单核细胞趋化蛋白-1在肾小球肾炎中的表达及临床意义

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单核细胞趋化蛋白一1在肾小球肾炎中的表达及临床意义

陆海峰

【摘要】

目的观察在急进性肾小球肾炎(RPGN)和Ⅳ型狼疮肾炎(LN)中单核细胞趋化蛋白一1(MCP—I)

的表达及临床意义。方法对20例急进性肾小球肾炎(RPGN)和16例Ⅳ型狼疮肾炎(LN)中肾活检组织进行MCP一1及cD68+浸润细胞免疫组化染色，分析MCP—l在肾小球、肾间质的分布及其与单核巨噬细胞浸润、肾小管间质损伤程度的关系。结果①正常组肾脏无MCP—l表达，RPGN和Ⅳ型LN组中大部分患者肾脏MCP—l有表达。②在正常肾组织偶见单核细胞浸润，而在RPGN组和Ⅳ型LN组中见大量单核巨噬细胞弥漫浸润，与正常组比较差异有统计学意义(P<0．01)。肾小管MCP—l表达与间质cD68+细胞浸润具有明显相关性。肾小管MCP一1表达越高，MC细胞浸润越明显，肾小管间质损伤就越重。结论①在两组病变中，单核细胞趋化蛋白一1都参与了肾小球和肾闻质小管的炎症病变；②McP—l参与原发性肾小球肾炎的发生发展，针对趋化因子及其受体进行靶向治疗，阻断白细胞在组织中浸润及其后续反应，有可能为进展性肾脏疾病的治疗开辟一条新的途径。

【关键词】

急进性肾小球肾炎；IV型狼疮肾炎L单核细胞趋化蛋白一l；免疫组织化学

inhumanactiveinflammatoryglomerulone-Hospi—

oattractantExpressionofmonocytechemphritisanditsclinicalsignificance

protein-I

LUHai-feng．DepartmentofNephrology。JiaozuoPeople’s

taZ，Jiaozuo454000，China

【Abstract】

moattractant

ObjectiveToinvestigatetheclinicalsignificanceoftheexpressionofmonocyteche—

rapidlyprogressive

protein一1(MCP—I)inglomerulonephritis(RPGN)and

classIVlupus

nephritis(LN)．Methods

tioninrenal

CP—-IpositiverateofM

ImmunohistochemicalmethodwasusedtoexamineMCP—IandMCinfihra—

renaltissue．Results

The

alPGN．16classⅣlupusnephritisand10normbiopsyof20R

andMCinfiltrationinRPGN’andLNwashihgerthanthatinnormalrenaltissue

MCinfiltrationandtubularinterstitial

(P<0．01)．The

ment

MCP—Ihadcorrelationswiththeamountof

damage．Conclusions

The

CP一1intubularinterstitiummovcrexpressionofMayattributetotherecruit-anactiveinflammatoryglomerulone—damageofhum

an

ofmonocytesandthusleadtotubularinterstitial

can

phritis．Anti—MCP—I

inhibitinflammationinglomeerulonephritis，whichmightbecom

effective

adjuvanttherapyforglomerulonephritis．

Rapidlyprogressiveglomerulonephfitis；ClassⅣlupusnephritis；Monocyteche—

【Keywords】

moattractantprotein一1：Immunohistochemistry

肾功能进行性减退是终末期肾功能衰竭最常见的原因，而外周血单核细胞(monocyte，MC)浸润是原发性肾小球肾炎发生、发展的重要环节，且与肾脏疾病的转归密切相关【l以J。单核细胞趋化蛋白MCP—l是新近明确的对单核／巨噬细胞(monocyte／macrophage，M／M)具有趋化、激活作用的细胞因子，在肾小球肾炎肾脏固有细胞及浸润炎性细胞均可表达，参与肾脏病理损伤p‘4J。本文主要通过对单核细胞趋化蛋白一1在急进性肾小球肾炎(RPGN)和Ⅳ型狼疮肾炎(LN)中的表达，力求加深了解在典型肾小球活动性炎症病变中单核巨噬细胞浸润、MCP—l表达的相互关系及其

临床意义。

l材料与方法

1．1

实验组：来自2002年10月至2008年1月期间

在我院住院的RPGN和Ⅳ型LN患者，符合以下条件：①肾穿刺组织病理均经光镜、免疫荧光和透射电镜证实，LN组还要符合美国风湿病协会1982年修订的系统性红斑狼疮(SLE)诊断标准。②病例资料齐备。③具有活动性炎症指标：RPGN病理以细胞性新月体或细胞纤维性新月体为主。Ⅳ型LN都具有病理和临床的活动指标，至少有以下病理活动指标中的4条：①肾小球细胞明显增生；②肾小球白细胞浸润；③细胞性新月体；④肾小球节段性坏死；⑤内皮下嗜复红蛋白沉积，白金耳形成；⑥苏木素小体，核碎裂；⑦小血管炎，微血栓形成；⑧间质炎症细胞浸润。同时，至少有以下临床活动指标中的两条：①关节炎；②低补体血症；③皮肤黏膜损害；④胸膜炎、心包炎；⑤精神、神经系统损

DOI：10．3760／cma．j．issn．1674—4756．2010．16．004作者单位：454000河南省焦作市人民医院肾内科

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害；⑥血管炎；⑦血尿。共收录RPGN20例和Ⅳ型LN

16例。

1．2

对照组：10例中8例来自肾肿瘤手术远离肿瘤

的肾组织，并经光镜证实肾组织正常，临床上无高血压、糖尿病等可引起肾脏损害的情况。另外2例肾外伤患者的肾切除标本，经光镜、免疫荧光和透射电镜检查未见异常。

1．3肾组织免疫组化染色及MCP一1定量分析：将10％福尔马林固定、石蜡包埋的肾脏组织制成4—5斗m切片，常规脱蜡，浸入0．01moVL、pH为6．0的枸橼酸盐缓冲液内，微波炉抗原修复10min，温度为92℃一98℃。用sP法进行免疫组织化学染色。其中阴性对照以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。CD68单克隆抗体购自DAKO公司，MCP一1单克隆抗体购自SIGMA公司。每个标本按顺序选取5个肾小球视野、5个肾间质小管视野，将其分为肾小球、肾问质小管2个区域，计数每100个肾小球、。肾小管中阳性数，结果以百分数表示。

1．4

MC的定量分析：采用单盲法，每个标本按顺序

选取5个肾小球视野、5个肾间质小管视野，将其分为肾小球、肾小球周围、肾间质和肾小管四个区域，选用彩色系统定标，计数直径>4¨m的目标数目，再计算与面积的比值，即得到各区域单位面积的MC细胞浸润数量。

1．5肾组织病理诊断：病理分型根据1982年WHO分型标准，分为5型。间质病变程度根据问质细胞浸润及间质纤维化程度分为轻度、轻一中度、中度及重度，间质纤维化程度低于25％为轻度，25％～50％为轻一中度，50％～75％为中度，高于75％为重度间质病变。1．6统计学方法：计数资料以例数(n)表示，采用x2检验；计量资料以均数±标准差(i±s)表示，组问比较用t检验；相关关系采用线性回归分析。P<0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．1

单核巨噬细胞浸润情况：在正常肾组织偶见单核

细胞浸润，而在RPGN组和Ⅳ型LN组中见大量单核巨噬细胞弥漫浸润，与正常组比较差异有统计学意义(P<0．01)。在RPGN组中MC主要在新月体内、肾间质(包括肾小球周围)和肾小管内聚集的趋势；在Ⅳ型LN组中MC有在肾小球内和肾间质(包括肾小球周围)聚集的趋势。两病变组的肾小管区域内均可见体积巨大的MC，LN组更多(尸<0．05)，并且均可见MC嵌入肾小管卜皮细胞问的现象(见表1)。

2．2

MCP—l的阳性表达及分布特点：正常组肾脏无

MCP一1表达，RPGN和Ⅳ型LN组中大部分患者肾脏MCP一1有表达。在20例RPGN组中，14例MCP一1

呈灶状在肾小管细胞内分布，部分患者有在肾小管刷状缘浓聚的现象；在肾小球内，Ⅳ型LN组主要呈局灶节段样系膜区及毛细血管襻内皮侧分布，RPGN组仅在毛细血管襻内皮侧有弱表达。所有患者中有11例肾间质小血管壁MCP一1呈阳性，其与光镜下是否存在血管病变无关(见表2)。

表1

两组肾炎患者及对照组单核巨噬细胞浸润情况比较(个／mm2，元±s)

注：‘j病变组比较，aP(0．01；与LN组比较，“P<0．05

表2

MCP一1阳性表达情况[例(％)]

注：与病变组比较。8P<0．01；与LN组比较，bp<0．05

2．3不同程度小管问质病变肾组织中MCP一1表达：MCP一1在间质病变轻的肾组织中表达量最低，阳性小管数为(12±4)％。其他三种程度的间质病变肾组织中阳性小管数明显升高，但三者比较差异无统计学意义[(55±15)％，(58±16)％，(60±14)％]。2．4肾小管MCP一1表达与间质CD68+细胞浸润的关系：所有患者肾间质中均有不同程度CD68+细胞浸润数，随着浸润数量的增加，同时伴有肾小管间质病变程度的加重。肾小管MCP一1表达与肾间质中CD68+细胞的浸润呈明显正相关(r=

0．5860，P=0．03)。

3讨论

MCP一1又称单核细胞趋化激活因子，是趋化因子家族的一员。成熟的MCP一1是76个氨基酸残基组成的碱性蛋白单链，其基因是一种小的可诱导基因。人类MCP—l基因位于17q11．2一q12，由机体多种细胞合成和分泌，其中主要是单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞，肾固有细胞也可合成和分泌。5J。MCP一1的主要作用是趋化和激活单核细胞和T淋巴细胞，使各种炎性细胞尤其是单核细胞向病变部位聚集，而单核巨噬细胞通过分泌转化生长因子13(TGF[3)等细胞因子促进肾小球硬化、肾间质纤维化，成为不良预后的影响因素之一o

6|。

本实验中，我们采用高敏感性的免疫组织化学方法测定MCP一1在RPGN和Ⅳ型LN中的表达及MC浸润情况，结果表明，正常组肾脏无MCP一1表达，RPGN和Ⅳ型LN组中大部分患者肾脏有MCP一1表达．同时伴有大量MC浸润，肾小囊周围、肾间质和肾

lO

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生发展，针对趋化因子及其受体进行靶向治疗，阻断白细胞在组织中浸润及其后续反应，有可能为进展性肾脏疾病的治疗开辟一条新的途径。

参考文献

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小管内各区域都有MC聚集，尤其在肾间质与肾小囊周围。这表明在肾小球活动性炎症病变中，尽管病因及肾小球的病理改变不一样，但都具有较严重的肾间质小管损害，MC浸润情况具有高度一致性，提示MC有在肾间质和肾小管腔间迁移的可能【7j。MC浸润到炎症局部，是一个主要由多种粘附分子和趋化物质相互协同作用的多步骤过程，目前未被完全揭示。本实验显示MCP—l表达与MC细胞在肾间质与肾小球中的浸润是有关联的，虽然两种肾炎病因不同，MC细胞均在某些因素影响下在各区域中按一定规律进行迁移，最终达到炎症部位形成损害。这也表明在人类肾小球活动性炎症疾病中，肾小球、肾间质小管的损害是一个不可分割的整体，MCP—l及MC是这类肾小球与肾间质小管病变的重要影响因素旧J。

本研究结果也表明：不同程度小管间质损伤肾组织中MCP一1表达程度不一样，MCP一1在间质病变轻的肾组织中表达量最低，阳性率只有(12±4)％，其他三种程度的问质病变肾组织中阳性率明显升高。肾小管MCP一1表达越高，MC细胞浸润越明显，肾小管间质损伤就越重。总的来说，趋化因子及其受体参与肾脏疾病进展的多个阶段，从而使得白细胞粘附、迁移、分化及聚集；聚集的白细胞除对肾脏产生直接损伤作用外，可进一步分泌趋化因子及其他细胞因子【9j。Wada等¨刮报道人MCP一1基因N一端缺失突变体7ND转染于骨骼肌可通过降低I型胶原和TGF—B的表达减缓肾纤维化，同时减少细胞浸润，且大部分是CCR2阳性细胞，并降低肾脏MCP一1的表达，提示MCP—l通过CCR2信号途径参与单核巨噬细胞的聚集，导致下游事件扩增而形成肾纤维化，抗MCP一1／CCR2信号途径可通过突变基因转移策略提供一种有益的肾纤维化的治疗方法。

综上所述，MCP一1参与原发性肾小球肾炎的发

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(本文编辑：王帆)

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(本文编辑：王帆)