IL_2与猪细小病毒VP_2基因双表达载体的构建及免疫原性的研究

May󰀁2006

IL󰀁2与猪细小病毒VP2基因双表达载体的构建及免疫原性的研究

ConstructionoftheEukaryoticExpressionVectorwithIL󰀁2GeneandVP2GeneofPPVandResearchonImmunogenicity

崔保安

*1

󰀁

,魏战勇,王学斌,黄克和,金喜新,董振杰,郑兰兰

1*

1

1

112111

CUIBao󰀁An,WEIZhan󰀁Yong,WANGXue󰀁Bin,HUANGKe󰀁He,JINXi󰀁Xin,DONGZhen󰀁Jie

1

andZHENGLan󰀁Lan

1河南省动物性食品安全重点实验室,郑州󰀁4500022南京农业大学动物医学院,南京󰀁210095

1HenanKeyLaboratoryforAnimalFoodSafety,Zhengzhou,Henan450002,China

2CollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing,Jiangsu210095,China

211

摘󰀁要󰀁将白细胞介素󰀁2基因和猪细小病毒VP2基因主要抗原区克隆至pCI󰀁neo真核表达载体中,构建了pCIneo󰀁IL2󰀁VP2重组质粒,用脂质体将其转染到PK󰀁15细胞中,利用免疫荧光方法检测在体外表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCIneo󰀁IL2󰀁VP2重组质粒、对照组pCI󰀁neo和猪细小病毒活疫苗通过肌肉注射进行免疫,检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能,特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,pCIneo󰀁IL2󰀁VP2在体外能够诱导PK󰀁15细胞表达VP2蛋白,小鼠注射pCIneo󰀁IL2󰀁VP2质粒1周后能够诱导机体产生抗体,4周时达到峰值,与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明,构建的pCIneo󰀁IL2󰀁VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。关键词󰀁

猪细小病毒,VP2基因,IL󰀁2,基因疫苗

中图分类号󰀁Q78󰀁󰀁文献标识码󰀁A󰀁󰀁文章编号1000󰀁3061(2006)03󰀁0425󰀁06

Abstract󰀁ToconstructgenevaccineofPPVandtoinvestigatetheeffectsofinterleukin2(IL󰀁2)asanadjuvantonimmuneresponsesinmouse,therecombinantexpressionplasmidofpCIneo󰀁IL2󰀁VP2wasconstructedandtransfectedintoPK󰀁15cellsbylipofectamine,theexpressedproductwasdetectedbyimmunofluoreassay.TostudytheimmuneeffectsofDNAvaccineinvitroandinvivo,micewereusedastheanimalmodel.TherecombinantplasmidpCIneo󰀁IL2󰀁VP2,thecontrolplasmidpCI󰀁neoandthePPVlivevaccinewereimmunizedbyintramuscularinjection.Anti󰀁PPVantibodiesweremeasuredbyELISA,lymphocyteproliferationactivitywasdetectedusingMTTmethod,andthespecifickillingactivitiesofCTLwereassayedtoo.TheresultsshowthattheimmunizedmiceproducedPPVantibodyafteroneweek,andreachedtohighestafterfourweeks.Comparedwiththecontrolgroup,thepCIneo󰀁IL2󰀁VP2immunizedgroupproducedsignificantdifferencesintheantibodytiters,thelymphocyteproliferationactivityandthespecifickillingactivitiesofCTL.ThepCIneo󰀁IL2󰀁VP2inducedhumoralandcellularimmunity

Received:Novebmer21,2005;Accepted:February17,2006.

Thisworkwassupportedbygrantsfrom󰀂15 foodsafetysignificantattackprojectofChina(No.2001BA804A30󰀁11)andsignificantscienceandtechnologyattackprojectofHenanProvince(No.0223013800).

