专利名称:犬瘟热病毒CDV-3株感染性cDNA克隆及其构建方
法和应用
专利类型:发明专利
发明人:薛向红,闫喜军,卜研,陈杰,赵建军,赵传芳,胡博申请号:CN201910985048.5申请日:20191016公开号:CN110951778A公开日:20200403
摘要:本发明公开了犬瘟热病毒CDV‑3株感染性cDNA克隆及其构建方法和应用。本发明以犬瘟热病毒CDV‑3株为模板,将CDV‑3的全长分5个片段进行RT‑PCR扩增。经酶切拼接,将5个片段顺次插入到真核载体,同时在F1首端和F5末端分别加入锤头状核酶和丁型肝炎核酶序列,获得犬瘟热病毒CDV‑3株感染性cDNA克隆。然后,构建表达CDV‑3N、P、L蛋白的三个辅助质粒。将犬瘟热病毒CDV‑3株感染性cDNA克隆和三个辅助质粒共转染293T细胞,获得拯救后的重组CDV‑3病毒(rCDV‑3)。研究发现,获得的rCDV‑3病毒滴度最高达到10TCID/mL,比wtCDV‑3高出10倍。rCDV‑3感染Vero细胞后,于感染后36h迅速达到最高病毒滴度,而wtCDV‑3于感染后72h时病毒含量达到最高。本发明的提出为犬瘟热病毒新型疫苗研制、致病机理研究奠定了基础。
申请人:中国农业科学院特产研究所
地址:130112 吉林省长春市净月经济开发区聚业大街4899号
国籍:CN
代理机构:北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司
代理人:马鑫
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