・１８９２・ 中国煤炭工业医学杂志２０１５年１１月第１８卷第１１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖ．２０１５，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．１１ ・基础论著・ 线粒体功能在自发性高血压大鼠动脉平滑肌 细胞中的改变与机制探究 张宇 傅义程 魏国良 陈曦 朱超 杨洁 李泱 摘要 目的探讨线粒体功能在自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞中的改变与机制。方法 选择正常血 压Ｗｉｓｔａｒ—Ｋｙｏｔｏ（ＷＫＹ）大鼠为正常对照组（ｎ：１６），同周龄自发性高血压Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｒａｔ（ＳＨＲ）大鼠为实验组（ｎ＝１６）。采用组织块贴壁法进行大鼠胸主动脉平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ，ＶＳＭＣ）原代培养并用免疫组织化学法鉴定；ＶＳＭＣｓ线粒体功能改变采用荧光法和流式细胞 术分别检测胞质内ＡＴＰ、ＲＯＳ水平和线粒体膜电位；筛选线粒体呼吸链主要亚基ＮＤ１、ＮＤ２、Ｃｙｔｂ８、ＣＯ１、 ＡＴＰ８的ｍＲＮＡ，采用实时定量聚合酶链式反应（ｑＲＴ—ＰＣＲ）法观察其在各组ＶＳＭＣｓ中的表达变化。 结果 与正常组相比，ｓＨＲ组大鼠ＶｓＭｃｓ细胞线粒体ＡＴＰ产生量由（６０．８７３±２．７５０）ｎｍｏｌ／Ｉ 下降至 （５１．５８１±３．２８０）ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０１），胞质内Ｒ０Ｓ水平明显升高，从（０．７５２±０．０４３）至（１．０８２±０．１４６）（Ｐ ＜０．０１）。细胞线粒体膜电位改变，由（１．６１４±０．１７３）降至（１．４０１±０．１３２）（Ｐ＜０．Ｏ１），提示ＶＳＭＣｓ细胞 线粒体功能显著受损。其次，对线粒体呼吸链主要亚基检测发现ｓＨＲ组ＮＤ１亚基ｍＲＮＡ表达存在明显 下调，与对照相比有显著差异。结论 高血压可导致动脉平滑肌细胞线粒体功能受损和氧化应激水平提 高，线粒体氧化呼吸链ＮＤ１亚基改变可能是在高血压发病中参与血管平滑肌细胞线粒体功能调控的重要 环节。 关键词 高血压；线粒体；血管平滑肌；氧化应激；ＮＤ１；大鼠 中囤分类号 Ｒ３４ 文献标识码 Ｂ 文章编号 １００７—９５６４（２０１５）１１—１８９２—０６ Ｄ０Ｉ编码 １０．１１７２３／ｍｔｇｙｙｘ １００７—９５６４ ２０１５１１０３２ ＭＩＴＯＣＨＯＮＤＲＩＡＬ ＤＹＳＦＵＮＣＴＩＯＮ ＩＮ ＶＡＳＣＵＬＡＲ ＳＭｏＯＴＨ ＭＵＳＣＬＥ ＣＥＬＬＳ ＯＦ ＳＰＯＮＴＡＮＥｏＵＳＬＹ ＨＹＰＥＲＴＥＮＳＩＶＥ ＲＡＴＳ ＡＮＤ ＲＥＬＡＴＥＤ ＭＥＣＨＡＮＩＳＭＳ Ｚｈａｎｇ Ｙｕ。Ｆｕ Ｙｉｃｈｅｎｇ，Ｗｅｉ Ｇｕｏｌｉａｎｇ，ｅｔ ａ１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ ＰＬＡ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００８５３。Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｏｒｔｉｃ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ （ＶＳＭＣｓ）ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １６ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ（ＳＨＲ）ａｎｄ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｇｅｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔｓ（ＷＫＹ）ａｇｅｄ １４ ｗｅｅｋｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ． ＶＳＭＣｓ ｗｅｒｅ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｕｓｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｂｌｏｃｋ ａｄｈｅｒｉｎｇ ｗａｌｌ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｔｏ ｆｉｆｔｈ ｇｅｎ— ｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｆｉｒｓｔ ｗｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ＡＴＰ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． ＲＯＳ ａｎｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ＶＳＭＣｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ ｍＲＮＡｓ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＤ１，ＮＤ２－Ｃｙｔｂ８，ＡＴＰ８，ＣＯ１ ｉｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｃｈａｉｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｆｏｒ ｒｅａｌ— ｔｉｍｅ ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＡＴＰ ｉｎ ＳＨＲ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｏｗｎｗａｒｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔＯ ＷＫＹ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０． ０１）－ａｎｄ ＲＯＳ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｉｎ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｔｏ ＷＫＹ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１），ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｍ— ｂｒａｎｅ ｐｏｔｅｎｔｉａ１ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ＳＨＲ ｇｒｏｕｐ．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ＮＤ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＳＨＲ ｇｒｏｕｐ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｓｔｒｉｋｅｌｙ（Ｐ％Ｏ．０１），ｂｕｔ ＮＤ２，Ｃｙｔｂ８，ＡＴＰ８，Ｃ０１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＳＨＲ ｇｒｏｕｐ 基金项目：国家自然基金重点项目（Ｎ０．８１０３０００２） 国家自然基金面上项目（ＮＯ．８１１Ｏ０１８６／ＨＯ２１４；８１４７０５４２／ Ｈ０２１４） 国家自然科学基金青年项目（ＮＯ．８１００２１５） 作者单位：１００８５３北京市，解放军总医院内科临床部心血管内 科 ＊通讯作者 中国煤炭工业医学杂志２０１５年】１月第１８卷第１１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖ．２０１５，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．１１ ・１８９３・ ｓｈｏｗｅｄ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＷＫＹ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｗｏｕｌｄ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｍｉ— ｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｏｆ ＶＳＭＣｓ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＮＤ１ ｓｕｂｕｎｉｔ ｉｎ ｔｈｅ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｃｈａｉｎ ｏｆ ＶＳＭＣＳ ｍｉｇｈｔ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐａｒｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｅｓｓｅｎ—－ ｔｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ；Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ；Ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ；Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ；ＮＤ１ 原发性高血压（ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ＥＨＴ）是 一电位检测试剂盒（ＪＣ一１），其他试剂为国产分析纯。 １．２ 方法 种可引起高发病率和死亡率的慢性常见病Ｌ】ｊ。预 计在未来三十年内全球高血压患病率会增加６０％左 １．２．１动物分组以自发性高血压（ＳＨＲ）大鼠为 右，将对经济和社会造成巨大负担。临床研究发现 高血压有家族聚集倾向，且大部分具备显著母系遗 传特点。而母系遗传是线粒体ＤＮＡ特有的遗传方 式。提示这类高血压发生可能与线粒体基因密切相 关 。 Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ心脏研究通过对数千名参与者进 行遗传学分析，发现线粒体遗传可对３５．２ 的高血 压家系产生影响ｌ＿３］。线粒体ＤＮＡ在高血压发生中 的作用机制尚不明确，推测可能与线粒体ＲＯＳ生 成、能量合成障碍、线粒体呼吸链功能紊乱 有关。 线粒体为细胞活动提供能量，其内膜的主要成分是 呼吸链。细胞生存所需的９５ 能量都由线粒体呼吸 链提供 ］。线粒体呼吸链复合体Ｉ／Ⅲ的“电子漏” 可使氧接受电子生成ＲＯＳ，而这两个复合体关键酶 的缺失可抑制线粒体呼吸链复合体活性，从而导致 线粒体功能障碍。 Ｒｉｚｚｏｎｉ等 发现，高血压中冠状动脉微循环存 在明显重构，包括血管中膜增厚、官腔缩窄。平滑肌 细胞是血管中膜的主要构成成分，是维持血管壁结 构和血管张力的重要组成，可通过轻度收缩调节血 管壁张力，维持血压。平滑肌功能障碍可导致血管 顺应性下降，血管重构 ］。由此可见血管平滑肌细 胞的异常增殖与凋亡对高血压的发病起重要作用。 １材料与方法 １．１一般材料 １．１．１动物１４周龄清洁级自发性高血压（ｓＨＲ） 大鼠及同周龄正常（ＷＫＹ）大鼠各１６只，均购自解 放军总医院实验动物中心。 １．１．２ 试剂Ｄ—ＭＥＭ／Ｆ一１２培养基、胰蛋白酶 一ＥＤＴＡ消化液购自Ｈｙｃｌｏｎ公司；胎牛血清（ＦＢＳ） 购自Ｇｉｂｃｏ公司，双抗（青链霉素）、ＤＡＢ Ｃｈｒｏｍｏ— ｇｅｎ、苏木素染液购自ｓｉｇｍａ公司，ａ—ＳＭ—ａｃｔｉｎ购 自ＤＡＫＯ公司，ＡＴＰ发光检测试剂盒购自北京威 格拉斯生物技术有限公司，活性氧（ＲＯＳ）检测试剂 盒购自上海碧云天生物技术有限公司，ＨＲＰ Ｐｏｌｙ— ｍｅｔ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ购自Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ公司，线粒体膜 实验组，正常血压（ＷＫＹ）大鼠为对照组。 １．２．２胸主动脉平滑肌细胞原代培养及鉴定 采 用颈椎脱臼法迅速处死大鼠后，暴露胸腔，取胸主动 脉长约１．５ｃｍ，于预冷的ＰＢＳ液中剥离血管周围结 缔组织及血管外膜，纵向切开血管刮除内皮细胞，用 刀片将血管切至ｌｍｍ×１ｒａｍ组织块，用弯镊将组织 块均匀平整的平铺于培养皿，组织块间距约为１．５－－ ２ｍｍ。放人３７ Ｃ ５ ＣＯ 孵箱静置４～５ｈ，隔日换 液，待细胞从组织块边缘爬出，并生长至７０ ～ ８Ｏ 即可传代。根据原代ＶＳＭＣｓ形态学特征应用 倒置显微镜观察细胞大小、形态、生长特点及排列方 式等。用特异性抗体ａ—ＳＭＡ—ａｃｔｉｎ对细胞进行免 疫组织化学法鉴定。二氨基联苯胺（ＤＡＢ）显色，苏 木素轻度复染，经分化、脱水、透明、封片，在显微镜 下观察，核卵圆形居中，呈淡蓝色，胞质内表达为强 阳性，并可见棕黄色的免疫产物可判定为阳性结果， 当细胞随传代而自行纯化时，细胞理化性质无明显 改变。将原代胸主动脉平滑肌细胞传代培养至３～４ 代时用于细胞实验。 １．２．３胸主动脉平滑肌细胞线粒体功能测定 １．２．３．１荧光法检测细胞内ＡＴＰ水平 选择生长 状态良好的细胞进行收集，将收集细胞置人足量１× Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ＵＬＢ）的培养皿内，充分混匀后置于微 型振荡器上震荡约５～７ｒａｉｎ；重悬细胞后将细胞悬 液移入１．５ｍｌ离心管，在涡旋振荡器上充分混匀震 荡４０ｓ。取待测样品５ ｌ加入测量管底部，取Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ ５０／￣１加入管底部，轻轻敲击管壁５～８次混 匀，立即放人仪器中进行测定，记录发光值为Ｆｉｒｅｆｌｙ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ的发光单位（ＲＬＵ）。以上结果重复３次 以上，得出数据，统计结果。 １．２．３．２ ＤＣＦＨ—ＤＡ法检测细胞内ＲＯＳ水平 去除细胞培养液，用无血清的培养基冲洗细胞２～３ 次，加入含１０／，ｍｏｌ／ＬＤＣＦＨ—ＤＡ的无血清培养基 ｌｍｌ，在３７。Ｃ含５ ＣＯ２的培养箱中孵育２０ｒａｉｎ， ＰＢＳ清洗３次，充分去除未进入细胞的ＤＣＦＨ— ＤＡ，用３ｍｌ无血清培养基重悬细胞；用流式细胞仪 （使用４８８ｎｍ激发波长，５２５ｎｍ发射波长）检测细胞 ・１８９６・ 中国煤炭工业医学杂志２０１５年１１月第１８卷第１１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖ．２０１５，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．１１ 下观察精确，且Ａｍａｎｎ选择的３６周大鼠年龄较老， 所以细胞形态改变明显。而本实验所用动物为１６ 周大鼠，动脉壁与平滑肌细胞肥厚尚未形成。 本实验结果显示高血压组细胞线粒体膜电位及 ＡＴＰ水平较正常组明显下降，提示高血压状态下， 线粒体结构与功能发生改变，导致细胞能量产生障 碍，细胞凋亡增加。细胞线粒体膜电位＿１ 可维持线 粒体内电化学稳态，使氧化还原通路保持通畅。当 膜电势的持续下降，会导致线粒体膜电势转换（ｍｉ— ｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＭＰＴ），启动细 胞凋亡。另外线粒体可通过氧化磷酸化产生细胞维 持正常活动所需要的大部分ＡＴＰ＿１ ，当线粒体功能 发生紊乱时，会产生电子传递障碍，ＡＴＰ生成减少， 不能满足细胞对于能量的需求。 本实验发现高血压组细胞ＲＯＳ水平明显升高， 说明在高血压病理状态下，平滑肌细胞受到损伤，线 粒体功能发生改变，导致自由基生成增多、清除降 ］ ］ ］ 低，从而引起细胞内ＲＯＳ水平升高。ＲＯＳ水平的高 低可以反映细胞受自由基攻击和损伤的程度 。许 多临床研究与动物实验都显示ＲＯＳ［＝１ 在高血压的 发生、发展过程中发挥重要作用。ＲＯＳ的重要来源 是线粒体，当线粒体结构和功能紊乱时会导致细胞 产生的ＲＯＳ异常增多。增多的Ｒ０Ｓ可激活细胞炎 性分子、细胞增殖和分化相关蛋白，在高血压、动脉 粥样硬化等疾病中发挥作用［１ 。另一方面，ＲＯＳ作 为调节血管结构和张力重塑的因子，可以导致血管 舒张因子释放受抑、细胞内钙超载、细胞外基质沉积 最终导致血管重塑，外周阻力增加，加重高血压的发 生发展 。 我们前期通过对具有母系遗传特点的高血压家 系进行线粒体ＤＮＡ测序分析，发现线粒体呼吸链复 合体Ｉ上的ＮＤ１基因 ３０８Ｃ突变与高血压发病密切 相关。本研究发现ＳＨＲ大鼠平滑肌细胞线粒体上的 ＮＤ１基因表达低于正常组，进一步验证了线粒体上的 ＮＤ１基因与高血压发生发展存在重要关联。ＮＤ１基 因可能在能量合成、氧自由基（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ，ＲＯＳ）生成、线粒体途径的细胞凋亡中起重要作用。 推测由于ＮＤ１基因表达下降，导致线粒体膜电位改 变、氧化磷酸化过程发生障碍，ＲＯＳ生成增加，对氧的 利用率降低，合成的ＡＴＰ减少，胞浆内钙离子浓度升 高引起细胞收缩，加重高血压的发生发展。 综上所述，本研究以前期发现的高血压家系中 存在的ＮＤ１突变为基础，研究高血压状态下大鼠平 滑肌细胞线粒体功能及ＮＤ１亚基表达的改变，进一 步明确ＮＤ１基因与高血压之间的存在重要关联，为 今后在线粒体基因水平研究高血压的发生提供依 据。但是线粒体呼吸链上多种蛋白的相互影响在高 血压发生发展中的作用及其机制尚不清楚。总之， 线粒体基因在高血压发生发展中的病理生理机制非 常复杂，还需要我们继续研究。 ４参考文献 ］ ］ ］ ］＿卜 ｌ］ ］ 中国煤炭工业医学杂志２０１５年１１月第１８卷第１１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖ．２０１５，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．１１ ・１８９７・ 大蒜素干预下大鼠血清对食管癌ＥＣ１０９细胞增殖及 凋亡的影响 张召 梁宗英 侯继申 张旭 辛国华 摘要 目的探讨长期大蒜素干预下ＳＤ大鼠血清对食管癌ＥＣ１０９细胞增殖以及凋亡的影响。方法 采 用普通ＳＤ大鼠血清和长期大蒜素干预条件下ＳＤ大鼠血清培养食管癌ＥＣ１０９细胞。Ｉ组：以普通灭活 ＳＤ大鼠血清培养液培养食管癌ＥＣ１０９细胞；ｌＩ组：以大蒜素干预ＳＤ大鼠灭活血清培养液培养食管癌 ＥＣ１０９细胞；应用流式细胞术测定细胞周期分布，并计算细胞ｓ期分数和增殖指数；采用ＡｎｎｅｘｉｎＶ—ＥＧ— ＦＰ／ＰＩ双染法和亚倍体峰法应用流式细胞仪检测早期和中晚期凋亡率。结果 Ⅱ组Ｇｚ／Ｍ期及Ｓ期细胞 比例明显低于Ｉ组，而Ｇｏ／Ｇ 期细胞比例明显升高；Ⅱ组Ｓ期分数及细胞增殖指数显著低于Ｉ组（Ｐ＜ ０．０５），差异有统计学意义。Ⅱ组细胞凋亡率明显高于Ｉ组，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论 长期 大蒜素干预下ＳＤ大鼠血清对食管癌ＥＣ１０９细胞的增殖活性具有明显的抑制作用并能促进食管癌ＥＣ１０９ 细胞的凋亡。 关键词 大蒜素；食管癌；ＥＣ１０９细胞；增殖活性；细胞凋亡；大鼠 中图分类号 Ｒ７３５．１ 文献标识码 Ｂ 文章编号 １００７—９５６４（２０１５）１１—１８９７—０４ Ｄ０Ｉ编码 １０．１１７２３／ｍｔｇｙｙｘ １００７—９５６４ ２０１５１１０３３ ＴＨＥ ＥＦＦＥＣＴ ＯＦ ＳＤ ＲＡＴＳ ＳＥＲＵＭ ＯＮ ＴＨＥ ＥＳＯＰＨＡＧＵＳ ＣＡＮＣＥＲ ＥＣ一１０９ ＣＥＬＬＳ ＰＲＯＬＩＦＥＲＡＴＩＶＥ ＡＣＴＩＶＩＴＹ ＡＮＤ ＣＥＬＬ ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ ＵＮＤＥＲ ＴＨＥ ＡＬＬＩＣＩＮ．ＩＮＴＥＲＶＥＮＴＩＯＮ Ｚｈａｎｇ Ｚｈａｏ，Ｌｉａｎｇ Ｚｏｎｇｙｉｎｇ．Ｈｏｕ Ｊ ｉｓｈｅｎ。ｅｔ ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃｈｅｎｇｄｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈｅｎｇｄｅ ０６７０００，Ｃｈｉｎａ 基金项目：２０１５年度河北省医学科学研究重点课题计划（课 题编号：２０１５００２３） 作者单位：０６７０００河北省承德市，承德医学院附属医院胸外 科 ＊通讯作者 ［１３］ Ａｍａｎｎ Ｋ，Ｇｈａｒｅｈｂａｇｈｉ Ｈ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｅｒ— Ｅｌ６］ Ｖｏｋｕｒｋｏｖａ Ｍ，Ｒａｕｃｈｏｖａ Ｈ，Ｒｅｚａｃｏｖａ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＲＯＳ ｔｒｏｐｈｙ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｔｈｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｒａｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ａｒｔｅｒｉｅｓ ｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ１ｙ ｈｙ— ｂｒａｉｎ ｏｆ Ｄａｈｌ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｓａｌｔ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｅｌｉｃｉｔｅｄ ｉｎ ａ ｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ［－Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，１９９５，２５（１）：１２４ ｄｕｈｈｏｏｄ［－Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｓ，２０１５，６４（３）：３０３—３１２ —１３１ Ｅ１７２ Ｔｒｅｔｔｅｒ Ｌ。Ａｍｂｒｕｓ Ａ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ＲＯＳ ｈｏｍｅｏ— Ｅ１４］ Ｂｉｒｓｏｙ Ｋ，Ｗａｎｇ Ｔ，Ｃｈｅｎ Ｗ．Ｗ，ｅｔ ａ１．Ａｎ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙ— Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ１ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ｃｈａｉｎ ｍｏｌ，２０１４，５４７：１９９—２２３ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｉｓ ｔｏ Ｅｎａｂｌｅ Ａｓｐａｒｔａｔｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｅ１９］ 魏国良．自发性高血压大鼠平滑肌细胞线粒体功能的 ＥＪ３．Ｃｅｌｌ，２０１５，１６２（３）：５４０—５５１ 研究［Ｄ］．福州：福建医科大学，２０１４ ［１５］ Ｂｅｕｔｎｅｒ Ｇ，Ｅｌｉｓｅｅｖ Ｒ．Ａ，Ｐｏｒｔｅｒ ＧＡ Ｊｒ．Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ［１９］ Ｃｈａｎ Ｓ．Ｈ，Ｃｈａｎ Ｊ．Ｙ．Ｂｒａｉｎ ｓｔｅｍ ＮＯＳ ａｎｄ ＲＯＳ ｉｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｃｈａｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｎｅｕｒａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｔｉｏｘｉｄ ｈｅａｒｔ ｃｏｉｎｃｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｒｅｄｏｘ Ｓｉｇｎａｌ，２０１４，２０（１）：１４６—１６３ ｃｏｍｐｌｅｘ １ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｐｅｒｃｏｍｐｌｅｘｅｓ［Ｊ］． ［２０１５—０９—２８收稿］ ＰＬＯＳ Ｏｎｅ，２０１４．９（１１）：ｅｌ１３３３０