*Correspondingauther.Tel:86󰀁371󰀁63558878;E󰀁mail:baoancui@henau.edu.cn

国家󰀂十五 食品安全重大攻关专项(No.2001BA804A30󰀁11);河南省重大科技攻关项目(No.0223013800)。

426

ChineseJournalofBiotechnology󰀁生物工程学报󰀁2006,Vol󰀂22,No󰀂3

responsessimilarlytothatthelivevaccineinduced.TheseresultsmanifestedthatthePPVDNAvaccinesuccessfullyinducedhumoralandcellularimmunityresponseinmicewiththeIL󰀁2geneasanadjuvant.Keywords󰀁PPV,VP2gene,IL󰀁2,DNAvaccine

󰀁󰀁猪细小病毒病是猪细小病毒(Porcineparvovirus,PPV)引起的猪主要繁殖障碍性疾病之一,以初产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱胎

等为特征,同时还可以引起仔猪的皮炎和腹泻,其它类型的猪感染后无明显临床症状。该病最早于1967年在英国报道,目前已遍布世界各地,每年给世界养猪业造成巨大的经济损失

[1,2]

Lipofectinreagent2000购自Invitrogen公司;RPMI1640培养基购自Gibco公司;胎牛血清购自Hyclone公司;植物血凝素(PHA)、MTT、DMSO购自Sigma公司,PPV󰀁Ab检测试剂盒,购自SvanovaBiotechAB(Sweden),金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)购自上海生物制品研究所;肝素钠购自上海伯奥生物公司,淋巴细胞分离液购自上海恒信化学试剂有限公司,其它常规试剂由本实验室提供。

1󰀂3󰀁猪细小病毒VP2基因与IL󰀁2基因真核双表达载体的构建

1󰀂3󰀂1󰀁IL󰀁2基因真核表达载体pCIneo󰀁IL2的构建:将pCI󰀁IL2用Nhe!、EcoR!双酶切,琼脂糖凝胶电泳后回收小片段即得到IL󰀁2基因。该片段与Nhe!和EcoR!双酶切pCIneo载体连接,得到重组质粒命名为pCIneo󰀁IL2,并进行酶切鉴定。

1󰀂3󰀂2󰀁IL2基因与猪细小病毒VP2基因真核双表达载体pCIneo󰀁IL2󰀁VP2的构建:将pGEM󰀁T󰀁VP2用Sal!、Sma!双酶切并用琼脂糖回收VP2片段,并与用Sal!、Sma!双酶切的pCIneo󰀁IL2连接即是pCIneo󰀁IL2󰀁VP2载体,酶切鉴定正确后测序验证。

1󰀂4󰀁重组质粒的转染及表达产物的检测

采用脂质体法将构建的重组质粒体外转染长于盖玻片上的PK󰀁15细胞。培养48h后,收获玻片和上清液,分别检测猪细小病毒VP2抗原蛋白和IL󰀁2的生物活性。

1󰀂4󰀂1󰀁猪细小病毒VP2抗原检测:将收获玻片上的细胞用0󰀂01mol󰀁LPBS(pH7󰀂2)缓冲液冲洗2次后,放入纯丙酮中固定10min,直接免疫荧光法(immunofluorescenceassay,FA)检测VP2基因的表达产物,抗体为FITC标记的抗PPV的抗体,最后置荧光显微镜下观察细胞表面是否有荧光物质。同时设空载体对照。

1󰀂4󰀂2󰀁IL󰀁2活性检测:采用小鼠脾细胞检测。无菌取小鼠脾脏,研磨后用RPMI1640洗涤2次,调整细胞浓度至5∀10个󰀁mL,加入刀豆蛋白(ConA)至终浓度为2󰀂5󰀁g󰀁mL,5%CO237#培养。将培养的细胞悬液置于淋巴细胞分离液上,2000r󰀁min离心5min,取界面层细胞即为IL󰀁2反应细胞。向96孔细胞培养板加入10󰀁mL细胞,100󰀁L󰀁孔,再加入转染66

。目前对于本

病的防治世界各国多采用猪细小病毒灭活疫苗和弱毒疫苗,在控制猪细小病毒病的流行方面取得了显著的效果。但目前该病在许多养猪地区仍有不断的

发生和流行,因此研究新型、安全高效的疫苗一直是国内外许多学者努力的方向。

核酸疫苗(nucleicacidvaccine)又称基因疫苗、DNA疫苗,是近年来随着基因治疗技术的发展而产生的一种全新疫苗。它是利用DNA重组技术将保护性抗原蛋白基因克隆到真核表达载体中,并将其直接导入体内,使抗原蛋白内源性表达递呈给免疫系统,诱发机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫反应。近年来分子免疫佐剂的发现,更加吸引了更多科学工作者的关注和研究

[4,5]

[3]

。细胞因子佐剂

中IL󰀁2应用最为广泛,它可作用于多种效应细胞,包括T、B淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞,对免疫应答具有广泛的上调作用

[6]

。本试验旨在构建PPV

主要保护性抗原VP2基因与IL󰀁2基因真核双表达载体,观察猪细小病毒VP2基因疫苗免疫效力及IL󰀁2能否增强基因疫苗的免疫反应,为研制出高效、新型猪细小病毒基因疫苗提供科学依据。

1󰀁材料与方法

1󰀂1󰀁菌株与质粒

大肠杆菌菌株JM109由本室保存。pGEM󰀁T󰀁VP2载体(含猪细小病毒VP2基因)和pCI󰀁IL2载体(含有IL󰀁2基因)均由本室构建保存。1󰀂2󰀁主要试剂

限制酶(Nhe!、EcoR!、Sal!、Sma!)、DNAMarker购自大连宝生物公司,T4DNA连接酶购自Promega公司,FITC标记的抗PPV多克隆抗体,购自VeterinaryMedicalResearch&Development公司(VMRD,Inc󰀂),重组IL󰀁2购自邦定生物医学公司,

崔保安等:IL󰀁2与猪细小病毒VP2基因双表达载体的构建及免疫原性的研究

427

过的pCIneo󰀁IL2󰀁VP2细胞上清。置5%CO237#培养40~48h,每孔加入MTT30󰀁L(5mg󰀁mL)。继续培养8h后,各孔加入酸化SDS(0󰀂01mol󰀁LHCl、10%SDS)0󰀂1mL作用4h,测定OD570值。同时用空载体转染的细胞培养上清作为阴性对照。

1󰀂5󰀁pCIneo󰀁IL2󰀁VP2重组质粒的免疫原性研究1󰀂5󰀂1󰀁DNA疫苗免疫小鼠:30日龄清洁级昆明小鼠,60只(由郑州大学实验动物中心提供),将小鼠随机分为4组,每组15只。分别为生理盐水对照组、空质粒pCIneo对照组、pCIneo󰀁IL2󰀁VP2质粒免疫组和猪细小病毒活疫苗组。每只小鼠于股四头肌内直接注射总体积为200󰀁L(1󰀁g󰀁󰀁L)的质粒DNA溶液,猪细小病毒活疫苗组每只小鼠注射0󰀂5mL。共免疫3次,每次间隔为15d。

1󰀂5󰀂2󰀁抗体检测:免疫小鼠分别在首免后第0、1、2、4、6、8和10周断尾采血,分离血清检测血清抗体。按PPV󰀁Ab检测试剂盒说明书进行,待测血清与用过氧化物酶标记的PPV抗体竞争包被在酶标板上的PPV󰀁Ag,通过测定标记酶的OD450值检测抗体的效价,最后用抑制百分数(percentinhibition,PI)表示。计算公式如下:

PI=100-样品平均OD450∀100

阴性OD450值

100󰀁L,每只小鼠为9孔,其中3孔为PHA刺激组,加入终浓度25󰀁g󰀁mL;3孔为SPA刺激组,加入终浓度为300󰀁g󰀁mL;3孔为对照。置5%CO237#培养箱(Thermo,371型)中培养36h后进行测定。测定前4h时每孔加入MTT20󰀁L(5mg󰀁mL)继续培养,测定时各孔加入150󰀁L的DMSO,充分震荡10min使结晶物溶解,用酶联免疫检测仪(Thermo)测定OD570nm值。增殖水平以刺激指数(StimulationIndex,SI)表示,SI=(实验组cpm󰀁仪器本底)󰀁(对照组cpm󰀁仪器本底)。1󰀂5󰀂4󰀁淋巴细胞杀伤效应的检测(CTL)(采用MTT法):长成单层的PK󰀁15细胞经胰酶消化后,取培养液量1󰀁10的病毒液同步接种细小病毒种毒,接毒24h收集细胞,吹散制成细胞悬液,用培养液稀释成10个󰀁mL,此细胞即为靶细胞,置4#备用。免疫小鼠摘除眼球后采血1󰀂5mL,加入100󰀁L肝素抗凝后加入4倍体积的生理盐水,混匀后缓慢加入等体积的淋巴细胞分离液(不能混合),2500r󰀁min离心30min,吸取白细胞层转入1󰀂5mLEP管,用RPMI1640培养液洗涤3次后,再用完全培养液

