中国食物与营养２０１４，２０（８）：１３—１７ＦｏｏｄａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎｉｎＣｈｉｎａ实时荧光定量ＰＣＲ技术在食源性致病菌检测中的应用李敏，綦国红（中国药科大学药学院，南京２１０００９）摘要：实时荧光定量ＰＣＲ技术作为一种高效的微生物定量检测法，在食品工业中具有广泛的应用前景。本文综述了实时荧光定量ＰＣＲ技术检测原理，及其在食源性致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌０１５７：Ｈ７、沙门氏菌和副溶血性弧菌检测中的应用。关键词：实时荧光定量ＰＣＲ－ｔ支Ｙ．－；食源性致病菌检测；微生物检测；定量检测近年来，由食源性致病菌引起的食物中毒事件居高不下。传统的检测方法主要有平板培养显色法、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）、常规聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法。１。。上述方法虽然具有特异性强、灵敏度高的优点，但无法进行实时测定、不利于致病菌定量测定。实时荧光定量ＰＣＲ技术改进了常规聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法，实现了对致病菌的动态定量检测。１２实时荧光定量ＰＣＲ技术在食源性致病菌检测中的应用目前，实时荧光定量ＰＣＲ技术已初步应用到金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、大肠杆菌０１５７：Ｈ７（Ｅｓｃｈｅｎｃｈｉａｃｏｌｉ０１５７：Ｈ７）、沙门氏菌（Ｓａｈｎｏｎｅｌｌａ）、单增李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、副溶血性弧菌（ｐＴｂｄｏ实时荧光定量ＰＣＲ技术概述实时荧光定量ＰＣＲ技术基于荧光共振能量转移原ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、志贺氏菌（跏咖耽）等食源性致病菌的检测中。２．１对金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌可产生肠毒素导致食物中毒。传统理（］ｅｌｕｏｒｅｓｅｎｅｅＲｅｓｏｎａｎｃｅＥｎｅｒｇｙＴｒａｎｓｆｏｒ，ＦＲＥＴ），通过将荧光基团加入到ＰＣＲ反应体系，实时检测ＰＣＲ指数扩增期问的荧光信号强度变化。每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时经历的循环次数称为ｃｔ值（Ｃｙｃｌｅｔｈｒｅｓｈｏｌｄ），以其拷贝数的对数作为横坐标，ｃｔ值作为纵坐标建立标准曲线对未知模板定量分析，据此实现目的致病菌的检测。２’…。实时荧光定量ＰＣＲ技术根据检测荧光信号的不同，主要分为双链ＤＮＡ特异性荧光染料和特异性荧光标记探针。染料法利用染料嵌入ＤＮＡ双链产生荧光信号指示扩增产物水平，适用于非特异性的定量ＰＣＲ检测；探针法则利用与靶序列特异性杂交的探针指示扩增产物水平，适用于检测特异性要求较高、扩增序列专一的体的Ｂａｉｒｄ—Ｐａｒｋｅｒ平板和血平板结合法耗时长，灵敏度低，易产生假阳性结果。目前主要以金黄色葡萄球菌的肠毒素、耐热核酸酶基因作为靶基因，建立实时荧光定量ＰＣＲ法。葛小萍等。５１以ＳＥＡ—ＳＥＥ型肠毒素基因序列设计引物，从４６株金黄色葡萄球菌中检测出２２株携带肠毒素基因，阳性率达４７．８３％，ＳＥＡ、ＳＥＢ的检出率分别为３１．８２％和２７．２７％，可应用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型检测中。唐吉思等两１针对肠毒素Ａ基因建立了荧光定量ＰＣＲ检测法，最低可检测出４９．５ｆｇ／ｐ。Ｌ（１６．５拷贝）的阳性质粒，具有较高的特异性一与常见的产ＳＥＢ的Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、产ＳＥＣ的Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、无乳链球菌、大肠杆菌、嗜热链球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌ＤＨ５系”及ＪＭｌ０９均无交叉反应。