・７６・ 临京医学工程２０１２年１月第１９卷第１期 ・论著・ （临床研究） 胚胎形态对胚胎质量及妊娠结局的影响 李娜，苗聪秀 ，毕慧玲，苗卉 （山西省长治医学院附属和平医院生殖遗传科，山西长治０４６０００） 【摘要】 目的研究探讨胚胎原核期及Ｄ２／Ｄ３胚胎形态学指标对胚胎质量及妊娠结局的影响。方法回顾性分析我院生殖中 心２０１０年８月至２０１１年８月期间行常规体外受精／单精子卵胞浆内注射胚胎移植的不孕症患者１６７例．根据是否妊娠分为２组． 妊娠组８１例，未妊娠组８６例，比较分析２组胚胎形态学评分和胚胎质量以及妊娠之间的关系。结果妊娠组与未妊娠组相比， 评分较高的胚胎、评分较低的胚胎、比较优质胚胎率和妊娠均有显著差异Ｐ＜０．Ｏ５。评分最高的胚胎优质胚胎率可达６７．０５％，而 最高形态评分的胚胎移植也有最高的妊娠率。结论对原核期及Ｄ２／Ｄ３天胚胎形态评分可预测胚胎的发育潜能。提高妊娠率，减 少移植胚胎数目，并可作为胚胎移植时选择胚胎的依据。 【关键词】 胚胎形态；优质胚胎；体外授精一胚胎移植；妊娠率 中图分类号：Ｒ３２１—３３；Ｒ７１ １．６ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４—４６５９．２０１２．０１．００７６ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｈｍｎａｎ Ｅｍｂｒｙｏ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ Ｅｍｂｒｙｏ Ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ Ｏｕｔｃｏｍｅ ＬＩ Ｎａ，ＭＩＡＯ Ｃｏｎｇｘｉｕ￣ＢＩＨｕｉｌｉｎｇ，ＭＩＡ０ Ｈｕｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｈｅｒｅｄｉｔｙ，ｔｈｅ Ａｆｌｉｆａｔｅｄ Ｈｅｐｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆＣｈａｎｇｚｏｈｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｚｈｉ ０４６０００，Ｃｈｉｎａ； Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＭＩＡ ０ Ｃｏｎｇｘｉｕ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｄ２／Ｄ３ ｏｎ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ ｎｄ ａｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｏｕｔｃｏｍｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １６７ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｙ ｐａｔｔｉｅｎｔｓ ｗｉｈ ｔｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｉｔｏｎ（Ⅳ下）ａｎｄ ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（ｉｃｓｉ）ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉｍｌ ｆｒｏｍ Ａｕｇｓｔ ２０１０ ｔｏ Ａｕｇｓｔ ２０１ １ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｏｒ ｎｏｔ： ｐｒｅｇｎａｎｔ ｒｏｕｐ（ｇ８ １ ｃａｓｅｓ）ａｎｄ ｎｏｎ－ｐｒｅｇｎａｎｔ ｒｏｕｐ（ｇ８６ ｃａｓｅｓ）．