6

悬浮成10个󰀁mL,此细胞即为效应细胞,置4#备用。

将效应细胞与靶细胞以20∃1比例混合后加入96孔细胞培养板,100󰀁L󰀁孔,每个样重复3孔,并同时培养靶细胞和效应细胞各3孔做对照。37#CO2培养24h,每孔加入MTT30󰀁L(5mg󰀁mL)继续培养4h,各孔加入酸化SDS(0󰀂01mol󰀁LHCl、10%SDS)0󰀂1mL作用8h,测定OD570nm值,计算杀伤效率。杀伤效率按如下求得:

6

1󰀂5󰀂3淋巴细胞增殖反应的检测(MTT比色法):小鼠末次免疫后10d无菌摘取脾脏(每组3只),进行细胞免疫功能测定。参考李玉华介绍的方法进[7]

行,取小鼠脾脏磨碎用RPMI1640溶液配成每毫升1∀10单细胞悬液,然后于96孔板中每孔加入

细胞毒(%)=

6

靶细胞对照组OD值-(实验组OD值󰀁效应细胞对照组OD值)

∀100

靶细胞对照组OD值1󰀂6󰀁统计学分析

利用SPSS软件包按生物统计学上的方差分析法对抗体抑制百分数pI值、细胞增殖反应数据和细胞毒性数据进行统计学处理,显著水平为P<0󰀂05。其中某一时间的中和抗体效价以3只鼠的中和抗体几何平均数(GMT值)表示;某一时间内的淋巴细胞反应以3只鼠的OD570平均数表示;细胞毒性试验以测定3只鼠的细胞毒性的平均数表示。

因,与Nhe!和EcoR!双酶切后的pCIneo载体连接,得到pCIneo󰀁IL2;再将pCIneo󰀁IL2用Sal!、Sma!双酶切后与pGEM󰀁T󰀁VP2经Sal!、Sma!双酶切后的VP2连接得到pCIneo󰀁IL2󰀁VP2重组质粒(图略)。2󰀂2󰀁重组质粒表达抗原的检测

将pCIneo󰀁IL2󰀁VP2和pCIneo重组质粒转染PK󰀁15细胞后,继续培养48h后,进行免疫荧光试验,在荧光显微镜下进行观察,可以看到在转染重组核酸疫苗质粒的PK󰀁15细胞有明显的荧光,而空载体转染未见有(图1)。结果说明,构建的核酸疫苗质粒表达了VP2蛋白。

󰀁󰀁将重组质粒用Lipofectinagent包裹后转染细胞,继续培养48h,分别收集上清液,用MTT法检测可2󰀁结果与分析

2󰀂1󰀁猪细小病毒VP2和IL󰀁2基因双表达质粒的构建及鉴定

pCI󰀁IL2经Nhe!、EcoR!双酶切后得到IL󰀁2基428

ChineseJournalofBiotechnology󰀁生物工程学报󰀁2006,Vol󰀂22,No󰀂3

图1󰀁重组核酸疫苗质粒免疫荧光Fig.1󰀁FAofrecombinantplasmids

pCIneo󰀁IL2󰀁VP2recombinantplasmids;B:controlplasmids.

表达的IL󰀁2活性,同时用人的重组IL󰀁2蛋白(rhIL󰀁2)做量化分析,结果见表1。

表1󰀁IL󰀁2在体外表达检测(MTTOD570)Table1󰀁DetectionofIL󰀁2expression

Group

!&∋()

∗+,

CellcontrolpCIneopCIneo󰀁IL2󰀁VP210IUrhIL󰀁220IUrhIL󰀁240IUrhIL󰀁260IUrhIL󰀁280IUrhIL󰀁2

OD570value2󰀂735%0󰀂178a2󰀂703%0󰀂307a3󰀂074%0󰀂157b2󰀂780%0󰀂124a3󰀂067%0󰀂200b3󰀂178%0󰀂172b3󰀂781%0󰀂290c3󰀂687%0󰀂232c

果见表2。

󰀁󰀁Note:Datawiththedifferentsuperscriptswithinthesamecolumnare

significantlydifferent(P<0󰀂05)󰀂

图2󰀁PPVVP2DNA疫苗免疫后不同时间血清抗体检测

Fig.2󰀁AntibodydetectioninducedbyDNA

vaccineinimmunizedmice表2󰀁免疫鼠脾细胞增殖试验结果

Table2󰀁Theresultsoflymphocyteproliferationresponse

inDNAimmunizedmice

Group

1234

BlankpCIneopCIneo󰀁IL2󰀁VP2Livevaccine

SI(n=3)

