脑脊液常规操作规程

1． 检验目的

指导脑脊液（CSF)常规测定。

2． 方法原理

2.1脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。由于脉络丛上皮细胞对血浆 中各种物质的选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不 同。其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙 离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、 胆固醇则极难或不能通过。中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎 症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过对脑脊液理学 检查，显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治 疗和预后判断提供依据。 2.2脑脊液（CSF）常规测定内容包括:颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘 氏试验、细菌等。 2.3潘氏（pandys)试验：CSF中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白 色混浊或沉淀。

3． 方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特 1 2 3 4 5

颜色（COLOR) 透明度（clearity) 凝固性（coagulability） 6 7 8 中性粒细胞（NE) 淋巴细胞（LY） 单核细胞（MO） 潘氏试验（pandys test） 脑脊液有核细胞计数（CSF—NUCL) 9 脑脊液红细胞计数（CSF—RBC) 4.标本类型

4.1标本类型：新鲜CSF。

4.2标本拒收条件：拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。

4.3标本保存与稳定性：一般室温1h内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数 及分类检查。

5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统

5.1标本容器：BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。 5.2试剂

5.2.1试剂组分： 生理盐水 白细胞稀释液 刘氏快速瑞氏染色液 0.9%Nacl溶液 1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml) A液：曙红、甲醇 B液：亚甲蓝 潘氏试剂 10%苯酚溶液（纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml） 5.2.2 试剂存储和有效期： 试剂名称 生理盐水 冰乙酸 1%乙酸 10%苯酚溶液 刘氏快速瑞氏染色液 5.3仪器：OLYMPUS光学显微镜，血细胞计数板。 6. 校准程序 （计量学溯源性）

不适用

7. 质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施

不适用

8. 程序步骤

存储条件 有效期 开瓶有效期 位置 室温 室温 冷藏 室温 室温 1年 2年 1年 1年 2年 1年 1年 1年 1年 6个月 存货柜/血常规室操作台 药品柜 试剂冰箱 药品柜 药品柜/染色操作台

8.1一般性状检查：轻轻混匀CSF，观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数≥300 /μl个时或蛋白增加可产生混浊），并记录。 8.2显微镜检查

8.2.1细胞计数（无凝块标本）

（1）清或微混标本：a) 混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格内细胞总 数（包括RBC，NUCL）。

b) 用白细胞稀释液作1：1稀释，计数有核细胞数 c) 红细胞数＝细胞总数－有核细胞数

（当白细胞数≥30个/μl时，在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞） （2）混浊及以上标本：

外观 粉色/轻度混浊 稀释 1:20 样本量 20μl 稀释液/溶解剂 380μl 1:50 10μl 490μl 红色/混浊 带血量极高/极度混浊 1:100 10μl 990μl

a)稀释标本：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数； b)溶解RBC：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数； c)冲池；计数 d)红细胞数=细胞总数－有核细胞数 8.2.2 有凝块或粘稠标本： （1）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。 （2）2000rpm×5min离心，分离上清液和沉渣。 （3）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察NUCL、RBC。 （4）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。 8.2.3离心获取沉渣和上清液：将完成计数的CSF离心，2000rpm×5min离心,吸出上 清液于另一试管，并在试管上编号。 8.2.4瑞氏染色：当NUCL>106/μl时进行操作。将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核细 胞数而定，血性标本可考虑推片。待干后，瑞氏染色进行分类（分 100个NUCL）；如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时，应请示 上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报 告，如脑膜白血病或肿瘤细胞等。

8.3潘氏试验

8.3.1试验操作：取小试管一支，加入10%的石碳酸水溶液约5ml，用一次性吸管 加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。 8.3.2结果判定：阴性：清晰透明。

弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。

阳性（+）：灰白色云雾状。 （2+）：白色浑浊。 （3+)：白色浓絮状沉淀。 （4+）：白色凝块。

9. 计算结果原理 9.1颜色

9.1.1红色：常见于穿刺损伤或出血性病变。 为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意： (1)离心沉淀后：如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出 血，且出血时间已经超过4小时。如上层液体澄清无色，红细胞均沉 管底，多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。 （2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺损伤引起出血时也可看 到，因脑脊液渗透压较血浆高所致。 9.1.2黄色：可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血、椎管梗阻、化脓性脑膜炎、结核性 脑膜炎、重症如核黄疸等引起。 9.1.3白色或灰白色：多因白细胞增加所致，常见于化脓性脑膜炎。 9.1.4褐色或黑色：常见于脑膜黑色素瘤。 9.1.5绿色：可见于绿脓假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎、高胆红 素血症和脓性脑脊液。 9.2透明度：脑脊液混浊程度与细胞数量有关，脑脊液中细胞数超过300×10/L时，可出现 混浊。蛋白质含量增加或含大量微生物也可产生混浊。 9.3凝固性：结核性脑膜炎静置12-24小时后，标本表面有纤细的网膜形成。蛛网膜下腔 梗阻时，可产生黄色胶冻状。

9.4潘氏试验：有脑组织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎、梅毒性中 枢神经系统疾病、脊髓灰质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈阳性反应， 如外伤性血液混入脑脊液中，亦呈阳性反应。 9.5细胞分类：

9.5.1中枢神经系统病变的CSF，细胞可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的 性质有关。

9.5.2中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时，细胞数可中度增加， 常以淋巴细胞为主。

9.5.3细菌感染时（化脓性脑脊髓膜炎），细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。 9.5.4寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。

9.5.4脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。 10. 生物参考区间

颜色（COLOR) 无色 透明度透明 （clearity) 凝固性（coagulability） 无凝块 潘氏试验（pandys 阴性OR弱阳性 test） 有核细胞计数 （CSF—NUCL) 成人（0-8）×106/L 中性粒细胞（NE) 成人（0-6%） 儿童（0-15）×106/L 新生儿（0-8%） 新生儿（0-30）×106/L 淋巴细胞（LY） 成人（40-80%） 新生儿（5-35%） 红细胞计数（CSF—RBC) 0×10/L （正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞、单核细胞，之比约为7:3，可含极少中性粒细 胞）。 11.警告值、危急值（适用时） 12.检验结果可报告区间

13.对超出可报告范围的结果的处理 13.1如检到细菌时应建议培养确认。

13.2有不能分类细胞，应请示上级主管，并另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞。 14.实验室解释 15.安全防护措施

15.1所有样品按具有潜在传染性的标本处理。

单核细胞（MO） 成人（15-45%） 新生儿（50-90%）

15.2测定完成后，上清液及沉渣试管于2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小时以上，倒入 医疗废物下水槽，由医院统一消毒处理；塑料试管或容器等容器等医疗废弃物倒入 黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销毁处理。

15.3原液保存48小时或以上，倒入黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销 毁处理，并做记录。 16.最常见的误差源。

手工操作，主观性较强，细胞鉴别需要有经验。

17.方法的局限性（如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等） 18.参考文献 18.1全国临床检验操作规程-第三版 19.有关引用程序与文件 20.SOP涉及的记录与表格