中国组织工程研究笫仃誊第４４ ２０１３—１０—２９出版 Ｃｈｉｎｅｓｅ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ￣ｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｃｔｏｂｅｒ２９，２０１３ ＶｏＬ１７，Ｎｏ．４４ ～ｃ一。 ｄｏｉ：１０．３９６９／】．ｉｓｓｎ，２０９５－４３４４．２０１３．４４．００１ ｌＭｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ］ 曾彬．王艾丽．胡冬冬．李昌 小鼠骚昭心脏心矫骥细胞体外培养模銎的建立 中国组织Ｉ程研究．２０１３．１７【４４１：７６６１—７６６６ 小鼠胚胎心脏心外膜细胞体外培养模型的建立冰 ☆ 曾彬’，王艾丽 ，胡冬冬’，李昌。（’武汉大学人民医院心血管内科，湖北省武汉市４３００６０； 武汉大学中南医院心血管内科超声心 动室，湖北省武汉市４３００７１；。湖北省中山医院心内科，湖北省武汉市４３００３３） 文章亮点： １心肌梗死忠者逐年增加，干细胞再生心肌治疗为心肌梗死提供了新的治疗方法。胚胎心外膜细胞是 曾彬☆，男，１９７８年生， 最近被发现的具有分化为心肌细胞和血管平滑肌细胞潜能的心脏干细胞，但其分化机制及因素尚不清 湖北省黄石市人，汉族， 楚。 ２００８年武汉大学毕业，博 ２ Ｗｔ－１及Ｔｂｘ１８标记的胚胎心外膜细胞作为新发现的心脏干细胞为心脏损伤后的自我修复提供了崭新的 士，副教授，主要从事冠 思路和广阔的前景。明确心外膜细胞向心肌、血管平滑肌细胞分化的机制与因素，以提高心外膜源性心 心病基础与临床研究。 肌、血管平滑肌细胞的分化效能将加速心脏干细胞运用于临床。 ｚｂｃｈ ２００＠１６３．ｃｏｍ ３文章首次于体外建立了胚胎心外膜细胞的培养模型，相差显微镜观察胚胎心外膜细胞生长特点，使用 中图分类号：Ｒ３１８ 免疫荧光技术对细胞进行胚胎心外膜细胞特异性抗体Ｗｔ－１、Ｔｂｘ１ ８染色。结果显示，细胞生长增殖迅速，几 文献标识码：Ａ 乎１０Ｏ％的细胞表达胚胎心外膜细胞特异因子，为进一步明确胚胎心外膜细胞的定向分化分子机制提供了新 文章编号：２０９５－４３４４ 的思路。 （２０１３）４４－０７６６１－０６ 关键词： 收稿日期：２０１３－０４－１０ 器官移植；心肺移植；心脏干细胞；心外膜细胞；细胞培养；分化；再生；增殖；信号通路；Ｗｔ－１；Ｔｂｘ．１８； 修回Ｅｌ期：２０１３－０５－１５ 国家自然科学基金 （２０１３０４０６０／Ｇ’Ｃ） 主题词： 胚胎干细胞；细胞培养技术；再生；细胞增殖 基金资助： 国家自然科学基金青年项目（３０９００６０９）＊￣国家自然科学基金面上项目（８１２７０２７１） 摘要 背景：胚胎心脏心外膜细胞是最近被发现的具有分化为心肌细胞和血管平滑肌细胞潜能的心脏干细胞，可分 化为心脏三系细胞，为心脏损伤的再生提供了新的细胞来源，但其定向分化机制及因素仍不清楚。 目的：体外建立小鼠胚胎心脏心外膜细胞培养模型。 方法：解剖显微镜下分离１１．５—１２．５ ｄ小鼠胚胎心脏，剪除肺静脉血管、心房组织及左心室，移至６孔板（或 ３５ ｍｍ培养皿 培养，２４ ｈ后移走胚胎心脏组织继续培养。相差显微镜观察胚胎心外膜细胞生长特点；使用 免疫荧光技术对细胞进行胚胎心外膜细胞特异性抗体Ｗｔ－１、Ｔｂｘ１８染色。 结果与结论：胚胎心外膜单层细胞从组织块边缘长出，呈鹅卵石样，并围绕组织块向外延伸。移去胚胎心 脏后细胞继续生长，且增殖迅速，三四天后长至融合。所有细胞均强阳性表达胚胎心脏心外膜细胞特异性 抗体Ｗｆ＿１及Ｔｂｘｌ８。结果表明，胚胎心脏心外膜细胞生长迅速、形态单一，均表达心外膜细胞特异因子， 细胞纯度高，成功构建了体外胚胎心脏心外膜细胞培养模型，为研究其定向分化的分子机制提供了新的 思路。 Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａｒｔ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ Ｚｅｎｇ Ｂｉｎ’Ｗａｎｇ Ａｉ～ｌｉ，Ｈｕ Ｄｏｎｇ．ｄｏｎｇ’，，Ｌｉ Ｃｈａｎｇ。（’Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｎｍｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００６０，Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ；２ＥｃｈＯｃａｒｄｉＯｇｒａｐｈｙ Ｒｏｏｍ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｚｈｏｎｇｎａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７１，Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ； ３Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｗｕｈａｎ ４３００３３，Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｌｃｔ ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：Ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉｕｍ ｃａｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ｉｎｔｏ ｍｙｏｃａｒｄｉａＩ ｃｅｉｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ Ｚｅｎｇ Ｂｉｎ☆．