畜牧兽医 唼瞒防治 鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究 杨希国’，李欣南’，李香珍’，董娜 ，杨慧宁ａ （１．辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳 １１００１６； ２．辽宁省沈阳市兽药饲料监察所，辽宁沈阳 １１００３１； ３．辽宁省葫芦岛市兽药饲料监察所，辽宁葫芦岛１２５０００） 中图分类号￥８５２．６１ 文献标识码 Ｂ 文章编号 １６７２－９６９２（２０１ １）０７－００３２－０３ ［摘要］２００８～２０１ ０年在辽宁地区共采集９９０份鸡泄殖腔拭子样品，分离鉴定出３８０ 株大肠杆菌，用１０种抗菌药物进行药敏试验。结果表明，２００８年分离的大肠杆菌耐药性较 轻，对氨苄西林和恩诺沙星的耐药率为７４．６０％和５７．１４％；２００９年和２０１Ｏ年分离的大肠杆菌 耐药性非常严重，对氨苄西林、阿莫西林／克拉维酸、四环素、磺胺异口唑、复方新诺明和 恩诺沙星的耐药率均大于８０％，多重耐药性严重。 ［关键词］大肠杆菌；分离鉴定；耐药性 鸡大肠杆菌病是鸡最常见和对养鸡业危害最 司；药敏检测板，由中国兽医药品监察所提供。 严重的传染病之一，可引起胚胎死亡、脐炎、败 １．３仪器培养箱、ＡＴＢ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ细菌鉴定 血症、输卵管炎和滑膜炎、肉芽肿、卵黄性腹膜 仪。 炎和眼炎等一系列病症，其抗原性复杂，血清型 １．４大肠杆菌的分离取泄殖腔拭子样品用接 多样，临床症状和病理变化多变，且多与病毒性 种棒接种于麦康凯琼脂平面，３７℃培养ｌ８～２４ ｈ。 疾病和其他细菌性疾病并发［１］。由于该病在一些 １．５大肠杆菌的鉴定挑取麦康凯培养基可疑 鸡场中发生严重，兽医临床上抗菌药物不得不大 的大肠杆菌菌落，用麦康凯培养基纯化一代，然 量地被应用，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现， 后接种于营养琼脂平面３７℃培养１８～２４ ｈ，按ＩＤ 耐药谱不断扩大，形成恶性循环。２Ｏ世纪９０年 ３２ Ｅ肠杆菌鉴定条使用说明，用ＡＴＢ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 代前后所分离的致病性大肠杆菌对抗生素的敏感 细菌鉴定仪进行鉴定。 菌株比例呈下降趋势，中度敏感菌株比例先升后 １．６大肠杆菌的耐药性试验按照美国临床实 降，耐药菌株比例逐步上升。同时，抗菌药物在 验室标准协会（ＣＬＳＩ）的微量肉汤稀释法测定大肠 畜禽体内的残留给养禽业的持续发展和人类的身 杆菌最小抑菌浓度。结果判定及质量控制参照 体健康带来潜在危害［２１。因此，调查研究鸡大肠 ＣＬＳＩｔ３１标准执行。 杆菌耐药性现状，对指导兽医临床用药和进行微 ２结果 生物耐药性风险分析具有重要的理论和实践意 ２．１大肠杆菌的分离结果见表ｌ。 义。 １材料与方法 表１ 大肠杆菌分离结果统计表 １．１样品２００８年６月～２０１０年１１月从辽宁地 区鸡场采集泄殖腔拭子共９９０份。 １．２试剂营养肉汤、营养琼脂、麦康凯琼脂 等培养基，购自北京陆桥技术有限责任公司；ＩＤ ３２ Ｅ肠杆菌鉴定条，购自生物梅里埃中国有限公 对９９０份泄殖腔拭子样品进行大肠杆菌分 ［收稿日期］２０１卜０４—２８ 离，经鉴定共得到３８０株大肠杆菌，分离率为 ２０ ７ ７．Ｄ７ 齑牧兽医 唼瞒防治 ３３．７６％－４２．００％。 断扩大，耐药性也逐渐严重，大肠杆菌对氨苄西 ２．２大肠杆菌的鉴定挑取麦康凯琼脂培养基 林、阿莫西林／克拉维酸、四环素、磺胺异恶唑、 上粉红色、边缘光滑的大肠杆菌可疑菌落，经细 复方新诺明和恩诺沙星等药物表现为较严重的耐 菌鉴定仪鉴定，均为大肠杆菌。 药性。本研究中分离鉴定的大肠杆菌对生产中的 ２．３大肠杆菌的耐药性试验试验结果见表２。 大肠杆菌耐药性 常用药物均产生了普遍的耐受性，提示在进行疫 病的药物防治中，应结合临床分离菌株的药敏实 ％ 表２大肠杆菌耐药性试验结果统计表 验，采取针对性用药。 ３．２动物源细菌耐药性的风险分析 目前，兽 医临床上抗生素的广泛、长期使用以及饲料中抗 菌药物的不规范使用最终导致许多细菌的耐药性 增强，而且很多细菌已由单药耐药发展到多重耐 药，这不仅给预防和治疗动物疾病带来困难，而 且加剧了抗生素在畜禽体内的残留，严重危害动 物性食品安全。动物性食品中抗生素的残留最终 将导致人体内耐药菌的增Ｎ Ｅ４Ｊ。临床致病菌耐药 性的不断增加，使抗生素的药效越来越低，必须 不断加大剂量才能起到治疗效果，结果不但加大 试验结果表明，２００９年和２０１０年分离的大 了饲养成本，更由于病程延长，影响了动物的生 肠杆菌对１０种药物的耐药率差异较小，但与 产性能，使养殖利润下降。动物用药后，药物以 ２００８年的差异较大。２００８年分离的１２６株大肠 原形或代谢物的形式排入环境中，不仅对土壤、 杆菌对氨苄西林和恩诺沙星的耐药率为７４．６０％ 水源等造成环境污染，而且大多数药物或其代谢 和５７．１４％，对其余８种药物耐药率均较低； 物仍然具有活性，对土壤微生物、水生生物及昆 ２００９年和２０１０年分离的大肠杆菌对多粘菌素Ｅ 虫等造成影响。此外，动物病原菌的耐药基因是 耐药率较低，对其余９种药物的耐药率均很高， 否会传递给人类病原菌已开始引起社会广泛关 尤其对氨苄西林、阿莫西林／克拉维酸、四环素、 注。随着人们对动物性食品安全的关注，细菌耐 磺胺异恶唑、复方新诺明和恩诺沙星的耐药率均 药性及动物性食品中的兽药残留也越来越成为全 大于８０％。 社会共同关注的公共卫生问题［４１。 ２．４大肠杆菌的多重耐药性大肠杆菌多重耐 在当前普遍关注公众健康和环保的背景下， 药率结果见表３。 应积极加强养殖场细菌耐药性监测，开展细菌耐 药性的调查，为流行病学积累资料，并进行系统 表３大肠杆菌多重耐药率统计表 ％ 的风险评估，对于指导兽医临床用药、防止药物 ２００８年１３．４９ ２６．１９ １９．ｏ５ １４．２９ ７．１４ ３．９７ ３．１７ １．５９ 残留超标等方面具有重要的意义。近年来，根据 ２００９年 ０．８１ ０．８１ Ｏ．８１ ８．１３ １６．２６ ２Ｏ．３３ ５２－８５ 微生态学原理研制的各种微生态制剂，因其无毒 ２０１０年０．７６ １．５３ ２．２９ ６．８７ ８．４０ １０．６９ １２．２１ １４．５０ ４３．５１ 性、无残留、不产生耐药性，且具有防治疾病、 多数大肠杆菌出现多重耐药现象。２００８年 提高动物生产性能等优点，在生产实践中显示出 分离的大肠杆菌主要集中在１ ５重耐药；２００９ 广阔的应用前景。今后一段时间内，对微生态制 年和２０１０年分离的大肠杆菌主要集中在６～９重 剂的开发、研制无疑将成为缓解动物疫情、解决 耐药，尤其以９重耐药率最高。 抗生素残留的重要途径之一。 ３讨论 ［参考文献］ ３．１鸡大肠杆菌的耐药性分析对鸡大肠杆菌 【１］蔡宝祥．家禽传染病学［Ｍ】．第３版．北京：中国农业出 版社，２０００：５—５５． 耐药性的研究表明，近年来大肠杆菌的耐药谱不 ２０１ ７ Ｄ７ 猪蛔虫病免疫学进展 刘军骅 （辽宁省重大动物疫病应急中心，辽宁中图分类号 Ｓ８５３．３２ 文献标识码 Ａ 沈阳 １１０１６１） １ ６７２—９６９２（２０１ １）０７—００３４—０３ 文章编号 蛔虫作为一种历史悠久，严重危害畜牧业发 许多相似之处，因而，世界上一些国家已经把猪 展乃至人类健康的消化道寄生线虫，广泛分布于 蛔虫纳入公共卫生学的范畴。本文概述了近年来 世界上每一个国家和地区。蛔虫可感染几乎所有 猪蛔虫的免疫学研究进展。的常见动物，包括一些野生动物。猪蛔虫是广泛 １ 抗原 分布于世界各地的大型线虫，寄生于猪的小肠， 关于猪蛔虫成虫的蛋白质和抗原，一般用全 是猪最主要的寄生虫之一，感染率达到５０％～ 虫和（或）假体腔液作为材料进行研究。结果显示 ７０％，且主要感染于生长时期的仔猪。猪蛔虫病 猪蛔虫为１２条区带。罗仲全等【 １曾先后比较了人 降低生产效率，引起严重的经济损失。新近的研 蛔虫与猪蛔虫的ｌ７种氨基酸含量，假体腔液和 究证实，猪蛔虫也可感染人，猪蛔虫与人蛔虫有 肌肉在ＰＡＧＥ板状电泳上的蛋白质电泳区带以及 乳酸脱氢酶同工酶在电泳上的区带位置均未发现 ［收稿日期］２０１卜０５—２０ 有显著的差异，而与犬弓蛔虫相比较，则差异显 ｍａｌｓ（ａｐｐｒｏｖｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄｓ）【ＭＩ．Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００８． ［２］沈建忠．动物性食品的安全性及其监控［Ｊ］．中国兽医 杂志，２００１，３７（１）：３８—３９． ４］刘健华，陈杖榴．食品动物源细菌耐药性与公共卫生 ［３］Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｄｉｓｋ ａｎｄ ｄｉｌｕ— 『ｔｉｏｎ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎｉ一 ｆＪ１．中兽医医药杂志，２００８，２７（１）：２３—２４． 一 ＂Ｉｓｏｌａｔｉ１ ‘ ｏｎ，ｉｄｅｎｔｉ‘１ ‘ ‘ｔｉｃａｔｉ ‘ ｏｎ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｅｓｔ ｏｆ Ｅ．ｃｏｌｉ ｆｒｏｍ ｃｈｉｃｋｅｎ Ｙａｎｇ Ｘｉｇｕｏ’，Ｌｉ Ｘｉ ｎｎａｎ ，Ｌｉ Ｘｉ ａｎｇｚｈｅｎ ，Ｄｏｎｇ Ｎａ ，Ｙａｎｇ Ｈｕｉ ｎｉｎｇ。 （１．ＡｎｉｍａＩ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｏｕａｌ ｉｔｙ Ｔｅｓｔｉ ｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉ ｎｅｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１００１６； ２．Ａｎ ｉ ｍａｌ Ｍｅｄ ｉ ｃ ｉ Ｒｅ ａｎｄ Ｆｅｅｄ ｓｕｐｅｒｖ ｉ Ｓ ｉ ｏｎ ｌ ｎｓｔ ｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １００３１； ３．ＡｎｉｍａＩ ＭｅｄｉＣｉｎｅ ａｎｄ Ｆｅｅｄ ｓｕｐｅｒｖｉ ｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＨｕＩｕｄａｏ，ＨｕＩ ｕｄａｏ １２５０００） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］９９０ ｓｗａｂ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｆｒｏｍ ｃｈｉｃｋｅｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ２００８ ａｎｄ ２０１０ ｉｎ ｌ ｉａｏｎｉｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ．ｉｎ ｗｈｉｃｈ ３８０ Ｅ．ｃｏｉ１ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔｓ ｗｉｔｈ １０ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｒｕｇｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ Ｅ．ｃｏｌ１ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ ２００８ ｗａｓ ｌｉｇｈｔｅｒ．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ７４．６００／ｏ ａｎｄ ５７．１４％ｔｏ Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ ａｎｄ Ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ：ｔｈｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ Ｅ．ｃｏｉ１ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ ２００９ ａｎｄ ２０１０ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｓｅｖｅｒｅ． ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｒａｔｅ ｗａｓ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ８０％ｔｏ Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ， ａｍｏｘｉｃｉ１ｌｉｎ／Ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ，ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ， ｓｕｌｆｉｓｏｘａｚｏｌｅ， Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ ａｎｄ Ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ．Ｍｕｌｔｉｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｅ．ＣＯｉ１ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｓｅｖｅｒｅ ｆｒｏｍ ｃｈｉｃｋｅｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｅ．ｃｏｌｉ：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｍ