第３４卷２０１３年第３期 ５月 中山大学学报（医学科学版） ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＵＮ ＹＡＴ－ＳＥＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ） Ｖｏ１．３４ Ｎｏ．３ Ｍａｙ．２０１３ ＥＧＣＧ对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２裸鼠移植瘤ＣＯＸ一２、 ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ表达的调控 周薇ｈ，戴奇刚 ，邓鑫 ，荣孪君 ，王英桂 （广东药学院１．附属第二医院病理科，广东广州５１０３００；２．附属第一医院放疗科，广东广州５１００８０；３．广西中医学院附属瑞 康医院科教科，广西南宁５３００１１） 摘 要：【目的】探讨表没食子儿茶素没食子酸脂ＥＧＣＧ对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑 制作用及ＥＧＣＧ对移植瘤环氧合酶一２（ｃｏｘ一２）、血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）和碱性成纤维生长因子（ｂＦＧＦ）表达的调控。【方 法】将肝癌细胞ＨｅｐＧ２种植至裸鼠背部皮下，１０ ｄ后开始用不同浓度ＥＧＣＧ治疗，３８ ｄ后处死。观测裸鼠移植瘤的体积和质 量。并采用间接免疫流式细胞术和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法检测移植瘤ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的表达，用免疫组化法检测微血管密度 （ＭＶＤ）。【结果】①生理盐水组切除的移植瘤平均体积和质量分别是（１１７４．６±７９３．５）ｍｍ 和（０．５７２±０．１３８）ｇ，ＥＧＣＧ ５０ ｍｇ／ 组分别为（６４９．３±１００．８）ｍｍｓ和（０．３４０±０．０６６）ｇ，两组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＣＧ ５０ ｍｇ／ｋｇ组抑瘤率为 ４０．５６％。②生理盐水对照组和ＥＧＣＧ ５０ｍｇ／ｋｇ组的ＭＶＤ值分别为２３．２４￣１．７６和１４．２７￣１．２５，两组差异有统计学意义（Ｐ＜ ０．０１）：间接免疫荧光流式细胞术和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测结果提示ＥＧＣＧ呈浓度依赖性地抑制人肝癌细胞ＨｅｐＧ２移植瘤中 ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的表达。【结论】ＥＧＣＧ具有抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用；同时能抑制肝癌移植瘤内新生血管 内皮细胞的生长，其机制可能与抑制ＣＯＸ一２的表达以及由此引起的ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ蛋白表达降低有关。 关键词：ＨｅｐＧ２细胞；裸鼠移植瘤；新生血管生成；ＣＯＸ一２；ＶＥＧＦ；ｂＦＧＦ 中图分类号：Ｒ７３—３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２．３５５４（２０１３）０３—０３６４—０７ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＧＣＧ ｏｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ・２，ＶＥＧＦ，ａｎｄ ｂＦＧＦ ｉｎ Ｎｕｄｅ Ｍｉｃｅ Ｘｅｎｏｇｒｆｔｓ Ｔｕｍｏｒ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＨｅｐＧ２ Ｃｅｌｌｓ ＺＨＯＵ Ｗｅｉ ，ＤＡＩ Ｑｉ－ｇａｎｇ２，ＤＥＮＧ Ｘｉｎ ，ＲＯＮＧ Ｌｕａｎ—ｊｕｎ ，ＷＡＮＧ Ｙｉｎｇ—ｇｕｉ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １００８０，Ｃｈｉｎａ； ３．ｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｒｕｉｋａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔｌａ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３００１ １，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ（一）一Ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ一３－ｇａｌｌａｔｅ（ＥＧＣＧ）ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＧＣＧ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ－２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２），ＶＥＧＦ（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ），ａｎｄ ｂＦＧＦ（ｂａｓｉｃ ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔ ｒｇｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｘｅｎｏｇｒｆｔｓ ｔｕｍｏｒ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＨｅｐＧ２ Ｃｅｌｌｓ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｄｏｒｓａｌ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ａｔｈｙｍｉｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＧＣＧ １０ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ａｆｔｅｒ ３８ ｄａｙｓ．Ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ一２，ＶＥＧＦ，ａｎｄ ｂＦＧＦ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｓｓａｙ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ（ＭＶＤ） ｕｓｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｓｍａｌｌｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｔｕｍｏｒ ｗｅｉｇｈｔ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｌｉｇｈｔｅｒ ｉｎ ＥＧＣＧ ５０ｍｇ／ｋｇ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｏｕｐ［（１１７４．ｇ６±７９３．５）ｍｍ３ ｖｓ（６４９．３±１００．８）ｍｍ ａｎｄ（Ｏ．５７２± ０．１３８）ｇ ｖｓ（０．３４０±０．０６６）ｇ，Ｐ＜Ｏ．０５］．Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ４０．５６％．ＭＶＤ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｈｔｅ ｓａｌｉｎｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＥＧＣＧ ５０ ｍｇ／ｋｇ ｗｅｒｅ（２３．２４±１．７６）ａｎｄ（１４．２７±１．２５），ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（Ｐ＜０．０１）； ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｙ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｒｎ Ｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ＥＧＣＧ ｗａｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ 收稿日期：２０１２一ｌｌ一２８ 基金项目：广西壮族自治区科学技术厅青年基金（桂科青０８３２０５６） 作者简介：周薇，医学硕士，主治医师，主要从事肿瘤病理学研究， 通信作者，周薇 第３期 周薇，等．ＥＧＣＧ对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２裸鼠移植瘤ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ表达的调控 ３６５ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ－２，ＶＥＧＦ ａｎｄ ｂＦＧＦ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ］ＥＧＣＧ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌ ｘｅｎｏｇｆｆｔｓ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ．Ｉｔ＇ｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＣＯＸ－２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｓｕｌｒｔｉｎｇ ＶＥＧＦ ａｎｄ ｂＦＧＦ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｏｗｅｒ ｔｈｅｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＨｅｐＧ２ ｃｅｌｌｓ；ｘｅｎｏｇｒｆｔｓ；ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ；ＣＯＸ－２；ＶＥＧＦ；ｂＦＧＦ ［Ｊ ＳＵＮ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ Ｓｃｉ），２０１３，３４（３）：３６４－３７０］ 绿茶具有抗血管生成作用，作为绿茶最重要 的活性成分一表没食子儿茶素没食子酸脂 （ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ ｇａｌｌａｔｅ，ＥＧＣＧ）也显示具有抗血 Ｓｉｇｍａ公司，纯度９５％）将其溶于ＰＢＳ中，过滤除 菌后于４℃保存备用。阳性对照试剂为重组人血管 内皮抑制素注射液（山东先声麦得津生物制药有 管生成活性［ 。环氧合酶一２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２， ＣＯＸ一２）已经成为肿瘤防治的新靶点之一，ＣＯＸ一２ 在细胞调控、免疫抑制、细胞凋亡、促进肿瘤新生 血管生成及促进肿瘤浸润、转移等方面都有一定 的作用。因此ＣＯＸ一２的抑制剂在肿瘤治疗中具有 广阔的应用前景。既往研究及我们前期工作提示 ＥＧＣＧ能够抑制肿瘤的生长和ＶＥＧＦ的表达及 ＥＧＣＧ能通过抑制ＣＯＸ一２蛋白的表达诱导肝癌细 胞的凋亡［ｓ ，同时基于国内外的文献报道，ＣＯＸ一 ２蛋白和ＶＥＧＦ蛋白表达具有相关性，且两者均具 有促进肿瘤血管生成的作用 ］，因而，阐明两者 之间的关系或许就能找出ＥＧＣＧ抗肿瘤血管生成 的机理，为临床提供新的治疗靶点和理论依据。本 研究采用体内模型方法研究ＥＧＣＧ对肝癌裸鼠移 植瘤生长的抑制作用及对血管生成的抑制作用， 旨在探讨ＥＧＣＧ在体内对ＨｅｐＧ２肝癌细胞裸鼠 移植瘤ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的蛋白表达的调 控，为其在肝癌防治中的应用提供实验依据。 １材料与方法 １．１细胞培养 人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２由中科院上海细胞库提 供，用含１００ ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＲＰＭＩ一１６４０培养 基（含青霉素１００ Ｉｘｇ／ｍＬ、链霉素１００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ）在 ３７℃、饱和湿度和体积分数为５％的ＣＯ：的恒温培 养箱中培养。选取对数生长期细胞进行实验。 １．２动物饲养 ４周龄ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠，２５只，均为雄性，体质 量１４～１６ ｇ，购自广东省医学实验动物中心，实验 动物质量合格证明编号：００６６３１０，ＳＰＦ级屏障系 统饲养。 １．３药物和试剂 表没食子儿茶素没食子酸脂（ＥＧＣＧ，美国 限公司）。ＲＰＭＩ一１６４０培养液为Ｇｉｂｃｏ公司产品， 新生牛血清购自杭州四季青生物工程公司。鼠抗 人ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ单克隆抗体、ＨＲＰ标记羊 抗鼠ＩｇＧ抗体和ＦＩＴＣ标记羊抗鼠抗体ＩｇＧ抗体 均由北京中杉生物技术有限公司提供。即用型 ＳＡＢＣ试剂盒及ＤＡＢ显色剂购自武汉博士德公 司．ＣＤ３１单克隆抗体购自福州迈新公司。流式细 胞仪为美国ＢＤ公司产品（ＦＡＣＳ４２０），垂直电泳槽 和电泳仪为德国伯乐产品。 １．４裸鼠异种移植瘤模型构建 用无菌ＰＢＳ调整ＨｅｐＧ２细胞浓度为１．５×１０ 个／ｍＬ。在裸鼠背部皮下接种ＨｅｐＧ２细胞悬液０．２ ｍＬ，用游标卡尺测量移植瘤最长径（ ）和最短径 （ ），按公式Ｖ＝Ｌ×Ｗ ×０．５２计算瘤体积。待肿 瘤体积达１００ ｍｍ３左右时，将裸鼠随机分为５组， 每组４只。分别为生理盐水组即Ａ组，重组人血管 内皮抑素３ ｍｇ／ｋｇ组即Ｂ组，ＥＧＣＧ １０ ｍｇ／ｋｇ组即 Ｃ组。ＥＧＣＧ ３０ ｍｓ／ｋｓ组即Ｄ组，ＥＧＣＧ ５０ ｍｇ／ｋｇ组 即Ｅ组。隔日按体质量腹腔注射给药０．１ ｍＬ／１０ ｇ， 连续给药２８ ｄ。给药期间每４ ｄ测量鼠体重及移 植瘤体积。末次给药４８ ｈ后用颈椎脱臼法处死裸 鼠，切取移植瘤，记录瘤重。 １．５ ＭＶＤ计数 石蜡包埋的５ ｍ厚肿瘤组织切片用于免疫 组化检测，内皮细胞通过ＣＤ３Ｉ多克隆抗体确认， 肿瘤微血管密度通过Ｗｅｉｄｎｅｒ的方法计算。血管 内皮细胞染成棕黄色为阳性表达，以与周围肿瘤 细胞和结缔组织成份明显区别的任何一个表现为 棕染的内皮细胞或细胞丛为一个血管，只要结构 不相连接，其分支结构也记为一个微血管。每例先 在低倍镜下（×１００）选择微血管密度最高的肿瘤 区域，然后再高倍镜下（Ｘ ４００）随机计数５个视野 内微血管数，再求其平均值作为血管密度。阴性对 照染色中。用ＰＢＳ代替一抗。 ３６６ 中山大学学报（医学科学版） 第３４卷 １．６间接免疫荧光流式细胞术检测移植瘤细胞 ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的表达情况 切取不同处理组组织块．网搓法制备单细胞 悬液，取１×１０６／ｍＬ细胞悬液，１２００ ｒ／ｍｉｎ，ｒ＝８ ｃｍ离心５ ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤后，悬浮于染色液（ＰＢＳ＋ ０．１％ｔｒｉｔｏｎＸ一１００＋１０％羊血清）中３０ ｍｉｎ，以增加 细胞膜的通透性，并封闭非特异性抗体结合部位。 间接免疫荧光法标记，分别加人染色液１：１００稀 释的鼠抗人ＣＯＸ一２、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ单抗各２０ 后，３７℃孵育６０ ｍｉｎ。同时设立阴性对照组：用 ＰＢＳ代替一抗。ＰＢＳ洗涤后加入染色液１：２００稀 释的ＦＩＴＣ标记的二抗各２０ ，混匀，避光室温孵 育３０ ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤，除去未结合的荧光抗体，将 细胞重悬于１ ｍＬ ＰＢＳ中，过滤后上机检ｉ贝４。测定 数据按流式细胞仪所配置的软件进行数据处理。 计数１０ ０００个活细胞，以阳性细胞的平均荧光强 度（ＭＦＩ）表示细胞的蛋白表达量。 １．６ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测移植瘤细胞ＣＯＸ一２、 ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的表达 于一８Ｏ℃冰箱中称取组织０．２ ｇ，以预冷的 ＰＢＳ洗涤３次并用眼科剪将组织剪碎于ＥＰ管中， 将组织转人匀浆器．再加入组织裂解液于４ ａ【＝研 磨，裂解３０ ｍｉｎ，离心，吸出上清液，考马斯亮兰蛋 白定量。１０％十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电 泳分离蛋白后，３８＇０ Ｖ电转移３０ ｍｉｎ，蛋白转移至 硝酸纤维素膜，５％脱脂奶粉封闭过夜。去离子水 漂洗硝酸纤维素滤膜，加入一抗，３７ ｃＩ＝孵育２ ｈ， ＰＢＳ漂洗。在封闭液中稀释碱性磷酸酶标记的羊 抗鼠二抗，３７℃孵育１ ｈ，ＰＢＳ漂洗３次。滤膜放在 新鲜配制的ＮＢＴ／ＢＣＩＰ底物溶液中显色２０ ａｒｉｎ。 １．７统计学处理 采用ＳＰＳＳ １５．０统计软件进行数据处理，配对 资料采用ｔ检验，多组间比较采用方差分析。 ２ 结 果 ２．１ ＥＧＣＧ对裸鼠移植瘤生长的影响 ４周龄裸鼠接种后。于６—１０ ｄ肉眼可见移植 瘤长出。２５只裸鼠无１例复种，均形成移植瘤，成 瘤率为１００％。至实验结束２４只存活良好，重组人 血管内皮抑素组中１只因意外死亡未参加统计结 果分析。实验结束时各组裸鼠体重均有小幅增加， 实验组与生理盐水组相比无显著性差异。ＥＧＣＧ 高剂量组（５０ ｍｇ／ｋｇ）的瘤重与生理盐水组相比抑 瘤率为４０．５６％，ＥＧＣＧ高剂量组瘤重与生理盐水 对照组结果见图１及表１．两组结果有显著差异 （Ｐ＜０．０５）。 ２．２ ＥＧＣＧ对移植瘤ＭＶＤ表达的影响 ＣＤ３１抗体主要表达于血管内皮及单个内皮 细胞．免疫组织化学染色结果显示与生理盐水对 照组相比ＥＧＣＧ ５０ ｍｇ／ｋｇ组肿瘤组织内ＣＤ３１阳 性染色的毛细血管数量显著减少（图２），生理盐 水对照组ＭＶＤ值为２３．２４±１．７６．ＥＧＣＧ ５０ ｍｇ／ｋｇ 组ＭＶＤ值为１４．２７±１．２５，与对照组相比，差异有 统计学意义（￡＝３．７７，Ｐ＜０．０１）。 ２．３ ＥＧＣＧ对移植瘤组织内ＣＯＸ一２的表达情况 间接免疫荧光流式细胞术结果显示，生理盐 水对照组移植瘤组织中ＨｅｐＧ２细胞的平均荧光 强度比较高。ＣＯＸ一２蛋白表达荧光强度为５７．０５ ４－ ８．９３，ＥＧＣＧ １０、３０、５０ ｍｇ／ｋｇ组移植瘤组织中 ＨｅｐＧ２细胞的平均荧光强度（Ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）呈浓度依赖性地下降，ＣＯＸ一２蛋白表达 荧光强度分别为４６．１１±７．９８、２５．６５ ４－５．２９、１８．９０ ±４．８８。其中３Ｏ、５０ ｍｇ／ｋｇ组与对照组相比，差异 有统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１）。此结果表明ＥＧＣＧ可抑 制移植瘤中ＨｅｐＧ２细胞ＣＯＸ一２的表达（图３Ａ）。 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析灰度扫描显示，对照组ＣＯＸ一２ 蛋白表达为１－３１±０．０４，ＥＧＣＧ １０、３、５０ ｍｇ／ｋｇ组 ＣＯＸ一２蛋白表达分别为１．１４±０．０２、０．９３ ４－０．０１、 ０．７１ ４－０．０３，其中３０、５０ ｍｇ／ｋｇ组与对照组相比， 差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。此结果表明ＥＧＣＧ可呈 浓度依赖性抑制移植瘤中ＨｅｐＧ２细胞ＣＯＸ一２的 表达（图３Ｂ）。 ２．４ ＥＧＣＧ对移植瘤组织内ＶＥＧＦ和ｂＦＧＦ的 表达情况 间接免疫荧光流式细胞术结果显示。生理盐 水对照组移植瘤组织中ＨｅｐＧ２细胞的ＶＥＧＦ蛋白 平均荧光强度为８３．７７±９．０５，ＥＧＣＧ １０、３０、５０ ｍｇ／ｋｇ组移植瘤组织中ＨｅｐＧ２细胞ＶＥＧＦ蛋白表 达荧光强度分别为５９．２９ ４－７．４５、４６．９０ ４－６．８０、 ３１．６５±５．３４。其中１０、３０、５０ ｍｇ／ｋｇ组与对照组相 比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．Ｏ１）。此结果表明 ＥＧＣＧ可呈浓度依赖性抑制移植瘤中ＨｅｐＧ２细胞 ＶＥＧＦ的表达（图４Ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析灰度扫描 显示，对照组ＶＥＧＦ蛋白表达为１．２３ ４－０．０３， ＥＧＣＧ １０、３０、５０ ｍｇ／ｋｇ组ＶＥＧＦ蛋白表达分别为