Ｄｏｃｔｏｒ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａＩ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ．ａｎｄ ｉｔ ｃａｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｔｏ ｃａｒｄｉａｃ ｔｈｒｅｅ．１ｉｎｅ ｃｅｌｌｓ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｎｅｗ ｃｅｌＩ ｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｉｎｊｕｒｙ．Ｂｕｔ ｔｈｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｎｍｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒｓ ａｒｅ ｓｔ川ｕｎｃｌｅａｒ． Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅＩ ｏｆ ｅｐｉｃａｒｄｉａＩ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａｒ１． ４３００６０，Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｃｈｉｎａ ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａ￣ｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｓｅｃｔｅｄ ｆｒ０ｍ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ａｔ ｐｒｅｇｎａｎｔ １ ０．５—１ １．５ ｄａｙｓ．ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｚｂｃｈ＿２Ｏ０＠１６３．ｃｏｍ ｖｅｉｎｓ．ａｔｒｉａｌ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ Ｉｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｏｆｆ，ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａ￣ｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ６－ｗｅｌＩ ｅｃ。。 ： 。，。．０４．，。 ｐｌａｔｅｓ（ｏｒ ３５ ｍｍ ｄｉｓｈ）ｆｏｒ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ２４ ｈｏｕｒｓ，ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａｒｃ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｍｏｖｅｄ ａｎｄ Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０１３－０５ １５ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙ．Ｐｈａｓｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｌｓＳＮ ２０９５—４３４４ ＣＮ ２１—１ ５８’７Ｒ ＣｏＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ ７６６１ 曾韦移．等 小鼠旺眙心畦心钋骥镪匏体外培养模型韵建立 一ｃ一伽 ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ；ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔａｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｗｔ一１ ａｎｄ Ｔｂｘｌ ８ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ． ＲＥＳＵＬＴＳ ＡＮＤ Ｃ０ＮＣＬＵＳＪ０Ｎ：Ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌ Ｊ ｍｏｎｏｌａｙｅｒｓ ｇｆｅｗ ｆｒｏｍ ｔｉｓｓｕｅ ｂｌｏｃｋ ｅｄｇｅ ｗｉｔｈ ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅ—ｌｉｋｅ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｏｕｔｗａｒｄｌｙ ａｒｏｕｎｄ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｂｌｏｃｋｓ． ｅｒ ｒｅｍｏｖｅｄ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａｒｔ．ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｇｒｅｗ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙ ｗｉｔｈ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｇｏｔ ｆｕｓｉｏｎ ａｔ ３４ ｄａｙｓ．Ａｌｌ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｗｔ－１ ａｎｄ Ｔｂｘｌ ８ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｈａｖｅ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｒａｐｉｄｌｙ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｕｎｉｆｏｒｍ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｃａｎ ｅｘｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｕｒｉｔｙ．Ｔｈｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｎｅｗ ｉｄｅａ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｄ阡ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ． Ｓｕｂｊｅｃｔ ｈｅａｄｉｎｇｓ：ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｆｕｎｄｉｎｇ：Ｙｏｕｔｈ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｎｏ．３０９００６０９ ：Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒ￣ｅｃｔ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．Ｎｏ．８１２７０２７１ Ｚｅｎｇ Ｂ，Ｗａｎｇ ＡＬ，Ｈｕ ＤＤ，Ｌｉ Ｃ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈｅａｒｔ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｚｕｚｈｉ Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ Ｙａｎｊｉｕ．２０１３；１７（４４）：７６６１—７６６６． ０引言Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ １ 材料和方法Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ 长期以来，成体哺乳动物心脏被认为是终末分化 设计：细胞学体外实验。 器官，心脏细胞的损伤坏死将由心肌细胞的肥大及瘢 时间及地点：于２０１１年３月至２０１２年４月在武汉大 痕组织所取代ｒ。。 。近年来，心肌梗死的年轻化和猝死 学人民医院心血管内科２１１工程实验室完成。 令人吃惊。目前治疗主要是药物、介入治疗和搭桥手 材料： 术，虽能改善症状，甚至使闭塞血管再通，却不能替 实验动物：昆明小鼠４０只，其中雄鼠８只，雌鼠３２只， 代坏死心肌，心脏移植能彻底改善心脏状态，但临床 ８－１２周龄，购自武汉大学实验动物中心，许可证号： 开展难度很大。自从２０世纪７０年代末受损的蝾螈心脏 ＳＣＸＫ（－￣Ｉ；）２０１１—０００４。实验中对动物的处理方法符合中 可以由绞碎的心肌碎片成功修补以来，细胞移植治疗 华人民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的 心脏疾病备受关注。 指导性意见》。 近年来，新兴的细胞移植技术将自体或异体的心肌 小鼠胚胎心脏心外膜细胞体外培养模型建立实验的主要 细胞移植入心肌梗死后的心肌瘢痕组织中，代替不可复 试剂： 生的坏死心肌，改善心脏功能。目前干细胞再生治疗成 为研究热点，种子细胞的寻找着干细胞的运用 Ｊ。 试剂 来源 骨髓源成体干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞的研 ＤＭＥＭ培养液、Ｌ一谷氨酰胺 Ｓｉｇｍａ Ｔｂｘ１８、ＷＩ１ Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 究虽然取得重大进展，但因其各自的局限性了临床 运用 】；心脏干细胞优越的生物学特性逐渐吸引了研究 方法： 者的兴趣 Ｊ。 获得１１．５—１２．５ ｄ孕鼠：发情期雌、雄小鼠合笼后， 随着研究的进展，发现哺乳动物心脏存在具有内 第２天早晨检查雌鼠阴道栓，阳性记为０．５ ｄ，并将雌 在再生和修复潜能的心脏干细胞；这些细胞在体内、 鼠分开单独饲 侣 。 外心脏环境下可被诱导分化为３种主要的心系细胞：心 胚胎心脏心外膜细胞培养：无菌条件下摘取１１．５—１２．５ ｄ 肌细胞、血管平滑肌细胞和血管内皮细胞，而且没有 小鼠胚胎，解剖显微镜下分离心脏，剪除静脉血管及心 伦理问题和形成畸胎瘤的风险，是目前被认为用于干 房组织；移至１％Ｇｅｌｔｉｎ铺好的６孔板或３５ ｍｍ培养 细胞治疗最佳的细胞类型［１０－１１】。胚胎心外膜细胞是最 皿中，用无菌玻片压住使其贴壁、避免漂浮；培养基为 近被发现的具有分化为心肌细胞和血管平滑肌细胞潜 无血清ＤＭＥＭ，２ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｌ一谷氨酰胺、１ ００ Ｕ，ｍＬ青、 能的心脏干细 侄 引，但其分化机制及因素尚不 链霉素；培养２４ ｈ后，移走胚胎心脏组织继续培养， 清楚。 培养基为ＤＭＥＭ，体积分数１ ０％胎牛血清，１ ００ Ｕ／ｍＬ 实验于体外建立小鼠胚胎心脏心外膜细胞培养模 青、链霉素或根据实验需要添加各种细胞因子【 引。 型，相差显微镜观察胚胎心外膜细胞生长特点，使用免 胚胎心脏心外膜细胞免疫荧光染色：磷酸缓冲液ＰＢＳ 疫荧光技术对细胞进行胚胎心外膜细胞特异性抗体 （０．０１ ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ７．２）洗３遍，冷甲醇固定３０ ｍｉｎ，体 Ｗｌ－１、Ｔｂｘｌ ８染色，以期为研究胚胎心脏心外膜细胞定 积分数１％ＴｒｉｔｏｎＸ一１ｏ０破膜，ＰＢＳ振洗３遍，１０ ｇ／Ｌ 向分化的分子机制提供新的思路。 牛血清白蛋白封闭；分别加Ｗｔ．１（抗兔１：３００）、Ｔｂｘｌ８ ７６６２ 户ｏ．Ｂｏｘ ７２０ｎ Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００４ ＷＩ，￣／Ｖ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ 曾榜．等 小鼠珏雅心啦心外睽缅匏体穸｝培养模型的建立 鳊韧盆臌一ｃ尺矾。 佳途径和能够改善心脏功能的最佳移植细胞数量和细 胞类型。③干细胞移植的临床适应证。④细胞移植后能 否产生正常的心肌电一机械耦联，形成真正的功能合胞 课题未涉及任何厂家及相关雇主或其他经济组 织直接或间接的经济或利益的赞助。 伦埋默术术跨实验中对动物的处理方法符合中华人民共和国 胚胎心外膜细胞一是最近被发现的具有分化 体。⑤干细胞移植后是否会在宿主体内长期存活、增殖 或分化仍不清楚。 科学技术部颁发的 关于善待实验动物的指导性意见》。 Ｃ．Ｋｉｔ 细胞是最早发现也是目前研究较多的心脏干 细胞。细胞表达Ｃ－Ｋｉｔ一般被认为具有心脏多项分化潜 能；分离心脏的Ｃ－Ｋｉｔ细胞，条件培养基培养后移植到大 鼠急性心肌梗死心脏中，３周后治疗组左室射血分数明 显改善 。Ｓｃａ－１ 心脏干细胞表达Ｓｃａ．１而不表达造血 为心肌细胞和血管平滑肌细胞潜能的心脏干细胞，但其分化 机制及因素尚不清楚。心外膜细胞是位于心脏表面的一 层间皮细胞组成的膜，在心脏发育过程中起着重要的作用。 Ｗｔ－１及Ｔｂｘｌ ８标记的胚胎心外膜细胞作为新发现的心脏干 细胞为心脏损伤后的自我修复提供了崭新的思路和广阔的 细胞表面因子和Ｃ－ｋｉｔ，Ｓｃａ一１ 细胞在体外虽不能自然分 化为心脏细胞，但特定条件培养后部分细胞表达心肌细 胞特异因子（Ｎｋｘ２．５、Ｔｎ Ｉ和ａ．ａｃｔｉｎ）；静脉注射的 Ｓｃａ．１ 细胞，可以定向回到缺血再灌注心脏中并分化为 心肌细胞Ｉ 。ｉｓｌｌ 基因在心脏生长发育过程中有重要作 用，且标记第二心区来源的心脏干细 。‘酬；在新生啮 齿类和人的心脏里也能检测到这群ｉｓｌｌ 细胞，且保持着 未分化状态；与新生鼠的心脏细胞共培养后，这些细胞 分化为可白发收缩的心肌样细胞；并与周围细胞形成电 机械信号联系 。 胚胎心外膜细胞是最近被发现的具有分化为心肌 细胞和血管平滑肌细胞潜能的心脏干细胞，但其分化机 制及因素尚不清楚。心外膜细胞是位于心脏表面的 一层间皮细胞组成的膜，在心脏发育过程中起着重要的 作用，缺少心外膜的小鼠死于胚胎早 ∞ 。低级动物 斑马鱼心脏损伤试验发现，心外膜细胞在心脏损伤后可 迁移入心肌层并分化冠脉血管，损伤的心肌细胞可被完 整的修复Ｉ弱训】；Ｗｔ－１及Ｔｂｘｌ ８在小鼠的心外膜前体细胞 中表达，且在心外膜层细胞中持续表达；最近发现Ｗｔ．１ 及Ｔｂｘ１８标记的胚胎心外膜细胞体内外可以分化为心肌 细胞、血管平滑肌细胞ｐ 。ＷＩ＿１及Ｔｂｘｌ８标记的胚胎心 外膜细胞作为新发现的心脏干细胞为心脏损伤后的自 我修复提供了崭新的思路和广阔的前景。明确心外膜细 胞向心肌、血管平滑肌细胞分化的机制与因素，以 提高心外膜源性心肌、血管平滑肌细胞的分化效能将加 速心脏干细胞运用于临床。 作者这次实验在体外建立了胚胎心外膜细胞的培 养模型，相差显微镜观察胚胎心外膜细胞生长特点，使 用免疫荧光技术对细胞进行胚胎心外膜细胞特异性抗 体Ｗｔ．１、Ｔｂｘｌ ８染色。实验结果显示，细胞生长增殖迅 速，几乎１００％的细胞表达胚胎心外膜细胞特异因子； 为进一步明确胚胎心外膜细胞定向分化分子机制提供 了研究基础。 考 曾彬负责实验设计、评估、完成全部实验及成 文，王艾丽负责资料收集、修改；其他作者均参与了实验或协 助实施，均经过正规培训。 ｜ｓｓＮ ２０９５—４３４４ ＣＮ ２１—１５８１／Ｒ Ｃ０ＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ 前景。 考觑文章为原创作品，数据准确，内容不涉及泄密， 无一稿两投，无抄袭，无内容剽窃，无作者署名争议，无与他 人课题以及专利技术的争执，内容真实，文责自负。 ４参考文献Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ 【１】 Ｌｕｉ ＫＯ，Ｂｕ Ｌ，Ｌｉ ＲＡ，ｅｔ ａ１．Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ｈｅａｒｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ．Ｂｉｔｒｈ Ｄｅｆｅｃｔｓ Ｒｅｓ Ｃ Ｅｍｂｒｙｏ Ｔｏｄａｙ．２０１２；９６（１） ９８．１０８． ｆ２】Ｌｕｄｗｉｇ Ｍ Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ Ｇ｜Ｌｉ Ｊ．Ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＡＴ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｐａｉｒ．Ｃａｎ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏ１．２０１２：９０（３）：２８７－２９３． 【３】 Ａｂｄｅ１ｗａｈｉｄ Ｅ，Ｓｉｍｉｎｉａｋ Ｇｕａｒｉｔａ—Ｓｏｕｚａ ＬＣ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｎｅｗ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＣＵｒＴ Ｃａｒｄｉｏｌ Ｒｅｖ．２０１１；７（３）：２０１—２１２． 【４】 Ｓ＆ｎｃｈｅｚ Ａ，Ｓｃｈｉｍｍａｎｇ Ｇａｒｃｉａ－Ｓａｎｃｈｏ Ｊ．Ｃｅｌｌ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏ１．２０１ ２： ７４１：８９．１０２． 【５】 Ｇｎｅｃｃｈｉ Ｍ，Ｄａｎｉｅｌｉ Ｃｅｒｖｉｏ Ｅ．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｖａｓｃｕｌ Ｐｈａｒｍａｃｏ１．２０１２；５７（１）： ４８—５５． ［６ ６】Ｒａｎｇａｐｐａ Ｓ，Ｍａｋｋａｒ Ｒ，Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ Ｊ．Ｒｅｖｉｅｗ ａｒｔｉｃｌｅ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｎｅｗ ｃｅｌｌ ｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０；１５（４）： ３３８－３４３． ［７】 Ｍｅｎａｓｃｈ６ Ｐ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ｃａｒｄｉａｃ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．ＢｉｏｌＡｕｊｏｕｒｄｈｕｉ．２０１２；２０６（１１：３１＿４４． 【８】Ｐａｌ ＳＮ，Ｋｏｆｉｄｉｓ Ｔ Ｎｅｗ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ．Ｅｘｐｅ￣Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｔｈｅｒ．２０１ ２；１ ０（８）：１ ０２３－１ ０３７． 【９】 Ｇｉｔｔｅｎｂｅｒｇｅｒ－ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ＡＣ，Ｗｉｎｔｅｒ ＥＭ，Ｂａｒｔｅｌｉｎｇｓ ＭＭ，ｅｔ ａ１． Ｔｈｅ ａｒｔｅｒｉａｌ ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｅｐｉｃａｒｄｉｕｍ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．２０１２；８４（１）：４１－５３． ［１ ０】Ｂａｒｉｌｅ Ｌ，Ｍｅｓｓｉｎａ Ｅ，Ｇｉａｃｏｍｅｌｌｏ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｇ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｄｉｓ．２００７；５０（１）：３１－４８． 【１ １】Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＭ，Ｒｕｓｓｅｌｌ Ｂ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌ ｌＴｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉａｃ Ｒｅｐａｉｒ． Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｎｕｒｓ．２００９；２４（２）：９３—９７． ［１２】Ｃａｉ ＣＬ，Ｍａｒｔｉｎ ＪＣ，Ｓｕｎ ｅｔ ａ１．Ａ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｌｉｎｅａｇｅ ｄｅｒｉｖｅｓ ｆｒ０ｍ Ｔｂｘｌ ８ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５４（７２００）：１ ０４—１ ０８． 