第１２卷第３期 ２０１０年９月 闽西职业技术学院学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｎｘｉ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｅａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｖｏ１．１２ Ｎｏ．３ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１０ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－－４８２３．２０１０．０３．０２６ 冬青叶叶绿素提取工艺研究 董雁，章汝平，张夏红，姜秀榕，刘兰珍 （龙岩学院化学与材料学院，福建龙岩３６４０００） 摘要：以冬青叶片叶绿素提取量为衡量指标。通过单因素实验确定提取剂、提取剂用量、提取温度以及提取时间， 再利用正交实验，优化提取的工艺条件。结果表明，以丙酮、乙醇（体积比２：１）混合液为提取剂，提取时间２４ ｈ，提取剂 用量２０ ｍＬ，提取温度６ｏ℃是提取冬青叶片叶绿素的最佳工艺条件。 关键词：冬青叶；叶绿素；提取工艺 中图分类号：ＴＱ６１１．５—３３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－４８２３（２０１０）０３－０１０３—０４ 冬青为常绿乔木，冬青叶的干燥产品为苦丁茶， １．２实验方法 其中含原儿茶酸（Ｃ Ｈ６０，）及原儿茶醛（Ｃ Ｈ６０３）等生物 活性物质。对金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌有抑制作 用，可作为呼吸道感染、急性胃肠炎等疾病的辅助治 疗用品ｌａ－２ｌ。叶绿素是一种天然、安全、无毒并具有一 定生理功能的脂溶性天然色素［３１，具有诸如抗致（突） 变、促进创伤愈合、脱臭和改善便秘、降解胆固醇等 １．２．１叶绿素提取方法 选取新鲜的冬青叶片，洗净剪碎，过筛（２０目）， 准确称量１．００００ｇ后。置于锥形瓶中。向瓶中加入提 取剂，用分光光度计测定叶绿素的含量。为消除实验 误差，重复３次，取平均值。ｆ １．２．２叶绿素的测定方法 取待测液，于６６３ ｎｍ与６４５ ｎｍ处测定吸光度 方面的作用 。从冬青叶中提取的纯天然叶绿素，能 够广泛应用于医药、食品、化妆品等行业。本文的目 的在于优化提取冬青叶中叶绿素的最佳工艺条件， 为相关产品的进一步开发提供理论依据。 １材料与方法 值，按照Ａｍｏｎ公式计算叶绿素ａ和叶绿素ｂ及叶 绿素的含量网。 叶绿素ａ提取量（ｍｇ ）＝［１２．７Ａ６６３—２．６９Ａ６４５］Ｗ （１０００・Ｗ） １．１实验材料 原料：新鲜冬青叶片。 提取剂：提取剂ａ为丙酮，提取剂ｂ为乙醇，提 取剂ｅ为体积比为３：１的丙酮与乙醇，提取剂ｄ为 体积比为２：１的丙酮与乙醇．提取剂ｅ为体积比为 １：ｌ的丙酮与乙醇。提取剂ｆ为体积比为１：２的丙酮 叶绿素ｂ提取量（ｍｇ／ｇ）＝【２２．９Ａ６４５－４．６８Ａ￣］Ｖ／ （１０００－Ｗ） 叶绿素总提取量（ｍｇ ）＝叶绿素ａ提取量＋叶绿 素ｂ提取量 式中：Ａ６６广波长６６３ ｎｍ处的吸光度 Ａ６ 厂一波长６４５ ｎｍ处的吸光度 与乙醇，提取剂ｇ为体积比为１：３的丙酮与乙醇。丙 Ｖ——提取液的体积（ｍＬ） Ｗ一２结果与讨论 酮和乙醇均为分析纯。 主要仪器：ｗＦＪ２０００型可见分光光度计， ＢＳ１２４Ｓ电子天平，ＨＨ－４型数显恒温水浴锅．８００一Ｂ 离心机。 【收稿日期］２０１０－０５－１２ 【基金项目】龙岩学院２００９年大学生创新实验资助项目。 叶片质量（ ２．１各单因素实验 ２．１．１提取剂的选择 ［作者简介］董雁（１９８２一），女，福建长汀人，助教，硕士，主要从事化工工艺方面的研究。 ｌｏ３ 在其他条件不变的情况下，分别选择乙醇、丙酮 及其不同体积比的混合液进行叶绿素提取研究。实 表１提取剂对提取效果的影响 验结果如表１所示。 由表１可知，在冬青叶片叶绿素的提取中，不同 提取剂的叶绿素提取量有较大差别。以提取剂ｄ的 叶绿素提取量最高。提取剂ｅ次之。因此，在以下的 实验中．选取丙酮、乙醇体积比为２：１的混合溶剂作 为提取剂。 ２．１．２提取时间的选择 叶绿素质量分数，（ｍｇ幢） 提取剂用量／ｍｌ 图２提取剂用量对提取剂中叶绿素含量的影响 由图２可见．叶绿素ａ．ｂ的提取量随着提取剂 用量的增加而呈上升的趋势，提取剂用量达到２０ｍＬ 时。提取剂中叶绿素提取量达到最大值。当提取剂的 提取时ｌ司／ｌｌ 用量超过２０ ｍＬ。叶绿素提取量逐渐下降。这可能与 提取剂用量过大，导致提取不完全有关［９－Ⅻ。 ２．１．４提取温度的选择 图１提取时间对提取剂中叶绿素含量的影响 由图１可知，冬青叶片叶的叶绿素ａ、叶绿素ｂ 提取量及叶绿素总提取量均随着提取时间的延长而 由图３可知。提取温度对叶绿素的提取有明显 逐渐增加，并在２４ｈ时达到最大值。这是由于提取开 始后，叶绿素由叶片细胞内向外扩散，提取剂中的叶 绿素含量不断增加，当提取时间达到２４ ｈ时，达到 溶解——扩散平衡。提取时间超过２４ ｈ后，伴随着 影响。