输血相容性检测室内质控标准操作规程

【操作人员】经批准人授权的同志 【部门主管】 【质量控制员】 【目的】

考察输血相关检测项目结果是否准确、稳定。 【原理】

选择已知血浆和红细胞，标定其在不同检测介质（盐水介质、凝聚胺、抗人球蛋白以及微柱凝胶等）中的阳性及阴性检测的结果。通过每天或每批与检测标本同等的检测以证明其检测过程中影响检测结果的主要因素（试剂、设备、检测程序、人员操作等）是否符合标准操作规程限定的范围，证明检测结果是否有效的衡量标准。 【样本】

1) 标准血清：抗-A、抗-B、抗-D。 2）试剂红细胞：反定型红细胞。 3）凝聚胺介质试剂。 【仪器】

BYZ型血库血清学多用离心机，2002-2型血库专用离心机,FYQ免疫微柱孵育器。

【标准血清批次质控】 方法：

1. 质控红细胞准备：商品化A和B型试剂红细胞洗涤三次，备用。 2、取小试管20支，分两排放置于试管架上，分别标明A,B各10管。 3、各管均加生理盐水0.2ml。

4、吸取Ａ型被测血清0.2ml，加入Ａ排第1管中，混匀，吸出0.2ml加入第2管直到第10管，从第10管中吸出0.2ml弃掉。用同样的方法取B型被测血清在B排中稀释。血清稀释倍数为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256，1:512,1:1024

5、A排管各加B型2%红细胞悬液0.2ml，混匀。

6、以稀释倍数最高而又显凝集者为凝集效价。如A型被测血清在第6管显凝集，则其凝集效价为1:64，Ｂ型被测血清第7管仍显凝集，则其凝集效价为1:128。

标准血清的标准：A型（抗B）效价，B型（抗A）效价应在1:128以上。 试剂滴度允收标准：标准抗血清滴定设到512, 亲和力在10秒内达1mm颗粒凝集块。

【ABO血型反定型用红细胞试剂批次质控】

方法:

质控标准抗A，抗B血清准备

标准抗A,B血清倍比稀释，血清稀释倍数为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256，

将2%A,B,O试剂红细胞悬液0.2ml分别加相应的标准血清中,3400R/min离心10秒 ，观察结果。

试剂红细胞允收标准：

试剂红细胞在1：8稀释的标准血清中凝集强度应为3+以上，在1：64稀释的标准血清中凝集强度应为1+以上。 【凝聚胺介质试剂批次质控】

1.质控标准品准备

已知效价标准抗血清A或B（IgM），血清倍比稀释1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256，每管加入4％A型或B型试剂红细胞0.2ml。

已知效价标准抗血清D（IgG），血清倍比稀释1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256，每管加入O型RH阳性试剂红细胞0.2ml。

2.各加LIM0.65ml,混匀后，再各加Polybrence溶液2滴，并混匀。 3.3400r/min离心10秒，去上清，让管底残留约0.1ml液体。 4.轻轻摇动试管，目测确认红细胞有无凝集。

5.如有凝集，加入Resuspending2滴，轻轻摇动试管混匀，观察结果，凝集不散开，结果应为阳性。

凝聚胺介质试剂允收标准

凝聚胺介质检测IgM标准抗血清A或B，分别与A型或B型试剂红细胞反应

的阳性的效价值应大于128；检测IgG标准抗血清D，与O型试剂红细胞反应的阳性的效价值应大于128。

标准血清及试剂红细胞室内质控

1.质控准备：试剂红细胞洗涤三次，无溶血，制备成3%红细胞悬液；标准血清室温平衡30分钟。

2试管法检测：取抗A标准血清1滴分别与A1，B,O型3%红细胞悬液1滴反应；取抗B标准血清1滴分别与A1，B,O型3%红细胞悬液1滴反应；（IgM+ IgG）抗D标准血清与O型3%红细胞悬液1滴反应，3400r/min离心15秒，观察记录结果。

凝聚胺介质试剂室内质控

质控准备：O型RH阳性试剂红细胞洗涤三次，无溶血，制备成3%红细胞悬液;抗D标准血清, 自备AB型血浆，凝聚胺介质试剂室温平衡30分钟。

试管法检测：取抗D标准血清2滴加入3%O型RH阳性试剂红细胞悬液1滴反应作为阳性对照；取3%O型RH阳性试剂红细胞悬液1滴加入AB型血浆2滴反应作为阴性对照；各加LIM0.65ml,混匀后，再各加Polybrence溶液2滴，并混匀。3400r/min离心10秒，去上清，让管底残留约0.1ml液体，轻轻摇动试管，目测确认红细胞有无凝集，如无凝集需重做，如有凝集，加入Resuspending2滴，轻轻摇动试管混匀，观察并记录结果。

微柱凝胶抗人球试剂卡室内质控

1. 质控准备：O型RH阳性试剂红细胞洗涤三次，无溶血，制备成3%红细胞悬液;抗D标准血清, 自备AB型血浆，凝聚胺介质试剂室温平衡30分钟。

2. 取微柱凝胶抗人球卡一张，标注阳性对照孔取抗D标准血清2滴加入3%O型RH阳性试剂红细胞悬液1滴反应；标注阴性对照取3%O型RH阳性试剂红细胞悬液1滴加入AB型血浆2滴反应；将微柱凝胶抗人球卡置37℃专用孵育器15分钟后，微柱凝胶卡专用离心机离心10分钟，判断并记录结果。

结果判断

抗A与A1型红细胞，抗B与B型红细胞反应，凝集强度均是4+则为在控，反之则视为失控。

2.（IgM+ IgG）抗D标准血清与O型红细胞反应，凝集强度是2+以上为在

控，反之则视为失控。

3.（IgM+ IgG）抗D标准血清与O型红细胞在凝聚胺介质中反应，凝集强度是2+以上；O型RH阳性试剂红细胞与加AB型血浆在凝聚胺介质中反应，凝集反应为阴性，则凝聚胺介质试剂为在控，反之则视为失控。

4.（IgM+ IgG）抗D标准血清与O型红细胞在微柱凝胶抗人球卡中反应，凝集强度是2+以上；O型RH阳性试剂红细胞与加AB型血浆在微柱凝胶抗人球卡中反应，凝集反应为阴性，则凝聚胺介质试剂为在控，反之则视为失控。

5. 对于在控结果与失控结果，操作人员都应该认真填写室内质控登记表，所以质控数据应该按照实验室文件管理程序要求归档保存。

失控原因分析：

1、操作失误：主要是人为因素，如加样问题（漏加、错加等）、试剂及样本识别、误读误判、个人操作技术缺陷（如：加样不准确、离心条件、操作不标准等）。

2、检测试剂：试剂批号变更所致，如：抗筛细胞谱的变换，试剂的预温情况。过期试剂造成精确地和亲和力下降导致无法正确判读结果。试剂的性质与检测方法不匹配。

3、质控品失效：有效期失效、保存不当、操作或意外污染。 4、仪器维护。

质控结果失控后的处理： 1、重复检测排除人为误差所致。

2、更换质控品，以查明质控品是否过期或变质。

3、更换质控品后仍不在控，可以进行仪器维护后再测失控项目，可排除仪器问题引起的失控。

4、经过上述处理后仍然失控，应停止相关失控检测项目（可使用替代检测方法），立即与试剂或仪器厂家沟通，寻求技术上的支持。