苍耳抑菌成分提取工艺

２００６年１Ｏ月　甘肃农业大学学报　第４　１卷　双月刊　第５期６７～７Ｏ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＧＡＮＳＵ　ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＵＮ１ＶＥＲＳＩＴＹ　苍耳抑菌成分提取工艺　杨顺义　，郭东艳　，沈慧敏　，张新虎　（１．甘肃农业大学草业学院，甘肃兰州　７３００７０；２．甘肃农业大学研究测试中心．甘肃兰州　７３００７０）　摘要：用４种不同的溶剂和连续回流、冷浸以及振荡３种方法对苍耳抑菌成分的提取工艺进行了研究，并以番茄灰　霉病菌、辣椒丝核病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜黑星病菌和番茄早疫病菌为供试真菌进行了抑菌效果比较，．结果表明，丙　酮、甲醇分别为苍耳茎叶和苍耳根的最佳提取溶剂，而连续回流提取法为最佳提取方法．　关键词：苍耳；抑菌成分；提取　中图分类号：Ｓ　４８２．２　９２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００３—４３１５（２００６）０５—００６７—０４　Ｅｘｔｒａｃｔｉｘｔｒａｃｔｌｏｎ　ｔｅｃｈｎｉＯｎ　ｔｅｃｈｎｉｑ　ｑＬｉｅ　ｏｔｏｆ　ｅｆｆ，　ｅｉＩｅｃｎｖｅ　ａｎｔｉ　＂　ａｎｔｉ　ｆ￣ｇａ１ｌ　ｃｏｍｐｏＳ１ｔｌＯｎｓ　ｌｎ　’　’　’　１　ａｎｔｈｚｕｍ　ｓｉｂｉｒｚＣ　’　●　‘＇‘　‘　ＹＡＮＧ　Ｓｈｕｎ—ｙｉ　，ＧＵＯ　Ｄｏｎｇ—ｙａｎ。，ＳＨＥＮ　Ｈｕｉ—ｍｉｎ　，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉｎ—ｈｕ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒｅ．Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０；　２．Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｃｅｎｔｅｒ．Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０．Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｅｆｆｅｃ～　ｔｉｒｅ　ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔ　Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉ￣。ｉｃｕｍ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉｓｔａｔｉｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ，Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ　ｓｏｌａｎｉ，Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ，Ｃｌａｄｏ，ｓｐｏｒｉｕｍ　ＣＵＣＵｌｔ：￣ｅｌ＇ｌ　Ｔｌｌｌ　Ｔｎ　ａｎｄ　Ａｌｔ　Ｙｎ“　ｒｉｃ　ｓｏｌａｎ１．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ａｃｅｔｏｎｅ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅ，ａｎｄ　ｃａｒｂｉｎｏｌ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ．Ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｍｍ　ｈｏｄ　ｗａｓ　ｃｏｎｔｉｎｕ　ＯＵＳ　ｒｅｆｌｕｘ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｘａｎｔｋ　ｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ；ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　苍耳（Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ），属菊科（Ｃｏｍｐｏｓｉ～　木等［　．张兴等［　、李云寿等　、冯俊涛等　、李玉　ｔａｅ）、苍耳属（Ｘａｎｔｈｉｕｍ），又称野茄、猪耳、呆耳、常　思、卷耳、爵耳、苍子、苍耳子、野落苏、地葵、羊负来、　道人头、进贤菜、喝起草、野茄、缣丝草、粘粘葵、刺儿　棵、疗疮草、野紫菜、狗耳朵草等．苍耳全草有毒，幼　平等　］、何静等ｐ　研究表明，苍耳提取物兼有杀虫杀　菌活性．但目前关于苍耳抑蔺作用的研究仪局限于　粗提物的活性筛选，没有对其抑蔺成分的提取工艺　进行深入系统的研究，可能存在有效成分提取不彻　苗、嫩芽、种子的毒性最大ｎ　．在医学上，苍耳主要　用于治疗感冒、头风、头晕、目赤、风湿痹痛、拘挛麻　资助基金；甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目（ＧＮＳＷ一　２００４—０８）；ｔ：ｔ肃省教育厅基金项目（０３２—０６）．　底甚至漏提等问题，影响了这一宝贵植物农药资源　的进一步开发利用．本文就苍耳抑茼成分的提取方　法及提取溶剂进行了初步筛选，现将结果总结报道　如下．　作者简介：杨顺义（１　９７２一），男，甘肃礼县人，讲师，硕ｆ主要从事　，材料与方法　１．１　材料　生物农药的手Ｆ发利用研究．Ｅ—ｍａｉｌｔ　ｙａｎｇｓｈｙ＠ｇｓａｕ．　ｅｄｕ．ｅｎ　通讯作者；沈慧敏，女．教授．博：【　生导师，主要从啦害虫抗药性与生　物农药的开发应用研究．Ｅ～ｍａｉｌ：ｎｄｓｈｍ＠ｇｓａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　收稿日期：２００５一Ｉ２一Ｏ７　１．１．１供试植物苍耳采自陇南礼县，采集时间为　５～６月份．采回后将根、茎、叶、花、果分开．阴凉处　晾干，粉碎后过４Ｏ目筛（　一０．３７　ｍｍ）后密封，置　维普资讯 http://www.cqvip.com

甘　肃　农　业　大　学　学　报　于Ｏ～４℃冰箱中保存备用．　最佳提取溶剂提取３６　ｈ，提取液用旋转蒸发仪浓缩　１．１．２供试茵种　番茄灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｌｎｅ—　至少量转入刻度试管中，用丙酮定容为１　ｇ／ｍＬ，密　ｔｅａ）、辣椒丝核病菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ　ｓｏｌａｎｉ）、黄瓜枯萎　封，在Ｏ～４　Ｃ冰箱中保存备用．　病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ）、黄瓜黑星病菌（Ｃｌａ—　１．２．３　生物活性测定方法　用生长速率法测定植　ｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ）和番茄早疫病菌（Ａｌｔｅｒ—　物样品的抑菌活性［】。。．在无菌条件下，取１　ｍＩ　提取　ｎａｒｉｃ　ｓｏｌａｎｉ），分别由甘肃省农科院植保所和甘肃农　液至２ｏ　ｍＬ刻度试管，对照组中加入等量丙酮，再　业大学草业学院植物病理系提供．　倒入融化的培养基至１Ｏ　ｍＬ（即供试质量浓度为　１．２方法　０．１　ｇ／ｍＬ），摇匀，趁热倒入９０　ｍｍ培养皿中制成　１．２．１不同溶剂提取物的制备　苍耳茎叶和苍耳　平板，平板凝固后放人生长一致的菌饼（中＝　根分别以石油醚、二氯甲烷、丙酮、甲醇（均为分析　６．０　ｒａｍ）．每皿接种１个菌饼，每处理重复３次，一　纯）等４种极性不同的有机溶剂用索氏抽提器进行　定温度下培养至对照长满后，用十字交叉法进行生　平行提取，每处理重复３次．提取液经旋转蒸发仪浓　物活性测定供试真菌菌落生长直径，计算公式为：　缩至少量后转入２５　ｍＬ具塞试管中，用丙酮定容为　菌落直径（ｒａｍ）一测量菌落直径平均值一６．０　１　ｇ／ｍＬ，密封，Ｏ～４℃冰箱中保存备用．　１．２．２不同提取方法提取物的制备　抑菌率ｃ％　一　堕垦　黧篙　盗墼　１）　冷浸法：取植物样品２Ｏ　ｇ于具塞三角瓶　２结果与分析　中，在２５℃条件下，分别用最佳提取溶剂２００、１５０、　１５０　ｍＬ进行３、２、ｌ　ｄ　３次浸渍提取，合并３次滤液　２．１苍耳茎叶不同溶剂提取物对病原菌菌丝生长　后减压浓缩至少量转入２５　ｍＬ刻度试管中，用丙酮　的抑制作用　定容为１　ｇ／ｍＬ，密封，Ｏ～４℃冰箱中保存备用．　苍耳茎叶不同溶剂提取物对５种病原菌菌丝生　２）　振荡法：取植物样品２０　ｇ于具塞三角瓶　长的抑制作用见表１．结果表明：苍耳茎叶不同溶剂　中，在恒温振荡器（２５℃）中分别用最佳提取溶剂　提取物的抑菌活性存在显著差异．其中，丙酮提取物　２００、１５０、１５０　ｍＬ进行３、２、１　ｄ　３次振荡提取，合并　对５种病原菌菌丝生长抑制作用最强，对番茄灰霉、　３次滤液后减压浓缩至少量转入２５　ｍＬ刻度试管　辣椒丝核、黄瓜枯萎、番茄早疫和黄瓜黑星病菌菌丝　中，用丙酮定容为ｌ　ｇ／ｍＬ，密封，在０－－４℃冰箱中　生长的抑制率分别为９８．４３　、１００　、１００　、　保存备用．　６９．７Ｏ　和７９．４８　９，６．可见，苍耳茎叶中的抑菌成分　３）　连续回流提取法（索氏抽提法）：取粉碎　易溶于中极性有机溶剂丙酮．因此，丙酮为苍耳茎叶　的植物样品５０　ｇ装入滤纸筒中，在索氏抽提器中用　的最佳提取溶剂．　表１　苍耳茎叶不同溶剂提取物对５种病原菌菌丝生长的抑制作用　Ｔａｂ．１　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ　Ｏｎ　ｈｙｐｈａ　ｏｆ　５　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｕｎｇｉ　注：供试质量浓度为０．１　ｇ／ｍＬ．　维普资讯 http://www.cqvip.com

第５期　杨顺义等：苍耳抑菌成分提取工艺　２．２苍耳根不同溶剂提取物对病原菌菌丝生长的　抑制作用　高出３．２６　、３．０６　，这说明番茄灰霉病菌、辣椒　丝核病菌２种菌对弱极性有机溶剂二氯甲烷提取物　反应更敏感．综上所述，结合溶剂本身的特点和市场　表２所示，苍耳根不同溶剂提取物对不同供试　菌的抑菌活性存在差异，除番茄灰霉病菌以外，对其　它菌的活性抑制差异不显著．其中甲醇提取物对番　茄灰霉、辣椒丝核、黄瓜枯萎、番茄早疫和黄瓜黑星　价格，选择甲醇作为苍耳根的最佳提取溶剂．　２．３苍耳茎叶不同方法提取物对病原菌菌丝生长　的抑制作用　病菌菌丝生长的抑制率分别为９６．７４　９／６、８２．９４　６、　７Ｏ．３７　、６３．２５　和６２．９２　，普遍较其它溶剂提　取物的高，说明苍耳根中的抑菌成分大部分易溶于　极性有机溶剂．但是，二氯甲烷提取物对番茄灰霉病　菌、辣椒丝核病菌的菌丝生长抑制率为１．ＯＯ　、　８６．ＯＯ　９／６，分别比甲醇提取物的９６．７４　、８２．９４　如表３所示，苍耳茎叶不同方法提取物对供试　病原菌菌丝生长的抑制作用差异不大，连续回流提　取法提取物抑菌活性相对较高，对番茄灰霉、辣椒丝　核和黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制率均在９３　以　上，对后２种菌的抑制率达到ｉ００　．因此，选择连　续回流提取法为苍耳茎叶的最佳提取方法．　表２　苍耳根不同溶剂提取物对５种病原菌菌丝生长的抑制作用　ｔａｂ．２　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｏ１￣ｏｆ　Ｘａｎｔｈ　ｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ　ｏｎ　ｈｙｐｈａ　ｏｆ　５　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｕｎｇｉ　表３苍耳茎叶不同方法提取物对５种瘸原菌菌丝生长的抑制作用　Ｔａｂ．３　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ　ｏｎ　ｈｙｐｈａ　ｏｆ　５　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｕｎｇｉ　注；①为菌落直径／ｒａｍ，３次重复之平均数｝②为菌丝生长抑制率／　．　２．４苍耳根不同方法提取物对病原菌菌丝生长的　抑制作用　如表４所示，除番茄灰霉菌以外，苍耳根不同方　法提取物对其它供试病原菌菌丝生长的抑制作用差　异不大，因连续回流提取法提取时间短，节省溶剂．　因此，连续回流提取法应为苍耳根最佳的提取方法．　表４苍耳根不同方法提取物对５种病原菌菌丝生长的抑制作用　Ｔａｂ．４　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｘａｎｔｈｉｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ　ｏｎ　ｈｙｐｈａ　ｏｆ　５　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｕｎｇｉ　维普资讯 http://www.cqvip.com

７０　甘　肃　农　业　大　学　学　报　２００６照　３　讨论　对提取溶剂的选取，从成本、毒性、回收的难易　程度等方面考虑，在实验室内可用丙酮做溶剂，因为　不管是苍耳茎叶，还是苍耳根，丙酮的提取效率均较　高，且毒性较低．３种不同的提取方法对苍耳有效成　分的提取不存在显著差异，但它们各有优缺点．提取　少量样品，用索氏提取较好，所需时间较短，并且可　以提取得很完全，但不能提取对热不稳定的样品；冷　浸法可以提取大批量样品，不需要其他的仪器设备，　方法简单，但对有效成分的提取率不高，并且耗时；　振荡提取的提取率比较高，提取时间也较短，可以提　取对热不稳定的样品，但是需要振荡仪，处理大量样　品时不方便．对不同的需要可以采取不同的提取方　法，如果提取大量样品，用冷浸法多次提取比较合　适；如果要快速提取的话，则用振荡提取和索氏提取　都可以，可以根据实际条件加以选择．　目前，在植物杀菌剂的研究中，所用的提取方法　一般都是索氏、冷浸、振荡等比较传统的提取方法．　这些方法存在一些不足之处，如需要耗费大量有机　溶剂，易引起人员中毒等．当今新兴流行的超临界流　体萃取和微波萃取因在提取样品中有快速、提取杂　质少等优点而被广泛应用，它们具备许多常规方法　没有的优点ｎ　］．用这些方法来提取苍耳样品，其　结果怎样，值得进一步研究．　参考文献　［１１甘肃师范大学生物系．甘肃经济植物［Ｍ］．甘肃人民出　版社，１９６１　［２１强　胜．杂草学［Ｍ］＋中国农业出版社．２００１　［３１欧丽红，秦路平．苍耳属药用植物资源及其化学成分和　生物活性［Ｊ１．药学实践杂志．２０００．１８（５）：３４６～３４９　［４］　张　兴．杨崇珍。王兴林．等．西北地区杀虫植物资源初　步调查［Ｊ］．甘肃农业大学学报．１９９３，２８（１）：９３～９８　［５］李云寿，邹华英，唐绍宗．等．１４种菊科植物提取物对　菜青虫的杀虫活性［Ｊ１．华东昆虫学报。２０００．９（２）：９９　～１Ｏ１　［６］冯俊涛．石勇强．张　兴．等．５６种植物抑菌活性筛选　试验［Ｊ１．西北农林科技大学学报（自然科学版）．２ＯＯｌ，　２９（２）：６５～６９　［７］　冯俊涛。祝木金，于平儒，等．西北地区植物源杀菌剂初　步筛选［Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学版），　２００２，３０（６）：１２９～１３３　［８］李玉平．慕小倩．冯俊涛．等．几种菊科植物杀菌活性的　初步研究［Ｊ１．西北农林科技大学学报（自然科学版）．　２００２，３０（１）：６８～７１　［９１何静。沈慧敏．张新虎．七种植物粗提物对常见植物　病菌的抑菌作用研究［Ｊ１．甘肃农业大学学报．２００４，３９　（４）：４４７～４５０　［１０１黄彰欣．植物化学保护试验指导［Ｍ］．北京：农业出版　社．１９９７　［１１］赵淑英，宋湛谦．王秋芬，等．植物农药萃取新技术的　研究进展［Ｊ］．林产化学与工业．２００４，７，４（２）：１０２～　１Ｏ５　［１２］汪　虹．李义兵．植物药用成分的萃取技术［Ｊ］．时针　国医国药，２００５，１６（１０）：１０３０￣１０３２　［１３１郭陈艳，杨顺义，张新虎．瑞香狼毒根中抑菌成分的初　步研究［Ｊ］．甘肃农业大学学报，２００４，３９（３）：３２５～　３２９