的肾脏肿大，表面可见暗黄色斑纹，病理检查结果表明，肾皮质、髓质均出现结构破坏，炎细胞浸润，提示尿酸沉积明显并导致炎性病灶产生。说明本研究中所采用的的模型诱导方法效果明显但作用较强，不适合作为长期干预方案。

综上所述，本研究采用不同浓度酵母膏、腺嘌呤联合氧嗪酸钾诱导建立高尿酸血症大鼠模型的方法有效，高尿酸状态持续时间较长，建议采用酵母膏（１０ｇ／ｋｇ）和腺嘌呤（１００ｍｇ／ｋｇ）每日灌胃２次，联合间隔（第１、３、７日）腹腔注射氧嗪酸钾（３００ｍｇ／

（上接第２０１页）

［２０］余　帆，徐彤彤，佐　妍，等．不同剂量瘦素对２型

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响研究［Ｊ］．中国全科医学，２０１４，１（１７）：２９９３０３．

［２１］ＬｉｎＣ，ＳｕｉＨ，ＧｕＪ，ｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆ

ｐｒｏｐｏｆｏｌｏｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ［Ｊ］．ＭｉｃｒｏｖａｓｃＲｅｓ，２０１３，８（９０）：１６２１６８．