【１ ３】Ｗｕ Ｘ，Ｆｅｒｒａｒａ Ｃ，Ｓｈａｐｉｒｏ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｂｍｐ７ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｎｕｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ｔｈｅ ｕｒｏｇｅｎｉｔａｌ ｓｙｓｔｅｍ ｓｕｇｇｅｓｔ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｒｅ—ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｅｔｈｒａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒ ＰａＲｅｒｎｓ ２００９；９（４）：２２４－２３０． 曾彬，等 小鼠胚胎心虢心讣膜镪匏体穸｝培养模型的建立 【１４】Ｈａｓｓａｎｅ Ｓ，Ｃｌａｉｊ Ｎ，Ｊｏｄａｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｋｄ１一ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｄａｐ￣ｔｉｏｎ ｔｏ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ． Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１１；９１（１）：２４—３２． 【１５］Ｋｉｍ Ｊ，Ｒｕｂｉｎ Ｎ，Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｆｒＯｍ ａｄｕｌｔ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｈｅａｒｔ ｏｎ ａ ｉｆｂｒｉｎ ｍａｔｒｉｘ．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ． ２０１２：７（２）：２４７—２５５． 『１６１ Ｚｈｏｕ Ｂ，Ｐｕ Ｗ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｄ ａｄｕｌｔ ｅｐｉｃａｒｄｉｕｍ ａｎｄ ｅｐｉｃａｒｄｉｕｍ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏ１．２０１２；８４３：１５５．１６８． 【１７】余德立，余资江．大鼠视网膜干细胞的增殖和多向分化［Ｊ】．中国 组织工程研究，２０１２，１６（６）：１０１５—１０１８． ［１８】于滋超，郭开今．不同年龄段大鼠脊髓源性神经干细胞的体外培 养及鉴定【Ｊ】ｌ中国组织工程研究，２０１２，１６（４５）：８５０６・８５０９． 【１９１ Ｍａｚｏ Ｍ，Ａｒａｆｉａ Ｍ，Ｐｅｌａｃｈｏ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｉｌｓ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ：ａ ｂｅｎｃｈ ｔｏ ｂｅｄｓｉｄｅ ｒｏａｄｍａｐ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔ．２０１ ２；２０１ ２：１ ７５９７９． 【２０】Ｃｈｏｉ ＳＨ，Ｊｕｎｑ Ｓ Ｋｗｏｎ ＳＭ，ｅｔ ａ１．Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｏｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｉｒ Ｊ．２０１ ２；７６（６）：１ ３０７— １３１２． 【２１】Ｄｉｄｉ６ Ｍ，Ｃｈｒｉｓｔａｌｌａ Ｐ＇Ｒｕｂａｒｔ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＰａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔＩｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ．ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｈｅａｒｔ ｒｅｐａｉｒ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１ ３： １ ２３（３）：１ ２８５．１ ２９８． 【２２】Ｈｉｎｄｌｅｙ Ｃ，Ｐｈｉｌｐｏｔｔ Ａ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｎｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２０１３；１５（１２）：１３５—１４３． ［２３】Ｔｓｕｂｏｕｃｈｉ Ｆｉｓｈｅｒ ＡＧ．Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌ ｌｃｙｃｌｅ．ＣｕｒｒＴｏｐ Ｄｅｖ Ｂｉｏ１．２０１３：１０４：２２３－２４１． 