・４０６・ 国际检验医学杂志２０１４年２月第３５卷第４期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．４ ・临床检验研究论著・ 类风湿性关节炎患者自身抗体的检测及应用 董旭才，张婧，沈建军，张静，张惠中 （唐都医院检验科，陕西西安７１００３８） 摘 要：目的 探讨抗核抗体（ＡＮＡ）检测在类风湿性关节炎（ＲＡ）诊断中的意义。方法 随机选取该院２０１０～２０１３年收治 的ＲＡ患者６７例，以间接免疫荧光法及免疫印迹发检测ＡＮＡ，以速率散射免疫比浊法检测类风湿因子（ＲＦ），并分析ＡＮＡ和ＲＦ 在诊断ＲＡ中的相关性。结果 检测ＡＮＡ有利于ＲＡ的诊断。６７例标本中抗－ｎＲＮＰ／Ｓｍ、抗一Ｓ Ａ、抗一组蛋白阳性率最高，分别 为２１ 、１８ 、１８ 。ＲＡ组ＡＮＡ核型主要为均质型，其次为颗粒型，也有部分为阴性。结论 临床上治疗ＲＡ患者时，应注意监 测是否同时患有多重自身免疫性疾病。 关键词：类风湿因子； 抗体，抗核； 关节炎，类风湿 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１４．０４．０１０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２０１４）０４—０４０６—０２ Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｄｏｎｇ Ｘｕｃａｉ，Ｚｈａｎｇ Ｊｉｎｇ，Ｓｈｅｎ Ｊｉａｎｊｕｎ，Ｚｈａｎｇ Ｊｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ Ｈｕｉｚｈｏｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔａｎｇｄｕ Ｈｏｓｐｉｔａｌ。Ｘ ａｎ，Ｓｈａａｎｘｉ ７１００３８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＲＡ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６７ ｃａ— ｓｅｓ ｏｆ ＲＡ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｏｕｒ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｂｅｔｗｅｅｎ ２０１０—２０１３ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ．Ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗｅｒｅ ａ— ｄｏｐｔｅｄ ｔＯ ｄｅｔｅｃｔ ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＡＮＡ），ａｎｄ ｉｍｍｕｎｅｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔＯ ｄｅｔｅｃｔ ＲＦ，ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅ— ｔｗｅｅｎ ＡＮＡ ａｎｄ ＲＦ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＲＡ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡＮＡ ｉｓ ｈｅｌｐｆｕｌ ｔｏ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＲＡ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ａｎｔｉ—ｎＲＮＰ／Ｓｍ，ａｎｔｉ—ＳＳ－Ａ，ａｎｔｉ－ｈｉｓｔｏｎｅ ｗｅｒｅ ２１ 、１８ 、１８ ．Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｏｍｉｎａｔｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａｔｔｅｎｔｉｏｎｓ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｐａｉｄ ｔＯ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＲＡ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｏｓｅ ｗｈｏ ｓｕｆｆｅｒｓ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ； ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａｎｔｉｎｕｃｌｅａｒ； ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ 类风湿性关节炎（ＲＡ）是一种以对称性、多关节炎症为主 测采用免疫印迹法；ＲＦ检测采用速率散射比浊法。严格按照 本实验室项目Ｓ０Ｐ操作。ＡＮＡ检测结果判断靠肉眼观察荧 光强弱判断阴、阳性；ＡＮＡ谱检测结果靠肉眼观察印迹的颜色 判断阴、阳性；ＲＦ测定值大于２０ ＩＵ／ｍＬ为阳性结果。 ２结 果 要表现的慢性、系统性自身免疫性疾病。在中国，ＲＡ的患病 率约为０．３２ ～０．３６ ，男女患病比例约为１：３。ＲＡ的特 征性临床表现为多个受累的周围性关节疼痛、肿胀、功能下降， 病变呈持续、反复发作的过程。ＲＡ作为自身免疫性疾病，患 者体内可能存在多种自身抗体，而这些自身抗体也成为ＲＡ诊 断的重要依据ｌ１ｊ。本研究主要评价了抗核抗体（ＡＮＡ）、ＡＮＡ 谱、类风湿因子（ＲＦ）检测在ＲＡ诊断中的应用及相互关系，报 道如下。 两组ＲＦ与ＡＮＡ单独及联合检测的阳性率见表１。ＡＮＡ 谱阳性率分析显示，ＲＡ组６７例标本中各种ＡＮＡ的阳性率有 差异，其中抗一ｎＲＮＰ／Ｓｍ 抗一ＳＳ－Ａ、抗一组蛋白抗体阳性率最高， 分别为２１ 、１８ 、１８ ，见表２。ＲＡ组ＡＮＡ核型主要为均 质型，其次为颗粒型，也有部分为阴性，见表３。 １材料与方法 １．１标本来源 随机选取２０１０年１月至２０１３年４月于本院 表１ 两组ＲＦ与ＡＮＡ单独及联合检测的阳性率［ （％】］ 住院的ＲＡ患者６７例（ＲＡ组），诊断依据为美国风湿病学会于 １９８７年制定的分类标准。６７例ＲＡ患者中男性２Ｏ例，女性４７ 例，年龄２６～７５岁，平均５Ｏ．１岁。另外随机选取６７例同期于 本院进行体检的健康体检者作为对照组，其中男２３例、女４４ 例，年龄２１～７６岁，平均５ｌＩ ２岁。全部人员均于清晨空腹 采血。 表２ ＡＮＡ谱检测各项目的阳性率（ｎ一６７） １．２仪器与试剂ＤＡＤＥ ＢＥＨＲＩＮＧ ＢＮⅡ特种全自动血浆 蛋白仪；Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＨＺ—ＲＦＣＡ荧光显微镜。ＡＮＡ及ＡＮＡ谱 检测试剂盒（德国欧盟医学实验诊断有限公司）；ＲＦ检测试剂 盒（西门子医疗诊断产品有限公司）。 １．３方法ＡＮＡ的检测采用间接免疫荧光法；ＡＮＡ谱的检 作者简介：董旭才，男，检验技师，主要从事临床免疫学与检验的研究。 国际检验医学杂志２０１４年２月第３５卷第４期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．４ ・４０７・ 续表２ ＡＮＡ谱检测各项目的阳性率（ 一６７） 免疫性疾病可产生不同的抗ＡＮＡ多肽抗体，不同特性的抗 ＡＮＡ抗体在各种自身免疫性疾病中的阳性率不同［ 。本研 究中６７例ＲＡ患者标本中各种ＡＮＡ在人群中的阳性率有差 异，其中抗一ｎＲＮＰ／Ｓｍ、抗一ＳＳ—Ａ、抗一组蛋白阳性率最高，分别为 ２１ 、１８ 、１８ ，大致符合核型的分布。其中抗一ｎＲＮＰ／Ｓｍ抗 体提示有混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ），抗一ＳＳ－Ａ抗体提示有干 燥症，抗一组蛋白提示有ＳＩ Ｅ口 ，所以治疗ＲＡ同时也要观察 患者是否还有其他自身免疫性疾病。 综上所述，ＡＮＡ与ＲＦ在ＲＡ的诊断中呈正相关且ＲＡ组 中ＡＮＡ阳性率为５３．７３ 。临床上治疗ＲＡ患者时，应注意 监测是否同时患有多种自身免疫性疾病，以免出现误诊和漏 诊。 表３ ＲＡ组ＡＮＡ核型分布情况（ 一６７） 参考文献 ［１］曾小峰，艾脉兴，甘晓丹，等．抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关 节炎中的意义［Ｊ］．中华风湿病学杂志，２００１，５（５）：２８１—２８４． ［２］赵文秀，李妍．类风湿性关节炎的免疫学诊断研究进展［Ｊ］．解放 军医学高等专科学校学报，１９９９，２７（２）：１５２—１５４． Ｅ３］郭巍，王守芹，聂德志，等．检测抗核抗体早期诊断类风湿［Ｊ］．中 国实验诊断学，１９９８，２（３）：１６． ［４］Ｈｏｘｈａ Ａ，Ｒｕｆｆａｔｔｉ Ａ，Ｇｒｙｐｉｏｔｉｓ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｎｕｅｌｅａｒ，ａｎｔｉ—ｄｓＤＮＡ ａｎｄ ａｎｔｉ——ＥＮＡ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｄｒ—＿ ｔｈｒｉｔｉｓ ｏｒ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ ［Ｊ］．Ｒｅｕｍａｔｉｓｍｏ，２００６，５８（２）：１２１ １２６． ３讨 论 ［５］杨德平．上海地区２６２例抗核抗体谱及类风湿因子浓度检测ＥＪ３． 检验医学与临床，２０１０，７（７）：５８２—５８３． 进行ＲＡ诊断试验研究，关键是要确定“金标准”，各种筛 选方法以“金标准”为依据。国际上通用的是美国风湿病学会 １９８７年诊断标准，主要依据是临床表现、ｘ线和ＲＦ检测。ＲＦ ［６］周正菊，王红霞，杨章元，等．混合性结缔组织病患者ＡＮＡ谱及 ＡＮＡ检测分析ＥＪ］．海南医学院学报，２０１２，１８（１０）：１４６６—１４６８． ［７］陈效琴．ＡＮＡ谱３在自身免疫性疾病诊治中的临床应用［Ｊ］．中 国医药指南，２０１１，９（２３）：２１５－２１６． 是最早从ＲＡ患者血清中发现的自身抗体［２］。它是变性ＩｇＧ 的自身抗体，有ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ，主要是ＩｇＭ。ＲＦ阳性还可以 见于其他疾病如干燥综合征（ＳＳ）、系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）等。 ＲＡ患者血清中可以检测到其他ＡＮＡ，如抗～ｎＲＮＰ／Ｓｍ、抗一 ［８］童晓芳．ＡＮＡ及ＡＮＡ谱联合检测在自身免疫性疾病中的ｌ临床 价值［Ｊ］．浙江临床医学，２０１３，１５（６）：９０７—９０８． ［９］邹自英，李素华，陈莉．１３种自身抗体检测对ＳＬＥ的诊断价值 及临床意义［Ｊ］．细胞与分子免疫学杂志，２００７，２３（５）：４４３ ４４４． ＳＳＡ、抗一组蛋白抗体等。其中抗一ｎＲＮＰ／ｓｍ、抗－ＳＳＡ、抗一组蛋 白抗体阳性率分别为２１ 、１８ 、１８ 。ＲＡ患者临床表现复 杂，早期症状和体征不明显，ＲＡ的早期诊断对于早期干预治 疗非常有利，目前临床上常见ＲＦ与ＡＮＡ同时检测以早期诊 断ＲＡ＿３］。ＡＮＡ阳性和ＲＦ阳性有较好一致性。但ＡＮＡ不 能作为诊断ＲＡ的依据。因ＲＦ检测成本和费用较低，适合于 中国各地区ＲＡ的筛查。 ＡＮＡ检测的是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗 ［１Ｏ］陈曼丹，陈林兴．抗核抗体谱在自身免疫性疾病的检测及应用 ［Ｊ］．实用医技杂志，２００５，１２（２）：３０２—３０４． ［１１］辛琳琳，马静霖，司晓青，等．抗核抗体，抗ＥＮＡ抗体，抗ｄｓＤ— ＮＡ抗体联合检测对ＳＬＥ的诊断意义［Ｊ］．中国麻风皮肤病杂 志，２００５，２１（５）：３７卜３７２． ［１２］何蕊，徐兰峰。宋秀军，等．抗核抗体谱检测的Ｉ临床诊断意义 口］．细胞与分子免疫学杂志，２０１１，２７（９）：１０１７－１０１８． ［１３］何建伟，李静，程江，等．抗核抗体谱检测在弥漫性结缔组织病 体 ］。本研究ＡＮＡ在ＲＡ组的核型主要为均质型，其次为颗 粒型，也有部分为阴性，提示临床在治疗ＲＡ同时也应该监测 诊断中的价值［Ｊ］．中国全科医学，２０１１（１７）：１９６８—１９７０． ＡＮＡ，以防止出现其他自身免疫性疾病。 ＡＮＡ谱是针对核内可提取性核抗原的一种检测方法， （收稿日期：２０１３—１０—１０） ＡＮＡ抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中提取 ５］。 ＡＮＡ谱主要包括抗一Ｓｍ、抗一ＲＮＰ、抗一Ｒｏ等抗体。不同的自身