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｍｂｒｙｏ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ＳＣＯｒｅＳ，ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｙ ｔｎｄ ａｐｒｅｇｎａｎｃｙｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｄｉｆｅｎｅｎｃｅｓ ｏｆｅｍｂｒｙｏｗｉｈｂｏｔｔｈｈｉｇｈｅｒ Ｓｃｏｒｅｓａｎｄｌｏｗｅｒ ｓｃｏｒｅ，ｐｒｉｍｅ ｅｍｂｒｙｏ ｒａｔｅａｎｄ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｗｅｒｅ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈｅｔ ｐｒｅｇｎａｎｔ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎｏｎ－ｐｒｅｎａｇｎｔ ｒｏｕｐ ’ｇ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｐｒｉｍｅ ｅｍｂｒｙｏ ｒａｔｅ ｗｉｍ ｈｅｔ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｃｏｒｅ ａｔｔａｉｎｅｄ ｔｏ ６７．０５％，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｅｍｂｒｙ ｗｉｈ ｔｈｔｅ ｈｉｈｅｓｇｔ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｓｃｏｒｅ ｈａｄ ｈｅｔ ｈｉｈｅｓｇｔ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｒａｔｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｓｃｏｒｅ ｉｎ ｐｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ Ｄ２／Ｄ３ Ｃａｎ ｆｏｒｅｃａｓｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆｅｍｂｒｙｏ，ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｒａｔｅ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｅｍｂｒｙｏ’Ｓ ｎｕｍｂｅｒ，ｗｈｉｃｈ Ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ｅｍｂｒｙｏｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｅｒ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｅｍｂｒｙｏ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ；Ｐｒｉｍｅ ｅｍｂｒｙｏ；／ｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ—ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ；Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ Ｒａｔｅ 生殖医学中的ＩＶＦ／ＩＣＳＩ—ＥＴ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ／ｉｎ ｔｒａｃｙｔｏ． 者年龄小于３５岁．平均移植内膜９．１８ ｍｍ。均于第３天进行胚 ６８ ｐｔａｓｍｉｃ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ），即在临床中体外受 胎移植，根据是否妊娠分为２组，妊娠组８１例，胚胎数１精／单精子卵胞浆内注射一胚胎移植是全世界以及我国主要的治 个。未妊娠组８６例，胚胎数１７１个。 疗不孕不育的手段．其中胚胎的质量很大程度上会对妊娠结局 １－２方法 有影响，在实际工作中分辨胚胎的质量，选择优质的胚胎移植 １．２．１排卵及取卵采用超促排卵：促排卵以后要定期Ｂ超监测 ｍｍ，还有一种情 到患者体内是一个重要的问题，形态学评分是ＩＶＦ技术中最常 卵泡发育．监测发现至少１个卵泡直径达１８ ６～１７ ｍｍ时．我们一般都是给予ＨＣＧ 用的无损伤性评价胚胎质量的方法Ⅲ：本文主要探讨从原核期 况即有３个卵泡直径＞１形态及取卵后第２天或第３天形态学特征判断胚胎的发育潜能 六千到一万个单位肌内注射，给药后３６ ｈ后采用Ｂ超引导下 及和胚胎种植之间的关系，为更好的选择移植胚胎提供依据。 的经阴道取卵术。 １．２．２精子收集与处理丈夫需要禁欲３—７ ｄ，并且于取卵当 １资料与方法 天上午采用手淫法取精于无菌容器内，保存方法在３７℃培养 ｍｉｎ。按照ＷＨＯ标准，液化后采用精液分析法进行 １．１基本资料选取本院生殖中 １１，２０１０年８月一２０１１年８月 箱静置３０ 行常规ＩｖＦ／ＩＣＳＩ—ＥＴ胚胎移植的１６７例不孕症病例。所有患 分析，并且使用上游法或密度梯度离心方法处理。１．２．３授精和胚胎移植主要的方法有两种：①ＩＶＦ方案：在取 收稿日期：２０１１－０９—０６ 修回日期：２０１１－１２－１２ 卵后体外培养４～６ ｈ以后进行授精，使用的精子浓度按照国 作者简介：李娜，女，研究方向：辅助生殖。 通讯作者：苗聪秀，Ｅｍａｉｌ：ｍｃｘｍｓ＠１６３．ｃｏｒｎ。 际化标准为每个卵子５ Ｘ １０４条活动精子。（￣ＩＣＳＩ方案：将卵 子培养２ ６ ｈ后，使用药物即用透明质酸酶消化去除卵子周 临春医学工程２０１２年１月第ｌ９卷第１期 围的颗粒细胞，然后在倒置显微镜下观察卵子成熟度，当观察 ・７７・ 表２妊娠组和未妊娠组Ｄ２／Ｄ３胚胎期形态比较（％） 到卵子处于ＭⅡ期卵子．使用显微注射行胞浆内单精子注射。 采用以上受精方法ｌ６～１８ ｈ后在倒置显微镜下观察原核形态， 当胞质中出现２个原核（２ ｐｒｏｎｕｃｌｅｕｓ）的受精卵这个时候我们 可认定为正常受精卵：依据治疗周期的不同我们移植不同的胚 胎数目；移植以后５周后Ｂ超检查见妊娠囊我们即认为临床妊 娠。 １．２．４形态观察指标 组别妊娠组ｎ Ａ级 Ｂ级 ｃ级 。级 ８１ １６８ ７８（４６．４３％）‘７５（４４．６４％） ７（４．１７％）’９（５．３６％） 未妊娠组８６ １７１ ３１（１８．１３％）１９（１ １．１ １％）６９（４０．３５％）５２（３０．４１％） 注：与未妊娠组比较 Ｐ＜Ｏ．０１ ２．３妊娠组和未妊娠组优质胚胎数比较优质胚胎数在妊娠组 Ｉ级、Ⅱ级明显高于Ⅲ级和Ⅳ级（Ｐ＜０．０５，见表３）。 １．２．４．１显微原核期观察指标在原核相交处有数目相同的核仁 和未妊娠组之间有统计学差异（Ｐ＜Ｏ．叭），妊娠组优质胚胎数 排列成线、核仁数３—７个就是我们常说的１级原核；而临床 中常见２级原核中可以发现核仁的大小、数目相等，均匀分散 于核质；３级原核内核仁少（＜３）或许多小的针尖样核仁（＞７） 两原核内核仁数量或大小相差很大：４级两原核分开未贴近 （原核分离）或原核大小明显不一。 １．２．４．２ Ｄ２／Ｄ３胚胎观察指标Ａ级胚胎的每个卵裂球内均可见 单核，胚胎发育到８个细胞，无胞浆碎片；Ｂ级胚胎至少有１ 个卵裂球内未见核．胚胎发育到５ ６个细胞，胞浆碎片＜ １０％：Ｃ级胚胎有多核卵裂球，也就是胚胎发育到４个细胞。 而且我们发现其胞浆碎片＜２０％；Ｄ级半数卵裂球有多核，并且 主要的显著特征为胚胎发育小于４个细胞。大致的胞浆碎片大 约在２０—５０％的范围以内。 １．２．４．３取卵后第３天胚胎质量评分我们一般把根据卵裂球数 目、形态和胞浆碎片等参数可以将胚胎分为４个不同等级。常 见的为Ｉ级胚胎为卵裂球大小均匀，并且发现无胞浆碎片；ＩＩ 级胚胎为卵裂球大小均匀，但是可以发现胞浆碎片＜１０％。Ⅲ 级胚胎一般定义为卵裂球大小不均匀，主要的是胞浆碎片＜ ２０％，Ⅳ级胚胎主要的特征为卵裂球大小均匀或也有的是不均 匀，而且可以发现胞浆碎片为２０％～５０％。 １．２．４．４优质胚胎评价标准依据我中心的优质胚胎评分标准： 受精第１天出现２个原核，受精第３天细胞数≥６个，并且卵 裂球大小均一、胞质透亮、并且是碎片少于１０％，这种我们一 般可以评分为Ｉ级或Ⅱ级的胚胎。 １．３统计学处理实验结果用Ｓ￣ＳＤ表示，采用进行Ｘｚ检验， 采用ＳＰＳＳ １５．０软件处理。 ２结果 ２．１原核期形态对妊娠结局的影响原核期形态在妊娠组和未 妊娠组之间有统计学差异（Ｐ＜０．０１），妊娠组原核期形态１级 明显高于２、３、４级（Ｐ（０．０１）。见表１。 表１妊娠组和未妊娠组原核期核仁形态比较（％） 组别ｎ 级 ｚ级 ｓ级 ４级 妊娠组８１ １６８ ９２（５４．７６％） ４３（２５．６０ １７（１０．１２％） １６（９．５２％） 未妊娠组８６ １７ １ １３（５４．７６％）８（５４．７６％）９３（５４．７６％）５７（５４．７６％） 注：与未妊娠组比较 Ｐ＜Ｏ．Ｏ１ ２．２ Ｄ２／Ｄ３胚胎期形态对妊娠结局的影响Ｄ２／Ｄ３胚胎期形态 在妊娠组和未妊娠组间有统计学差异（Ｐ＜０．ｏ１），妊娠组Ｄ２／ Ｄ３胚胎期形态Ａ、Ｂ级明显高于ｃ、Ｄ级（Ｐ＜０．