— 37 —时间适当。
3.4 提取方法的选择 对隐丹参酮的提取方法，通过回流1 h、超声提取10、20、30 min比较，结果超声处理20 min，丹参酮的峰面积基本不变，且操作方便，故选用超声处理20 min。
3.5 原标准中采用紫外-可见分光光度法对隐丹参酮进行定量分析，操作繁琐；本文建立了HPLC法对丹参酮胶囊中隐丹参酮进行含量分析的方法，结果表明，该方法具有操作简便、准确，快速，重现性好等特点。参考文献
[1] 卫生部药品标准中药成方制剂第十七册，19.
[2] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，
2005，527.
3 讨论
3.1 测定波长的选择 取隐丹参酮对照品溶液，在200~400 nm波长范围内进行扫描，结果显示在263 nm处有较大吸收峰，且吸光度较强、不受溶剂峰干扰，故选择263 nm处为测定吸光波长。
3.2 色谱柱的选择 本文采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）和Thermo ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱进行试验，结果用Thermo ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱分离效果好。
3.3 流动相的选择 本文选用流动相甲醇-水系
75：25；80：20三个比统[2]，分别以70：30；
例试验，结果以75：25比例分离效果好，保留
HPLC-ELSD法测定阿拉伯糖的含量
刘 峥，崔小兵，李 伟*，徐智勇
（南京中医药大学，江苏 南京，210029）
摘要：目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定阿拉伯糖含量的方法。方法 采用SHISEIDO NH2分析色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）30 ℃，流动相：，柱温：乙腈-水(70：30)，流速：0.8 mL/min，ELSD参数：漂移管温度为80 ℃，N2流速为2.0 L/min。结果 阿拉伯糖在12.00~27.99 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为100.4 %，RSD=0.8 %，定量限为200 μg/mL (S/N=10)。结论 HPLC-ELSD法简便，快捷，无干扰，灵敏度高，重现性好，可用于阿拉伯糖的含量测定。
关键词：高效液相色谱-蒸发光散射检测法；阿拉伯糖；含量测定
R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2008)06-0037-04 中图分类号：
Determination of Arabinose by HPLC-ELSD
LIU Zheng, CUI Xiao-bing, LI Wei, XU Zhi-yong
(Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)
Abstract: Objective To establish a HPLC-ELSD method for the determination of arabinose. Methods The analytical column was SHISEIDO NH2(4.6 mm×250 mm,5 μm).The column temperature was 30℃.The mobile phase was acentonitrile-water (70：30). The flow rate was 0.8 mL/min. The samples were determined by an evaporative light-scattering detector (ELSD) with the drift tube temperature at 80 ℃ and the fl ow rate of nitrogen was 2.0 L/min. Results The linear range of arabinose was 12.00~27.99 μg(r=0.999 9). The average recovery was 100.4% with RSD of 0.8%. The limit of detection and quantifi cation for arabinose was 200 μg/mL(S/N=10). Conclusion The method is simple, accurate, sensitive and with good reproducibility. It can be used as the content control of arabinose.
Key words: HPLC-ELSD; arabinose; determination
收稿日期：2008-08-28*
通讯作者：李 伟，男，研究员，博士，Tel: (025)86798269，E-mail: liwaii@126.com
— 38 —蒸发光散射检测器( ELSD)是一种新型质量检测器，利用光散射原理，其响应与被测物的质量成正比, 而不依赖于被测物的光学特性及官能团[1]，同时具有高效、灵敏度高、专属性强等优点，特别适用于无生色团、无紫外线吸收或紫外末端吸收的样品以及挥发性低于流动相的任何组分[2]。Pamita Bhandari[3]等采用HPLC-ELSD测定胡黄连属中木糖、木糖醇、甘露醇、葡萄糖以及蔗糖的含量，根据ICH指南鉴证，此方法具有测定准确、灵敏度高、重现性好、精密度高等优点。
阿拉伯糖属于五碳醛糖，以阿拉伯聚糖、阿拉伯糖基木聚糖、阿拉伯糖基半乳糖体及类似于高等植物半纤维的形式存在。它是一种没有热量的甜料，能抑制水解双糖的酶，对蔗糖的代谢转化有阻断作用，因此，阿拉伯糖具有抑制肥胖、预防并治疗糖尿病方面的功效，同时阿拉伯糖还可以用作医药中间体、用于生化领域中细菌培养基的制备以及香料合成等[4]。
阿拉伯糖本身不存在紫外吸收，迄今为止，有关阿拉伯糖含量测定的文献报道较少。王晓雷[5]等曾采用3, 5-二羟基甲苯-三氯化铁比色法测定黄芪多糖中阿拉伯糖的含量，本文首次运用ELSD对阿拉伯糖样品成分含量进行HPLC分析，方法简便、快捷、无干扰、重现性好、灵敏度高、专属性强。1 仪器与试药
1.1 高效液相色谱仪 Waters 515 HPLC 泵两台，717plus自动进样器，Millennium32色谱管
Alltech 500；电理系统；蒸发光散射检测器：
Sartorius BP211D；阿拉伯糖对照子分析天平：
品（Exquim S.A. 批号 035061）；乙腈为色谱纯(Dima Technology inc.批号84211)；水为重蒸馏水(自制)。
1.2 阿拉伯糖样品的制备 采用阿拉伯胶提取法[6]
，阿拉伯胶在硫酸作用下水解得到含L-阿拉伯糖的混合液，乙醇萃取，工业乙酸沉淀，得阿拉伯糖粗品，通过微晶纤维素粉和硅胶填充的玻璃色谱柱，分离得阿拉伯糖样品。2 色谱条件
SHISEIDO NH2分析色谱柱（4.6 色谱柱：
mm×250 mm, 5 μm），大连依利特科学仪器厂；
流速：0.8 mL/流动相：乙腈-水(70∶30)；
现代中药研究与实践2009年第23卷第1期
Research and Practice of Chinese Medicines
min；进样量：10 μL；ELSD 参数：漂移管温度为80 ℃，N2流速为2.0 L/min。3 方法与结果
3.1 供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的阿拉伯糖样品适量，溶于水中制成每1 mL含2.0 mg的溶液。
3.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的阿拉伯糖对照品适量，溶于水中制成每1 mL含2.0 mg的溶液。
3.3 专属性考察 取水进样，记录色谱图。在阿拉伯糖保留时间处无相应的色谱峰（见图1）。
注：a. 阿拉伯糖对照品 b. 样品 c. 阴性对照 1. 阿拉伯糖
图1 阿拉伯糖的HPLC图谱
Fig .1 HPLC chromatogram of arabinose
3.4 线性关系考察 精密称取阿拉伯糖对照品约400 mg，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密吸取上述溶液3、4、5、6、7 mL，分别至10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制得标准溶液系列。取10 μL进样，记录色谱图（见图1b），测出阿拉伯糖峰面积（见表1）。以浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标作图（见图2），用最小二乘法进行线性回归，得回归方程
lgA = 1.218 3lgC + 2.912 3 , r= 0.999 9。进样为：
量在12.00~27.99 μg范围内线性关系良好。
根据线性试验结果，确定含量测定所适用的高低浓度，本法采用测试浓度的80~120％为测试范围。
3.5 重复性试验 精密吸取阿拉伯糖对照品溶液(1.999 mg/mL)10 μL注入色谱仪，重复进样测定6次，测出阿拉伯糖主峰的峰面积。以峰面积的对数计算重复进样的相对标准偏差，
现代中药研究与实践2009年第23卷第1期Research and Practice of Chinese Medicines
— 39 —3.8 定量限考察 分别将对照品溶液逐步稀释，并进行测定，将信号与空白相对比，求出各色谱图中的信噪比。以信噪比约为10时溶液的浓度为其定量限。结果可知阿拉伯糖的定量限为200 μg/mL。
3.9 重复性考察 精密吸取浓度为1.559 mg/mL、2.399 mg/mL阿拉伯糖对照品溶液10 μL，注入色谱仪测定，重复进样两次，记录色谱图，测量主峰的峰面积，计算峰面积平均值的对数与浓度的对数。结果见表5。
表5 重复性试验随行对照方程(n=2)
Tab.5 Controlled equation of randomised replicate test
Inj vol(μL)Cs(μg/mL)
10
12792879
A724537569931301216608012130646
lgA6.85247.0845
lgCs3.19293.3800
表1 线性试验结果(n=5) Tab.1 Results of linear test
No12345
C(μg/mL)12001559199923992799
lg C3.07903.19293.3009
A
451599846448504548828638845663236166258496851480184527148588622
lgA6.6599 6.8009 6.9304
3.38001100748610738204106762837.0337 3.44701289105212898018129243937.1107
图2 阿拉伯糖标准曲线图Fig.2 The standard curve arabinose
10
RSD=0.26%。说明本方法重现性良好。
3.6 准确度试验 精密吸取三份浓度为1.559 mg/mL、1.999 mg/mL、2.399 mg/mL阿拉伯糖对照品溶液10 μL，注入色谱仪测定，重复进样三次，测出主峰的峰面积，以峰面积的对数，从线性回归方程计算其浓度，RSD=0.8%，见表3。
表3 准确度测定结果（n=9）Tab.3 Results of accuracy test
NoCs(μg/mL)Inj vol(μL)Ci(μg/mL)回收率(%)平均值RSD(%)123456789
159912761235199920011995239924012849
101010101010101010
162015951544203620092015236724382374
101.27 99.53 100.37 100.88 100.81 100.42100.71 98.97 101.33 99.94
0.8
以峰面积平均值的对数与浓度的对数计算校
lgA = 1.240 8 lgC +2.890 4。 精密正曲线，得：
1.999 mg/mL、2.399 吸取三份浓度为1.559 mg/mL、
mg/mL阿拉伯糖对照品溶液10 μL，注入色谱仪测定，量出主峰的峰面积。从校正曲线计算出相
RSD=0.61%。见表6。，应的浓度，计算含量（n=9）
表6 重复性试验结果（n=9）Tab.6 Results of replicate test
NoCs(μg/
mL)1234567
155215431538194019291923232823152308
Inj vol(μL)101010101010101010
A
lgA
Ci(μg/mL)
69739866.8435 153468529356.8359 151368582746.8362 151491021306.9591 190291347936.9607 190790981666.9590 1901115942857.0642 2311115973437.0644 2312112853487.0525 2261
含量(%)98.84 98.33 98.20 98.10 98.75 98.86 98.7199.30 99.90 98.13
0.61平均RSD值
(%)
89
3.7 稳定性考察 供试品溶液每隔2 h取10 μL
注入色谱仪测定，重复进样两次，以lgA计算RSD%为0.19%， 见表4。
