活体生物发光成像技术-是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA
活体生物发光成像技术-是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记,利用一套非常灵敏的光学检测仪器,让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。
学术术语来源——
绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定
文章亮点:
1 利用显性遗传的表达绿色荧光蛋白的转基因大鼠作为细胞供体,进行了骨髓间充质干细胞的分离和培养,成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞。
2 经鉴定后的间充质干细胞传代至10代时仍具有很强的增殖能力,采用油红O和茜素红染色方法进一步证实,在不同的诱导条件下,其可分别向成脂和成骨方向分化。结果说明稳定表达的绿色荧光蛋白未影响到骨髓间充质干细胞的多向分化潜能,可作为良好的示踪因子。 关键词:
干细胞;骨髓干细胞;绿色荧光蛋白;骨髓间充质干细胞;转基因大鼠;细胞表型;成骨分化;成脂分化;辽宁省自然科学基金 主题词:
骨髓;间质干细胞;绿色荧光蛋白质类;大鼠,转基因
摘要
背景:转基因动物提取的间充质干细胞自身携带绿色荧光蛋白,与传统病毒、质粒转染相比,能在活细胞中稳定地表达,可较快筛选其修饰的细胞。 目的:观察绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。 方法:取2周龄的绿色荧光蛋白转基因大鼠双侧长骨骨髓,采用全骨髓贴壁法
分离培养骨髓间充质干细胞。流式细胞术分析第5代绿色荧光蛋白阳性骨髓间充质干细胞的细胞表型,并分别加入成骨及成脂条件培养液进行体外多向诱导分化,采用茜素红钙盐染色和油红O染色进行鉴定。
结果与结论:成功获得了稳定表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表达CD90和CD105,不表达或弱表达CD14和CD45。经成骨诱导3周后茜素红染色可见有橘红色钙盐沉积,经成脂诱导3周后油红O染色见红色的脂滴。结果表明稳定表达的绿色荧光蛋白未影响到骨髓间充质干细胞的多向分化潜能,可作为良好的示踪因子。