Ｏ１）。见表２。 表３妊娠组和未妊娠组优质胚胎数 较（％） 注：与未妊娠组比较 ＜Ｏ．０１ ３讨论 评估胚胎的发育和种植潜能。对选择胚胎移植，提高妊娠 率，降低多胎率是非常重要的Ｅ２］。本研究表明，原核期形态、 Ｄ２／Ｄ３胚胎期形态在妊娠组和非妊娠组间有统计学差异（Ｐ＜ ０．０１）。其中妊娠组原核期形态以１级最多见，为５４．７６％；Ｄ２／ Ｄ３胚胎期形态则以Ａ级和Ｂ级最多见。分别为４６．４３％和 ４４．６４％；从研究中我们可以发现，移植胚胎中所含优质胚胎数 目与妊娠结果有相关性，胚胎组中含优质胚胎数１１５占总胚胎 数的６８．４５％。所以我们认为根据原核期形态、Ｄ２／Ｄ３胚胎期形 态．可作为ＩＶＦ／ＩＣＳＩ—ＥＴ临床工作中选择移植胚胎的一项辅助 指标，预测胚胎种植潜能，以提高胚胎移植后着床的成功率。 研究发现授精后发现。２Ｏ一２７小时第一次卵裂。约４０小时形 成４细胞，约６５小时达到８细胞，胚胎在空间和时间的统一 是胚胎正常发育的关键步骤；胚胎的发育节奏与种植力密切相 关＿３＿。研究发现Ｄ３移植发育为８细胞胚胎其妊娠率高于非８ 细胞胚胎【４］，ＳｃｏｔｔＬ等［５３也研究发现Ｄ３移植卵裂球数目为８ 细胞的胚胎妊娠率最高。卵子从激活、受精、单个卵裂球的形 成到胚胎基因组的激活，严格按照本身固有的生理时钟发育， 可能预示胚胎有较高的发育潜能＿６］。 参考文献 ［１】 李劲，陈士岭，孙玲，等．人原核期胚胎形态与胚胎移植后着床的关 系【Ｊ１．南方医科大学学报，２００７，２７（７）：１０５７—１０６０，１０６４． 【２】 Ｌｉｕ Ｑ，Ｚｈｕ Ｇ，Ｈｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｍｎｕｃｌｅａｒ ｓｃｏｒｉｎｇ ａｎｄ ｅｍｂ￣ｏ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｐｌｎａｔａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉｌａ ｉｎ ＩＶＦ－ＥＴ【Ｊ１．Ｊ Ｈｕａ ｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇＭｅｄ Ｓｃｉ，２００８，２８（２）：２０４－２０６． 【３】ＤｅｍｉｒｅｌＬＣ，Ｅｖｉｒｇｅｎ Ｏ，Ａｙｄｏｓ，ｅｔ ｏ１．Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｏｎｅ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ＩＣＳＩ ｏｎ ｐｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｏ￣ｈｏｌｏｇ【Ｊ］．Ｈｕｍ Ｒｅ— ｐｒｏｄ，２００１，１６（１ １）：２３２７－２３３２． 【４１ ＢｏｒｉｎｉＡ，ＬａｇａＵａＣ，ＣａｔｔｏｌｉＭ，ｅｔ ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒｅｍｂｒｙｏ ｉｍｐｌａｎ－ ｔａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉｌａ［Ｊ】．Ｒｅｐｒｏｄ ＢｉｏｍｅｄＯｎｌｉｎｅ，２００５，１０（５）：６５３—６６８． 【５】５ Ｓｃｏｔｔ ＬＡ．Ｐｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｓｃｏｒｉｎｇ ａｓ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｅｍｂ￣ｏ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［ＪＪ． ＲＢＭ Ｏｎｌｉｎｅ，２００３，６（２）：２０１—２１４。 【６］ Ｓａｌｕｍｅｔｓ Ａ，Ｈｙｄ６ｎ—Ｇｒａｎｓｋｏｇ Ｃ，Ｓｕｉｋｋａｒｉ Ａ．Ｍ。ｅｔ ．Ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｐｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｚｙｇｏｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２００１，１６（１０１：２１７７—２１８１． （责任编辑：钟婷婷）