PHA1󰀂899%0󰀂041

aa

󰀁󰀁从表1可以看出,与细胞、pCIneo对照组相比,pCIneo󰀁IL2󰀁VP2质粒在细胞能够诱导淋巴细胞增生,OD值在统计学上比细胞对照组的增加显著,其表达的IL󰀁2活性与40IU的重组IL󰀁2相当。

2󰀂3󰀁疫苗诱导的体液免疫应答效果观察

用ELISA法分别检测每组3只小鼠的抗PPV抗体,然后按公式计算pI值并求其平均值,结果见图2。由图可知,pCIneo󰀁IL2󰀁VP2质粒和活疫苗对照组在免疫后第一周开始出现抗体,随着免疫时间的延长,其抗体逐渐增加,免疫后4周其抗体的PI值达到高峰,一直维持到第10周,而pCIneo组和空白对照组不引起机体产生抗体。pCIneo󰀁IL2󰀁VP2组与对照组pCIneo及生理盐水对照组相比,差异显著(P<0󰀂01)。

2󰀂4󰀁DNA疫苗诱导的淋巴细胞增殖效果观察

在第3次免疫后10d,每一试验组取3只小鼠处死,无菌摘取脾脏,制成悬液,分别用PHA和SPA进行刺激,观察脾细胞的T和B细胞增殖试验,其结SPA1󰀂945%0󰀂2091󰀂828%0󰀂1373󰀂359%0󰀂389a3󰀂148%0󰀂095a

1󰀂735%0󰀂284

3󰀂140%0󰀂2923󰀂208%0󰀂047

󰀁Note:Datawiththedifferentsuperscriptswithinthesamecolumnaresignificantlydifferent(P<0󰀂05)󰀂

󰀁󰀁从表2可以看出,所构建的pCIneo󰀁IL2󰀁VP2质粒和活疫苗对照组均能够诱导强的T和B细胞增殖,与空白对照和空载体对照差异显著。2󰀂5󰀁脾特异性CTL杀伤活性检测结果

在第末次免疫后10d,每组取3只小鼠,摘除眼球放血,抗凝后分离淋巴细胞测定细胞毒活性,具体结果见表3。崔保安等:IL󰀁2与猪细小病毒VP2基因双表达载体的构建及免疫原性的研究

429

表3󰀁免疫鼠特异性CTL杀伤活性

Table3󰀁ThespecificCTLactivityofDNAimmunizedmice

1245

GroupBlankpCIneopCIneo󰀁IL2󰀁VP2Livevaccine

CTLvalue(n=3)36󰀂23%2󰀂49a40󰀂75%12󰀂9872󰀂17%6󰀂3068󰀂88%9󰀂78

a

CSF。Barouch等比较了单独表达IL󰀁2的质粒与HIVgp120DNA疫苗和表达IL󰀁2󰀁Ig融合蛋白的质粒对小鼠免疫效果,结果发现只有融合蛋白才能显著增强特异性抗体产生和T细胞增殖,而单独表达IL󰀁2的质粒则无效果

[9]

。于涟等(2001)将利用鸡IL󰀁2基因

构建了传染性法氏囊病毒多聚蛋白DNA疫苗,免疫鸡后发现,IL󰀁2能明显增强DNA疫苗对强毒攻击的保护,显著促进鸡的胸腺、脾脏和外周血液T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应

[10]

󰀁󰀁Note:Datawiththedifferentsuperscriptswithinthesamecolumnare

significantlydifferent(P<0󰀂05)󰀂

󰀁󰀁通过表3可以看出,与空白对照组和空白质粒相比,pCIneo󰀁IL2󰀁VP2和活疫苗对照组小鼠的外周淋巴细胞的细胞毒活性值显著升高,其中pCIneo󰀁IL2󰀁VP2略高于活疫苗对照组,但统计学检验结果差异不显著。

。本试验将表

达IL󰀁2的基因同时构建到真核表达载体,将其转染PK󰀁15细胞,并检测其活性,初步证实其在PK󰀁15细胞表达的IL󰀁2能增强体外诱导培养的鼠淋巴细胞增殖,与40IUIL󰀁2活性相当。

试验构建的双表达载体能够较强的诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,在试验中可观察到小鼠在注射后1周开始出现抗体,随着免疫时间的延长和第二次加强免疫之后,抗体水平明显的增高,在4、6周达到高峰;另外,活疫苗对照组的抗体水平也逐渐增强,在免疫之后,与双表达载体出现的抗体的时间和抗体达到高峰所需的时间基本一致,这说明该载体均能够迅速产生抗体,并且达到高峰。该载体诱导的T淋巴细胞和B细胞增殖反应与活疫苗相似,经统计学检验无显著差异;通过细胞毒性试验证明,该载体具有诱导较强的细胞毒性作用,产生较强的细胞免疫应答。这一结果预示着PPV基因免疫具有良好的前景,为以后其它核酸疫苗的研制奠定了基础。

REFERENCES(参考文献)

[1][2]

LemanAD,StrawB,GalockRD󰀂DiseasesofSwine󰀂SixthEdition󰀂LowaStateUniversityPress,1986,pp.411-424HardingMJ,MolitorTW󰀂AmonoclonalantibodywhichrecognizescellsurfaceantigenandinhibitsPorcineParvovirusreplication.ArchVirol,1992,123:323-333

[3]

DongDX(董德祥).Baseofvaccinestechnologyandapplication(疫苗技术基础与应用).Beijing:ChemistryandIndustryPress(化学工业出版社),2002,pp.196-221

[4]

WeiZY(魏战勇),CuiBA(崔保安),HuangKH(黄克和).StudiesontheimmunoadjuvantsofDNAvaccines.-51

[5]

ChenCF(陈创夫),YuXL(余兴龙),MaZH(马正海)etal.StudiesonconstructionandimmunityenhancerIL󰀁2andIL󰀁3ofthedoubleexpressionplasmidsofClassicalSwineFeverVirusE2.ScientificAgriculturalSinica(中国农业科学),2002,35(11):1406-1410Animal

HusbandryVeterinarianMedicine(畜牧与兽医),2005,37(4):48

3󰀁讨论

随着分子生物学等相关学科的发展,基因疫苗

也得以迅速发展,目前已有多种基因疫苗进入临床试验阶段,如预防HIV、乙肝病毒、流感病毒感染的基因疫苗和用于治疗艾滋病、乳腺癌、结肠癌前列腺

[3]

癌等疾病的疫苗。另外尚有多种基因疫苗正在开发研究中。关于猪细小病毒基因疫苗的研究国内外报道较少,2003年赵俊龙等将猪细小病毒结构蛋白VP1和VP2基因成功地克隆到真核表达载体pcDNA3󰀂1(+)和pCIneo,构建了pcDNAVP2、pCIneoVP1和pCIneoVP23种真核表达质粒,并将其免疫小鼠,结果发现所有表达质粒均能诱导产生明显的细胞免疫和体液免疫。VP2是PPV主要的保护性抗原,但诱导机体产生高的保护性抗体并非整个VP2蛋白,而是其中主要的抗原区域,加之真核表达载体对所携带的基因的表达与基因的大小成反比,基因的片段越大表达的蛋白越少,因此产生的抗原越少,诱导机体产生的免疫反应就小。为此,我们对PPVVP2基因进行了克隆及其免疫原性进行分析,并成功构建了pCEneo󰀁IL2󰀁VP2质粒,通过荧光抗体技术检测到该表达质粒在PK󰀁15细胞高效的表达VP2蛋白。

基因疫苗的动物试验研究表明,基因疫苗在小动物获得了较好的免疫效果,可诱导机体产生较高特异性抗体,但在大动物基因疫苗的效果就不尽理[4]

想。随着分子免疫学的发展,发现细胞因子、协同刺激分子、补体以及其它一些分子能调控DNA疫苗诱导的免疫应答类型及增强免疫应答强度,起到佐剂的作用。IL󰀁2具有促进和刺激淋巴细胞增生和增强细胞毒作用的功能,增强活化T细胞产生IFN和[8]

430[6]

BuJ,SongY,RompatoGetal.Co󰀁deliveryofIL󰀁2orliposomesaugmenttheresponsesofmicetoaDNAvaccineforpseudorabiesvirusIE180.CompImminolMicrobiolInfectDis,2003,26(3):175-187

[7]

LiYH(李玉华),WangHB(王洪彬),LiSY(李声友)etal.StudiesonthemethodfordetectingthespecificcyctotoxicTlymphcoyteinducedbyliveAttenuatedJEVvaccine(SA14󰀁14󰀁2).ProgressinMacrobiologyandImmunology(微生物学与免疫学进展),1998,26(3):33-36

[8]

ZhaoXL(赵俊龙),ChenHC(陈焕春),LvJQ(吕建强)etal.StudyongeneimmunityofPorcineparvovirusstructuralprotein󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁

ChineseJournalofBiotechnology󰀁生物工程学报󰀁2006,Vol󰀂22,No󰀂3

genesVP1andVP2.ChineseJournalofVirology(病毒学报),2003,19(1):47-51

[9]

BarouchDH,SantraS,SteenbekeTDetal.AugmentationandsuppressionofimmuneresponsestoanHIV󰀁1DNAvaccinebyplasmidcytokine󰀁Igadministration.JImmunol,1998,161:1875-1882

[10]

YuL(于涟),LiJR(李建荣),HuangYW(黄耀伟)etal.Enhancedimmunogenicityofplasmidencodingpoly󰀁proteingeneofInfectiousBursalDiseaseVirusbyco󰀁administrationofchickeninterleukin2.ChineseJournalofBiotechnology(生物工程学报),2001,17(6):652-657

2006年中国微生物学会学术年会

暨中国微生物学会第九次全国会员代表大会

征文通知

󰀁󰀁

由中国微生物学会主办、湖北省微生物学会承办的󰀂2006年中国微生物学会学术年会暨中国微生物学会第九次全国会员代表大会 ,定于2006年10月27日~11月1日在湖北武汉中南花园酒店举行,这次微生物学界的盛会,将为全国从事微生物学基础研究及工、农、医微生物学工作者提供一次进行学习交流和展示各自研究成果的极好机会,同时对湖北微生物学科的发展产生积极促进作用。敬请第八届理事会理事和第九届理事会理事候选人务必拔冗出席,行使理事的职责和权利。学术年会的主题

微生物对人类的贡献-21世纪微生物学和微生物技术的发展方向会议内容:1.纪念先驱者报告、院士报告、大会报告、专题报告

2.中国微生物学会第九次全国会员代表大会,审议第八届理事会工作报告、修改学会章程等,选举产生新一届理事会。

3.会后生态考察

年会大会报告、专题报告人选、采取中国微生物学会会员自愿报名(同时提供个人简历、不少于3000字的报告内容以及与报告内容相符的近几年发表在国内外学术期刊上的文章目录),大会、专题报告内容最好能够体现出当今国内研究最高水平和趋近于国际研究发展动态。所有申请的大会、专题报告均需在5月31日前报送中国微生物学会办公室,统一经专家评定,并经常务理事会审定后决定。

征文内容及要求:现向全国微生物学科技工作者征集会议论文摘要(中文或英文均可),论文摘要内容以年会主题为准,涉及基础、工、农、医、兽医微生物学等多方面研究进展。

1.与会者可提交未公开发表的论文摘要(限400字)格式要求如下:题目:三号宋体;作者和作者地址(包括E󰀁mail地址):五号楷体;正文:小四号宋体。

2.请有意参加会议的代表务必将论文摘要于征文截止期2006年7月31日前通过中国微生物学会E󰀁mail:csm@sun.im.ac.cn提交,个别无条件者亦可直接邮寄论文摘要。

3.会议将进行论文摘要统一审稿。

4.凡参加会议的代表,提供的论文摘要均编入大会论文摘要集。

联系地址:北京市海淀区中关村北一条13号󰀁中国微生物学会办公室󰀁邮编:100080电话󰀁传真:010󰀁62554677󰀁E󰀁mail:csm@sun.im.ac.cn

联系地址:湖北省武汉市武昌小洪山中区44号󰀁湖北省微生物学会办公室󰀁梁莉邮编󰀁430071󰀁󰀁电话:027󰀁87198921󰀁󰀁传真:027󰀁87198612E󰀁mail:kywiv@pentium.whiov.ac.cn,llp@wh.iov.cn

敬请附上您的详细联系地址、邮政编码、电话(单位及住宅)、传真以及E-mail地址,以便我们安排好会议,发放第二轮报到通知,谢谢您的合作。

中国微生物学会湖北省微生物学会

2006年4月12日