邵彪等ｏ７。选取ＦｅｔｎＢ基因设计基金项目：国家自然科学基金青年项目（项目编号：３０７００６２７）；江苏省级大学生创新创业训练计划项目（项目编号：Ｊ１０３０８３０）。作者简介：李敏（１９９２），女，在读本科生，食品质量与安全专业。通讯作者：綦国红（１９７２），女，博士，副教授，硕士生导师，从事食品质量与安全研究。万方数据１４中国食物与营养因，建立实时荧光定量ＰＣＲ法。第２０卷引物和ＴａｑＭａｎ探针，构建的重组质粒作为阳性对照模板，检测灵敏度为６０拷贝／反应体系，与传统法一致。Ｈｅｉｎ等。８。以耐热核酸酶（ｎｕｃ）作为靶基因，比较了ＳＹＢＲ中ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＧｒｅｅｎ杜雄伟等。１６。ｎｖＡ基因作为靶基因，建立了ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ荧光定量ＰＣＲ检测法。该法具有良好的特异性Ｉ染料法和ＴａｑＭａｎ探针法的灵敏度。其Ｉ染料法为６０ｎｕｃ基因拷贝数／¨Ｌ，Ｔａｑ—和重复性，组内ｃｔ值变异系数为０．９６％且组问无显著差异（Ｐ≤０．０１），从核酸提取到完成检测仅需３ｈ。由于实施完全闭管操作，极大程度上杜绝了扩增产物污染和假阳性问题。张巧艳等。１７。采用本法检测生牛奶中的沙门氏菌，最低检出限为１０２ｃｆｕ／ｍＬ，相关系数为０．９９９。乳制品经１６ｈ扩增后检测灵敏度达１ｃｆｕ／２５ｍＬ，扩增效率为１０３％。Ｃｈｅｎ等。１８。试以一段位于ｓｓａＮ基因中的特异性序列设计引物。通过检测临床已知的４０株沙门氏菌和２４株阴性沙门氏菌证实了该法对鼠伤寒沙门氏菌株和肠炎沙门氏菌株的最低检出限分别为４１．２ｆｇ／ＰＣＲ和１８．６ｆｇ／ＰＣＲ。贾俊涛等。１明用ＴａｑＭａｎ荧光定量ＰＣＲ法检测宠物食品中沙门氏菌的研究中发现，当样品菌悬液浓度为１０４ｃｆｕ／ｍＬ时，检测率可达１００％（１７ｃｆ∥反应体系）。Ｍｉｌｌｅｒ等。２０。报道了以ｉｖｎＡｍＲＮＡ为模板，结合反转录ＰＣＲ技术（ｒｔ—ＲＴ—ＰＲＣ）可提高活菌检测结果的准备性。２．４对单增李斯特菌的检测单增李斯特菌属于李斯特菌属，具有强致病性，其传统的分离培养检测法和酶联免疫吸附法均需经过预培Ｍａｎ探针法为６ｎｕｃ基因拷贝数／¨Ｌ。Ａｌａｒｃｏｎ等凹１进一步确认了这两种方法的检测水平可降低至１００和１０个细胞水平。若联合使用ＴａｑＭａｎ—ＭＧＢ探针，可降低本底信号强度，且可检测仅有单核苷酸差异的等位基因的表达水平。Ｐｒｏｄｕ等。１０。研究了浮选法、基质增溶和免疫磁性分离等样品前处理法对实验结果的影响，发现浮选法和基质增溶均允许在１—１０个细胞／ｍＬ水平上进行定量检测，均比平板接种法检测出更多的细菌细胞当量（ＢＣＥ），免疫磁性分离法制备的样品具有较高的特异性。２．２对大肠杆菌０１５７：Ｈ７的检测大肠杆菌０１５７：Ｈ７作为一种新型的食源性致病菌具有强致病性。常规培养法操作繁琐，检测周期长。目前，主要以大肠杆菌０１５７：Ｈ７的帕Ｅ、ｕｉｄＡ、ｅａｅ、ｓｔｘｌ、ｓｔｘ２基因作为靶基因，建立实时荧光定量ＰＣＲ法。李军等。１１。Ｆｌｉｃ（Ｈ７）基因序列进行同源性比较分析，选取保守序列设计特异性扩增引物，最低检测限为１０３ｃｆｕ／ｍＬ，特异性明显增强，对非大肠杆菌０１５７：Ｈ７血清型细菌、猪链球菌２型、副猪嗜血杆菌均无反应，重复性检测的变异系数小于２％。Ｗｅａｇａｎｔ等。１２。免疫磁性分离技术处理样品，检测限降至０．２ｃｆｕ／ｇ，有效避免漏检。Ｌｅｅ等ｎ纠用皂土包被的活性炭除去可能存在的ＰＣＲ抑制剂，最低检出限从１×１０３ｃｆｕ／ｇ降低至５ｃｆｕ／ｇ。Ｅｌｉｚａｑｕｔｖｅｌ等。１４３用叠氮溴化丙锭（ＰＭＡ）对样品前处理。由于ＰＡＭ可以透过死菌的细胞膜和胞内的ＤＮＡ形成共价碳氮键，对死菌ＤＮＡ在ＰＣＲ扩增时起到抑制作用，可避免假阳性结果产生。Ｄｉｎｕ等。１５。研究了ＰＭＡ—ｑＰＣＲ法、酶联免疫法在检测静止期（ＶＢＮＣ）的大肠杆菌０１５７：Ｈ７的差异。结果表明，使用ＰＭＡ—ｑＰＣＲ法检测结果与活菌显微镜计数法检测结果一致，而用酶联免疫法无法准确测定静止期细胞。２．３对沙门氏菌的检测传统的沙门氏菌检测需经过前增菌、选择性增菌、平板分离、生化试验和血清学鉴定等步骤，准备和收尾工作繁重，耗时长。