当温度从２０℃升高到５Ｏ ｃ《＝时，提取剂中的叶 绿素含量增多，并在５０℃时提取量达到最大值。当 温度继续上升。叶绿素的提取量则随温度上升而下 降。这与叶绿素在高温下不稳定、易分解有关，当提 取温度过高时，提取剂中叶绿素的提取量降低。 ２．２冬青叶片叶绿素提取的最佳工艺条件 提取时间的延长，叶绿素不断分解，导致提取剂中总 叶绿素含量下降嘲。由此可知，冬青叶片叶叶绿素的 提取时间以２４ ｈ为宜。 ２．１．３提取剂用量的选择 １０４ 为了确定冬青叶片叶绿素提取的最佳工艺条 件，依据本文２．１．２—２．１．４单因素实验结果，选择提取 叶绿素质量分数，（ｍｇ，ｇ） 温度（ｃ）＞提取时间（Ａ）。从平均值上看，因素Ａ、因素 Ｂ均以第２水平为最好，因素Ｃ以第３水平为最好， 最优组合为Ａ：Ｂ２Ｃ，，即提取液ｄ（丙酮：乙醇体积比为 ２：１的混合液），提取时间为２４ ｈ，提取剂用量为２Ｏ ｍＬ，提取温度为６０℃的提取效果最好。 正交试验得到的结果与单因素试验得到的结果 有些不同，以正交试验的结果作为最佳条件。 ２结论 （１）在冬青叶片叶绿素提取实验中，以丙酮与乙 醇的体积比为２：１的提取液的叶绿素提取量最高， 丙酮与乙醇体积比为１：１的次之。提取效果最差的 溶剂为丙酮。 提取温度，℃ （２）本文在冬青叶片叶绿素提取工艺条件研究 中，在提取时间、提取液用量及提取温度几个主要的 ３提取温度对提取剂中叶绿素含量的影响 时间、提取剂用量及提取温度设计Ｌ９（３３）ｉＦ交试验， 选取的３个水平，如表２所示。正交实验结果如 表３所示。 因素进行单因素实验的基础上。采用正交实验的方 法优化叶绿素提取的工艺条件。实验结果表明，提取 时间、提取剂用量以及提取的温度都是叶绿素提取 工艺中影响显著的因素，主次关系依次为提取剂用 量＞温度＞提取时间。提取的最佳条件是提取液为丙 酮：乙醇体积比２：１的混合液，提取时间为２４ ｈ，提取 剂用量为２０ ｍＬ，提取温度为６０℃。 由表３按极差的大小决定因素的主次分析可 知，提取时间、提取剂用量、提取温度对冬青叶叶绿 素提取的影响都达到了极显著水平。影响冬青叶叶 绿素提取诸因素的主次关系依次为提取剂用量（Ｂ）＞ 表２正交试验因素水平表 １０５ 参考文献： ［６］吴荣金，林泽浩．凤眼莲叶叶绿素的提取及其性质的稳定 性【Ｊ】．仪器仪表及分析检测，２００７（１）：３２—３４． 【７】Ａｒｎｏｎ ＤＬ Ｃｏｐｐｅｒ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｅｈｌｏｉｏｐｌａｓｔｓｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｏｘｉｄａｓｅ ｉｎ Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９４９，２４：１－５． ［Ｉ】梁月荣，徐月荣．苦丁茶化学成分研究【Ｊ】．浙江农业大学 学报，１９９２，１８（２）：４１—４４． ［２］肖文军，杨伟丽．苦丁茶鲜叶加工技术研究［Ｊ］．湖南农业 大学学报，２００１，２６（４）：７８—２８１． ［３］黄持都，胡小松．叶绿素研究进展【Ｊ］．中国食品添加剂， ２００７（３）：１１４－１１８． ［４］王敏，刘邻渭．叶绿素及衍生物研究进展与护绿工艺分析 ［８贾长英，８］唐丽华，张晓娟，等．青草叶绿素提取工艺的研究 ［Ｊ】．杭州化工，２００８，３８（２）：１６—１７． ［９】谌素华，王维，蔡清．绿藻石莼叶绿素提取工艺的研究【Ｊ］． 食品科技，２００８（２）：１７２—１７５． ［Ｊ］．郑州轻工业学院学报：自然科学版，２００１，１６（１）：６３— ６７． ［１Ｏ】刘玲玲．仙人掌叶绿素的提取及叶绿素铜钠盐的制备工 艺研究【Ｊ］．食品工业科技，２００９（６）：２４０—２４２． 责任编辑：潘伟彬 ［５］李婷婷，舒红英．苦瓜叶绿素的提取和稳定性的研究【Ｊ］． 江西化工，２００８，３：６５—６８． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ｆｒｏｍ ｈｏｌｌｙ ｌｅａｖｅｓ ＤＯＮＧ ｙａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｒｕ—ｐｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａ—ｈｏｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｘｉｕ—ｔｏｎｇ，ＬＩＵ【丑ｎ—ｚｈｅｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｘｍｇｙａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｌｏｎｇｙａｎ，Ｆｕｊｉａｎ，３６４０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｏｌｌｙ ｌｅａｖｅｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｏｌｖｅｎｔｓ， ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ， ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ． ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ１．Ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｇｕｉｄｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｈｅ ｒｅｓｕｌＴｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｌｉｑｕｉｄ ｍｉｘｅｄ ２ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ａｃｅｔｏｎｅ ｗｉｔｈ １ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓｏｌｖｅｎｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ１． Ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｗａｓ ２４ ｈｏｕｒｓ．ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｖｏｌｕｍｅ ｗａｓ ２０ ｍｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ６０￣Ｃ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｏｌｌｙ ｌｅａｖｅｓ；ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ （上接第６８页） Ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｌｍｍａｋｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｔ０ ｍｏｄｅｒｎ Ｂｒｉｔｉｓｈ ａｎｄ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｆｉｃｔｉｏｎ ＣＨＥＮ Ｗｅｉ——ｑｉａｎｇ （Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｌａｎｇｕａｇｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｌｉｍｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｕａｎｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ，３６２０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｉｌｍｍａｋｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ｆｉｃｔｉｏｎａｌ ｗｒｉｔｉｎｇ ｓｈａｒｅ ａ ｌｏｔ ｏｆ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ． Ｓｏｍｅ ｍｏｄｅｍ Ｂｒｉｔｉｓｈ ａｎｄ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｗｒｉｔｅｒｓ ｈａｖｅ ｂｅｎｅｆｉｔｅｄ ｍｕｃｈ ｆｒｏｍ ｆｉｌｍｍａｋｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ａｒｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｈｅｍ ｉｎ ｔｈｅｉｒ ｆｉｃｔｉｏｎ ｗｒｉｔｉｎｇ．Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｄｉｓｃｕｓｓｅｓ ｆｉｌｍｍａｋｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｓｕｃｈ ａｓ ｃｒｏｓｓｃｕｔｔｉｎｇ，ｓｌｏｗ ｍｏｔｉｏｎ，ｃｌｏｓｅ－ｕｐ ａｎｄ ｍｏｎｔａｇｅ，ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｍｏｄｅｍ ｆｉｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｉｆｌｍｍａｋｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；ｆｉｃｔｉｏｎ ｗｒｉｔｉｎｇ；ｍｏｄｅｍ Ｂｒｉｔｉｓｈ ａｎｄ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｆｉｃｔｉｏｎ
