维普资讯 http://www.cqvip.com ｌｌ９２ 临床肺科杂志２００７年１１月 第１２卷第１ １期 大环内酯类抗生素抗分枝杆菌作用的研究 李国利 张灵霞 【摘要】 目的研究大环内酯类抗生素抗分枝杆菌的作用。方法分别测定６种大环内酯类抗生素对２０种分枝杆菌（包 不同药物显示不同的试管内抗菌作用谱。结论 括结核、牛分枝杆菌和１８种非结核分枝杆菌）的试管内最低抑菌浓度。结果大环内酯类抗生素足ｌ临床非结核分枝杆菌病治疗町选择的药物。 【关键词】 大环内酯类抗生素；分枝杆菌；最低抑菌浓度 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍａｃｒｏｌｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｇａｉｎｓｔ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ Ｌ／Ｇｕｏｌｉ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎｇｘｉａ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ— ｓｔｉｔｕｔｅ，Ｔｈｅ ２ｎｄ Ａｔｔａｃｈｍｅｍ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００９１，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｉｘ ｍａｃｒｏｌｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｇａｉｎｓｔ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆ ｓｉｘ ｍａｃｒｏｌｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｇａｉｎｓｔ ２０ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｖａｒｉｏｕｓ ｄｒｕｇｓ ｓｈｏｗｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｍａｅｒｏｌｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｒｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｄｍｇｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｎｏｎｔｕｂｅｒ－ ｃｕｌｏｓｉｓ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｌ ｄｉａｓｅａｓｅｓ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ｍａｃｒｏｌｉｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ；ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ；ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ 分枝杆菌菌种繁多，分枝杆菌属内除结核分枝杆菌复合 群和麻风分枝杆菌外统称为非结核分枝杆菌（ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ，ＮＴＭ），临床可见的致病性ＮＴＭ主要包括堪萨 斯、鸟、胞内、猿猴、蟾蜍、海、瘰疬、苏加、施氏、偶然、龟、脓肿 分枝杆菌，机会致病性ＮＴＭ主要包括土地、不产色、次要、戈 登、亚洲、耻垢和：革分枝杆菌。 近年来，国内外ＮＴＭ感染及发病率有所升高，我国全国 结核病流行病学抽样调查（以下简称流调）结果亦表明ｕ ， ２０００年第四次流调ＮＴＭ分离株占分枝杆菌分离株的 １１．１％，明显高于１９７９年第一次流调的４．３％，１９８４／１９８５年 第二次流调的４．２％和１９９０年第三次流调的４．９％。临床上 遇到ＮＴＭ病的机率正在增加。 ＮＴＭ与结核分枝杆菌对药物敏感性不同，结核分枝杆菌 除非对抗结核药物产生抗药性，通常对抗结核药物敏感，而许 多ＮＴＭ对抗结核药物不同程度天然抗药，临床对ＮＴＭ病的 ＡＴＭ），益桥（湖南）制药有限公司，０．２５ 安瓶冻干粉，批号 ２００５０７１３；克拉霉素（Ｃｌａｒｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，ＣＴＭ），杭州中美华东制药 有限公司，０．２５ ｓ／片，批号０５０８０１；麦迪霉素（Ｍｉｄｅｃａｍｙｃｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ，ＭＤＭ），北京曙光药业有限责任公司，０．１ ｓ／片，批号 ０５０７０２；乙酰螺旋霉素（Ａｃｅｔｙｌｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ ｔａｂｌｅｔｓ，ＡＳＭ），上海信 谊百路达药业有限公司，０．１ ｓ／片，批号０４０３０２；乳糖酸红霉 素（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ ｆｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＥＴＭ），大连美罗大 药厂，０．２５ ｓ／瓶冻干粉，批号２００５０６１４。 三、试剂 ＤｉｆｃｏＴＭ Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９ Ｂｒｏｔｈ，干粉，ＢＤ公司产品，批号 Ｌｏｔ ６０５２５８０。 四、培养基 不含药及含药改良罗氏斜面培养基，其配方和制备方法 参照“结核病诊断实验室检验规程” Ｊ。按试剂说明配制 Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９ Ｂｒｏｔｈ液体培养基，并按１０％比例加入ＡＤＣ 促生长剂，同时制备不含药及含药培养基。ＡＤＣ促生长剂： ５％牛血清白蛋白Ｖ，２％葡萄糖，０．００３％过氧化氢酶，０．８５％ 治疗往往缺乏可选择药物，使ＮＴＭ病趋于长期、反复，而难以 治愈。由于以往对ＮＴＭ病的认识不足，许多目前临床常用抗 生素缺乏抗ＮＴＭ作用的研究。随着对ＮＴＭ的不断认识，研 究临床常用抗生素抗ＮＴＭ作用，对现有常用抗生素药的开发 利用，对临床ＮＴＭ病治疗均有重要意义。大环内酯类抗生素 通过与细菌核糖体５０Ｓ亚基结合，抑制蛋白质合成而显示抗 菌作用，是临床常用的一类抗生素，我们分别测定６种大环内 酯类抗生素对２０种分枝杆菌的试管内最低抑菌浓度（ＭＩＣ）， 研究大环内酯类抗生素抗分枝杆菌的作用。 材料与方法 一ＮａＣ１，０．２２ ｕｍ滤膜过滤除菌备用。各种药物在改良罗氏斜 面及Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９ Ｂｒｏｔｈ液体含药培养基中的终浓度均为 ０．５、１、５、１０、５０和１００ ｍｅ，／Ｌ。 五、药物抗分枝杆菌ＭＩＣ检测 挑取适量在改良罗氏斜面培养基上传代生长良好的分枝 杆菌菌株，慢生长分枝杆菌菌龄３～４周，快生长分枝杆菌菌 龄５～７ ｄ，用磨菌器研磨制备菌悬液，用ＭａｃＦａｒｌａｎｄ Ｎｏ．１比 浊管确定浓度为１ ｓ／Ｌ，１０倍稀释至１０ Ｌ，取０．１ｍ１分别 接种于含药和不含药培养基，即每管接种菌量为１０～ｍｇ，置 、菌株 ３７￣Ｃ培养箱培养，慢生长分枝杆菌４周观察结果，快生长分枝 杆菌７ ｄ观察结果。不含药改良罗氏培养基细菌生长旺盛， 含药培养基菌落１＋以上判定为耐药，无细菌生长为敏感；不 试验所用２０种分枝杆菌标准菌株见表１，来源于中国药 品生物制品检定所。 二、药物 含药Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９ Ｂｒｏｔｈ液体含药培养基中细菌生长良 好，含药培养基内细菌成膜或沉淀或浑浊生长判定为耐药，无 细菌生长为敏感。 结果与讨论 一罗红霉素（Ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ ｃａｐｓｕｌｅｓ，ＲＴＭ），珠海联邦制药 股份有限公司中山分公司，０．１５ ｓ／胶囊，批号０５１２３２０２；注射 用盐酸阿奇霉素（Ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｆｏｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ， 作者单位：１０００９１北京总医院第二附属医院结核病研究所 、药物抗分枝杆菌试管内ＭＩＣ结果见表１。 维普资讯 http://www.cqvip.com 临床肺科杂志２００７年１１月 第１２卷第１１期 １１９３ ＡＴＣＣ美国标准菌种收藏所；ＣＭＣＣ（Ｂ）中国医学微生物菌种保藏管理中心 二、在不同培养基中，由于成分、制作、测定过程中药物变 化程度不同出现不同的ＭＩＣ值。表中结果表明所测定药物 在改良罗氏斜面培养基上ＭＩＣ值通常比Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９ Ｂｒｏｔｈ液体培养基高２～１０倍，这是由于改良罗氏斜面培养基 ＭＤＭ、ＡＳＭ和ＥＴＭ均耐药；鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、蟾蜍 分枝杆菌、胃分枝杆菌、施氏分枝杆菌、次要分枝杆菌、堪萨斯 分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈凳分枝杆菌、苏加分枝杆菌和龟 分枝杆菌对ＲＴＭ、ＡＴＭ、ＣＴＭ和ＥＴＭ敏感，对ＭＤＭ和ＡＳＭ 耐药；不产色分枝杆菌、脓肿分枝杆菌对ＲＴＭ、ＡＴＭ和ＣＬＡ 敏感，对ＭＤＭ、ＡＳＭ和ＥＴＭ耐药；海鱼分枝杆菌对ＣＴＭ敏 感，对ＲＴＭ、ＡＴＭ、ＭＤＭ、ＡＳＭ和ＥＴＭ耐药；偶然分枝杆菌ＫＭ 、制备过程中蛋白质对药物的吸附作用，以及药物在培养基灭 菌前加入，灭菌过程中对药物热耗使其部分失活所致，因此改 良罗氏斜面培养基测定的ＭＩＣ值可能并非真正的药物浓度。 理想的ＭＩＣ测定采用液体培养基方法，药物在培养基灭菌后 加入，药物吸附、降解少，加入的浓度可认作是实际作用浓 度，测定的ＭＩＣ可与Ｃｍａｘ和其他药代动力学参数比较。 ＡＭＫ、ＮＥＴＭ、ＩＳＭ、ＥＴＭ和ＧＭ敏感，对ＳＭ和ＴＭ耐药；耻 垢和草分枝杆菌对ＳＭ、ＫＭ、ＡＭＫ、ＮＥＴＭ、ＩＳＭ、ＥＴＭ、ＴＭ和 ＧＭ均敏感。不同药物显示了不同的试管内抗菌作用谱，为 临床ＮＴＭ病的治疗选择用药提供了一定参考依据。 参考文献 １ 全国结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国结核病流行病学 抽样调查办公室．２０００年全国结核病流行病学抽样调查报告．中 国防痨杂志，２００２，２４（２）：１０２． ２ 中国防痨协会基础专业委员会．结核病诊断实验室检验规程．北 目前，国内测定分枝杆菌药物敏感性常规方法采用改良 罗氏斜面培养基，试验中我们同时采用改良罗氏斜面和Ｍｉｄ— ｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９ Ｂｒｏｔｈ液体培养基，主要目的是想了解药物在改 良罗氏斜面培养基制备过程中的损耗，为今后采用该培养基 药物敏感性测定提供参考依据。 三、体外药物ＭＩＣ测定是判断细菌对药物敏感性，即药 物对细菌作用的重要指标 。其判定标准须参照药物在体 内的药代动力学参数，主要是最大血药峰浓度（Ｃ…）。在临 床药物常规用量时，如果分枝杆菌对药物通常达到的Ｃｍａｘ 抗药则被认为耐药，如果受到抑制则被认为敏感。据文献 ［４，５］报导常规用量ＲＴＭ、ＡＴＭ、ＣＴＭ、ＭＤＭ、ＡＳＭ和ＥＴＭ的 Ｃ 分别为６．６～７．９ ｍｇ／Ｌ（平均７．２５ ｍｇ／Ｌ），２．０３～５．２３ ｍｇ／Ｌ（平均３．５８ ｍｇ／Ｌ），２．７～２．９ ｍｇ／Ｌ（平均２．８ ｍｇ／Ｌ），１ ｍｇ／Ｌ，１ ｍｇ／Ｌ和２．３～６．８ ｍｇ／Ｌ（平均４．５５ ｍｇ／Ｌ）。参照药 京：中国教育出版社，２００６，４６—５１． ３ Ｈｅｉｆｅｔｓ ＬＢ．Ｄｒｕｇ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｌｏｎｄｏｎ：ＣＲＣ ｐｒｅｓｓ，１９９１，２—３． ４国家药典委员会．中华人民共和国药典临床用药须知（２０００年版 二部）．北京：化学工业出版社，２００１，６５１—６６１． ５胡文铎，崔乃杰，高仲阳．国家基本药物及新特药临床指南．天 津：天津科技翻译出版社，１９９６：２６—３２． Ｉ收稿日期：２００６—０４—１６ Ｊ 物Ｃｍａｘ值分析本试验，结果表明结核分枝杆菌、牛分枝杆 菌、猿猴分枝杆菌、偶然分枝杆菌和对ＲＴＭ、ＡＴＭ和ＣＴＭ、