以试剂盒或分子生物学方法提取细菌总ＤＮＡ作为模板的检测方法，操作复杂，成本高。目前主要以沙门氏菌的ｉｎｖＡ基因、ｓｓａＮ基因作为靶基养，耗时长。目前，主要以单增李斯特菌的＾咖、ｐ弘、ｉｎｌ、ａｃｔＡ和ｌａｐ基因作为靶基因，建立实时定量ＰＣＲ法。Ｔｒａｕｎ§ｅｋ等心１。取＾蚴基因设计引物，该法具有较高的灵敏度，最低检出限为１６５基因当量，相关系数为０．９８，扩增效率可达９２％。邵美丽等陋１对此法做了改进，使用荧光本底信号较低的Ｅｃｌｉｐｓｅ非荧光淬灭基团取代常用的ＴＡＭＲＡ荧光淬灭基团作为３’端标记基团。检测人为污染肉样品，证实最低检测限可降至２．８×１０１ｃｆｕ／ｍＬ，且阳性重组质粒定量扩增敏感度可达１９．５拷贝／¨Ｌ。Ｆｕｓｃｏ等㈦。以１６Ｓ和２３ＳｒＲＮＡ之问的基因问隔区设计引物，建立ＴａｑＭａｎ探针荧光定量ＰＣＲ法。Ｏｌｉｖｅｉｒａ等悼。证明了该法与传统培养检测法无显著差异（Ｐ＜０．０５）。Ｖａｎｅｇａｓ等∞。对比了该法与常规ＰＣＲ技术的检测灵敏度。通过检测８１份牛奶样品，证明该法具有较高的特异性，共检出２１份样品，常规ＰＣＲ方法仅检出１３份样品。Ｍａｒｔｉｎ等幽。确定了最佳的样品前处理方法。分别采用ＰｒｅＭａｎ试剂、ＤＮｅａｓｙＤＮＡ提纯技术、ＢＡＸ系统处理熟肉样品，结果表明，采用ＤＮｅａｓｙＤＮＡ提纯技术得到的检测结果最佳，ＰｒｅＭａｎ试剂次之，这３种方法均可以万方数据第８期李敏等：实时荧光定量ＰＣＲ技术在食源性致病菌检测中的应用１５有效地区分单增李斯特菌和沙门氏菌，减少假阳性结果产生。Ｙｅ等。２“结合反转录ＰＣＲ技术检测冷冻猪肉中的单增李斯特菌。对未经预培养的样品，该法最低检出限为１ｃｆｕ／ｍＬ，相关系数可达０．９９５，对经高压处理的样品检测结果与传统细菌培养法一致。刘海泉等怛ｓ－提出以肠道细菌基因问重复序列（ＥＲＩＣ）设计引物，建立单增李斯特菌的溯源分析ＥＲＩＣ—ＰＣＲ技术。以质控菌株ＡＴＣＣ１９１展，进一步研究和优化实时定量ＰＣＲ技术并与其它技术相结合必将成为食源性致病菌检测发展的重要趋势。◇＾爹１１５为对照，采用ＥＲＩＣ—ＰＣＲ方法对从菌株型已ｒＬ２知的市场猪肉样品溯源分析，实验证明该分型方法的辨别指数为６０％，基本可以满足ＨＡＣＣＰ追溯体系的检测要求。２．５对副溶血性弧菌的检测副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐菌，其传统检测方法操作繁琐，耗时长，且易产生假阳性结果。目前，主要以副溶血性弧菌的ｔｄｈ、ｔｒｈｔｏｘＲ、ｇｙｒＢ基因作为靶基因，建立实时荧光定量ＰＣＲ法。谢晓红等。２到根据副溶血性弧菌的基因保守区设计引物，该法的检测灵敏度为１．５ｃｆｕ／ｍＬ，阳性检出率从常规法的４０．６２％提高至４７．９２％，检测时问缩短至２—３ｈ。陈刚等。３０。等选取位于ｔｏｘＲ基因上的特异性片段作为靶基因，用ＰＧＭ—Ｔ载体构建重组质粒。该法具有良好的特异性，检测灵敏度为４０拷贝／反应体系，变异数小于５％。ｒＬ３ｒＬ４ｒＬ５ｒＬ６韩碉等。３１。优化了荧光定量ＰＣＲ法的检测条件。与Ｗａｒｄ等。３２。提出的检测法相比，该法可同时检出１０１２６菌株和０９ｖｐｌ０７菌株中的ｔｄｈ和ｆ疏基因、１１９９７菌株和ＡＴＣＣｌ７８０２菌株的ｆ疏基因以及１１６１５菌株和ＡＴＣＣ３３８４７菌株的ｔｄｈ基因。Ｚｈｕ等。３３。确立了最佳ＰＡＭ试剂处理浓度。用一系列等浓度梯度的ＰＡＭ试剂处理样品，发现当ＰＡＭ试剂浓度为８ｔｘｇ／ｍＬ时，检测灵敏度最高，相关系数为０．９９７。３结论实时荧光定量的ＰＣＲ法定量和扩增同步进行，克服了ＰＣＲ的平台效应，有效解决了传统ＰＣＲ只能终点检测的局限性。在封闭的条件下操作，避免了ＰＣＲ产物ｒＬ７ｒＬ８ｒＬ９ｒＬ１之问的交叉污染，且无需经过电泳等ＰＣＲ后处理操作，简化了实验步骤。选取ＰＭＡ作为ＤＮＡ嵌入试剂可选择性消除死亡细菌的ＤＮＡ，克服实时定量ＰＣＲ技术无法区别活性和死亡病原微生物的ＤＮＡ的缺陷，减少了假阳性问题产生。近年来，许多科研工作者通过将多重ＰＣＲ技术应用到实时定量ＰＣＲ检测中，同时对多种致病菌定量检测，进一步提高了检测效率。随着分子生物学技术的发ｒＬ１ｒＬ１万方数据１６中国食物与营养Ｅ．ｃｏｌｉ第２０卷ＧＭ，ＭｏｒｅａＭ，ｅｔａ１．Ｒａｐｉｄａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｉ—ａｕｒｅｕｓ０１５７：Ｈ７ｆｒｏｎｌａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄＦｏｏｄａｌｆａｌｆａ［２３］ＦｕｓｅｏＶ，Ｑｕｅｒｏｓｐｒｏｕｔｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２０１１，１４９（３）：２０９－２１７．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｄｅｎｔｉｆｉｅａｔｉｏｎｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｔｏｘｉｎｇｅｎｅｍｉｌｋｂｙｈａｒｂｏｕｒｉｎｇｔｈｅｅｎｔｅｒｏ—ｃｌｕｓｔｅｒ（ｅｇｅ）ａｎｄｔｉｔｔｌｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｒａｗｏｆ［１３］ＬｅｅＪＬ，ＬｅｖｉｎＲＥ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ５ＣＦＵ／ｇｏｆＥｓｅｈｅｒｉｅｈｉａｃｏｌｉｏｎｒｅａｌＰＣＲ『Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌＦｏｏｄ０１５７：Ｈ７ｗｉｔｈｏｕｔｌｅｔｔｕｃｅｕｓｉｎｇａｃｔｉｖａｔｅｄｃｈａｒｃｏａｌａｎｄｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１４４（３）：５２８—５３７．ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ［Ｊ］．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，２８（３）：［２４］ＯｌｉｖｅｉｒａＭＡ，ＲｉｂｅｉｒｏｏｆＬｉｓｔｅｒｉａＥＧＡ，ＢｅｒｇａｍｉｎｉｍｏｎｏｅｙｔｏｇｅｎｅｓｉｎａＡＭＭ，ｅｔｍｉｎｉｍａｌｌｙａ１．ｐｒｏ—ｏｎ５６２—５６７．ＱｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＰ，ＳｄｎｅｈｅｚＧ，ＡｚｎａｒＲ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［１４］ＥｌｉｚａｑｕｉｖｅｌｏｆｖｉａｂｌｅｅｅｓｓｅｄｌｅａｆｙｖｅｇｅｔａｂｌｅｓｕｓｉｎｇｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｆｏｏｄｂｏｒｎｅＥ．ｃｏｌｉ０１５７：Ｈ７，Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｅｙｔｏｇｅｎｅｓａｎｄ１６ＳｒＲＮＡｒｅａｌ—ｔｉｔｔｌｅＰＣＲＪ．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏ—ａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｉｎｆｌｅｓｈ—ｃｕｔｖｅｇｅｔａｂｌｅｓｃｏｍｂｉｎｉｎｇｐｒｏｐｉｄｉｕｍｍｏｎｏａｚｉｄｅａｎｄｒｅａｌ—ｔｉｔｔｌｅＰＣＲＪ．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ，２０１２，２５ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，２７：１９－２３．［２５］ＶａｎｅｇａｓＬｉｓｔｅｒｉａＭＣ，ＶｆｓｑｕｅｚＥ，ＭａｒｔｉｎｅｚＡＪ，ｅｔａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｅｙｔｏｇｅｎｅｓｉｎｉｎｒａｗｗｈｏｌｅｍｉｌｋｆｏｒ（２）：７０４－７０８．ｈｕｍａｎＣＯｉｌ—［１５］ＤｉｎｕＬＤ，ＢａｃｈＳ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｖｉａｂｌｅｂｕｔｎｏｎ—ｅｕｈｕｒａｂｌｅｓｕｍｐｔｉｏｎＣｏｌｏｍｂｉａｂｙｒｅａｌ—ｔｉｔｔｌｅＰＣＲ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ，Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｉａｃｏｌｉｔａｔｉｖｅ０１５７：Ｈ７ｆｒｏｍｖｅｇｅｔａｂｌｅｓａｍｐｌｅｓｕｓｉｎｇｑｕａｎｔｉ—ａｓ—２００９，２０：４３０－４３２．