配方 将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用30%聚丙烯酰胺(100ml) Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。 10%SDS 称取100gSDS固体,溶于1000mlddH2O中 称取181.71gTris固体,溶于1L水中,用Tris缓冲液(1.5M,PH8.8) HCl调PH值至8.8 称取121.14gTris固体,溶于1L水中,用Tris缓冲液(1.0M,PH6.8) HCl调PH值至6.8 10%过硫酸铵 1g过硫酸铵加水至10ml 5%脱脂牛奶 脱脂奶粉,1×TBST 一抗稀释液 1%BSA、0.05%NaN3、TBST 二抗(mouse、Rabbit) 使用前按适当比例用5%脱脂牛奶配制 200Mm Tris-HCl (PH6.8) 2ml 8%SDS 0.8g Western4×SDSloading buffer(10ml) 0.4%溴酚蓝 0.04g 相关试剂 4%甘油 4ml 加1M DTT到其终浓度为0.4M Tris 37.75g 甘氨酸(Glycine) 235g 5×Running buffer(2.5L) 10%SDS 62.5ml 使用前用ddH2O稀释成1×Running buffer Tris 37.75g 甘氨酸(Glycine) 235g 5× Transfer buffer(2.5L) 使用前用ddH2O和无水甲醇按1:1稀释成1×Transfer buffer ddH2O 73ml 10%SDS 20ml Strip buffer(100ml) 1M Tris-HCl (PH6.8) 6.25ml β-Me 0.69ml 10×TBST(2.5L) Tris 60.57g NaCl 219.15g 调PH到8.0 DMEM 500ml 胎牛血清(FBS) 50ml P/S 5.5ml Tris-HCl (PH8.0) 100mM KCl 500mM DTT 5mM EDTA 1 mM 名称 细胞培养10%FBS 相关试剂 乙酰化体外反应相5× HAT buffer 关试剂 Tris-HCl (PH8.0) 125mM NaCl 685mM 5× HDAT buffer KCl 13.5mM MgCl2 5 mM Kinase Tris-HCl (PH7.5) 100ul assay 5×Kinase assay buffer(1ml) MgCl2(1M) 50ul 相关试剂 ddH2O 850ul 考马斯亮蓝G250 将0.25gG250溶于90ml甲醇和水(1:1,v/v)与10ml冰醋酸中 40%无水甲醇 10%无水乙酸 50%蒸馏水 Na2HPO4·12H2O 2.902g/L NaH2PO4·2H2O 0.335 g/L NaCl 8 g/L KCl 0.20 g/L 调PH到7.4 Hepes(PH 7.4) 50ml NaCl(5M) 30ml Glycerol 100ml Triton-100 10ml MgCl2(1M) 1.5ml EGTA(0.1M) 10ml NaF(1M) 100ml Na3VO4(1M) 1ml ddH2O 补至1L Before use add DTT((1M)、Aprotinin(2mg/ml)、Pepstetin(2mg/ml)、Leupeptin(5mg/ml),按1:1000的比例。 蛋白胨 16g/L 酵母浸膏 10g/L NaCl 5 g/L 每1L 2YT液体培养基中加入12g琼脂粉 蛋白胶考染脱色剂 PBS 其它 Lysis Buffer(1L) 液体 2YT 培养基 固体 每0.5克干粉中加入10ml蒸馏水溶解后,氨苄抗生素储液(50mg/ml) 用0.22µm孔径的滤膜过滤除菌,分装成1ml的小份于-20℃冻存。