中草药免疫增强剂对断奶仔猪免疫功能的影响

江苏农业科学２００６年第３期　一１３１一　中草药免疫增强剂对断奶仔猪免疫功能的影响　谢红兵。，黄志坚　，陈强　，江和基　，陈勤光　（１．河南科技学院动物科学学院，河南新乡４５３００３；２．福建农林大学动物科学学院，福建福州３５０００２；　３．福建省南平猪业有限公司，福建南平３５３０００）　摘要：选用９０头体重为６　ｋｇ左右的“杜长大”三元杂交猪，根据体重相近、公母各半的原则分为比较组和中　药组，每组３个重复，研究中草药对断奶仔猪免疫功能的影响。结果表明：中草药饲料添加剂能明显改善断奶仔　猪的生产性能，与对照组相比较，在血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白和免疫球蛋白ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ及补体ｃ，、ｃ　的含　量，ＩＬ一２、　一ＩＦＮ的含量等均有显著的提高；ＣＤ３、ＣＤ　、ＣＤ８含量均无显著变化（Ｐ＞０．０５），但ＣＤ　／ＣＤ８的比值差　异极显著（Ｐ＜０．０１）。　关键词：中草药；饲料添加剂；断奶仔猪；生产性能；免疫功能　中图分类号：￥８２８．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２—１３０２（２００６）ｏ３—０１３１—０３　中草药饲料添加剂具有天然性、资源丰富、低毒　性与无抗药性、经济实用性、多功能性、环境保护性　中草药），每组设３个重复，每个重复１５头。猪Ｅｔ喂　４次，采用干拌料，自由饮水。预试期７　ｄ，预试期间　的优点和促进生长、提高饲料报酬转化率、抗菌驱　对试验猪进行驱虫及防疫。正试期５０　ｄ，正试期间　记录每Ｅｔ采食量和猪群的情况，对患病仔猪给予一　定治疗。饲养结束后，于早晨空腹称重。　１．１．２中药药物血的作用。　虫、抗病毒、增强免疫力、预防疾病、提高生产性能、　提高繁殖力、减小应激作用、增加动物的耐受力、提　高肉品品质、改善肉品风味、促进泌乳、改善乳的品　质的作用特点已得到了证实¨　Ｊ，但中草药饲料添　由绞股蓝、茵陈、板蓝根、甘草４　味中药组配而成，具有化积解毒、活血化瘀、调和气　１．１．３抗生素添加剂抗生素为泰乐菌素１２０　ｇ＋　加剂如何提高断奶仔猪的免疫功能方面的研究比较　少。本试验选用绞股蓝、茵陈、甘草、板蓝根等药用　植物，应用中药多功能提取器提取其有效生物活性　物质，并浓缩喷雾成干燥制粉，按不同的比例组合并　精制成饲料添加剂，目的是研究在断奶仔猪饲料中　添加中草药饲料添加剂对生产性能和免疫功能的影　硫酸抗敌素２５　ｇ，在饲料中的添加量为０．０２４％。　１．１．４供饲Ｅｔ粮参照我国断奶仔猪的饲养标准，　按照营养需要配制成全价日粮，配方及主要营养指　标见表１。　寝ｌ　试验饲料配方及营养成分　配比（％）　响，旨在探讨药用植物防病、促生长和提高机体抗病　力的作用机理，为精制中草药饲料添加剂的临床推　广应用提供科学依据。　１材料与方法　１．１材料　组分　保育　保育　营养鼢黼　一阶段　二阶段　５６　ｌ８　２．５　６５　１６　１．５　ｌ０　１．５　２　ＤＥ（Ⅲ／ｋｇ）　ＣＰ（％）　Ｌｙｓ（％）　１３．８４　１９．１　１．１８　１３．１０　１８．５　１．１　玉米　豆粕　鱼粉　１．１．１　试验动物　使用９Ｏ头６　ｋｇ左右的“杜长　大”三元杂交猪作为试验猪，根据体重相近、公母各　乳清粉　豆粉　牛至油　５　１０　２　Ｍｅｔ＋Ｃｙｓ（％）Ｃａ（％）Ｐ（％）０．６５　０．９５　０．６９　０．６１　０．９０　０．６０　半的原则将其分为对照组（加抗生素）、试验组（加　收稿日期：２００５—０９—０５　柠檬酸　酵母　ｏ．５　２　预混料４　４　基金项目：福建省科技厅项目（编号：２００４２０６５）；福建省教育厅科技　项目（编号：Ｋ０３０１６）。　氯化胆碱、蛋氨酸、赖氨酸、亚硒酸钠　复合酶、磷酸氢钙等。　作者简介：谢红兵（１９７６一），男，湖北洪湖人，硕士，讲师，从事动物　营养与免疫研究。Ｔｅｌ：（０３７３）３０４０８３２；Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｈｂ—ｌｈｍ＠１２６．　ｃｏｒｎ。通讯作者：黄志坚（１９６３一），男，硕士，副教授。　１．２试验方法　１．２．１　中药的配制采用减压控温方法，温度控制　维普资讯 http://www.cqvip.com

一１３２一　江苏农业科学２００６年第３期　在５５—６０℃，压力在一０．０５　ＭＰａ（低压），水煮、醇　ＣＡ．９５１１２　ＵＳＡ提供。采用美国Ｃｏｌｔｅｒ公司ＥＰＩＣＳ　提浓缩、过滤成浸膏，然后加入载体淀粉（１：１）混　—ＸＬ流式细胞仪检测外周血Ｔ淋巴细胞亚群的　合、烘干、粉碎而成。　含量。　１．２．２血清的制备饲养试验结束后，从每个组每　１．２．４数据处理与分析试验数据以平均数±标　个重复中各选体重为３５　ｋｇ左右的猪４头，公母各　准差表示，进行单因素多重复方差分析，所有数据用　半，共６０头，禁食２４　ｈ，自由饮水，于前腔静脉采血　ＳＰＳＳ　１０．０统计软件进行单因素方差分析和最小显　１０　ｍｌ，取２　ｍｌ肝素抗凝血用于淋巴细胞亚群的测　著法进行数据分析与处理。　定，其他于３７℃水浴静置，待析出血清时，于３　５００　ｒ／ｍｉｎ离心１５　ｒａｉｎ，上清液分装于管中，然后封口置　２结果与分析　于一７０℃低温冰箱中保存。　２．１　中草药饲料添加剂对断奶仔猪生产性能的　１．２．３血清中免疫指标的测定血清中总蛋白、白　影响　蛋白、球蛋白、免疫球蛋白ＩｇＡ、免疫球蛋白ＩｇＭ、免　中草药饲料添加剂对断奶仔猪生产性能影响的　疫球蛋白ＩｇＧ及补体ｃ　、ｃ　的含量，均用上海迅达　结果见表２。从表２可见，与加抗生素的对照组相　医疗仪器公司生产的ＸＤ８１１半自动生化分析仪，采　比较，试验组的日增重提高１６．３％（Ｐ＜０．０５），腹泻　用散射速率比浊法测定，测定试剂盒购自伊利康生　率下降６９．８％（Ｐ＜０．０５）。　物技术有限公司。Ｔ淋巴细胞ＡＮＡＥ阳性率采用酸　２．２　中草药饲料添加剂对断奶仔猪血清免疫指标　性　一醋酸萘酯染色法（ＡＮＡＥ法）。ＩＬ一２、＾ｙ一干　的影响　扰素　一ＩＦＮ用ＥＬＩＳＡ方法检测，ＩＬ一２和＾ｙ—ＩＦＮ　中草药饲料添加剂对断奶仔猪血清免疫指标影　试剂盒均由ＭＡＲＫＥＴ　ＩＮＣ．ＳＴＥ．１１７．ＳＡＮ　ＪＯＳＥ．　响的结果见表３。　表２试验期中草药对断奶仔猪生产性能的影响　注：表中同一列数字后字母相同者表示差异不显著（Ｐ＞Ｏ．０５），相邻者表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相问者表示差异极显著（Ｐ＜０．Ｏ１）。　表３　中草药饲料添加剂对断奶仔猪血清免疫指标的影响　机体蛋白质的一个来源，用于修补组织和提供能量；　仔猪血清球蛋白来源于浆细胞的分泌，球蛋白主要　包括抗体分子与补体成分，故血清球蛋白的上升，在　一定程度上反映了机体抗体水平的上升。从表３可　以看出，添加中药的试验组与添加抗生素的对照组　相比较，总蛋白、白蛋白、球蛋白的含量分别提高　１８．４％（Ｐ＜０．０５）、２０．１％（Ｐ＜０．０５）和１６．６％　（Ｐ＜０．０５）。添加中草药能显著提高总蛋白、白蛋　白的含量，增加蛋白质在体内的沉积，提高断奶仔猪　的机体抗体水平。　２．２．２血清中免疫球蛋白ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ的变化　注：表中同一行数字后字母相同者表示差异不显著（Ｐ）０．０５）．　相邻者表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相问者表示差异极显著（Ｐ（　ＩｇＧ有抗菌、抗病毒作用，抗毒素也主要为ＩｇＧ，它能　０．Ｏ１）。　中和毒素使其失去毒性，调理、凝聚和沉淀抗原。　ＩｇＭ是机体初次接触抗原物质最早产生的抗体，也　２．２．１　血清总蛋白、白蛋白水平的变化血清总蛋　有抗菌、抗病毒和中和毒素的功能，在机体受到病原　白、白蛋白的含量与机体蛋白质的吸收和代谢状况　感染后与补体结合。ＩｇＡ是外分泌液中的主要Ｉｇ，　有关，仔猪的血清白蛋白由动物肝脏合成，除作为许　同样具有抗菌、抗病毒、抗毒素作用，对机体呼吸道、　多营养物质的载体外，还维持血清渗透压，同时又是　消化道等局部黏膜免疫起着相当重要的作用，特别　维普资讯 http://www.cqvip.com

谢红兵等：中草药免疫增强剂对断奶仔猪免疫功能的影响　一１　３３一　是对于一些黏膜感染的病原微生物具有抗感染作　用。从表３可以看出，添加中药的试验组与添加抗　分化，促进细胞毒性Ｔ前体细胞分化为细胞毒性Ｔ　细胞，并增强其杀伤效应，并可促进ＮＫ细胞功能及　释放免疫干扰素，具有显著的抗肿瘤作用，并能抵御　病毒性感染。　一干扰素是由脊椎动物细胞产生的　一生素的对照组相比较，免疫球蛋白ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ分　别提高８０％（Ｐ＜０．０５）、３３％（Ｐ＜０．０５）、３８％（Ｐ＜　０．０５）。表明在饲料中添加中草药能增强动物机体　抗菌、抗毒素和抗病能力。　２．２．３血清中补体ｃ　、ｃ　的含量变化补体是特　类蛋白，具有广谱的抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞　的作用。从表３可以看出，添加中草药的试验组与　添加抗生素的对照组相比较，在ＩＬ一２、　一ＩＦＮ方面　分别提高２６．５％（Ｐ＜０．０５）和１１．１％（Ｐ＜０．０５）。　生长以及免疫调节等多种生物活性和双向免疫调节　异性免疫的主要组成成分，协助抗体和吞噬细胞杀　灭病原微生物和加强细胞免疫功能。从表３可以看　出，添加中草药的试验组与添加抗生素的对照组相　比较，在补体Ｃ　、ｃ　方面分别提高４０％（Ｐ＜０．０５）　和４５％（Ｐ＜０．０５）。　结果表明，添加中草药能改善机体细胞免疫功能。　２．３　中草药饲料添加剂对断奶仔猪外周血Ｔ淋巴　细胞亚群及Ｔ细胞阳性率的影响　中草药饲料添加剂对断奶仔猪外周血Ｔ淋巴　细胞亚群及Ｔ细胞阳性率影响的结果见表４。　２．２．４血清中ＩＬ一２、　—ＩＦＮ水平的变化ＩＬ一２　具有广谱的免疫增强活性，可诱导Ｔ与Ｂ细胞增殖　表４　中草药饲料添加剂对断奶仔猪外周血Ｔ淋巴细胞亚群及Ｔ细胞阳性率的影响　注：表中同一列数字后字母相同者表示差异不显著（Ｐ＞Ｏ，０５），相邻者表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相间者表示差异极显著（Ｐ（ｏ，Ｏ１）。　２．３．１　断奶仔猪外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化　机体维持正常的免疫功能状态，有赖于各种免疫细　胞（特别是各类Ｔ细胞亚群）之间的相互协作或相　互制约，以产生适度的免疫应答，既能清除异物抗　原，又能不损伤机体自身组织。正常情况下，Ｔ细胞　及其亚群的数目在周围组织中相对稳定。免疫细胞　中ＣＤ　（Ｔ辅助细胞）和ＣＤ　（Ｔ抑制细胞）为两种主　要的免疫调节细胞，其分泌的各种因子（目前所知　的白介素２和肿瘤坏死因子均由ＣＤ　细胞产生）对　３小结与讨论　添加中草药的试验组与加抗生素的对照组相比　较，能增加断奶仔猪的日增重，提高其生产性能；并　能提高动物机体的非特异性免疫功能和特异性免疫　功能，显著降低断奶仔猪的腹泻率。故在断奶仔猪　饲料中添加一定量的中草药免疫添加剂能在一定程　度上减少和替代部分抗生素的使用，能有效提高机　体的抗病力，减少断奶仔猪腹泻病的发生。这对于　无公害猪肉生产具有一定的意义。　利用中草药有效成分作为饲料添加剂来提高畜　禽免疫功能、促进生长的应用研究较多，但作用机理　了解还不够，许多研究工作还应深入。我们认为还　必须进行以下几个方面的研究：（１）中草药有效成　分提取最佳方法和条件；（２）中草药方剂中发挥功　效的成分确定；（３）建立体外培养条件，探讨中草药　成分的免疫增强作用和机理，更有效地筛选出免疫　细胞免疫、体液免疫均有调节作用，ＣＤ　／ＣＤ　值一　旦失衡，则机体免疫系统发生改变。ＣＤ　／ＣＤ　值降　低是疾病严重程度和预后不良的主要标志之一。从　表４可以看出，添加中草药的试验组与添加抗生素　的对照组相比较，在ＣＤ　、ＣＤ　、ＣＤ。等方面差异不显　著，但在ＣＤ　／ＣＤ。方面差异极显著（Ｐ＜０．０１）。故　在饲料中添加中草药饲料添加剂能提高动物机体的　抗病和免疫能力。　２．３．２　Ｔ细胞阳性率的变化从表４可以看出，添　加中药的试验组与添加抗生素的对照组相比较，在　Ｔ淋巴细胞阳性率方面提高１０：７％（Ｐ＜０＋０５），Ｔ　细胞阳性率的变化可初步反映机体细胞免疫功能的　高低和抵抗力的高低。　增强作用较好的中草药成分；（４）研究符合动物不　同生长时期特性和生理需要的专用型功能性中草药　饲料添加剂，逐步形成系列产品，提高产品的专一性　和效果的针对性、显著性，从而真正发挥中草药的天　然、无害优势；（５）设计方剂时还应考虑到地区差　（下转第１４０页）　维普资讯 http://www.cqvip.com

一１４０一　江苏农业科学２００６年第３期　７６．　中国兽医学报，２００２，２２（３）：２９５—２９９．　［２］Ｐｕｒｓｅｌ　ＶＧ，Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＬＡ．Ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ：Ｆｅｒｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｃａ－　［１２］李青旺，江中良，王立强，等．猪精液冷冻保存的初步研究［Ｊ］．　ｐａｃｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｓｅｍｅｎ　ａｎｄ　ａ　ｎｅｗ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ［Ｊ］，Ｊ　西北农林科技大学学报，２００３。３１（４）：６３—６６．　Ａｎｉｍ　Ｓｃｉ，１９７５，４０：９９—１０２．　［１３］Ｐｅｎａ　ＦＪ，Ｊｏｈａｎｎｉｓｓｏｎ　Ａ，Ｗａｌｌｇｒｅｎ　Ｍ。ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ　［３］Ｙｉ　ＹＪ，Ｉｍ　ＧＳ，Ｐａｒｋ　ＣＳ．Ｌａｃｔｏｓｅ—ｅｇｇ　ｙｏｌｋ　ｄｉｌｕｔｅｒ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｒｍ　ｍｏｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｌｉｐｉｄ　ａｒｃｈｉ—　Ｎ—－ａｃｅｔｙｌ—－Ｄ—－ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ　ａｆｆｅｃｔ　ａｃｒｏｓｏｍｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｍｏｔｉｌｉｔｙ　ｔｅｃｔｕｒｅ　ｓｔａｔｕｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ。２００４。６１　ｏｆ　ｆｒｏｚｅｎ—ｔｈａｗｅｄ　ｂｏｒａ　ｓｐｅｍｒ［Ｊ］．Ａｎｉｍａｌ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　（１）：６３—７０．　２００２．７４（３／４）：１８７—１９４．　［１４］Ｂｒｅｉｎｉｎｇｅｒ　Ｅ，Ｂｅｏｒｌｅｇｕｉ　ＮＢ。Ｏ　Ｆｌａｈｅｒｔｙ　ＣＭ．Ａｌｐｈａ—ｔｏｃｏｐｈｅｍｌ　ｉｍ—　［４］Ｍｅｄｒａｎｏ　Ａ，Ｗａｔｓｏｎ　ＰＦ，Ｈｏｈ　ＷＶ．Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｃｏｏｌｉｎｇ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｖｅｓ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｄｙｎａｍｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｉｎ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｂｏａｒ　ａｎｉｍａｌ　ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ　ｆｏｒ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｒｍ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓ￣ｍｅｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００５，６３（８）：２１２６—２１３５．　ｃｒｙｏｍｉｃｍｓｃｏｐｅ［Ｊ］．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ。２００２。１２３（２）：３１５—３２２．　［１５］Ｇｕｈｔｒｉｅ　ＨＤ，Ｗｅｌｃｈ　ＧＲ．Ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｐｉｒｏｒ　ｔｏ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　［５］Ｇａｄｅａ　Ｊ，Ｇａｒｅｉａ—Ｖａｓｑｕｅｚ　Ｆ，ＭａｔａｓＣ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｏｌｉｎｇ　ａｎｄｆｅｒｅｚｉｎｇ　ｏｆ　ｏｎ　ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒｎａｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｏｂａｒ　ｓｐｅｍｒ［Ｊ］．Ｔｉｌｅｒ－　ｏｂａｒ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ：ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｅｒｅｚｉｎｇ　ｍｅｄｉａ　ｗｉｔｈ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００５，６３（２）：３９６—４１０．　ｇｌｕｔａｈｔｉｏｎｅ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｓ　ｓｐｅｍｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ａｎｄｒｏｌ，２００５，２６（３）：　［１６］Ｃａｒｖａｊａｌ　Ｇ，Ｃｕｅｌｌｏ　Ｃ。Ｒｕｉｚ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ　ｂｅ—　３９６—４０４．　ｆｏｒｅｆｒｅｅｚｉｎｇ　ｏｎ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｍｒ　ｃｒｙｏｓｕｒｖｉｖａｌ［Ｊ］，Ｊ　Ａｎｄｒｏｌ，２００４，２５　［６］Ｇａｄｅａ　Ｊ，Ｇｕｍｂａｏ　Ｄ，Ｍａｔａｓ　ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｔｅ　ｔｈａｗｉｎｇ　（３）：３８９—３９６．　ｍｅｄｉａ　ｗｉｔｈ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒ－　［１７］Ｓａｒａｖｉａ　Ｆ，Ｗａｌｌｇｒｅｎ　Ｍ．Ｎａｇｙ　Ｓ．Ｄｅｅｐ　ｆｅｒｅｚｉｎｇ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｂｏａｒ　ｔｉｌｉｚｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｏｂａｒ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ　ａｆｔｅｒ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ａｎ－’　ｓｅｍｅｎ　ｆｏｒ　ｉｎｔｒａ　ｕｔｅｒｉｎｅ　ｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ：ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｓｐｅｒｍ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．　ｄｍｌ，２００５，２６（６）：７４９～７５６．　Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００５，６３（５）：１３２０—１３３３．　［７］Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｆ　Ｐ，Ｒｉｃｈｔｅｒ．Ｚｕｒ　ｔｉｅｆｇｅｆｒｌｅｒｕｎｇ　ｖｏｎ　ｅｂｅｒｓｐｅｒｍａ：Ｌａｂｏｒ—　［１８］Ｆｉｓｅｒ　ＰＳ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｇｌｕｃｅｅｒｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｏｌｉｎｇ　ｖｅ．　ｕｎｄ　ｂｅｓａｍｕｎｇｓｅｒｇｅｂｎｉｓｓｅ　ｍｉｔ　ｄｅｍ　ｈｉｉｌｓｅｎｂｅｒｇｅｒ　ｐａｉｌｌｅｔｔｅｎ—ｖｅｒｆａｈｒｅｎ　１ｏｅｉｔｙ　ｏｎ　ｍｏｔｉｈｙ　ａｎｄ　ａ￣３１＂ｏｓｏｍａｌ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ　ｆｒｏｚｅｎ　［Ｊ］．Ｄｔｓｅｈ　Ｔｉｅｒａｒｚｌｆ　Ｗｓｃｈｒ，１９７５，８２：２６１—２６７．　ｉｎ　０．５　ｍｌ　ｓｒｔａｗｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｒｅｐｒｏｄ　Ｄｅｖ，１９９０，２５：１２３—１２９．　［８］Ｂｗａｎｇａ　ＣＯ，ｄｅ　Ｂｒａｇａｎｃａ　ＭＭ，Ｅｉｎａｒｓｓｏｎ　ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　［１９］Ｗｏｅｌｄｅｒｓ　Ｈ，Ｄｅｎ　Ｂｅｓｔｅｎ．Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｓｅｍｅｎ　ｗｉｔｈ　ｓｍａｌｌ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｓｅｍｅｎ　ｉｎ　ｍｉｎｉ—ａｎｄ　ｍａｘｉ—ｓｔｒａｗｓ『Ｊ］．Ｚｅｎｔｒａｌｂｌ　Ｖｅｔｅｒｉ—　ｂｅｔｗｅｅｎ—ｂｏａｒ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｓｔ—ｔｈａｗ　ｓｅｐｒｍ　ｓｕｒｖｉｖａｌ［Ｊ］．Ｃｒｙｏｂｉｏｌ—　ｎａｒｍｅｄ　Ａ，１９９０，３７（９）：６５１—６５８．　ｏｇｙ，１９９３，３０：６４５．　［９］Ａｌｉｍｉｄ　Ｔ，Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＬＡ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｇｌｙｃｅｅｒｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｑｕｉｌｉｂｒａ－　［２０］Ｐｕｒｓｅｌ　ＶＧ。Ｐａｒｋ　ＣＳ．Ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ａｎｄ　Ｔｈａｗｉｎｇ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｆｏｒ　Ｂｏａｒ　ｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｐｏｓｔ—ｔｈａｗ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　Ｓｐｅｒｍａｔｏｚａｏ［Ｍ］／／Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＬＡ，Ｌａｒｓｓｏｎ　Ｋ．Ｄｅｅｐ　Ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ｏｆ　Ｂｏｒａ　ｏｆｂｏａｒ　ｓｅｐｒｍａｔｏｚｏａ　ｆｒｏｅｚｎ　ｉｎ　ｓｔｒａｗｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｎｉｍ　Ｓｃｉ．１９８８，６６　Ｓｅｍｅｎ．Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ：ＳＬＵ，１９８５：１４７—１６６．　（１１）：２８９９—２９０５．　