组织切片制作过程:
1.固定: 10%甲醛溶液内固定 24~28h
组织块大小为15×15×5mm
2.水洗:流水冲洗24h 需用到胶皮管、烧杯、纱布
组织块放于烧杯中,用纱布将烧杯口封死,在纱布中间部位留出供胶皮管插入的豁口,胶皮管一头接到水源,另一头插入烧杯中。有水注入后,尽量让组织块不要沉底。
3.脱水:不同浓度的酒精
50%——70%——80%——95%——95%——无水酒精——无水酒精
30m-1h 2-4h 2-4h 2h 2h 1h 1h
其中70%酒精可以长时间保存,并且在脱水过程中随时可返回70%酒精中。但是返回后,仍需按顺序进行,即80%开始。
4.透明:
无水酒精:二甲苯(1:1)——二甲苯
30m 30m
透明过程中,在二甲苯中时,需注意观察组织块是否已透明,无需按固定时间来计算。
5.浸蜡与包埋: 将石蜡融化后置于52℃~60℃烘箱中
二甲苯:石蜡(1:1)——石蜡(1)——石蜡(2)——石蜡(3)
30min 30min 30min 30min
6.切片:
按需要厚度一般将切片机设为5-7um厚,厚度视组织块而定。
7.展片:
用水浴锅,将温度设为40℃,用毛笔将切好的蜡片从切片机上卷下,放入水浴锅中。
8.粘片:
需准备蛋白甘油,蛋白甘油由鸡蛋蛋清和甘油调配而成,比例为1:1。
先将一滴蛋白甘油涂抹在干净的载玻片上,然后用载玻片从水中将展好的蜡片捞起,平放入烘箱内进行烘干,烘干温度为50℃,时间为12~24h。
9.染色:
二甲苯(1)——二甲苯(2)——无水酒精(1)——无水酒精(2)——
5-10min 5-10min 5min 3-5min
95%酒精(1)——95%酒精(2)——80%酒精——70%酒精——50%酒精——
2-3min 2-3min 2min 2min 2min
蒸馏水——苏木精——自来水洗——蒸馏水——1%盐酸酒精——自来水蓝化
2min 5-15min 2min 2min 3-5s 15-30min
——蒸馏水——50%酒精——70%酒精——80%酒精——伊红——95%酒精(1)
2min 2min 2min 2min 1-2min 2-5min
——95%酒精(2)——无水酒精(1)——无水酒精(2)——二甲苯(1)
2-5min 5min 5min 5min
——二甲苯(2)
5-10min
10.封片:树胶封片,置于35℃~38℃之间烘干。