【２４】Ｍｅｄｖｅｄｅｖ ＳＰ，Ｐｏｋｕｓｈａｌｏｖ ＥＡ，Ｚａｋｉａｎ ＳＭ．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ．Ａｃｔａ Ｎａｔｕｒａｅ．２０１ ２；４（４）：２８－４６． 【２５】杨新春，易方方，蔡军，等．由胚胎干细胞分化的心肌细胞移植对心 肌梗死大鼠左心室重构及心功能的影响【Ｊ】．中华器官移植杂志， ２００７。２８（９）：５３０。５３３． ［２６】Ｅｎｓｅｎａｔ－Ｗａｓｅｒ Ｒ，ＰｅｌｌｉＣｅｒ Ａ，Ｓｉｍｏｎ Ｃ．Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ：ｈｏｗ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｃｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｉｎ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ？Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ．２００９ ；９１（４）：９７１－９７４． ［２７】Ｆｅｒｒｅｉｒａ ＬＭ，Ｍｏｓｔａｊｏ—Ｒａｄｊｉ ＭＡ．Ｈｏｗ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｒｅｄｅｆｉｎｉｎｇ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｇｅｎｅ．２０１ ３；５２０ （１）：１－６． 【２８】Ｓｉｍａｒａ Ｐ．Ｍｏｔｌ ＪＡ，Ｋａｕｆｍａｎ ＤＳ．Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｒａｎｓｌ Ｒｅｓ．２０１ ３；１ ６１（４）：２８４－２９２． 【２９】Ｄａｗｎ Ｂ，Ｓｔｅｉｎ ＡＢ，Ｕｒｂａｎｅｋ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒｌｙ ｔｒａｖｅｒｓｅ ｔｈｅ ｖｅｓｓｅｌ ｂａｒｒｉｅｒ， ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｉｎｆａｒｃｔｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ，ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ ＮａｔｌＡｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００５；１０２（１０）：３７６６．３７７１． ７６６６ ｗｗｗ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ 【３０】Ｏｈ Ｈ，Ｂｒａｓｆｕｔｅ ＳＢ，Ｇａｌｌａｒｄｏ ＴＤ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｄｉａｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｅｃｌｌｓ ｆｒ０ｍ ａｄｕｌｔ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ：ｈｏｍｉｎｇ，ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｆｕｓｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００３； １００（２１、：１２３１３－１２３１８． 【３１】Ｃａｉ ＣＬ，Ｌｉａｎｇ Ｘ，Ｓｈｉ Ｙ ｅｔ ａ１．Ｉｓｌｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ｃａｒｄｉａｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｓ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ａ ｍａｊｏｒｉｔｙ ｏｆ ｅｃｌｌｓ ｔｏ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ．Ｄｅｖ Ｃｅｌ１． ２００３：５（６）：８７７—８８９． 【３２］Ｋｌａｕｓ Ａ，ＭＱＩｌｅｒ Ｍ，Ｓｃｈｕｌｚ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｗｎｔ／ｐ－ｅｃｔｅｎｉｎ ａｎｄ Ｂｍｐ ｓｉｇｎａｌｓ ｃｏｎｔｒｏＩ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｓｅｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ ｌＡｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１２；１０９（２７）： １０９２１．