表4 稳定性试验结果
时间(h)024681012
Tab.4 Results of stability testA7885542844040880065697850363762148180174387930262
lgA6.8968 6.9264 6.9034 6.8949 6.8820 6.9040 6.8993
6.9010
0.19
lgA
RSD(%)
3.10 样品测定 精密吸取三份浓度为1.599 mg/
mL、2.399 mg/mL阿拉伯糖对照品溶液10 μL以及三批样品溶液10 μL，注入液相色谱仪测定（见图1b、c），每份进样两次，以外标两点法对数方程计算(n=3)，阿拉伯糖的含量结果见表7。
表7 含量测定结果 (n=3) Tab.7 Results of content determined批号080211080212080213
含量(%)98.2298.3898.29
— 40 —4 讨论
4.1 本试验选择了不同的色谱条件对样品进行测定，证明本方法的耐用性良好。通过改变柱温 (分
35 ℃)、别为25 ℃，改变流动相比例乙腈-水(分
别为75:25，65:35)、改变检测器漂移管温度（分别为76 ℃，84 ℃）、改变检测器气流（分别为1.8 L/mL 、2.2 L/mL），其他色谱条件不变，进行系统适用性试验，色谱分离无明显影响。
4.2 糖类成分多不存在紫外吸收,以前主要采用分光光度法对这类成分进行定量分析,但只能测定总糖含量，选择性、准确度较差[7]。本文用高效液相色谱-蒸发光闪射检测器法测定阿拉伯糖的含量，进行了准确度、精密度、专属性、线性、稳定性以及耐用性考察，结果表明该方法准确度高、专属性强，精密度及稳定性均较好，能客观反映阿拉伯糖的含量，对分析方法进行了方法学验证，可作为该糖的含量测定方法，同时也可作
现代中药研究与实践2009年第23卷第1期Research and Practice of Chinese Medicines
为其他糖类含量测定的参考。ELSD虽然不可能完全的替代UV 检测器,但是对于糖类成分的分析发挥了重要作用。参考文献
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临床药理, 2001, 12(6): 444.
[2] 马艳蓉, 柴国林, 张莅峡. HPLC-ELSD在中药分析中的应用[J]. 中国中
医药信息杂志, 2004, 11(4): 368.
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and picrosides in Picrorhiza species using ultrasonic extraction and high-performance liquid chromatography with evaporative light scattering detection. Journal of Chromatography A, 2008 (1194): 257.[4] 秦海敏, 喻宗沅, 容如滨. L-阿拉伯糖研究进展[J]. 化学与生物工程,
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25(11): 925.
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2003, 20(5):288.
[7] 赵宇新, 李曼玲. 蒸发光散射检测器在中药成分分析中的应用[J]. 中国
中药杂志, 2003, 28(10): 914.
益智不同部位低聚糖的含量测定
汪金玉，陈 康，林 励，廖慧君
（广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006）
摘要：目的 初步比较益智不同部位低聚糖含量的区别。方法 以果糖对照，按紫外分光光度法在285 nm处测定吸收度。 结果 在0~60 µg•mL -1范围内，果糖浓度与吸光度呈良好的线性关系（R2=0.999 9），壳和仁的平均加样回收率分别为100.69%和99.20%（RSD分别为1.49%和1.25%，n=6）。结论 该测定方法简便、快速、重现性好，益智果壳和果仁低聚糖含量区别明显。
关键词：益智；不同部位；低聚糖；含量测定；紫外分光光度法
R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)01-0040-03中图分类号：
Determination of Oligosaccharides in the Different Parts of Alpinia oxyphylla
WANG Jin-yu, CHEN Kang, LIN Li, LIAO Hui-jun
(College of Chinese Medicine,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510006,China)
Abstract：Objective To compare the content of oligosaccharides in different parts of Alpinia oxyphylla. Methods Using fructose as a reference substance, to analyze absorption by UV-spectrophotometry with a detection wavelength at 285 nm. Results Good linear relationship with absorbability occurred when the concentration range of fructose was 0~60 µg•mL -1 (R2=0.999 9). The average recovery of shell and nutlet were 100.69% and 99.20% with RSD of 1.49% and 1.25% (n=6) , respectively. Conclusion The method is simple, quick and sensitive, the content of oligosaccharides is different between shell and nutlet of Alpinia oxyphylla.
Key words：Alpinia oxyphylla Miq．；different parts；oligosaccharides；determination；UV-spectrophotometry
收稿日期：2008-08-29
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