ＰＣＲｗｉｔｈｐｒｏｐｉｄｉｕｍｍｏｎｏａｚｉｄｅａｎｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ［２６］ＭａｒｔｉｎＢ，ＧａｒｒｉｇａＭ，ＡｙｍｅｒｉｅｈＴ．Ｐｒｅ—ＰＣＲｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｎａｓａｓａｙｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ，２０１３（３１）：２６８—２７３．［１６］杜雄伟，李叶，江洁，等．肉制品中沙门氏菌ｉｎｖＡ基因实时荧光定量ＰＣＲ检测方法的建立［Ｊ］．食品工业科技，２０１３，３４（１２）：６８—８０．［１７］张巧艳，陈亭亭，陈笑芸，等．基于ＳＹＢＲＧｒｅｅｎｋｅｙｆａｃｔｏｒｔｏｇｅｎｅｓｔｉｔｔｌｅｔｈｅｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｉｓｔｅｒｉａｎｌｏｎｏｅｙ—ａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｉｎｒｅａｄｙ—－ｔｏ—－ｅａｔｍｅａｔｐｒｏｄｕｃｔｓｂｙｒｅａｌ—－Ｊ．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ，２０１２，２７：１６３—１６９．Ｙ，ｅｔＰＣＲ［２７］ＹｅＫＰ，ＺｈａｎｇＱ，ＪｉａｎｇＩ荧光Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｅｙｔｏｇｅｎｅｓｉｎｔｒａｎｓｅｒｉｐｔａｓｅａ１．Ｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｖｉａｂｌｅｒｅｖｅｒｓｅ—－ｃｈｉｌｌｅｄｐｏｒｋｂｙｒｅａｌ—－ｔｉｔｔｌｅ定量ＰＣＲ建立生乳及乳制品沙门氏菌快速检测技术［Ｊ］．浙江农业学报，２０１２，２４（５）：９１４－９２１．［１８］ＣｈｅｎＪｉｎｇ，ＺｈａｎｇＬｉｄａ，ＰａｏｌｉＧＣ，ｅｔａ１．Ａｒｅａｌ—ｔｉｔｔｌｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｅａｆｒｏｍｆｏｏｄｓｉｎｇａｕ—ＰＣＲ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ，２０１２，２５：１１７—１２４．［２８］刘海泉，朱颖，姜文洁，等．ＥＲＩＣ—ＰＣＲ技术对单增李斯特菌的溯源分析［Ｊ］．食品工业科技，２０１３，３４（８）：４９１６０．ｔａｒｇｅｔｓｅｑｕｅｎｃｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｅＪｏｕｒｎａｌｏｆａ—［２９］谢晓红，沈莉，王仁刚，等．荧光定量ＰＣＲ技术快速检测食物中副溶血性弧菌［Ｊ］．预防医学情报杂志，２０１３，２９（２）：１７１—１７３．ｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ２０１０，１３７：１６８—１７４．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，［１９］贾俊涛，崔鹤，马云，等．应用ＴａｑＭａｎ荧光定量ＰＣＲ快速检测宠物食品中的沙门氏菌［Ｊ］．安徽农业科学，２０１２，４０（３０）：１４９７３—１４９７５．［３０］陈刚，邵彪，许蓓蓓，等．副溶血性弧菌实时荧光定量ＰＣＲ标准模板的构建和检测方法的建立［Ｊ］．肉类研究，２０１２，２６（１２）：８－１１．［２０］ＭｉｌｌｅｒＮＤ，ＤａｖｉｄｓｏｎＰＭ，Ｄ’ＳｏｕｚａＤＫＲｅａｌ—ｔｉｔｔｌｅＰＣＲａｎｄｆｏｒｒｅｖｅｒｓｅ—［３１］韩珥，张惠媛，马师良，等．荧光ＰＣＲ检测副溶血陛弧菌致病基因方法的建立［Ｊ］．中国食品卫生杂志，２０１３，２５（５）：３９７－４００．