国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数
实验目的
实验原理：国标法操作的原理
实验器材：
培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台 实验药品： 磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤： 一：
10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min 二：
1：用电子天平称取成品LB3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。 3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。 4：灭完菌后放入超净台中备用。 三：
1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49mlPBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。 3：取4只试管，编号1—4 4：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS 5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。 6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀 7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。 9：取4只平皿，编号1—4 10：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。
12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。 四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照） 1号，2号菌落个数多不可计，舍弃 4号平皿中菌落数目小于10cfu，舍弃
3号平皿中菌落分布较均匀，数3号中的菌落数，一共有210个cfu。 计算样品中细菌浓度为：1.05×105Cfu/ml
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点评
超净台中的实验步骤讲述详细，明确，不错。前面的步骤叙述有点乱，建议按照如下标题重新调整顺序。 实验步骤： 1、 仪器清洗
将烧杯，培养皿、试管等仪器用洗衣粉清洗，超声5min.然后用清水清洗，超声5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱中烘干。 2、 培养基配制
精确称量。。。。。。。。。。放入锥形瓶中，加入。。。。mL蒸馏水，摇匀 3，灭菌
包扎、灭菌，烘干备用
3、 超净台中的操作（如上） 除了实验步骤和结果，还要有讨论和注意事项 例如：实验讨论： 1、评价该方法（操作简易程度，灵敏度如何，适用性） 2、为何选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数？ 注意事项 比如各种仪器的使用注意事项，以及保持洁净，防止染菌等。
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