［２１］Ｇａｄｅａ　Ｊ，Ｓｅｌｌｅｓ　Ｅ，Ｍａｒｃｏ　ＭＡ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｃｅｒａｓｅ　ｉｎ　ｇｌｕｔａｔｈｉ０ｎｅ　ｃｏｎ—　［１０］Ｚｅｎｇ　ＷＸ，Ｔｅｒａｄａ　Ｔ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｒａ　ｓｅｐｒｍａｔｏｚｏａ　ｆｒｏｍ　ｃｏｌｄ　ｓｈｏｃｋ　ｔｅｎｔｉｎ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｒｍ　ａｆｔｅｒ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｔｈｅ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅ—　ｄａｍａｇｅ　ｂｙ　２一ｈｕｄｒｏｘｙｐｍｐｙｌ—ｂｅｔａ—ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｉｒｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎ—　ｄｕｃｅｄ　ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｔｏ　ｈｔｅ　ｒｆｅｅｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｃｘｔｃｎｄｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｒ－　ｄａｇｙ，２００１，５５：６１５—６２７．　ｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，２００４，６２（３／４）：６９０—７０１．　［１１］周佳勃，岳奎忠，孙兴参，等．猪精液冷冻技术的研究进展［Ｊ］．　（上接第１３３页）　料养分消化率的影响研究［Ｊ］．云南农业大学学报，２００２，１７（１）：　异、成本因素和畜禽采食量等综合因素，向精品化、　８ｌ一８５．　规范化、系列化方向发展。　［５］Ｖａｎ　Ｈｅｕｇｔｅｎ　Ｅ，Ｓｅｐｅａｒｓ　ＪＷ．Ｃｏｆｆ￣ｙ　ＭＴ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｍｅｈｔｉｏ—　ｎｉｎｅ　ａｎｄ　ａｆｌａｔｏｘｉｎ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｗｅａｎｉｎｇ　ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ａｎｉｍ。　参考文献：　１９９４，７２（３）：６５８—６６４．　［６］Ｓａａｌｍｌｌｅｒ　Ａ．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｙｍｉｃ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｈｙ　［１］扬元青，钱敏，袁书林．中草药饲料添加剂在养猪业中的应用　ａｒｉｎ　ＣＤ４，ＣＤｓ—ａｎｄ　ＣＤ４，ＣＤ８　ｐｒｏｃｉｎｅ　Ｔ　１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　［Ｊ］．动物科学与动物医学。２００２（９）：４７—４９．　Ｉｍｍｕｎｅ，１９８９，１９：２０１１—２０１６．　［２］莫伟文，雷建民。刘凤华，等．中草药饲料添加剂加工工艺及其应　［７］Ｃｈｅｎ　Ｆｕ　ｘｉａｎｇ，Ｔａｎｇ　Ｊｕｎ，Ｌｉ　Ｎｉｎｇ，ｅｔ　ａ１．ＳＬＡ　ｃｌａｓｓ　Ｉ　Ｍｌｄｅｓ　ｏｆ　ｃｈｉ—　用效果［Ｊ］．中国饲料，１９９７（１１）：３４—３５＋　ｎｅｓｅ　ｐｉｇ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｓｉｇｎｉｓｃｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｘｅｎｏｒｔａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．　［３］张先勤，葛长荣，田允波。等．中草药饲料添加剂对生长育肥猪胴　Ｃｅｌｌ　Ｒｅａｓｅａｒｃｈ，２００３，１３（４）：２８５—２９４．　体特性和肉质的影响［Ｊ］．云南农业大学学报，２００２，１７（１）：８６—　［８］张晋平，杜刚林，魏铜有，等．ＡＮＡＥ标记人周血淋巴细胞正常值　９０．　的探讨［Ｊ］．长治医学院学报，２００２，１５（４）：２４６—２４７．　［４］李崎华，高士争，葛长荣，等．中草药饲料添加剂对生长肥育猪饲