ｔｒａｎｓｅｒｉｐｔａｓｅｆｒｏｍｌｅｔｔｕｃｅＳａｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｎｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｏｍａｔｏｅｓＪ．ＬＷＴ—ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，４４：１０８８—１０９７．［３２］ＷａｒｄＬＮ，ＢｅｊｕｓｅＡＫ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＶｉｂｒｉｏｏｆｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｅｕｓｉｎ［２１］ＴｒａｕｎｓｅｋＵ，ＴｏｐｌａｋＮ，ＪｅｒｓｅｋＢ，ｅｔａ１．Ｎｏｖｅｌｃｏｓｔ—ｅｆｆｉ—ａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｈｅｌｌｆｉｓｈｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｍｕｈｉｐｌｅｘｅｄｒｅａｌ—ｔｉｔｔｌｅＰＣＲｗｉｔｈＴａｑＭａｎＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００６，７２ｅｉｅｎｔｒｅａｌｔｉｍｅＬｉｓｔｅｒｉａＰＣＲａｓｓａｙｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｒｏｂｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｍｏｎｏｅｙｔｏｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ（３）：２０３１－２０４２．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１１，８５（１）：４０－４６．［３３］ＺｈｕＲＧ，ＬｉＴＰ，ＪｉａＹＦ，ｅｔａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｖｉａｂｌｅｓｅａｆｏｏｄｕｓｉｎｇｐｒｏｐｉｄｉｕｍ［２２］邵美丽，刘思国，赵燕丽，等．ＴａｑＭａｎ探针实时定量ＰＣＲ检测肉中单增李斯特菌的研究［Ｊ］．东北农业大学学报，２０１２，４３（８）：１－５．ＶｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｅｕｓｃｅｌｌｓｉｎｒａｗｍｏｎｏａｚｉｄｅｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｈａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＰＣＲ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ—Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１２，９０：２６２－２６６．万方数据中国食物与营养２０１４，２０（８）：１７—１９ＦｏｏｄａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎｉｎＣｈｉｎａ江苏省南通市餐饮业即食生食动物性水产品微生物监测结果分析张周建，张卫兵，羌校君，赵荣梅，金峰，陆艳艳（南通市卫生监督所，江苏南通２２６００６）摘要：目的：了解江苏省南通市餐饮业即食生食动物性水产品微生物污染状况，收集制定地方食品安全标准的基础数据。方法：随机抽检江苏省南通市６５家主营水产品的餐饮单位共１１０份即食生食动物性水产品样品，按国家标准规定的相关方法检验大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等。结果：１１０份样品中，大肠菌群＜０．３ＭＰＮ／ｇ的为４０份，占３６％；致病菌检出２３份，检出率为２０．９％，其中副溶性弧茵检出率为１４．５％、沙门氏菌检出率为６．４％、金黄色葡萄球菌检出率为５．５％。不同类型餐饮单位致病菌检出率差异无统计学意义（）（２＝２．７９，Ｐ＞０．０５）。结论：江苏省南通市餐饮业经营的即食生食动物性水产品存在微生物污染，有一定的食用安全风险，应尽快制定即食生食动物性水产品食品安全标准、加强日常监管、规范加工操作，以提高即食生食动物陛水产品的食用安全。关键词：即食生食动物性水产品；微生物；监测；分析即食生食动物性水产品在餐桌上越来越受到消费者的青睐，而由于即食生食动物性水产品尚无国家食品安全标准，其食用安全问题也是受到社会的广泛关注，其中微生物污染是关注的焦点，因为由微生物污染所引起的食源性疾病在我国食物中毒中一直位居首位。１。。为了保障江苏餐饮业即食生食动物性水产品的食用安全，江苏省卫生厅委托南通市卫生监督所等单位，着手制定江苏省食品安全地方标准《即食生食动物性水产品（附加工操作规范）》，为了收集制定标准的基础数据，了解微生物污染状况，南通市卫生监督所于２０１３年开展了餐饮业即食生食动物性水产品微生物风险监测工作，现将结果报告如下。基金项目：江苏省卫生厅食品安全标准制定项目（项目编号：ＪＳＳＰＤＢ２０１２—００６）；南通市科技局社会发展计划项目（项目编号：ＨＳ２０１２０１６）。作者简介：张周建（１９８１），男，硕士，助理研究员，研究方向：卫生监督与食品安全。通讯作者：赵荣梅（１９６４），女，学士，副主任医师，从事卫生监督与食品安全研究工作。ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＲｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲｉｎｔｈｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＦｏｏｄｂｏｒｎｅＰａｔｈｏｇｅｎｓ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｆｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅＲｅａｌ—ｔｉｍｅｐｅｅｔｓｉｎｓｕｃｈａｓＰＣＲ，ｗｈｉｃｈｉｓａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｍｅｔｈｏｄｏｆｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ｈａｓａｂｒｏａｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓ—ａｓｆｏｏｄｉｎｄｕｓｔｒｙ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆＲｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ，ａｓｗｅｌｌｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｏｏｄｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ０１５７：马，ＳａｈｎｏｎｅｌｌａａｎｄＶｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｏｏｄｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｓ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｅｒｏｏｒｇａｎｉｓｎ『１ｓ；ｑｕｍｔｌｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（责任编辑李婷婷）万方数据实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测中的应用
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
李敏， 綦国红， LI Min， QI Guo-hong中国药科大学药学院,南京,210009中国食物与营养
Food and Nutrition in China2014,20(8)
2014(8)
引用本文格式：李敏.綦国红.LI Min.QI Guo-hong 实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测中的应用[期刊论文]-中国食物与营养