１０９２６． ［３３】Ｐａｎｄｕｒ Ｓｉｒｂｕ ＩＯ，Ｋ０ｈｌ ＳＪ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｌｅｔ１－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃａｒｄｉａｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｅｃｉｌｓ：ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｃｒｏｓｓ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｄｅｖ Ｇｅｎｅｓ Ｅｖｏ１．２０１ ３；２２３（１－２）：１ １ ７－１ ２９． 【３４】Ｍｅｓｓｉｎａ Ｅ，Ｄｅ Ａｎｇｅｌｉｓ Ｌ，Ｆｒａｔｉ Ｇ ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｒ０ｍ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｈｅａｒｔ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ．２００４；９５（９）：９１ １—９２１． 【３５］Ｐｅｒｅｚ－Ｐｏｍａｒｅｓ ＪＭ，ｄｅ ｌａ Ｐｏｍｐａ ＪＬ．Ｓ￣ｎａｌｉｎｇ ｄｕｒｉｎｇ ｅｐｉｃａｒｄｉｕｍ ａｎｄ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｖｅｓｓｅｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ． ２０１１：１０９（１２）：１４２９－１４４２． ［３６】Ｈｉｎｋｅｌ Ｒ，Ｔｒｅｎｋｗａｌｄｅｒ Ｋｕｐａｔ Ｃ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｙｍｏｓｉｎ ｐ４一ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ａａｎ Ｎ ＹＡｃａｄ Ｓｃｉ．２０１２：１２６９：１Ｏ２—１０９： 【３７】Ｎａｋａｎｏ Ｈ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｅ，ＨｏｓｈＵｉｍａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｄｉａｃ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｊｎｆｌｏｗ ｔｒａｃｔ．Ｊ ＭｏＩ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｄｉｏ１． ２０１ １；５０（２）：３３７—３４５． 【３８】Ｌｅｐｉｌｉｎａ Ａ，Ｃｏｏｎ ＡＮ，Ｋｉｋｕｃｈｉ Ｋ。ｅｔ ａ１．Ａ ｄｙｎａｍｉｃ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｐｐｏ￣ｓ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｅｃｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｕｒｉｇｎ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｈｅａｒｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｅｌ１．２００６．１２７（３）：６０７—６１９． 【３９】Ｌｉｍａｎａ Ｆ，Ｃａｐｏｇｒｏｓｓｉ ＭＣ，Ｇｅｒｍａｎｉ Ａ．Ｔｈｅ ｅｐｉｃａｒｄｉｕｍ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｐａｉｒ：ｆｒ０ｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｃｅｌＩ ｖｉｅｗ．ＰｈａｒｍａｃｏＩ Ｔｈｅｒ． ２０１１：１２９（１）：８２－９６． 【４０】Ｋｉｍ Ｊ，Ｗｕ Ｑ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．ＰＤＧＦ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｈｅａ￣ｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１ Ｏ：１ ０７（４０）： １７２０６－１７２１０． 【４１】Ｇｏｎｚ￣ｌｅｚ—Ｒｏｓａ ＪＭ，Ｍａｒｔｉｎ、，，Ｐｅｒａｌｔａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｓｃａｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｈｅａｒｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｃｒｙｏｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．２０１１：１３８（９）：１６６３－１６７４． Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １２００，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００４ ｗｗｗ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ
